鼻咽癌組織中c-IAP2的表達(dá)及其臨床意義

李恒麗 邢媛媛 張 莉

鼻咽癌屬于常見惡性腫瘤,好發(fā)于鼻咽頂壁及側(cè)壁,鼻咽癌發(fā)病早期癥狀不明顯,多數(shù)患者出現(xiàn)明顯癥狀時病情已進(jìn)展至中晚期,增加治療難度,整體預(yù)后較差[1]。細(xì)胞凋亡抑制蛋白-2(c-IAP2)屬于凋亡抑制因子家族成員,在細(xì)胞凋亡的抑制過程中發(fā)揮重要作用。相關(guān)研究顯示[2-3],c-IAP2在多種惡性腫瘤中存在異常表達(dá),能夠通過抑制腫瘤細(xì)胞凋亡的過程促使腫瘤發(fā)生。鑒于此,本研究分析鼻咽癌組織內(nèi)c-IAP2的表達(dá)及臨床意義,旨在為臨床提供指導(dǎo)。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2018年1月至2020年1月我院收治的74例鼻咽癌患者的臨床資料。其中男性47例,女性27例;年齡35～72歲,平均年齡(58.96±5.27)歲;體質(zhì)量指數(shù)19.2～28.1 kg/m2,平均體質(zhì)量指數(shù)(23.36±1.92)kg/m2;臨床分期:35例Ⅰ～Ⅱ期,39例Ⅲ～Ⅳ期;分化程度:30例低分化,44例中高分化;顱底侵犯:20例有,54例無;神經(jīng)侵犯:23例有,51例無;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移:29例有,45例無。納入標(biāo)準(zhǔn):患者均經(jīng)病理活檢確診為鼻咽癌;臨床資料完整;患者精神狀態(tài)正常。排除標(biāo)準(zhǔn):存有肝腎功能障礙;病理采集前經(jīng)抗腫瘤治療;合并嚴(yán)重腦血管疾病;伴有傳染性疾病;伴有其他惡性腫瘤。

1.2 方法

所有患者均在抗腫瘤治療前,經(jīng)鼻內(nèi)鏡下采集腫瘤組織標(biāo)本及癌旁組織標(biāo)本,并及時送至病理科檢測c-IAP2表達(dá)情況。采用實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)開展檢測工作:先在Trizol法輔助下完整組織內(nèi)RNA提取,之后加入SYBR green染料開展PCR擴(kuò)增處理,具體操作流程需嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行;具體引物為:c-IAP2-F,TGGATATTTCCGTGGCTCTT;c-IAP2-R,CCCACATAATAAAAACCCGCA;GAPDH-F,AATCCCATCACCATCTTCCA;GAPDH-R,CCTGCTT-CACCACCTTCTTG。Western印跡:先將組織內(nèi)總蛋白提取出來,之后制備分離膠及濃縮膠,待電泳轉(zhuǎn)膜后,以5%脫脂奶粉封閉處理,并在4 ℃環(huán)境下孵育鼠抗人c-IAP2抗體過夜,之后洗膜,滴加二抗,并在室溫下孵育1.5 h,凝膠成像系統(tǒng)掃描。免疫組織化學(xué)染色:將標(biāo)本經(jīng)甲醛溶液固定后,常規(guī)進(jìn)行石蠟包埋等處理,之后連續(xù)切片,保持組織切片厚度4 μm,經(jīng)烤片、二甲苯脫蠟、乙醇水化、抗原修復(fù)等一系列處理后,血清封閉后加入一抗c-IAP2,之后4 ℃孵育過夜后加入二抗,經(jīng)PBS溶液漂洗后,進(jìn)行二氨基聯(lián)苯胺顯色,再經(jīng)蘇木精復(fù)燃、脫水封片等處理,顯微鏡下觀察。結(jié)果判定:依靠染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞比判定,其中染色強(qiáng)度為0分無色,1分淡黃色,2分棕色,3分棕褐色;陽性細(xì)胞比為0分<5%,1分5%～25%,2分為>25%～50%,3分為>50%～75%,4分為>75%;兩者乘積<6分為低表達(dá),≥6分則為高表達(dá)。所有患者均隨訪2年,隨訪內(nèi)容為腫瘤復(fù)發(fā)情況,隨訪方式為電話隨訪及門診復(fù)查。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)c-IAP2表達(dá)情況:比較c-IAP2在腫瘤組織及癌旁組織內(nèi)的表達(dá)水平。(2)c-IAP2表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系:分析不同c-IAP2表達(dá)患者在年齡、性別、體質(zhì)量指數(shù)、腫瘤分期、分化程度、顱底侵犯、神經(jīng)侵犯等病理特征間的差異。(3)c-IAP2表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系:隨訪2年,記錄患者腫瘤復(fù)發(fā)情況,比較不同c-IAP2表達(dá)患者復(fù)發(fā)率。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 c-IAP2表達(dá)情況

腫瘤組織內(nèi)c-IAP2高表達(dá)率高于癌旁組織,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 不同組織內(nèi)c-IAP2表達(dá)情況對比(例,%)

2.2 c-IAP2表達(dá)與鼻咽癌臨床病理特征的關(guān)系

高表達(dá)組臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、分化程度低分化及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移占比高于低表達(dá)組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 c-IAP2表達(dá)與鼻咽癌臨床病理特征的關(guān)系(例,%)

2.3 c-IAP2表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系

74例鼻咽癌患者隨訪2年,復(fù)發(fā)22例,復(fù)發(fā)率為29.73%(22/74);高表達(dá)組復(fù)發(fā)率高于低表達(dá)組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 c-IAP2表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系(例,%)

3 討論

鼻咽癌病因復(fù)雜,臨床認(rèn)為EB病毒感染為主要病因,與遺傳、環(huán)境及飲食等多種因素相關(guān),多種因素綜合作用,則可促使EB病毒于鼻腔黏膜大量繁殖代謝,從而釋放多種毒性代謝產(chǎn)物,引起黏膜上皮細(xì)胞損傷[4]。EB病毒感染后還可整合至宿主細(xì)胞DNA內(nèi),對受感染細(xì)胞的凋亡起到抑制作用,并可激活其生長,最終誘導(dǎo)增殖失控,形成腫瘤。臨床治療鼻咽癌以早確診、早治療為原則,臨床需有計劃、合理地制定個體化綜合治療方案,以阻止腫瘤進(jìn)展,提高患者生存質(zhì)量。放射治療為治療鼻咽癌的首選根治性手段,由于鼻咽癌細(xì)胞對放射治療敏感性極高,早期鼻咽癌經(jīng)放射治療后可獲得良好的治療效果,但對于中晚期鼻咽癌治療難度較大,即使放療技術(shù)不斷改進(jìn),并聯(lián)合化療等綜合手段,仍有部分患者存在較高復(fù)發(fā)風(fēng)險,預(yù)后欠佳[5-6]。因此,還需尋找新的分子標(biāo)志物評估鼻咽癌患者病情及預(yù)后,以便于提高整體療效。

凋亡抑制因子屬于高度保守的內(nèi)源性抗細(xì)胞凋亡因子家族,能夠通過參與調(diào)解核因子NF-κB及抑制Caspase活性等方式阻止細(xì)胞凋亡,從而廣泛參與多種病理及生理過程的調(diào)控[7-8]。但臨床發(fā)現(xiàn),細(xì)胞凋亡是機(jī)體預(yù)防細(xì)胞過度增殖、消除有害細(xì)胞的重要生理過程,細(xì)胞凋亡調(diào)控則有助于機(jī)體維持正常更新及增殖,故細(xì)胞凋亡機(jī)制一旦發(fā)生障礙,則難以控制有害細(xì)胞過度增殖,加速腫瘤發(fā)生及發(fā)展[9]。c-IAP2則屬于凋亡抑制因子家族成員,在惡性腫瘤中研究較為少見,在鼻咽癌中的表達(dá)情況及臨床意義仍需深入分析。本研究結(jié)果顯示,腫瘤組織內(nèi)c-IAP2高表達(dá)率高于癌旁組織,高表達(dá)組臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、分化程度低分化及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移占比高于低表達(dá)組;74例鼻咽癌患者經(jīng)2年隨訪,復(fù)發(fā)率為29.73%(22/74);高表達(dá)組復(fù)發(fā)率高于低表達(dá)組。提示c-IAP2在鼻咽癌中呈高表達(dá),其表達(dá)與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度密切相關(guān),且c-IAP2高表達(dá)患者復(fù)發(fā)風(fēng)險更高高,可作為評估預(yù)后及指導(dǎo)治療的重要參考指標(biāo)。其原因?yàn)閏-IAP2作為與細(xì)胞凋亡存在密切關(guān)系的蛋白,能夠參與腫瘤細(xì)胞凋亡的調(diào)控,當(dāng)c-IAP2處于高表達(dá)狀態(tài)時,則具有促癌活性,會抑制鼻咽癌細(xì)胞凋亡,使得生長能力大幅提高,從而迅速增殖及擴(kuò)散,加速鼻咽癌進(jìn)展,故高表達(dá)患者普遍腫瘤分期高,更易伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[10]。而腫瘤分期高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與患者預(yù)后密切相關(guān),相較于早期患者腫瘤細(xì)胞清除難度更大,易出現(xiàn)遠(yuǎn)期復(fù)發(fā),預(yù)后欠佳。因此,臨床可將c-IAP2作為鼻咽癌治療的新靶點(diǎn),通過抑制c-IAP2表達(dá)促使腫瘤細(xì)胞凋亡,以阻止腫瘤增殖及擴(kuò)散,降低遠(yuǎn)期復(fù)發(fā)風(fēng)險。

綜上所述,鼻咽癌組織中c-IAP2呈高表達(dá),且高表達(dá)與不良臨床病理特征密切相關(guān),c-IAP2表達(dá)水平越高則復(fù)發(fā)風(fēng)險越高,可為臨床治療提供指導(dǎo)。