脫落細胞DNA倍體分析聯(lián)合腫瘤標(biāo)志物對良、惡性胸腹水的診斷價值

王君可

胸腹水是常見臨床疾病，患者主要表現(xiàn)為惡心、嘔吐、呼吸困難、胸腹痛等癥狀，嚴(yán)重影響其身心健康[1]。臨床上將胸腹水分為惡性和良性兩類。由于不同原因引起的胸腹的性質(zhì)、治療以及預(yù)后存在較大差異，胸腹水的良、惡性鑒別診斷具有重要意義。傳統(tǒng)涂片法診斷胸腹水易受人為因素的影響，存在結(jié)果陽性率低等問題[2]。胸腹水的脫落細胞學(xué)是檢查診斷胸腹水的重要手段之一，具有操作簡單、創(chuàng)傷小等特點，臨床應(yīng)用較為廣泛[3-4]。隨著免疫學(xué)、分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，血清腫瘤標(biāo)志物檢測在診斷惡性胸腹水中得到廣泛應(yīng)用，具有可定量、定性的特點，但由于特異度和靈敏度較低，容易出現(xiàn)誤診、漏診[5]。近年來，脫落細胞DNA 倍體分析用于診斷惡性腫瘤獲得良好效果[6]。目前，臨床上關(guān)于脫落細胞DNA 倍體分析聯(lián)合腫瘤標(biāo)志物鑒別診斷良、惡性胸腹水的研究較少，缺乏可靠的臨床參考依據(jù)。本研究對永康市第一人民醫(yī)院2020年1月至2022年1月收治的胸腹水患者腹水進行分析，旨在探討脫落細胞DNA 倍體分析聯(lián)合腫瘤標(biāo)志物鑒別診斷良、惡性胸腹水的價值，以期為臨床提供參考。

1 對象和方法

1.1 對象 共收集到胸腹水患者93 例，其中男54 例，女39 例；年齡43～79（61.34±8.89）歲。根據(jù)病理檢查結(jié)果證實惡性胸腹水40 例（胸水32 例，腹水8 例），良性胸腹水53 例（胸水43 例，腹水10 例）。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）因胸腔/腹腔積液而行胸腔/腹腔穿刺抽液的患者；（2）具有完整的臨床資料；（3）同意配合。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）伴血液系統(tǒng)疾病者；（2）精神疾病者；（3）臨床資料不全者。

1.2 脫落細胞DNA 倍體分析 取患者腹水200 ml，提取脫落細胞，將其分成兩部分，一部分用于細胞學(xué)病理診斷；另一部分行脫落細胞Feulgen 染色DNA 定量分析。采用BS 固定液（甲醇320 ml+甲醛60 ml+冰乙酸20 ml）固定50 min；流水沖洗4～5 次；鹽酸酸解1 h，再次流水沖洗4～5 次；Feulgen 染色：將切片置于DNA染液中浸染75 min；流水沖洗4～5 次后浸洗15 min；脫水，濕法封片，按照細胞DNA 定量檢測分析儀及其系統(tǒng)診斷軟件方法進行細胞DNA 倍體分析。結(jié)果判定[7]：以2 倍體細胞為主，未發(fā)現(xiàn)異倍體細胞或異倍體細胞峰為陰性（-）；1～2 個DNA 指數(shù)＞2.5 的細胞為弱陽性（+）；3～5 個DNA 指數(shù)＞2.5 的細胞為陽性（++）；≥6 個DNA 指數(shù)＞2.5 的細胞為強陽性（+++）。

1.3 腫瘤標(biāo)志物測定 采集患者肘靜脈血5 ml，2 000 r/min 離心10 min，取血清，采用化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)測定糖類抗原（carbohydrate antigen，CA）125、CA153 和癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）。判定結(jié)果：CA125≥35 U/ml 或CA153≥25 U/ml 或CEA≥5 μg/L 為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 23.0 統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料以頻數(shù)和構(gòu)成比表示，組間比較采用χ2檢驗，采用ROC 曲線分析診斷良、惡性胸腹水的靈敏度和特異度。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 脫落細胞DNA 倍體分析準(zhǔn)確率 脫落細胞DNA倍體分析結(jié)果顯示，惡性胸腹水38 例，良性胸腹水55例，脫落細胞DNA 倍體分析檢測惡性胸腹水準(zhǔn)確率為95.00%（38/40），見表1。

表1 脫落細胞DNA 倍體分析準(zhǔn)確率（例）

2.2 兩組患者血清腫瘤標(biāo)志物陽性率比較 腫瘤標(biāo)志物檢測顯示，惡性胸腹水組CA125、CA153 和CEA 陽性率均高于良性胸腹水組（均P＜0.05），見表2。

表2 兩組患者血清腫瘤標(biāo)志物陽性率比較[例（%）]

2.3 脫落細胞DNA 倍體分析聯(lián)合腫瘤標(biāo)志物診斷惡性胸腹水靈敏度和特異度 惡性胸腹水診斷中，脫落細胞DNA 倍體分析預(yù)測靈敏度為0.925，特異度為0.858；腫瘤標(biāo)志物預(yù)測靈敏度為0.643，特異度為0.621；脫落細胞DNA 倍體分析聯(lián)合腫瘤標(biāo)志物預(yù)測靈敏度為0.961，預(yù)測特異度為0.948。脫落細胞DNA倍體分析聯(lián)合腫瘤標(biāo)志物診斷惡性胸腹水靈敏度和特異度高于脫落細胞DNA 倍體分析與腫瘤標(biāo)志物單項檢測（均P＜0.05），見圖1。

圖1 不同方法診斷惡性胸腹水的ROC 曲線

3 討論

采用胸腹水脫落細胞檢查是目前臨床診斷鑒別良、惡性的金標(biāo)準(zhǔn)[8-12]。腫瘤發(fā)生、發(fā)展中一般會伴染色體數(shù)量和結(jié)構(gòu)的變化，故而通過檢測細胞核DNA 倍體分布，可了解正常細胞的周期變化并及時發(fā)現(xiàn)惡性增殖的腫瘤細胞[13-14]。細胞核DNA 倍體分析具有較高的特異度和靈敏度，不受細胞蛻變的影響，通過將DNA 倍體分析標(biāo)準(zhǔn)化，得到可重復(fù)、客觀的診斷結(jié)果，具有相對廉價、實用的特點[15]，此外DNA 倍體分析還可以獲得形態(tài)分析無法獲知的腫瘤生物學(xué)特征信息[16]。但應(yīng)用DNA 倍體分析有時無法確定核異質(zhì)細胞及非整倍體、多倍體等，故而仍需與脫落細胞學(xué)檢查及腫瘤標(biāo)志物檢測等聯(lián)合[17]。本研究發(fā)現(xiàn)，脫落細胞DNA 倍體分析檢測惡性腹水準(zhǔn)確率為95.00%，有效提高了診斷惡性胸腹水準(zhǔn)確率。

腫瘤標(biāo)志物對疾病病情的判斷具有重要指導(dǎo)價值。CA125、CA153 和CEA 是重要的腫瘤標(biāo)志物，其中CA125 水平升高主要見于卵巢癌；CA153 水平升高常見于乳腺癌；CEA 水平升高常見于卵巢癌、直腸癌、胃癌及胰腺癌。腫瘤標(biāo)志物水平檢測在鑒別惡性胸腹水也具有重要臨床價值[6]。桂強[5]研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)細胞形態(tài)學(xué)檢出聯(lián)合血清腫瘤標(biāo)志物診斷可有效提高準(zhǔn)確性和靈敏度，為惡性胸腔積液/腹水患者鑒別診斷提供可靠參考依據(jù)。本研究表明，惡性胸腹水組CA125、CA153、CEA 陽性率均高于良性胸腹水組。許娟[18]研究表明，采用細胞DNA 倍體聯(lián)合腫瘤標(biāo)志物檢測具有較大應(yīng)用價值，方案更為準(zhǔn)確，靈敏度和特異度更高。本研究發(fā)現(xiàn)，脫落細胞DNA 倍體分析聯(lián)合腫瘤標(biāo)志物診斷惡性胸腹水靈敏度和特異度高于脫落細胞DNA 倍體分析或腫瘤標(biāo)志物單項檢測，由此可見脫落細胞DNA 倍體分析聯(lián)合腫瘤標(biāo)志物有利于患者疾病的治療，具有較高的臨床應(yīng)用價值，提高治療有效率，在臨床診斷中可大力推廣應(yīng)用。但本研究還存在一些不足，樣本量小，還需后續(xù)增加樣本量深入研究，提供更多可靠參考信息。

綜上所述，脫落細胞DNA 倍體分析聯(lián)合腫瘤標(biāo)志物診斷惡性胸腹水靈敏度和特異度良好，可提高診斷價值。