羅勒精油對(duì)運(yùn)前暫養(yǎng)珍珠龍膽石斑魚應(yīng)激緩解作用

吳煒俊，梁喜麗，陳偉澎，黃宇豪，范秀萍,2，秦小明,2

（1.廣東海洋大學(xué)食品科技學(xué)院/ 國家貝類加工技術(shù)研發(fā)分中心(湛江)/ 廣東省水產(chǎn)品加工與安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/ 廣東省海洋生物制品工程實(shí)驗(yàn)室/ 廣東省海洋食品工程技術(shù)研究中心/ 水產(chǎn)品深加工廣東普通高等學(xué)校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 湛江 524088；2.海洋食品精深加工關(guān)鍵技術(shù)省部共建協(xié)同創(chuàng)新中心，大連工業(yè)大學(xué)，遼寧 大連 116034）

珍珠龍膽石斑魚（Epinephelus fuscoguttatusi♀×Epinephelus lanceolatus♂）是由鞍帶石斑魚（E.fuscoguttatusi）與棕點(diǎn)石斑魚（E.lanceolatus）雜交子一代[1]，其養(yǎng)殖區(qū)域主要分布在我國東南沿海地區(qū)，其魚肉具有高蛋白、低脂肪、富含多種不飽和脂肪酸的特點(diǎn)，營養(yǎng)價(jià)值較高[2]。據(jù)2021 年中國漁業(yè)年鑒統(tǒng)計(jì)，我國石斑魚養(yǎng)殖總量超過19 萬t，且呈逐年增長的趨勢?；铛r銷售的水產(chǎn)品營養(yǎng)價(jià)值更高，更受消費(fèi)者青睞，利潤空間更大[3]。目前水產(chǎn)品進(jìn)行活鮮銷售需通過?；钸\(yùn)輸從產(chǎn)出地運(yùn)至銷售地，而禁食暫養(yǎng)是?；盍魍ǖ闹匾h(huán)節(jié)之一，可減緩因捕撈、轉(zhuǎn)運(yùn)等一系列外界環(huán)境因素而產(chǎn)生的應(yīng)激反應(yīng)[4]，但實(shí)際上在禁食暫養(yǎng)過程中，水產(chǎn)品還會(huì)遭受如饑餓、氨氮等其他脅迫因子的影響等[5]，使機(jī)體受到氧化損傷，降低水產(chǎn)品在?；钸\(yùn)輸過程中的抗逆能力。因此，需開發(fā)新的應(yīng)激緩解技術(shù)，以有效提高保活運(yùn)輸效果。羅勒精油是由羅勒屬（Ocimum）植物的葉子經(jīng)水蒸氣蒸餾法等提取得到的具有芳香氣味的植物精油，在傳統(tǒng)烹飪中常作為天然香料使用[6]；GB 2760-2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定羅勒精油可作為食品添加劑在食品加工中使用。研究表明，羅勒精油對(duì)多種魚類具有休眠鎮(zhèn)靜作用，在運(yùn)輸時(shí)加入一定量的精油可有效緩解魚類在運(yùn)輸時(shí)的應(yīng)激反應(yīng)[7]，如在對(duì)阿氏冠鲇（Lophiosilurus alexandri）[8]、克氏海葵魚（Amphiprion clarkii）[9]以及尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）[10]等魚類的應(yīng)用研究中均已得到證實(shí)。但目前關(guān)于羅勒精油對(duì)緩解珍珠龍膽石斑魚應(yīng)激方面的研究尚未見諸報(bào)道，同時(shí)，關(guān)于緩解魚類運(yùn)前暫養(yǎng)的應(yīng)激反應(yīng)研究也鮮有報(bào)道。因此，本研究以珍珠龍膽石斑魚為研究對(duì)象，探究羅勒精油對(duì)石斑魚禁食暫養(yǎng)脅迫下生理的影響，以期為羅勒精油在水產(chǎn)品保活運(yùn)輸?shù)膽?yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

珍珠龍膽石斑魚（E.fuscoguttatusi♀×E.lanceolatus♂）活鮮品，購自湛江市霞山區(qū)水產(chǎn)批發(fā)市場，體質(zhì)量500～700 g。挑選體質(zhì)健康、無外傷的珍珠龍膽石斑魚作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，將魚放入袋子充氧加水后袋口扎緊打包，在2 h 內(nèi)運(yùn)輸至廣東海洋大學(xué)興海樓?；盍魍ㄊ?。

實(shí)驗(yàn)魚暫養(yǎng)用海水，采自廣東省湛江市沿海，鹽度為23，使用前通過海水凈化系統(tǒng)循環(huán)過濾1 d以上。魚用運(yùn)輸三邊密封袋（規(guī)格40 cm×30 cm×0.4 mm，PA+PE材質(zhì)），購自雄縣卓昌紙塑包裝有限公司。羅勒精油（主要成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為丁香酚67.45%、乙位石竹烯31.44%、甲位石竹烯0.80%、氧化石竹烯0.18%、α-蒎烯0.13%），購自江西源上草香料有限公司。普通級(jí)CO2與O2，購自湛江市世紀(jì)雙龍工業(yè)氣體有限公司。乳酸脫氫酶（LDH）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）、乳酸（LD）、還原性谷胱甘肽（GSH）、尿素氮（BUN）、丙二醛（MDA）、糖原檢測試劑盒，購自南京建成生物有限公司；皮質(zhì)醇（COR）、熱休克蛋白70（Hsp70）酶聯(lián)免疫試劑盒，購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司；過氧化氫酶（CAT）試劑盒，購自蘇州格銳思生物科技有限公司；葡萄糖（Glu）測定試劑盒，購自上海榮盛生物藥業(yè)有限公司；無水乙醇、分析純，購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽（MS-222），購自阿拉丁生物試劑公司。

1.2 儀器與設(shè)備

海水凈化系統(tǒng)，廣州銘創(chuàng)生物科技有限公司；Varioskan 全自動(dòng)酶標(biāo)儀，美國ThermoFisher 公司；BSA224S-CW 電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；低溫生化培養(yǎng)箱，北京亞星儀科科技有限公司；便攜式pH計(jì)，上海雷磁儀器公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 羅勒精油暫養(yǎng)濃度對(duì)無水?；钍唪~的存活時(shí)間與存活率的影響 實(shí)驗(yàn)均于2021年10月進(jìn)行，氣溫25 ℃。將購得的30 尾珍珠龍膽石斑魚稱重，按魚質(zhì)量（kg）∶海水體積（L）為1∶10 的比例量取已過濾的新鮮海水于暫養(yǎng)池中。羅勒精油按暫養(yǎng)海水體積稱量，并用10 倍體積的無水乙醇溶解混勻，然后分別加入到的新鮮海水中，充分混勻，分別配制羅勒精油質(zhì)量濃度為0、5、10、20、40 mg/L 的暫養(yǎng)海水，同時(shí)設(shè)置乙醇對(duì)照組（乙醇添加量按最大梯度濃度溶解量添加）。將體長與體質(zhì)量相近的珍珠龍膽石斑魚隨機(jī)分成4 組，每組6 尾，分別放入不同羅勒精油暫養(yǎng)濃度的海水中，在水溫為（21±1）℃的海水中禁食暫養(yǎng)24 h。暫養(yǎng)結(jié)束后，參考范秀萍等[11]的無水?；顚?shí)驗(yàn)方法，通過梯度降溫將暫養(yǎng)水體降溫至18 ℃后，使用pH 值5.8 的CO2麻醉液對(duì)石斑魚進(jìn)行休眠處理，待魚進(jìn)入休眠狀態(tài)后，放入魚用運(yùn)輸袋中封口，充入O2，然后放入設(shè)定溫度為15 ℃的低溫恒溫箱中進(jìn)行靜態(tài)模擬無水?；顚?shí)驗(yàn)，記錄不同時(shí)間石斑魚的存活時(shí)間，計(jì)算存活率。

1.3.2 羅勒精油暫養(yǎng)時(shí)間對(duì)無水保活珍珠龍膽石斑魚的存活時(shí)間與存活率的影響 按1.3.1 節(jié)的方法配制質(zhì)量濃度為10 mg/L 羅勒精油，將24 尾珍珠龍膽石斑魚隨機(jī)按暫養(yǎng)時(shí)間分為0、12、24、36 h 四組，每組6 尾，暫養(yǎng)水溫為（21 ± 1）℃。按照1.3.1 節(jié)實(shí)驗(yàn)方法步驟對(duì)石斑魚進(jìn)行靜態(tài)模擬無水?；顚?shí)驗(yàn)，記錄不同實(shí)驗(yàn)組石斑魚的存活時(shí)間與存活率。

1.3.3 羅勒精油暫養(yǎng)時(shí)間對(duì)珍珠龍膽石斑魚生理生化指標(biāo)的影響 將24 尾珍珠龍膽石斑魚按照1.3.2節(jié)的方法暫養(yǎng)，同時(shí)設(shè)置未添加精油暫養(yǎng)的處理方式為對(duì)照組，然后分別在暫養(yǎng)0、12、24、36 h 時(shí)各取3 尾魚，參照黃湘媚等[12]方法將魚快速取出并放入含有200 mg/L MS-222 的海水中麻醉至魚體無明顯反應(yīng)，時(shí)間不超過2 min。使用10 mL注射器在魚的尾部靜脈取全血，然后快速注入2 mL 離心管中，不添加抗凝劑，在4 ℃冰箱中靜置2 h后放入低溫離心機(jī)，在4 ℃、3 000 r/min 條件下離心20 min，取上層血清放入超低溫冰箱待測。在冰上取魚肉的肝臟、背肌以及腦，背肌與肝臟使用已預(yù)冷的生理鹽水清洗干凈血跡并使用濾紙吸干水分，絞碎后放入凍存管中，魚腦則吸干水分后直接放入凍存管中。用液氮迅速將組織急凍并放入超低溫冰箱待測，按照試劑盒說明書的步驟與要求對(duì)各個(gè)指標(biāo)進(jìn)行測定。

1.4 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)結(jié)果均平行測定3 次，采用SPSS 26 軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和顯著性分析，結(jié)果以平均值± 標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，顯著性差異使用單因素分析（ANOVA）結(jié)合Tukey 檢驗(yàn)進(jìn)行多重比較，顯著性水平α為0.05。

2 結(jié)果與討論

2.1 羅勒精油暫養(yǎng)質(zhì)量濃度對(duì)珍珠龍膽石斑魚無水?；畹拇婊顣r(shí)間與存活率的影響

表1 可見，在羅勒精油質(zhì)量濃度為10 mg/L 時(shí)，其無水?；畹拇婊顣r(shí)間可延長至（19.7±0.5）h，存活率為66.7%，比對(duì)照組延長5.7 h，對(duì)照組存活率為0；在17 h 時(shí)其存活率可保持100%；而在5 mg/L暫養(yǎng)質(zhì)量濃度下與對(duì)照組及乙醇對(duì)照組無顯著差異，其存活率為0（P ＞0.05），在質(zhì)量濃度為20 mg/L和40 mg/L 下的珍珠龍膽石斑魚，暫養(yǎng)1 h 后全部死亡。

表1 羅勒精油質(zhì)量濃度對(duì)珍珠龍膽石斑魚無水?；畹挠绊慣able 1 Effects of mass concentration of basil essential oil on pearl gentian grouper in waterless transport

羅勒精油主要成分為丁香酚，許多研究已表明丁香酚對(duì)魚有鎮(zhèn)靜休眠作用。在Benovit 等[13]針對(duì)不同羅勒精油濃度對(duì)鲇（Silurus asotus）鎮(zhèn)靜休眠效果的實(shí)驗(yàn)中，表明魚在不同濃度的羅勒精油麻醉液中有著不同行為特性[14]。本研究中珍珠龍膽石斑魚在羅勒精油質(zhì)量濃度為20 mg/L 與40 mg/L 的海水中暫養(yǎng)1 h 后出現(xiàn)死亡，說明這兩個(gè)濃度已達(dá)到羅勒精油對(duì)珍珠龍膽石斑魚的麻醉閾值，長時(shí)間的麻醉作用使魚呼吸中樞麻痹導(dǎo)致死亡[15]，而在5 mg/L和10 mg/L 的質(zhì)量濃度中暫養(yǎng)可正常存活24 h。10 mg/L 質(zhì)量濃度的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明珍珠龍膽石斑魚在該質(zhì)量濃度下的羅勒精油中暫養(yǎng)能有效延長無水保活時(shí)間。在暫養(yǎng)過程中加入低濃度精油，可一定程度上忽略魚的運(yùn)輸?；罘绞降目紤]，極大程度延展精油在?；钸\(yùn)輸使用范圍，Wang 等[16]在海鱸（Lateolabrax maculatus）有水?；钸\(yùn)輸過程中加入低于麻醉濃度的香蜂草精油后，有效延長海鱸的存活時(shí)間，Boaventura 等[8]對(duì)阿氏冠鲇（Lophiosilurus alexandri）在運(yùn)輸過程中使用羅勒精油的研究也得出相似的結(jié)論，但以上研究結(jié)果僅適用于有水?；钸\(yùn)輸，相比于本研究存在著較大的應(yīng)用局限性。

2.2 羅勒精油暫養(yǎng)時(shí)間對(duì)珍珠龍膽石斑魚無水保活的的存活時(shí)間與存活率的影響

由表2 可見，珍珠龍膽石斑魚未經(jīng)暫養(yǎng)（0 h）直接進(jìn)行無水?；?，其存活時(shí)間為（12.8±0.8）h，經(jīng)羅勒精油暫養(yǎng)12 h 與24 h 后石斑魚無水?；畹拇婊顣r(shí)間均超過17 h，存活率分別為66.7%、83.3%；經(jīng)羅勒精油暫養(yǎng)36 h 后，石斑魚無水?；畲婊顣r(shí)間縮短至（15.1±0.8）h，存活率為66.7%。

表2 暫養(yǎng)時(shí)間對(duì)珍珠龍膽石斑魚無水?；畹牡挠绊慣able 2 Effects of culture time on pearl gentian grouper in waterless transport

暫養(yǎng)時(shí)間是禁食暫養(yǎng)環(huán)節(jié)中的關(guān)鍵影響因素，過短的暫養(yǎng)時(shí)間無法使魚類體內(nèi)的應(yīng)激水平與代謝廢物含量下降，縮短在?；钸\(yùn)輸過程的存活時(shí)間，過長則會(huì)導(dǎo)致暫養(yǎng)水質(zhì)惡化以及因禁食導(dǎo)致的能量物質(zhì)大量消耗，減弱魚類在后續(xù)?；钸\(yùn)輸中的抗逆能力[5]。朱乾峰等[13]通過?；顚?shí)驗(yàn)得到珍珠龍膽石斑魚最佳暫養(yǎng)時(shí)間為24 h，但在本實(shí)驗(yàn)中暫養(yǎng)12 h后珍珠龍膽石斑魚的無水?；畲婊顣r(shí)間與暫養(yǎng)24 h 后的無顯著差異，說明羅勒精油能有效縮短珍珠龍膽石斑魚所需的暫養(yǎng)時(shí)長；然而，在無水?；?5 h后的兩個(gè)不同暫養(yǎng)時(shí)長的珍珠龍膽石斑魚無水?；畛苫盥食霈F(xiàn)差異，說明添加羅勒精油暫養(yǎng)后，暫養(yǎng)時(shí)間的長短對(duì)珍珠龍膽石斑魚無水?；钊耘f有影響，在暫養(yǎng)36 h 后珍珠龍膽石斑魚存活時(shí)間顯著下降，可能是長時(shí)間的饑餓脅迫與水質(zhì)惡化導(dǎo)致。

2.3 羅勒精油對(duì)暫養(yǎng)脅迫下珍珠龍膽石斑魚的血清生化指標(biāo)的影響

不同暫養(yǎng)時(shí)間中珍珠龍膽石斑魚血清生化指標(biāo)的變化（表3）顯示，在暫養(yǎng)過程中，石斑魚血清中的COR 質(zhì)量濃度均顯著低于對(duì)照組組（P ＜0.05），對(duì)照組分別是實(shí)驗(yàn)組的2.12、1.69和1.41倍；實(shí)驗(yàn)組BUN 濃度在相同的時(shí)間段顯著低于對(duì)照組（P ＜0.05）；兩組石斑魚血清中GOT 酶活力均呈先下降后上升的趨勢，在暫養(yǎng)24 h時(shí)實(shí)驗(yàn)組GOT酶活力顯著低于對(duì)照組（P ＜0.05）；兩組石斑魚血清中LDH酶活力呈先下降后上升的趨勢，在12 h 時(shí)，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組無顯著差異，24 h 實(shí)驗(yàn)組顯著低于對(duì)照組（P ＜0.05），在36 h 時(shí)兩組LDH 酶活力無顯著差異（P ＞0.05）。

表3 不同暫養(yǎng)時(shí)間中珍珠龍膽石斑魚的血清生化指標(biāo)的變化Table 3 Changes of basil essential oil in serum biochemical indexes of pearl gentian grouper under different temporary culture time

硬骨魚在受到外部脅迫因素的刺激后，會(huì)將皮質(zhì)醇（COR）釋放至全身[17]，因此常將COR 質(zhì)量濃度作為評(píng)價(jià)硬骨魚應(yīng)激水平的標(biāo)志物。本研究中對(duì)照組的珍珠龍膽石斑魚血清COR 質(zhì)量濃度在暫養(yǎng)過程中始終高于實(shí)驗(yàn)組，說明在暫養(yǎng)過程中石斑魚受到脅迫因素，使COR 持續(xù)分泌，加入羅勒精油暫養(yǎng)后使石斑魚因脅迫的影響得到緩解，具有鎮(zhèn)靜效果。

尿素氮（BUN）是機(jī)體代謝蛋白后的最終產(chǎn)物，在脅迫作用下，珍珠龍膽石斑魚血清中BUN濃度會(huì)升高[12]。在本研究中，加入羅勒精油暫養(yǎng)后，實(shí)驗(yàn)組石斑魚血清中BUN濃度相比對(duì)照組降低，說明加入羅勒精油暫養(yǎng)減緩應(yīng)激水平升高導(dǎo)致BUN 濃度增加，體內(nèi)代謝廢物累積量下降，這可能是加入羅勒精油暫養(yǎng)后能使無水保活時(shí)間延長的原因之一[18]。

谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）的釋放量反映肝臟受損程度[19]。與暫養(yǎng)0 h時(shí)相比，在暫養(yǎng)12 h時(shí)兩組石斑魚GOT 酶顯著下降，顯示加入羅勒精油暫養(yǎng)能有效緩解因短途運(yùn)輸造成的肝臟損傷。隨著暫養(yǎng)時(shí)間的延長，受到氨氮與饑餓脅迫的影響，GOT 酶活力逐漸上升[5]，加入羅勒精油暫養(yǎng)能明顯減緩其上升的趨勢，說明羅勒精油可有效減緩長時(shí)間暫養(yǎng)脅迫對(duì)石斑魚肝臟的損傷。

乳酸脫氫酶（LDH）作為糖酵解酶，反映糖酵解的作用強(qiáng)度[20]，在受到脅迫后，血清中LDH 酶活力提升[21]。本實(shí)驗(yàn)中暫養(yǎng)24 h后實(shí)驗(yàn)組珍珠龍膽石斑魚血清中LDH酶活力上升趨勢顯著高于對(duì)照組，說明加入羅勒精油能在一定程度上緩解因暫養(yǎng)過程中的脅迫因素導(dǎo)致的糖酵解作用增強(qiáng)，減少乳酸的堆積；后期升高可能是饑餓脅迫增強(qiáng)，精油緩解作用減弱所致。

2.4 羅勒精油對(duì)暫養(yǎng)脅迫下珍珠龍膽石斑魚組織中應(yīng)激響應(yīng)的影響

由珍珠龍膽石斑魚肝臟應(yīng)激相關(guān)響應(yīng)指標(biāo)變化（表4）可見，與暫養(yǎng)0 h 相比，兩組石斑魚肝臟中MDA 含量在暫養(yǎng)12 h 時(shí)均顯著下降（P ＜0.05），實(shí)驗(yàn)組在不同時(shí)間段MDA 變化差異不顯著，在24 h、36 h時(shí)與對(duì)照組相比顯著低于對(duì)照組（P ＜0.05），對(duì)照組MDA 含量變化較大，不同時(shí)間段均有顯著差異（P ＜0.05）。在不同時(shí)間段實(shí)驗(yàn)組Hsp70含量均顯著高于對(duì)照組（P ＜0.05）。肝臟CAT 酶活力在暫養(yǎng)過程中總體呈先下降后上升的趨勢，實(shí)驗(yàn)組在24 h、36 h 時(shí)無顯著差異（P ＞0.05），但顯著低于對(duì)照組（P ＜0.05）。

表4 不同暫養(yǎng)時(shí)間中珍珠龍膽石斑魚肝臟應(yīng)激響應(yīng)相關(guān)指標(biāo)的變化Table 4 Changes of related indexes of liver stress response in pearl gentian grouper under different temporary culture time

表5反映珍珠龍膽石斑魚腦部氧化應(yīng)激指標(biāo)在暫養(yǎng)過程的變化。與暫養(yǎng)0 h 相比，實(shí)驗(yàn)組石斑魚腦部的MDA 含量在不同時(shí)間段均顯著降低（P ＜0.05），且在相同暫養(yǎng)時(shí)間下均顯著低于對(duì)照組（P ＜0.05）。Hsp70 含量在不同時(shí)間段顯著高于對(duì)照組（P ＜0.05）；GSH 含量在12 h 時(shí)與對(duì)照組有顯著差異外，其余時(shí)間段與對(duì)照組無顯著變化（P ＞0.05）。

表5 不同暫養(yǎng)時(shí)間中珍珠龍膽石斑魚腦部應(yīng)激響應(yīng)相關(guān)指標(biāo)的變化Table 5 Changes of related indexes of brain stress response in pearl gentian grouper under different temporary culture time

魚在受到應(yīng)激脅迫時(shí)，產(chǎn)生的氧化自由基會(huì)導(dǎo)致組織細(xì)胞脂質(zhì)過氧化物生成如丙二醛（MDA）等，導(dǎo)致器官損傷，MDA 的產(chǎn)生也會(huì)使肌肉品質(zhì)下降[22]。同時(shí)，肝臟與腦部為對(duì)抗應(yīng)激會(huì)激活抗氧化系統(tǒng)來消除體內(nèi)的氧化自由基[23]。本研究中，石斑魚肝臟和腦部的MDA 含量對(duì)照組始終高于實(shí)驗(yàn)組，說明羅勒精油暫養(yǎng)能有效降低組織細(xì)胞中的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)；兩組肝臟CAT 酶活力在前12 h 時(shí)的下降趨勢是暫養(yǎng)后石斑魚體內(nèi)穩(wěn)態(tài)恢復(fù)的表現(xiàn)，但隨著暫養(yǎng)時(shí)間的延長，脅迫因素的影響會(huì)激活機(jī)體抗氧化系統(tǒng)導(dǎo)致肝臟CAT 酶活性上升，但實(shí)驗(yàn)組上升幅度更小，說明羅勒精油能減少的石斑魚肝臟過氧化氫的累積，減少肝臟的損傷程度。在暫養(yǎng)12 h內(nèi)實(shí)驗(yàn)組腦部GSH 水平顯著下降，表明羅勒精油能在一定時(shí)間內(nèi)使暫養(yǎng)導(dǎo)致腦部損傷減少。

熱休克蛋白70（Hsp70）是一種存在于組織中的修復(fù)性蛋白，在魚受到脅迫時(shí)機(jī)體會(huì)釋放Hsp70 來修復(fù)因氧化損傷的組織細(xì)胞，增加機(jī)體對(duì)脅迫的耐受能力[24]，也是細(xì)胞通過基因表達(dá)來應(yīng)對(duì)脅迫的表現(xiàn)[25]。Basu等[26]認(rèn)為皮質(zhì)醇的大量釋放會(huì)抑制一些熱休克蛋白基因的表達(dá)，從而使得熱休克蛋白釋放量減少。因此，在暫養(yǎng)過程中，對(duì)照組的石斑魚組織中Hsp70 釋放量較低，可能是由于對(duì)照組石斑魚皮質(zhì)醇釋放量過高導(dǎo)致，降低了對(duì)照組石斑魚組織損傷修復(fù)能力，使機(jī)體對(duì)脅迫的耐受能力下降，從而使得?；顣r(shí)間縮短，加入精油暫養(yǎng)后的這一情況得到改善。

2.5 羅勒精油暫養(yǎng)水體對(duì)珍珠龍膽石斑魚能量物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的影響

在暫養(yǎng)過程中珍珠龍膽石斑魚能量物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物會(huì)發(fā)生變化，結(jié)果見表6。石斑魚血糖隨著暫養(yǎng)時(shí)間的增加，對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組血糖含量均顯著下降（P ＜0.05），但對(duì)照組比實(shí)驗(yàn)組下降更快。肝糖原含量隨暫養(yǎng)時(shí)間的增加而顯著上升，在不同時(shí)間段，實(shí)驗(yàn)組肝糖原含量均顯著低于對(duì)照組（P ＜0.05）。兩組肌糖原在暫養(yǎng)過程無太大變化。實(shí)驗(yàn)組肝乳酸含量呈先下降后上升的趨勢，在24 h 時(shí)達(dá)到最低，且均顯著低于相同暫養(yǎng)時(shí)間里對(duì)照組肝乳酸含量（P ＜0.05）；而兩組肌乳酸含量在暫養(yǎng)12 h內(nèi)無顯著變化（P ＞0.05），在24 h時(shí)實(shí)驗(yàn)組肌乳酸含量顯著低于對(duì)照組（P ＜0.05），在暫養(yǎng)36 h時(shí)兩組肌乳酸含量均升高且兩組間無顯著差異（P ＞0.05）。

表6 不同暫養(yǎng)時(shí)間中珍珠龍膽石斑魚的能量物質(zhì)及代謝產(chǎn)物的變化Table 6 Changes of energy substances and metabolites of pearl gentian grouper under different temporary culture time

血糖（Glu）、糖原（GLY）、乳酸（LD）之間含量的變化關(guān)系可以反映機(jī)體對(duì)能量代謝物質(zhì)的使用情況[27]。魚受到脅迫后，在HPI 軸的應(yīng)激的響應(yīng)機(jī)制會(huì)促進(jìn)糖原釋放葡萄糖，機(jī)體加快對(duì)血液中葡萄糖的消耗來對(duì)抗脅迫[28]。在本研究中，暫養(yǎng)脅迫的持續(xù)使對(duì)照組石斑魚血糖含量迅速下降，但加入精油暫養(yǎng)后延緩血糖下降速率，這與鉏曉艷等[29]探究使用亞硒酸鈉緩解暫養(yǎng)過程中斑點(diǎn)叉尾鮰的應(yīng)激作用的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。在暫養(yǎng)過程中，實(shí)驗(yàn)組珍珠龍膽石斑魚肝臟乳酸和糖原含量顯著低于對(duì)照組，說明在暫養(yǎng)過程中羅勒精油具有應(yīng)激緩解作用，使得血糖的消耗與轉(zhuǎn)化得以減少，但具體的能量轉(zhuǎn)化過程有待進(jìn)一步研究。乳酸過度積累會(huì)引起疲勞[30]，不利于暫養(yǎng)后的?；钸\(yùn)輸，這可能是實(shí)驗(yàn)組無水保活時(shí)間更長的原因之一。

3 結(jié)論

珍珠龍膽石斑魚在羅勒精油濃度為10 mg/L 的海水中暫養(yǎng)，能將無水?；畹拇婊顣r(shí)間延長至（19.7±0.5）h，對(duì)不同暫養(yǎng)時(shí)間的石斑魚的血清及組織的生理生化指標(biāo)進(jìn)行分析，加入羅勒精油暫養(yǎng)后石斑魚血清中的皮質(zhì)醇質(zhì)量濃度顯著低于空白對(duì)照組（P ＜0.05），在暫養(yǎng)過程血清中BUN 濃度顯著低于對(duì)照組（P ＜0.05），LDH 與GOT 酶活力上升趨勢減緩。與空白對(duì)照組相比，加入羅勒精油暫養(yǎng)后石斑魚肝臟、腦部等器官的Hsp70 釋放量顯著升高（P ＜0.05），MDA 含量顯著下降（P ＜0.05），組織的修復(fù)能力得到增強(qiáng)，脂質(zhì)過氧化程度得以緩解，CAT酶與GSH 的響應(yīng)程度均有所降低；石斑魚血糖的消耗速率減緩，肝臟的乳酸積累量顯著下降（P ＜0.05）。在暫養(yǎng)過程中珍珠龍膽石斑魚仍會(huì)受到一定程度的脅迫因素影響，導(dǎo)致體內(nèi)氧化應(yīng)激水平上升，石斑魚抗逆能力下降，在加入羅勒精油暫養(yǎng)后可使石斑魚組織中Hsp70 含量顯著升高，減少組織中脂質(zhì)過氧化物MDA 的產(chǎn)生和乳酸的積累，隨著暫養(yǎng)時(shí)間的延長，石斑魚體內(nèi)的應(yīng)激響應(yīng)和能量響應(yīng)上升強(qiáng)度減緩，魚體組織所受的損傷和代謝物累積減少，可減少暫養(yǎng)所需的時(shí)間，延長珍珠龍膽石斑魚無水?；畹拇婊顣r(shí)間。