CD16a mRNA在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)意義

李 貞 李 巖 周玙嬌

結(jié)直腸癌發(fā)病較高,由于早期表現(xiàn)較為隱匿,易被患者忽視,即使部分患者因早期癥狀進(jìn)行檢查,也易與其他胃腸道疾病混淆,導(dǎo)致無法及時(shí)治療,影響預(yù)后。臨床應(yīng)尋找能夠診斷患者疾病的相關(guān)標(biāo)志物,以盡早明確診斷,及時(shí)治療,從而改善結(jié)直腸癌患者預(yù)后[1]。隨著對(duì)結(jié)直腸癌研究的深入,臨床發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展均與機(jī)體的免疫狀態(tài)關(guān)系密切[2]。正常狀態(tài)下,人體免疫系統(tǒng)處于穩(wěn)定狀態(tài),能夠及時(shí)辨認(rèn)惡性轉(zhuǎn)變的細(xì)胞,并將其殺傷,防止疾病發(fā)生,若人體免疫系統(tǒng)障礙或局部免疫效應(yīng)細(xì)胞功能缺失,將對(duì)免疫效應(yīng)細(xì)胞的作用產(chǎn)生影響,無法發(fā)揮自身作用,導(dǎo)致腫瘤形成[3]。CD16a是一種跨膜蛋白,主要在免疫效應(yīng)細(xì)胞表面表達(dá),對(duì)抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒有介導(dǎo)作用,當(dāng)其水平出現(xiàn)異常表達(dá)時(shí),提示機(jī)體可能發(fā)生腫瘤[4]。分析CD16a的mRNA表達(dá)情況對(duì)判斷患者病情或許有較高的應(yīng)用價(jià)值。鑒于此,本研究進(jìn)一步探討CD16a mRNA在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)意義。現(xiàn)總結(jié)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2020年1月至2021年8月我院收治的結(jié)直腸癌患者86例,其中男性47例,女性39例;年齡34～83歲,平均年齡(62.75±5.16)歲;體重40～84 kg,平均體重(69.34±4.76)kg;發(fā)病位置:45例直腸,41例結(jié)腸;病理分型:38例乳頭狀腺癌,4例印戎細(xì)胞癌,26例黏液腺癌,18例管狀腺癌;TNM分期:11例Ⅰ期,25例Ⅱ期,33例Ⅲ期,Ⅳ期17例。醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)已批準(zhǔn)本研究。納入標(biāo)準(zhǔn):①所有入選者均符合《中國(guó)結(jié)直腸癌診療規(guī)范(2017年版)》[5]診斷標(biāo)準(zhǔn),并經(jīng)病理檢查確診;②無惡性腫瘤放化療、生物治療史;③患者不存在精神疾病或意識(shí)不清,對(duì)各項(xiàng)檢查均能較好配合;④知情同意書由患者及其家屬自愿簽署。排除標(biāo)準(zhǔn):①復(fù)發(fā)性或多源性結(jié)直腸癌;②伴有其他惡性腫瘤疾病;③患者存在認(rèn)知功能障礙,或無法進(jìn)行正常交流;④存有重要臟器功能不全。

1.2 方法

所有入選者均采集病灶組織以及周圍正常腸壁組織作為標(biāo)本,進(jìn)行CD16a mRNA檢測(cè),檢測(cè)方法為Real-time PCR技術(shù),上游引物:5'-TCCAAA AGCCACACTCAAAGAC-3',下游引物5'-CTGAAGACACATTTTTACTCCCAAAC-3',將74 bp設(shè)計(jì)成CD16a引物擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度。內(nèi)參基因?yàn)镚APDH,以138 bp作為引物擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度,上游引物:5'-CAGGAGGCATTGCTGATGAT-3',下游引物:5'-GAAGGCTGGGGCTCATTT-3'。自上海生工生物技術(shù)有限公司購入上述產(chǎn)品。RNA使用TransZol Up RNA試劑盒提取,操作步驟需嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行,隨后進(jìn)行電泳鑒定,檢測(cè)RNA濃度,逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA,提取2 μg總RNA進(jìn)行RT-PCR反應(yīng),反應(yīng)體系見產(chǎn)品說明書,反應(yīng)條件:①94 ℃ 30 s,②94 ℃ 5 s,60 ℃ 30 s,連續(xù)進(jìn)行45個(gè)循環(huán)重復(fù)操作,之后進(jìn)行溶解分析,并計(jì)算其△Ct值,重復(fù)檢測(cè)3次,以均值作為最后結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo)

比較結(jié)直腸癌患者病灶組織與病灶旁正常組織中CD16a mRNA含量;分析癌組織中CD16a mRNA表達(dá)與病理特征的相關(guān)性,病理特征包括性別(男、女)、年齡(≥60歲、<60歲)、發(fā)病位置(直腸、結(jié)腸)、病理分型(乳頭狀腺癌、印戎細(xì)胞癌、黏液腺癌、管狀腺癌)、病理分期(Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(N0、N1、N2)等。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 結(jié)直腸癌患者不同組織中CD16a mRNA含量表達(dá)情況

病灶旁正常腸壁組織中CD16a mRNA含量的△Ct值為(6.28±0.65),病灶組織中CD16a mRNA含量的△Ct值為(5.51±0.46)。不同組織中CD16a mRNA含量表達(dá)相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=8.967,P=0.000)。

2.2 癌組織中CD16a mRNA表達(dá)與病理特征的相關(guān)性

不同性別、年齡、發(fā)病位置、病理分型、病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌患者癌組織中CD16a mRNA表達(dá)相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 癌組織中CD16a mRNA表達(dá)與病理特征的相關(guān)性

3 討論

結(jié)直腸癌在臨床發(fā)病率較高,發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜,至今尚未完全明確,與飲食習(xí)慣、生活作息等多方因素有關(guān),對(duì)患者健康及生命安全造成較大威脅。結(jié)直腸癌早期無明顯癥狀,隨著病情進(jìn)展可引起血便、排便習(xí)慣改變、腸道疼痛等臨床表現(xiàn),當(dāng)患者出現(xiàn)典型癥狀后往往已發(fā)展至中晚期,預(yù)后較差。近些年隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展,臨床治療結(jié)直腸癌方法越來越多,尤其是放化療方案層出不窮,一定程度上提高治療效果,但結(jié)直腸癌患者5年生存率仍較低[6]。目前臨床治療結(jié)直腸癌仍以手術(shù)效果最佳,最大范圍切除病灶,可防止術(shù)后復(fù)發(fā),從而延長(zhǎng)患者生存時(shí)間。但臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn),手術(shù)治療具有一定的時(shí)間窗,而早期結(jié)直腸癌由于缺乏明顯表現(xiàn),檢出率較低,漏診誤診情況頻發(fā),常導(dǎo)致手術(shù)治療不及時(shí),不利于病情的控制及預(yù)后[7]。

目前臨床研究結(jié)直腸癌的重難點(diǎn)仍為早期診斷,若能尋找靈敏度、特異度高的相關(guān)指標(biāo),對(duì)提高結(jié)直腸癌早期檢出率、改善患者預(yù)后有重要意義[8]。一般情況下人體免疫功能較為穩(wěn)定,可維持較為理想的免疫狀態(tài),不會(huì)出現(xiàn)過弱或過強(qiáng)的反應(yīng)而引發(fā)疾病[9]。機(jī)體免疫若處于平衡狀態(tài),對(duì)于發(fā)生惡變的細(xì)胞免疫系統(tǒng)可準(zhǔn)確識(shí)別并將其殺傷,阻止惡性疾病發(fā)生,一旦抗原加工缺失、抗原脫落、抗原調(diào)變,或者效應(yīng)細(xì)胞表面受體不表達(dá)、缺乏抗原遞呈細(xì)胞、效應(yīng)細(xì)胞表面受體表達(dá)缺失等情況,均會(huì)導(dǎo)致惡變細(xì)胞無法得到效應(yīng)細(xì)胞結(jié)合,導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)惡性病變[10]。臨床認(rèn)為機(jī)體免疫不僅參與惡性腫瘤形成,在腫瘤進(jìn)展與轉(zhuǎn)移中也有所參與,分析惡性腫瘤與機(jī)體免疫功能關(guān)系有重要意義[11]。

CD16a主要表達(dá)于NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞表面,是免疫效應(yīng)細(xì)胞表面的重要結(jié)合位點(diǎn),屬于一種激活型受體,在細(xì)胞免疫上可發(fā)揮積極作用。臨床研究認(rèn)為,CD16a高表達(dá)的免疫細(xì)胞聯(lián)合單克隆抗體比普通免疫細(xì)胞聯(lián)合單克隆抗體,大大增強(qiáng)ADCC作用和腫瘤殺傷能力[12]。單克隆抗體可增加對(duì)CD16a的親和力,從而增加免疫細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ的能力,故當(dāng)組織中CD16a含量降低時(shí),提示機(jī)體細(xì)胞免疫功能減弱,易導(dǎo)致疾病發(fā)生。mRNA是RNA分子的統(tǒng)稱,主要作用為將遺傳信息從DNA傳遞至核糖體上,隨后生成基因所編碼的蛋白。將基因通過RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄成mRNA前體,之后再次進(jìn)行加工可成為成熟的RNA,經(jīng)翻譯后最后成為蛋白質(zhì)[13]。本次研究利用PCR技術(shù)檢測(cè)結(jié)直腸癌患者組織中CD16a mRNA表達(dá)情況,結(jié)果顯示,病灶旁正常腸壁組織中CD16a mRNA含量的△Ct值為(6.28±0.65),高于病灶組織的(5.51±0.46);不同性別、年齡、發(fā)病位置、病理分期、病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌患者癌組織中CD16a mRNA表達(dá)未見明顯差異。表明結(jié)直腸癌患者組織中CD16a mRNA表達(dá)明顯低于病灶旁正常腸壁組織,在疾病早期診斷中有一定的應(yīng)用價(jià)值,但CD16a mRNA水平與病理特征無明顯相關(guān)性,無法判斷患者疾病進(jìn)展情況。王磊等[14]研究顯示,癌組織與正常腸壁組織中CD16a mRNA表達(dá)存在較大差異,癌旁正常腸壁組表達(dá)更高,但CD16a mRNA水平并不會(huì)隨著病理特征改變而出現(xiàn)顯著變化,提示正常組織與癌組織中CD16a mRNA水平存在明顯差異,但CD16a mRNA水平不受疾病臨床特征影響,無法反映患者病情進(jìn)展。究其原因?yàn)镃D16a mRNA是ADCC重要的介導(dǎo)物質(zhì),當(dāng)局部組織中其含量減少時(shí),可導(dǎo)致抗體介導(dǎo)的細(xì)胞免疫功能下降,促使殺傷腫瘤細(xì)胞或惡性病變細(xì)胞的能力降低,使得局部組織中惡病變細(xì)胞大量增殖,導(dǎo)致惡性腫瘤形成[15]。由于CD16a mRNA為單一分子細(xì)胞,在鑒別結(jié)直腸癌組織與正常腸壁組織中具有較高的靈敏度,但并不會(huì)隨著病情進(jìn)展而變化,故在不同病理特征結(jié)直腸癌患者組織中表達(dá)未見明顯差異。

綜上所述,正常組織與癌組織中CD16a mRNA表達(dá)存在明顯差異,在疾病早期診斷中有一定的應(yīng)用價(jià)值,但CD16a mRNA水平與病理特征無明顯相關(guān)性,無法判斷患者疾病進(jìn)展情況。