COX2 和CDX2 在喉鱗癌中的表達(dá)特點(diǎn)及其與喉鱗癌患者預(yù)后的關(guān)系

莊利萍 ，王開昕 ，王 芳 ，葉 宏

（1）都江堰市中醫(yī)醫(yī)院病理科，四川 都江堰 611830;2）昆明醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)與病理生理學(xué)系，云南 昆明 650500;3）華中科技大學(xué)協(xié)和深圳醫(yī)院病理科，廣東 深圳 518052）

頭頸部鱗癌中最常見的是喉癌，占所有癌癥死亡的1%[1]，據(jù)文獻(xiàn)報道[2]預(yù)計2022 年中國（不包括臺灣?。⒂写蠹s3 萬人新診斷出喉癌，1.7萬人死于喉癌；其中，新發(fā)病例男性約2.7 萬人，女性約0.3 萬人；死亡病例男性約1.4 萬，女性約0.3 萬。喉乳頭狀瘤，兒童發(fā)病多于成人，成人有惡變傾向，因此，喉癌的癌前病變是喉乳頭狀瘤[3?4]。喉息肉多由慢性炎癥、刺激等因素引起的，發(fā)病率占喉部良性腫瘤的20%以上[5]。

目前，關(guān)于喉鱗狀上皮病變的不同階段（喉息肉、喉乳頭狀瘤、喉鱗狀細(xì)胞癌）關(guān)系比較的報道少見。而喉癌目前的治療方法仍以手術(shù)為主，但傳統(tǒng)手術(shù)方法創(chuàng)傷較大，且術(shù)后患者生存質(zhì)量較低。隨著微創(chuàng)手術(shù)概念的興起，需要對喉癌作出早期診斷，并正確估計患者治療后的預(yù)后，以便選擇合理的治療方法，避免造成不必要的創(chuàng)面并盡最大可能地保留喉的功能。當(dāng)前，腫瘤患者手術(shù)方法的確定和預(yù)后的評價主要基于腫瘤的臨床分期，但同一分期的喉癌患者常常顯示出不同的臨床過程，這就表明單一的TNM 分期對于喉癌患者預(yù)后的推測存在不足。為此，本課題主要通過免疫組化檢測增殖分化相關(guān)基因COX2、CDX2在喉息肉、喉乳頭狀瘤、喉鱗癌中的表達(dá)，同時探討檢測指標(biāo)與喉癌患者預(yù)后之間關(guān)系以找出判斷喉鱗癌預(yù)后的最佳免疫組化檢測指標(biāo)，為喉鱗癌患者預(yù)后判斷和治療方案的選擇提供一定的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究材料

1.1.1 樣本資料樣本選自昆明醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院手術(shù)切除的臨床資料完整的存檔蠟塊，共51 例。全部病例術(shù)前均未經(jīng)放療和化療。其中，喉息肉15 例、喉乳頭狀瘤11 例、喉鱗癌25 例；25 例喉鱗癌樣本，高分化8 例，中分化11 例，低分化6 例。淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移8 例，淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移17 例。男性23 例，女性2 例，年齡39～79 歲，平均62.12 歲。按WHO 喉癌TNM 分類標(biāo)準(zhǔn)[6]：T1～T2 期16 例，T3～T4 期9 例。4%中性甲醛固定，5 μm 連續(xù)切片。

所有患者的隨訪以電話方式進(jìn)行，隨訪日期從病理報告確診日期算起，至2008 年12 月，嚴(yán)格記錄隨訪情況。共隨訪到25 例喉鱗癌患者，失訪0 例；隨訪結(jié)局定義為死亡。

1.1.2 主要試劑COX2 即用型兔抗人單克隆抗體、CDX2 即用型鼠抗人單克隆抗體、DAB 顯色試劑盒、即用型非生物素免疫組化EliVisionTMplus 檢測試劑盒等均為美國Maxin 公司產(chǎn)品，購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。

1.2 研究方法

1.2.1 免疫組化染色步驟嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行。每次實(shí)驗(yàn)均設(shè)陽性對照和陰性對照。

細(xì)胞質(zhì)和/或細(xì)胞膜為COX2 主要著色部位，淡黃色～棕黃色。細(xì)胞核為CDX2 主要著色部位，呈淡黃色。

采用HPIAS-1000 高清晰度病理圖文分析系統(tǒng)對免疫組化結(jié)果進(jìn)行定量分析。每個樣本均在400 倍下，按無偏采樣原則取5 個視野，每個視野測定5 個細(xì)胞。最終結(jié)果由陽性單位（positive unit，PU）來判斷[7]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 COX2 蛋白免疫組化檢測結(jié)果

COX2 在喉鱗癌組織中的表達(dá)低于喉息肉、喉乳頭狀瘤中的表達(dá)（圖1～3），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.004，P=0.001），在喉息肉和喉乳頭狀瘤中陽性著色集中于棘細(xì)胞層和顆粒細(xì)胞層；T3-T4 期喉鱗癌COX2 表達(dá)比T1-T2 期高，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.001）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移喉鱗癌組高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移喉鱗癌組，低、中、高分化喉鱗癌中的表達(dá)逐漸升高，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表1～2。

表1 COX2 在喉息肉、喉乳頭狀瘤 和喉鱗 癌中的表達(dá)（）Tab.1 The expression of COX2 in laryngeal polyps，laryngeal papilloma and laryngeal squamous cell carcinoma（）

表1 COX2 在喉息肉、喉乳頭狀瘤 和喉鱗 癌中的表達(dá)（）Tab.1 The expression of COX2 in laryngeal polyps，laryngeal papilloma and laryngeal squamous cell carcinoma（）

與喉鱗癌比較，▲P <0.05。

表2 COX2 在喉鱗癌中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系（）Tab.2 The relationship between the expression of COX2 and clinicopathologic parameters in laryngeal squamous cell carcinoma（）

表2 COX2 在喉鱗癌中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系（）Tab.2 The relationship between the expression of COX2 and clinicopathologic parameters in laryngeal squamous cell carcinoma（）

圖1 COX2 在喉息肉中的表達(dá)IHC（比例尺：100 μm×200）Fig.1 Expression of COX2 protein in laryngeal polypus IHC（100 μm×200）

圖2 COX2 在喉乳頭狀瘤中的表達(dá)IHC（比例尺：100 μm×200）Fig.2 Expression of COX2 protein in laryngeal papilloma IHC（100 μm×200）

2.2 CDX2 蛋白免疫組化檢測結(jié)果

CDX2 在喉息肉、喉乳頭狀瘤（圖4～5）中多為弱陽性～陽性表達(dá)，陽性細(xì)胞散在分布，喉鱗癌（圖6）中未表達(dá)CDX2，但兩兩比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表3。

表3 CDX2 在喉息肉、喉乳頭狀瘤和喉鱗癌中的表達(dá)（）Tab.3 The expression of CDX2 in laryngeal polyps，laryngeal papilloma and laryngeal squamous cell carcinoma（）

表3 CDX2 在喉息肉、喉乳頭狀瘤和喉鱗癌中的表達(dá)（）Tab.3 The expression of CDX2 in laryngeal polyps，laryngeal papilloma and laryngeal squamous cell carcinoma（）

圖4 CDX2 在喉息肉中的表達(dá)IHC（比例尺：100 μm×200）Fig.4 Expression of CDX2 protein in laryngeal polypus IHC（100 μm×200）

圖5 CDX2 在喉乳頭狀瘤中的表達(dá)IHC（比例尺：100 μm×200）Fig.5 Expression of CDX2 protein in laryngeal papilloma IHC（100 μm×200）

圖6 CDX2 在喉鱗癌中呈陰性表達(dá)IHC（比例尺：100 μm×200）Fig.6 Negative expression of CDX2 protein in laryngeal squamous cell carcinoma IHC（100 μm×200）

2.3 COX2 的表達(dá)與喉鱗癌患者預(yù)后的關(guān)系

單因素生存分析中，COX2 陰性表達(dá)的喉鱗癌患者1 a、3 a、5 a 生存率高于COX2 陽性表達(dá)的喉鱗癌患者，COX2 陰性表達(dá)的喉鱗癌中位生存期比COX2 陽性表達(dá)的長，但是，兩者比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表4 和圖7。

表4 COX2 的表達(dá)與喉鱗癌患者預(yù)后的關(guān)系Tab.4 Relationship between expression of COX2 and prognosis of laryngeal squamous cell carcinoma patient

圖7 COX2 蛋白表達(dá)陽性和陰性喉鱗癌患者的生存曲線Fig.7 Survival curves of patients with positive and negative COX2 protein expression

3 討論

3.1 COX2 的表達(dá)特點(diǎn)及分析

喉鱗癌是一種高度致殘的疾病，影響患者的語言、吞咽和呼吸技能[8]，臨床上早期診斷極為重要。環(huán)氧合酶2（cyclooxygenase 2，COX2）作為體內(nèi)前列腺素生物合成的限速酶，其蛋白由604個氨基酸組成，表皮生長因子結(jié)構(gòu)域、膜結(jié)合結(jié)構(gòu)域及酶活性結(jié)構(gòu)域，構(gòu)成其基本結(jié)構(gòu)。人COX2 基因位于1 號染色體1q25.2～25.3 上，全長約8.3 kb，含10 個外顯子和9 個內(nèi)含子[9]。COX2 被認(rèn)為是一種“應(yīng)答基因”，在健康組織中呈低表達(dá)或不表達(dá)[10?11]，而在多種癌前病變和惡性病變時呈高表達(dá)[12]。其在體內(nèi)呈誘導(dǎo)性表達(dá)，在被細(xì)胞內(nèi)外各種刺激因素如脂多糖、白介素-1、血小板激活因子等因素所誘導(dǎo)下表達(dá)COX2。病理情況下，COX2 參與炎癥及腫瘤的形成[13?14]。研究顯示，COX2 與喉鱗癌[15?16]、食管鱗癌[17]和頭頸部鱗癌[18]的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān)，而有報道[19?20]卻發(fā)現(xiàn)口腔鱗癌的復(fù)發(fā)或生存率與COX2無關(guān)，因此，在頭頸部鱗癌中，COX2 的表達(dá)無預(yù)后意義。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)COX2 在喉鱗癌中的表達(dá)低于喉息肉和喉乳頭狀瘤中的表達(dá)，表明COX2參與了炎癥反應(yīng)及喉鱗癌的發(fā)生；COX2 在喉鱗癌低、中、高分化的表達(dá)逐漸升高，但其表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義；隨著喉鱗癌臨床分期的增高，COX2 的表達(dá)也增加，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義。筆者認(rèn)為COX2 在不同病理階段含量不同，對腫瘤細(xì)胞的促增殖作用也不同。

本實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)喉鱗癌中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組比無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的COX2 陽性表達(dá)高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義?？紤]與標(biāo)本量太少有關(guān)。COX2 表達(dá)陰性的喉鱗癌患者比陽性的患者中位生存期長，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，故筆者認(rèn)為COX2 不能預(yù)測喉鱗癌患者的預(yù)后。

3.2 CDX2 的表達(dá)特點(diǎn)及分析

CDX2 基因，包括3 個外顯子和2 個內(nèi)含子，全長22～23 kb，蛋白含311 個單氨基酸，與DNA 的相應(yīng)區(qū)域結(jié)合，方式為螺旋-環(huán)-螺旋，DNA 表達(dá)的調(diào)節(jié)靠轉(zhuǎn)錄因子的形式。這種核同源異構(gòu)體轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)控著組織的分化和增殖[21?22]。

據(jù)報道，CDX2 是膽管癌[23]和胰腺浸潤性導(dǎo)管癌[24]患者預(yù)后的指標(biāo)之一；CDX2 對Barrett 食管進(jìn)展的早期檢測具有潛在的預(yù)后效用，其表達(dá)可顯著預(yù)測初次活檢后40～ 45 個月杯狀細(xì)胞腸化生發(fā)生的風(fēng)險[22]。有學(xué)者推測CDX2 對腸上皮的鑒別、發(fā)生發(fā)展起著重要作用[25]，是結(jié)直腸腺癌[26]的標(biāo)志物，具有高度特異性和敏感性，CDX2 的表達(dá)可能有助于乳腺Paget 病的分型[27]；但也有學(xué)者認(rèn)為CDX2 多態(tài)性不能作為預(yù)測中國人結(jié)直腸癌易感性的有用標(biāo)記[28]。60 例食管鱗癌中CDX2 的陽性率為5%，而CDX2 在43 例肺鱗癌中僅2 例為散在陽性，42 例膀胱鱗癌中也發(fā)現(xiàn)有CDX2 表達(dá)，但表達(dá)較少為1 例，提示CDX2在鱗癌中表達(dá)極低[29]。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)CDX2 在喉息肉、喉乳頭狀瘤中多為弱陽性～陽性表達(dá)，CDX2 在喉鱗癌中不表達(dá)，且差異無統(tǒng)計學(xué)意義，初步推測CDX2 可能不是喉鱗癌的危險因素。