活化激酶C受體1、四個(gè)半LIM結(jié)構(gòu)域蛋白1在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及與患者預(yù)后的關(guān)系△

喬濱，劉孝民，肖中岳，孫佳春

河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤外科，河南 洛陽(yáng) 471003

食管癌是臨床上較為常見(jiàn)的消化系統(tǒng)疾病，多好發(fā)于中老年人群。食管癌以食管鱗狀細(xì)胞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）最為常見(jiàn)，約占全部食管癌類(lèi)型的90%[1]。ESCC 發(fā)生發(fā)展與腫瘤相關(guān)基因的異常表達(dá)密切相關(guān)。化療是目前臨床治療ESCC 的重要方法之一，但部分患者對(duì)化療反應(yīng)存在一定異質(zhì)性，預(yù)后亦有很大差異[2]。因此，尋找有效的分子標(biāo)志物對(duì)ESCC 患者對(duì)化療的反應(yīng)進(jìn)行預(yù)測(cè)有重要作用，可為ESCC 的個(gè)體化治療提供指導(dǎo)意見(jiàn)?；罨っ窩 受體1（receptor for activated C kinase 1，RACK1）屬于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)錨定蛋白，已有研究證實(shí)，RACK1 參與了多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展，與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)[3]。四個(gè)半LIM 結(jié)構(gòu)域蛋白1（four and a half LIM domains 1，F(xiàn)HL1）則是一種腫瘤抑制因子，可有效抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展[4]。但目前關(guān)于RACK1、FHL1 在局部晚期ESCC 療效評(píng)估及預(yù)后預(yù)測(cè)中的價(jià)值仍存在爭(zhēng)議。鑒于此，本研究通過(guò)回顧性分析局部晚期ESCC 患者的臨床資料，探討RACK1及FHL1 的表達(dá)對(duì)局部晚期ESCC 化療療效及預(yù)后的評(píng)估價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2015年2月至2021年3月河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院收治的局部晚期ESCC 患者的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)手術(shù)切除、穿刺活檢或穿刺細(xì)胞學(xué)檢查等確診為ESCC；②年齡﹥18 歲；③既往未接受放療、化療；④臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①過(guò)敏體質(zhì)；②存在意識(shí)障礙或精神類(lèi)疾??；③合并全身感染性疾病。依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入122 例ESCC 患者，其中男68 例，女54 例；年齡41～71 歲，平均（57.23±5.47）歲；臨床分期：Ⅲ期64 例，Ⅳ期58 例；腫瘤部位：頸段20 例，胸上段34 例，胸中段53 例，胸下段15 例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò)，所有患者均知情同意。

1.2 化療方法

所有患者均采用紫杉醇聯(lián)合順鉑同步化療：第1、8 天，紫杉醇80 mg/m2靜脈滴注，第1～3 天，順鉑40 mg/m2靜脈滴注，21 天為一個(gè)周期，共化療4 個(gè)周期。

1.3 免疫組化法檢測(cè)RACK1、FHL1 的表達(dá)情況

取122 例ESCC 患者的ESCC 組織及距瘤體5 cm 以上的癌旁組織，制成石蠟切片。組織標(biāo)本脫水，10%甲醛固定，二甲苯透明，常規(guī)石蠟包埋，5 μm 連續(xù)切片。采用免疫組化法檢測(cè)RACK1、FHL1 的表達(dá)情況。采用RACK1、FHL1 兔抗人單克隆抗體，詳細(xì)步驟嚴(yán)格遵循說(shuō)明書(shū)，采用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）代替一抗作為陰性對(duì)照。

結(jié)果判定[5]：RACK1、FHL1 主要定位于細(xì)胞核，呈棕色染色判定為陽(yáng)性。依據(jù)染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞所占比例進(jìn)行評(píng)分。無(wú)著色計(jì)0 分，淡黃色染色計(jì)1 分，棕黃色染色計(jì)2 分，黃褐色染色計(jì)3分；無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)0 分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例﹤10%計(jì)1 分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例10%～50%計(jì)2 分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例51%～75%計(jì)3 分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例﹥75%計(jì)4 分。染色強(qiáng)度評(píng)分和陽(yáng)性細(xì)胞所占比例評(píng)分相乘，﹤3分判定為陰性，≥3分判定為陽(yáng)性。

1.4 觀察指標(biāo)和評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

①比較ESCC 組織和癌旁組織中RACK1、FHL1 的表達(dá)情況。②依據(jù)實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估兩組患者的臨床療效[6]，包括完全緩解（complete response，CR）、部分緩解（partial response，PR）、疾病穩(wěn)定（stable disease，SD）、疾病進(jìn)展（progressive disease，PD），將CR+PR+SD判定為有效，PD判定為無(wú)效，比較不同臨床療效ESCC患者ESCC組織中RACK1、FHL1 的表達(dá)情況。③對(duì)所有患者進(jìn)行為期1年的隨訪，隨訪時(shí)間截至2022年3月。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；局部晚期ESCC 患者預(yù)后的影響因素采用多元Logistic 回歸分析。以P﹤0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ESCC 組織和癌旁組織中RACK1、FHL1 表達(dá)情況的比較

ESCC 組織中RACK1、FHL1 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率均明顯低于癌旁組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.01）。（表1）

表1 ESCC 組織和癌旁組織中RACK1、FHL1 表達(dá)情況的比較[n（%）]

2.2 不同臨床療效ESCC 患者ESCC 組織中RACK1、FHL1 表達(dá)情況的比較

依據(jù)實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，有效87 例，無(wú)效35例，有效ESCC 患者ESCC 組織中RACK1、FHL1 陽(yáng)性表達(dá)率均高于無(wú)效患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05）。（表2）

表2 不同臨床療效ESCC 患者ESCC 組織中RACK1、FHL1 表達(dá)情況的比較[n（%）]

2.3 局部晚期ESCC 患者預(yù)后的影響因素分析

至隨訪結(jié)束，122 例ESCC 患者中，死亡26 例，占比21.31%。單因素分析結(jié)果顯示，年齡、性別、吸煙情況、病變部位均可能與局部晚期ESCC 患者的預(yù)后無(wú)關(guān)（P﹥0.05）；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、分化程度、腫瘤直徑、RACK1 表達(dá)情況、FHL1 表達(dá)情況均可能與局部晚期ESCC 患者的預(yù)后有關(guān)（P﹤0.05）。多因素分析結(jié)果顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度為低分化、腫瘤直徑≥5 cm、RACK1 陰性表達(dá)、FHL1 陰性表達(dá)均是局部晚期ESCC 患者預(yù)后死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P﹤0.01）。（表3）

表3 局部晚期ESCC 患者預(yù)后的影響因素分析

3 討論

局部晚期ESCC 的惡性程度較高，相關(guān)資料顯示，局部晚期ESCC 經(jīng)手術(shù)治療后復(fù)發(fā)率較高，5年生存率較低[7]。新輔助化療是在術(shù)前進(jìn)行全身化療，目的是為早期殺滅微小轉(zhuǎn)移灶并縮小腫瘤體積，從而降低術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)。但惡性腫瘤是不斷演進(jìn)與異質(zhì)化的，相同臨床分期給予同樣的治療可能導(dǎo)致預(yù)后不一致。故如何準(zhǔn)確評(píng)估腫瘤生物學(xué)行為并據(jù)此選擇治療方案，進(jìn)行療效及預(yù)后評(píng)估有重要意義。

組織學(xué)和病理學(xué)檢查是評(píng)估診斷腫瘤最客觀、最常用的方法，但獲取腫瘤組織需要活檢，屬于有創(chuàng)檢查。隨著分子生物學(xué)的不斷進(jìn)展，已有研究證實(shí)，RACK1、FHL1 等分子標(biāo)志物在ESCC 發(fā)生發(fā)展中有重要作用[8-9]。RACK1 是定位于人5 號(hào)染色體的支架蛋白，屬于RACK 家族人員之一，可通過(guò)與細(xì)胞中多種信號(hào)分子結(jié)合，參與細(xì)胞內(nèi)多個(gè)信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)。研究顯示，RACK1 可影響細(xì)胞周期進(jìn)程、調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖能力[10]。研究指出，RACK1 在口腔鱗狀細(xì)胞癌、肺腺癌等惡性腫瘤中持續(xù)高表達(dá)，是影響患者預(yù)后的不良因素[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，RACK1 在局部晚期ESCC 患者ESCC 組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于癌旁組織，表明RACK1在局部晚期ESCC 中可能發(fā)揮抑癌基因的作用，推測(cè)RACK1 表達(dá)及作用可能具有組織特異性，其在不同腫瘤中可能發(fā)揮不同的生物學(xué)作用，這可能與RACK1 參與調(diào)節(jié)多種信號(hào)通路有關(guān)。

FHL1是FHL家族成員之一，定位于Xq26.3，長(zhǎng)度2524 bp，由7 個(gè)外顯子和6 個(gè)內(nèi)含子組成。既往已有研究顯示，F(xiàn)HL1 在肺癌、胃癌等多種惡性腫瘤中低表達(dá)，參與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控[12]。本研究中，F(xiàn)HL1在局部晚期ESCC患者ESCC組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于癌旁組織，與王哲彥等[13]的研究結(jié)果相符。提示FHL1 可能是一種保護(hù)性蛋白，其表達(dá)下調(diào)可能抑制腫瘤細(xì)胞增殖。

本研究比較不同臨床療效局部晚期ESCC 患者ESCC 組織中RACK1、FHL1 表達(dá)情況發(fā)現(xiàn)，有效ESCC 患者ESCC 組織中RACK1、FHL1 陽(yáng)性表達(dá)率均高于無(wú)效患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05）。既往研究發(fā)現(xiàn)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度等均是影響腫瘤患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素[14]。本研究多因素分析結(jié)果顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度為低分化、腫瘤直徑≥5 cm、RACK1 陰性表達(dá)、FHL1 陰性表達(dá)均是局部晚期ESCC 患者預(yù)后死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P﹤0.01），但這些因素缺乏特異性。相關(guān)報(bào)道認(rèn)為，RACK1、FHL1 表達(dá)下調(diào)可能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，影響患者的預(yù)后[15]。本研究中，RACK1 陰性表達(dá)、FHL1 陰性表達(dá)均是影響ESCC患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，表明RACK1、FHL1 可作為評(píng)估局部晚期ESCC 患者化療療效的輔助指標(biāo)之一，同時(shí)提示RACK1、FHL1 表達(dá)與局部晚期ESCC 患者預(yù)后有關(guān)，陰性表達(dá)患者預(yù)后不良的可能性更高。

綜上所述，RACK1、FHL1 在局部晚期ESCC 組織中陽(yáng)性表達(dá)率較低，可作為評(píng)估紫杉醇聯(lián)合順鉑化療療效、患者預(yù)后的可靠指標(biāo)。本研究不足之處在于樣本量較少、隨訪時(shí)間較短，仍需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行深入研究。