基于液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)分析雀梅藤化學(xué)成分

蒙雪雁，王成海

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南寧 530200；2.廣東省東莞國(guó)藥集團(tuán)常平醫(yī)藥公司，廣東東莞 523560）

雀梅藤［Sageretia thea（Osbeck）Johnst.］屬于鼠李科（Rhamnaceae）雀梅藤屬（Sageretia），別名雀梅刺、對(duì)節(jié)刺、碎米子、刺楊梅等［1］。雀梅藤主要分布于西南及江蘇、安徽、浙江、江西、福建、臺(tái)灣、湖北、湖南、廣東、廣西等地，其藥用化學(xué)成分主要為黃酮及其苷類(lèi)、糖苷類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)、酯類(lèi)、蒽醌類(lèi)、萜類(lèi)、植物甾醇、天然色素、木脂素和新木脂素等［2］。其地下部分具有行氣化痰、祛風(fēng)除濕的功效，主治咳嗽、胃痛、哮喘、鶴膝風(fēng)、水腫等病癥［3］。本研究通過(guò)超高液相色譜-串聯(lián)四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜（UPLC-QTOF-MS/MS）技術(shù)對(duì)雀梅藤根水提物的化學(xué)成分進(jìn)行定性分析，為雀梅藤的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的闡明提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器

Sciex X500R Q-TOF 型液質(zhì)聯(lián)用儀（配有ESI 源和Sciex OS 數(shù)據(jù)處理軟件），美國(guó)Sciex 公司；Waters Acquity Arc 超高效液相色譜儀（四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、2998PDA 檢測(cè)器、Waters 工作站），沃特世科技（上海）有限公司；SB-800DTD 型超聲波清洗機(jī)，寧波新芝生物科技股份有限公司；SQP 型十萬(wàn)分之一電子分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司。

1.2 材料

本研究所用雀梅藤藥材采集于廣西南寧；乙腈（HPLC 級(jí)，德國(guó)Merck 集團(tuán)）；甲酸（LC/MS 級(jí)，賽默飛）；甲醇（分析純，成都市科隆化學(xué)品有限公司）；水為去離子水。

1.3 方法

1.3.1 色譜及質(zhì)譜檢測(cè)條件 色譜條件，色譜柱為T(mén)hermo scientific Accucore C18 柱（100 mm×2.1 mm，2.6 μmol/L）；流動(dòng)相為乙腈-0.1%甲酸水，梯度洗脫，0～1 min，5%乙腈；1～5 min，5%～27%乙腈；5～15 min，27%～70%乙腈；15～18 min，70%～95%乙腈；18～20 min，95%～5%乙腈；體積流量0.4 mL/min；柱溫40.0 ℃；進(jìn)樣量3 μL。

質(zhì)譜條件，電噴霧電離源（ESI），正、負(fù)離子模式，掃描范圍（m/z）100～2 000；碰撞能量35 eV；離子源溫度為600 ℃；噴霧電壓5 500 V。通過(guò)一級(jí)質(zhì)譜信息確定精確相對(duì)分子質(zhì)量，二級(jí)質(zhì)譜獲得裂解信息，搜索數(shù)據(jù)庫(kù)和查閱文獻(xiàn)推測(cè)化合物的結(jié)構(gòu)式。

1.3.2 供試品溶液的制備 取干燥雀梅藤根部粗粉210 g，用8 倍量水回流提取3 次，每次2.5 h。合并提取液過(guò)濾并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮，后除去殘余水份，得到凍干的提取物13.82 g，得率為6.58 %。取適量提取物溶于甲醇，配制成1 mg/mL 樣品溶液，用0.22 μm 濾膜過(guò)濾，裝于液相小瓶?jī)?nèi)，待用。

2 結(jié)果與分析

采用UPLC-Q-TOF-MS/ MS 對(duì)雀梅藤進(jìn)行分析，選擇正、負(fù)離子模式分別對(duì)供試品溶液進(jìn)行掃描，總離子流見(jiàn)圖1、圖2。通過(guò)SCIX OS 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)查找質(zhì)譜響應(yīng)較高的成分的精確相對(duì)分子質(zhì)量，與天然產(chǎn)物高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)（Natural procducts HR- MSMS 2.0）進(jìn)行比對(duì)，獲得候選化合物，通過(guò)二級(jí)碎片離子及母離子可能的斷裂規(guī)律來(lái)確定其結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明，從雀梅藤中鑒定出43 個(gè)化學(xué)成分，各化學(xué)成分的保留時(shí)間、質(zhì)譜信息見(jiàn)表1。通過(guò)UPLC-Q-TOF-MS/MS 聯(lián)用技術(shù)，并通過(guò)對(duì)比參考文獻(xiàn)對(duì)雀梅藤的化學(xué)成分進(jìn)行了初步鑒定，發(fā)現(xiàn)雀梅藤中所含化學(xué)成分可分為有機(jī)酸、黃酮及其他3 大類(lèi)。

圖1 雀梅藤正離子TIC

圖2 雀梅藤負(fù)離子TIC

表1 雀梅藤化學(xué)成分的UPLC-Q-TOF-MS/MS 鑒定結(jié)果

續(xù)表

2.1 有機(jī)酸類(lèi)化合物質(zhì)譜解析

雀梅藤有機(jī)酸成分較多，該類(lèi)成分的二級(jí)質(zhì)譜裂解特征通常易失去H2O、CO、CO2、CH2等中性碎片。有機(jī)酸類(lèi)中的兒茶素及其衍生物是抑制環(huán)加氧酶-1 的有效抑制劑，是抑制癌癥的天然重要活性成分之一［42］。以化合物兒茶素為例，其在正離子模式下的準(zhǔn)分子離子峰為291.086 6，tR為6.34，二級(jí)質(zhì)譜中存在的離子碎片主要為93.034 5。表1 中鑒定得到離子碎片（m/z）主要為119.051 4、139.039 8、147.045 0、165.055 4，根據(jù)其裂解規(guī)律與文獻(xiàn)［30］對(duì)照基本吻合，推測(cè)化合物30 為兒茶素，可能的斷裂途徑見(jiàn)圖3。

圖3 兒茶素可能的裂解途徑

2.2 黃酮及異黃酮類(lèi)化合物質(zhì)譜解析

黃酮類(lèi)化合物是中草藥常見(jiàn)的有效成分之一，雀梅藤中含有較多的黃酮及異黃酮類(lèi)成分。黃酮類(lèi)成分能夠減輕關(guān)節(jié)炎程度，保護(hù)關(guān)節(jié)組織，滑膜增生，血管翳形成，軟骨破壞和骨侵蝕改善關(guān)節(jié)組織關(guān)節(jié)翳形成，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和骨侵蝕［43］。以異槲皮素為例，其在負(fù)離子模式下的準(zhǔn)分子離子峰為463.124 8，tR為4.69，二級(jí)質(zhì)譜中存在的離子碎片主要為151.002 8、271.024 5、301.135 9。根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)和二級(jí)碎片信息，其裂解規(guī)律與文獻(xiàn)［24］對(duì)照基本吻合，推測(cè)化合物23 為異槲皮素，可能的質(zhì)譜裂解途徑見(jiàn)圖4。

圖4 異槲皮素可能的裂解途徑

3 小結(jié)

本研究鑒別出的有機(jī)酸類(lèi)化合物如兒茶素、綠原酸、水楊酸等都具有良好的藥理活性。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，有機(jī)酸類(lèi)中的水楊酸及其衍生物是COX-2 活性的有效抑制劑，是抗炎的天然重要活性成分之一［44］。水楊酸顯著降低C57Bl/6DIO 小鼠網(wǎng)膜脂肪組織中的11β-HSD1 mRNA，其在腸系膜脂肪中具有相似的趨勢(shì)（P=0.057）。在C57Bl/6 DIO 小鼠的腸系膜脂肪中，水楊酸也降低了11β-HSD1 酶的活性［45］。本研究通過(guò)UHPLC-Q-TOF-MS/MS 分析，鑒定出雀梅藤地下部分潛在的主要成分，并查閱相關(guān)報(bào)道了解這些化合物的主要藥理活性，發(fā)現(xiàn)確實(shí)存在抗炎活性成分，與雀梅藤傳統(tǒng)藥理作用一致。