改良蕈樣膀胱插管技術(shù)在家兔尿生成實驗中的應(yīng)用

陳柏合,羅滔,劉波,蔡仕寧 （. 遵義醫(yī)科大學(xué)珠海校區(qū)機(jī)能實驗室，廣東 珠海 5904；. 遵義醫(yī)科大學(xué)珠海校區(qū)病理生理學(xué)教研室，廣東 珠海 5904）

機(jī)能學(xué)實驗是將生理學(xué)、病理生理學(xué)和藥理學(xué)三門學(xué)科的相關(guān)實驗有機(jī)融合而成的一門獨(dú)立的實驗課程，該課程是用實驗手段研究動物或人體的機(jī)能活動規(guī)律及其在病理狀態(tài)或藥物干預(yù)下的變化，是醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)課程體系的重要組成部分。在泌尿系統(tǒng)實驗學(xué)習(xí)中，探討影響尿液生成的因素和觀察利尿藥物的作用是目前機(jī)能實驗教學(xué)中應(yīng)用比較廣泛的一個實驗，其直接的教學(xué)目的是使學(xué)生熟悉并掌握尿生成的過程（包括腎小球濾過、腎小管和集合管的重吸收與分泌）以及尿生成的影響因素。實驗最重要的環(huán)節(jié)是導(dǎo)尿，即采用恰當(dāng)?shù)牟骞芗夹g(shù)把尿液從家兔膀胱里導(dǎo)出來。目前應(yīng)用較為廣泛的插管技術(shù)有輸尿管插管法、膀胱插管法、尿道插管法、膀胱內(nèi)輸尿管插管法。輸尿管插管法能夠精準(zhǔn)導(dǎo)尿，是導(dǎo)尿的理想選擇，但在實際操作過程中，由于家兔雙側(cè)輸尿管較細(xì)且卷曲，游離輸尿管時易造成輸尿管損傷；同時，輸尿管切口大小不容易控制，多次反復(fù)插管會損傷輸尿管，常導(dǎo)致創(chuàng)傷性無尿[1]。尿道插管法是從尿道進(jìn)入膀胱導(dǎo)尿，但是受性別的影響，雄性和雌性家兔的尿道口構(gòu)造各有不同，且未生育與已生育的雌性家兔尿道口也有不同[2]，雌性家兔尿道插管難度較大，不易掌握，且容易導(dǎo)致創(chuàng)傷性血尿甚至無尿，無法滿足多批次實驗教學(xué)要求[2]。而膀胱內(nèi)輸尿管插管法需要使用特殊的輸尿管插管，通過膀胱切口進(jìn)入尋找膀胱內(nèi)輸尿管出口，然后進(jìn)行插管，技術(shù)難度甚于輸尿管插管，而且膀胱內(nèi)的輸尿管插管更容易造成堵塞，影響插管成功率[3]。對比上述三種插管技術(shù)，膀胱插管法是最適用的，其中蕈樣膀胱插管是最常用的膀胱插管，但是由于普通蕈樣膀胱插管導(dǎo)管直徑相對粗大，不利于導(dǎo)尿，因此改良蕈樣膀胱插管，使其適用于家兔尿生成實驗成為了導(dǎo)尿的關(guān)鍵。經(jīng)過思考研究，本團(tuán)隊用簡單的工具制作改良蕈樣膀胱插管導(dǎo)管用于家兔尿生成實驗，并收集了232名同級臨床、影像專業(yè)學(xué)生對改良蕈樣膀胱插管技術(shù)導(dǎo)尿效果的反饋，學(xué)生反映導(dǎo)尿效果較好。現(xiàn)將該技術(shù)的應(yīng)用報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

實驗動物：健康新西蘭大白兔10只，雌雄不限，體質(zhì)量2.0~2.5 kg，SPF級繁殖飼料和滅菌水飼養(yǎng)，飼養(yǎng)溫度20~26 ℃，濕度40%~70%。

實驗試劑：生理鹽水、25%氨基甲酸乙酯溶液、50%葡萄糖溶液、0.01%去甲腎上腺素溶液、0.1%呋塞米溶液。

實驗器械：哺乳類動物器械1套（手術(shù)刀、手術(shù)剪、眼科剪、手術(shù)鑷、眼科鑷、止血鉗、皮鉗、玻璃分針、三通管等）、恒溫水浴槽、嬰兒秤、兔臺、注射器（20 mL、10 mL、5 mL、1 mL）、靜脈輸液器、靜脈注射器、手術(shù)絲線、改良蕈樣膀胱插管導(dǎo)管、皮膚縫合針、紗布、集尿杯等。

1.2 方法

1.2.1 稱重、麻醉和固定 取家兔1只，置于嬰兒秤稱重后經(jīng)耳緣靜脈注射25%氨基甲酸乙酯溶液3~4 mL/kg，仰臥位固定在兔臺上。家兔角膜反射減弱或消失、四肢肌張力減弱或消失、疼痛反射消失后停止麻醉，拔出注射管并用三通管連接于注射針，三通管另一端連接靜脈輸液器和生理鹽水，調(diào)節(jié)注射速度為2滴/秒，持續(xù)給予生理鹽水靜脈滴注。注射部位用膠布固定，后期通過三通管實現(xiàn)靜脈給藥。

1.2.2 改良蕈樣膀胱插管導(dǎo)管制作 將一次性注射器的帽蓋剪除細(xì)端形成開放管口，剪除后的細(xì)端連接一次性1 mL注射器的針頭接口部分，最后連接剪除頭皮針的靜脈注射細(xì)管。改良蕈樣膀胱插管導(dǎo)管包括注射器帽蓋形成的膀胱插管導(dǎo)管以及靜脈注射細(xì)管形成的導(dǎo)尿管。

1.2.3 膀胱插管 在家兔恥骨聯(lián)合上緣約1 cm橢圓形區(qū)域備皮，手術(shù)刀作約5 cm的縱向切口，沿腹白線剪開腹直肌，暴露膀胱。用溫?zé)岬纳睇}水濕潤紗布墊在暴露的膀胱下，找到左右兩側(cè)輸尿管，隨后用手術(shù)絲線穿過兩側(cè)輸尿管下方，輕輕提起膀胱向腹部方向翻轉(zhuǎn)，絲線結(jié)扎尿道與膀胱連接處，防止尿液從尿道排出。用單線穿過手術(shù)縫合針，在膀胱無血供區(qū)域進(jìn)行荷包縫合，輕提荷包縫合中心區(qū)域剪開小口，注意開口不要超過荷包縫合區(qū)域范圍，插入膀胱插管導(dǎo)管，拉線結(jié)扎插管導(dǎo)管和膀胱，用溫?zé)岬纳睇}水濕潤紗布覆蓋膀胱，見圖1。膀胱插管導(dǎo)管末端用膠布固定于集尿杯中，以便觀察及計算每分鐘尿滴數(shù)。

圖1 家兔膀胱插管圖

1.3 觀察指標(biāo)

觀察并記錄膀胱插管成功后每分鐘尿滴數(shù)，每隔2 min記錄1次尿量，一共記錄3次，取平均值。完成3次尿滴數(shù)記錄后（6 min后）先靜脈注射50%葡萄糖溶液2 mL/kg，然后注射0.1%呋塞米溶液0.5 mL/kg，最后注射0.01%去甲腎上腺素溶液0.2 mL/kg。每種藥物注射后觀察15~20 min，待藥物干預(yù)作用基本消失后再進(jìn)行下一種藥物的注射，記錄每種藥物注射后的每分鐘尿滴數(shù)，間隔5 min記錄1次尿量，一共記錄3次，取平均值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用兩樣本t檢驗。P<0.01為差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

與給藥前尿量相比，50%葡萄糖、0.1%呋塞米給藥后家兔尿量均明顯增加，0.01%去甲腎上腺素給藥后家兔尿量明顯減少，差異均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），見表1。

表1 3種藥物對家兔尿量生成的影響（n=10，滴/分）

3 討論

尿液的生成包括3個基本過程，即腎小球濾過、腎小管和集合管的重吸收以及腎小管和集合管的分泌。尿生成的過程主要受神經(jīng)和體液等因素調(diào)節(jié)。參與神經(jīng)調(diào)節(jié)的腎交感神經(jīng)興奮可釋放去甲腎上腺素，通過增加腎小管對水和鈉的重吸收，從而使尿量減少。在體液因素中，腎小管溶質(zhì)濃度、滲透壓、循環(huán)血量以及激素水平可通過不同途徑影響尿生成。高濃度葡萄糖可增加腎小管溶質(zhì)濃度，使管內(nèi)滲透壓增加，影響水分重吸收，從而使尿量增加；呋塞米是一種高效的利尿劑，主要作用于髓袢升支粗段，通過抑制Na+-K+-2Cl-同向轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制NaCl的重吸收和尿液的濃縮，從而達(dá)到利尿效果。

家兔尿生成實驗的技術(shù)難點為導(dǎo)尿，相對于其他常用的插管方式，膀胱插管法具有操作簡單、導(dǎo)尿效果佳的優(yōu)勢。除了制作改良蕈樣膀胱插管導(dǎo)管，本團(tuán)隊還在常規(guī)膀胱插管法基礎(chǔ)上進(jìn)行了2點細(xì)節(jié)上的改進(jìn)：①實現(xiàn)膀胱插管的前提條件是膀胱保持充盈狀態(tài)，因此一般術(shù)前會持續(xù)給予家兔靜脈滴注生理鹽水，但這會改變正常尿量的計算，因此本團(tuán)隊參考多項研究[4-9]改變了實驗觀察項目，即對比50%葡萄糖、0.1%呋塞米和0.01%去甲腎上腺素給藥前后的尿量變化，探討這3種藥物對尿生成的影響；②充盈的膀胱因為膀胱肌牽張發(fā)射器容易受到刺激引起逼尿肌收縮、尿道括約肌擴(kuò)張，從而使尿液瞬間排空，為了避免這種情況的發(fā)生，本團(tuán)隊在膀胱充分暴露后先結(jié)扎尿道，再進(jìn)行荷包縫合，從而保證了膀胱插管的順利完成。

本團(tuán)隊實驗室采用改良蕈樣膀胱插管技術(shù)進(jìn)行家兔尿生成實驗2年以上，隨堂收集了232名同級臨床、影像專業(yè)學(xué)生對改良蕈樣膀胱插管技術(shù)導(dǎo)尿效果的反饋，學(xué)生反映該插管方法的導(dǎo)尿效果顯著。改良蕈樣膀胱插管導(dǎo)管部分摩擦力比玻璃、塑料等其他材質(zhì)的膀胱插管導(dǎo)管大，結(jié)扎線不易滑落；同時，靜脈注射器形成的導(dǎo)管直徑小，有利于尿液以尿滴形式從管口滴出，便于計算每分鐘尿滴數(shù)；除此以外，經(jīng)過改良的膀胱插管成本低，制作簡單，可推廣使用。