野生白肉靈芝固體培養(yǎng)特性、馴化栽培及活性成分分析*

牛開陽，李娥賢，何 俊，，李樹紅，蘇錫鈞，羅宗龍**

（1.大理大學 農(nóng)學與生物科學學院，云南 大理 671003；2.云南省農(nóng)業(yè)科學院 生物技術與種質資源研究所，云南 昆明 650223）

靈芝屬（Ganoderma） 隸屬于擔子菌門（Basidiomycota） 傘菌綱 （Agaricomycetes） 多孔菌目（Polyporales） 靈芝科 （Ganodermataceae）[1]。靈芝屬真菌在全球分布廣泛，是一類重要的木腐真菌，具有維持森林生態(tài)系統(tǒng)物質循環(huán)和能量流動的作用[2-4]。此外，靈芝還是最早被利用，文化最悠久的食（藥）用菌之一[5]?，F(xiàn)代研究表明，靈芝含有多糖類、三萜類、甾醇類、微量元素、脂肪酸等多種生物活性物質；其中，靈芝多糖與三萜被認為是靈芝中主要的功能成分[6]。大量研究證實靈芝具有抗氧化、抗腫瘤、免疫調節(jié)、鎮(zhèn)靜安神、抗心肌缺血、調節(jié)血脂、抗病毒和改善睡眠等藥理作用[7-10]。

20世紀50年代，中國科學院微生物研究所首次成功栽培靈芝，之后靈芝在我國逐步實現(xiàn)廣泛栽培，并迅速發(fā)展成為以生產(chǎn)靈芝孢子粉為主的重要產(chǎn)業(yè)[11]。至今，靈芝在我國已有60多年的人工栽培歷史，隨著栽培技術的不斷發(fā)展，規(guī)模越來越大，出現(xiàn)了栽培品種、技術、模式和原料的多樣化[12]。截至2022年2月，獲得審定的靈芝品種有26個，其中通過國家級審定的有4個，省級審定的有22個。隨著人們生活水平的日益提高，對靈芝產(chǎn)品的需求不斷提升，野生靈芝資源難以滿足當前市場需求。對野生靈芝資源進行合理開發(fā)利用，既能保護野生資源，又有助于促進靈芝產(chǎn)業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展。目前，我國以赤芝（Ganaderma lingzhi)和紫芝（Ganoderma sinense）為主要原料生產(chǎn)的養(yǎng)生保健產(chǎn)品超過500種，藥品有100多種，中藥化妝產(chǎn)品12種[13-14]。

白肉靈芝（Ganoderma leucocontextum） 于2014年被廣東省科學院微生物研究所科研人員采集并命名，隨后在拉薩國家農(nóng)業(yè)科技示范園區(qū)首次成功馴化栽培[15-16]。野生白肉靈芝主要廣泛分布于中國西南高海拔地區(qū)闊葉林[17]。由于其菌肉潔白，多糖和萜類等活性成分含量較高，被視為高品質的靈芝品種，產(chǎn)品價格往往比普通靈芝高數(shù)倍[18]。目前對白肉靈芝種質資源的研究主要集中在西藏地區(qū)，而不同地區(qū)靈芝生長特性及子實體活性成分存在較大差異[19-24]。為明確云南省野生白肉靈芝資源特性，發(fā)掘栽培性狀好、活性成分高的靈芝菌株，以采自云南省昆明市石林縣的1株白肉靈芝為材料，開展多基因系統(tǒng)發(fā)育分析、菌絲固體培養(yǎng)特性研究及馴化栽培試驗，并對子實體活性成分進行測定，旨在為云南野生靈芝的資源開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試樣品子實體（編號HKAS 123767），于2019年由何俊采自云南省昆明市石林縣（海拔為1 979.67 m），經(jīng)組織分離和純化獲得純菌株（編號為Lz-124）。子實體標本保存于中國科學院昆明植物研究所隱花植物標本館（KUN-HKAS），菌株保藏于云南省農(nóng)業(yè)科學院生物技術與種質資源研究所菌種庫。

1.2 培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯（去皮） 200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g，蒸餾水1 000 mL。

基礎培養(yǎng)基：馬鈴薯（去皮） 200 g、葡萄糖20 g、蛋白胨2 g、磷酸二氫鉀0.46 g、磷酸氫二鉀1 g、硫酸鎂0.5 g、瓊脂20 g，蒸餾水1 000 mL。

原種培養(yǎng)料配方：小麥80%、闊葉樹木屑10%、麥麩8%、石膏粉1%、白糖1%，含水量50%～55%；

栽培種（袋） 配方：闊葉樹木屑79%、麥麩18%、石膏1%、白糖2%，含水量50%～55%。

1.3 試劑

KOH（10%）、HCl（1.0 mol·L-1）、NaOH（1.0 mol·L-1）、植物基因組DNA提取試劑盒，北京擎科新業(yè)生物技術有限公司。

1.4 形態(tài)學鑒定

對供試樣品子實體和經(jīng)組織分離后獲得的菌株進行宏觀和微觀形態(tài)觀察，并對各項特征進行詳細描述和圖版制作。

1.5 分子生物學分析

采用試劑盒提取靈芝子實體及菌絲體的DNA，針對樣品的ITS、TEF1-α及RPB2三個序列片段，使用引物ITS4/ITS5、TEF1-983/TEF1-1567和RPB2-6f/fRPB2-7cR[25]，以參考文獻[26]記載的方法進行PCR擴增。經(jīng)凝膠電泳檢測后，將PCR原液送至北京擎科新業(yè)生物技術有限公司測序。測序結果通過BLAST在線對比，同時從GenBank中下載靈芝屬其他樣品序列構建數(shù)據(jù)庫。在CIPRES Science Gateway上使用RAxML-HPC2 on XSEDE進行最大似然（ML） 系統(tǒng)發(fā)育樹構建[27]；系統(tǒng)發(fā)育樹用FigTree version 1.4.0進行可視化分析，并使用PowerPoint 2019進行編輯。

1.6 固體培養(yǎng)特性試驗

配制PDA培養(yǎng)基，混勻后于121℃、0.103 MPa條件下滅菌30 min，倒入90 mm培養(yǎng)皿中制成平板。將保藏的Lz-124菌株活化后轉接至培養(yǎng)皿中，待菌絲長滿培養(yǎng)皿后備用。

1.6.1 碳源單因子篩選試驗

在基礎培養(yǎng)基的基礎上，不加入葡萄糖作為空白對照（CK1），分別加入麥芽糖、乳糖、蔗糖、可溶性淀粉替代葡萄糖作為供試培養(yǎng)基。采用直徑為7 mm的打孔器進行打孔，將菌塊接種至固體培養(yǎng)基中央，并置于22℃恒溫培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)，每組試驗設置5個重復。采用“十”字劃線法，每隔24小時測量1次菌落直徑，觀察并記錄菌絲形態(tài)及長勢。數(shù)據(jù)結果采用SPSS 20.0軟件的Duncan法比較差異顯著性（P<0.05），使用Excel 2019制作菌絲生長速度柱形圖。菌絲生長速率（V，mm·d-1）公式為：

式中：L表示菌落直徑（mm）；D表示培養(yǎng)天數(shù)（d）。

1.6.2 氮源單因子篩選試驗

在基礎培養(yǎng)基的基礎上，不加入蛋白胨作為空白對照（CK2），分別用氯化銨、硫酸銨、酵母粉、尿素替代蛋白胨作為供試培養(yǎng)基，接種、培養(yǎng)、設置重復及數(shù)據(jù)處理等方法同1.6.1。

1.6.3 無機鹽單因子篩選試驗

在基礎培養(yǎng)基的基礎上，不加入硫酸鎂作為空白對照（CK3），分別用三氯化鐵、碳酸鈣、七水合硫酸鋅、氯化鈉替代硫酸鎂作為供試培養(yǎng)基。接種、培養(yǎng)、設置重復及數(shù)據(jù)處理等方法同1.6.1。

1.6.4 溫度單因子篩選試驗

將菌塊接種至基礎培養(yǎng)基中，分別置于20℃、22℃、24℃、26℃、28℃恒溫培養(yǎng)箱內避光培養(yǎng)。接種、培養(yǎng)、設置重復及數(shù)據(jù)處理等方法同1.6.1。

1.6.5 pH單因子篩選試驗

使用HCl（1 mol·L-1）和NaOH（1 mol·L-1）將基礎培養(yǎng)基的pH分別調為5.0、5.5、6.0、6.5、7.0作為供試培養(yǎng)基，接種、培養(yǎng)、設置重復及數(shù)據(jù)處理等方法同1.6.1。

1.7 正交試驗

從單因素試驗中挑選出對菌絲生長速度影響較大的4個因素：碳源、氮源、無機鹽和溫度，從每個因素中選出較優(yōu)的3個水平，采用L9（34）正交表進行4因素3水平正交試驗。

1.8 馴化栽培試驗

1.8.1 母種制備

將保藏的菌株Lz-124活化之后接種于直徑為90 mm的PDA培養(yǎng)基中，并置于22℃恒溫培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)備用。

1.8.2 原種制備

采用規(guī)格為8 cm×11 cm的玻璃瓶作為原種瓶，按1.2所述配方將培養(yǎng)料混合均勻，每瓶裝料質量為0.25 kg。將裝滿培養(yǎng)料的原種瓶至于121℃、0.103 MPa條件下滅菌2 h。待瓶內培養(yǎng)料溫度冷卻至30℃以下時開始接種，按照1瓶母種接種10瓶原種的比例接種，并置于室溫下培養(yǎng)備用。

1.8.3 栽培種制備

選用17 cm×35 cm×0.05 cm的聚乙烯袋作為栽培袋，按照1.2所述配方將培養(yǎng)料混合均勻后裝袋，每袋培養(yǎng)料質量為1 kg。將裝滿培養(yǎng)料的栽培袋至于121℃、0.103 MPa條件下滅菌2 h，待袋內培養(yǎng)料溫度冷卻至30℃以下，按照1瓶原種接種10袋栽培袋的比例接種，并置于室溫下培養(yǎng)。

1.9 出菇試驗

菌絲長滿栽培袋后繼續(xù)進行20 d的后熟培養(yǎng)，之后將栽培袋轉移至溫室大棚內進行覆土。首先在靈芝菌棒上端棒肩處開小孔（直徑為1 cm～3 cm），將開好孔的菌棒移入栽培槽內，開孔端向上，每個菌棒間隔10 cm，再在栽培槽上覆土（厚度為2 cm～5 cm）。在溫度為22℃～28℃，土壤濕度為30%，空氣濕度為80%～90%的條件下進行出菇管理。試驗設置5個重復小區(qū)，每個小區(qū)面積為1 m×10 m，每個小區(qū)栽培100個菌棒。待白肉靈芝生長進入成熟期，從5個小區(qū)中各隨機挑選20個菌棒采摘子實體，并記錄每個菌棒所采摘靈芝的平均鮮質量、干質量、菌蓋直徑、菌柄長度、菌柄直徑，并計算生物學效率（BE，%），計算公式為：

式中：Ffw為子實體鮮質量（g）；Sdw為培養(yǎng)料干質量 （g）。

1.10 靈芝子實體活性成分測定

將收集到的靈芝子實體于60℃烘干，粉碎并過80目篩后進行活性成分測定。氨基酸測定參照國家標準《食品中氨基酸的測定》（GB 5009.124-2016）[28]的方法進行測定；礦質元素測定參照食品安全國家標準《食品中多元素的測定》（GB 5009.268-2016）[29]的方法進行測定；粗蛋白含量測定參照食品安全國家標準《食品中蛋白質的測定》（GB 5009.5-2016）[30]的方法進行測定；脂肪含量測定參照國家標準《食品中脂肪的測定》（GB 5009.6-2016）[31]的方法進行測定；多糖、三萜含量測定參照《中國藥典》[32]的方法進行測定；靈芝酸測定參照《靈芝產(chǎn)品中靈芝酸含量的測定高效液相色譜法》（NY/T 2278—2012）[33]的方法進行測定。

2 結果與分析

2.1 形態(tài)學鑒定結果

根據(jù)樣品子實體及菌株的形態(tài)學特征，將其鑒定為白肉靈芝（Ganoderma leucocontextum）[15]，野生白肉靈芝的形態(tài)特征見圖1。

圖1 野生白肉靈芝 (HKAS 123767)形態(tài)圖Fig.1 Morphology of wild Ganoderma leucocontextum(HKAS 123767)

如圖1所示，白肉靈芝生長于滇青岡（Cyclobalanopsis glaucoides） 腐木的基部。擔子果一年生，有柄，呈木栓質或木質。菌蓋匙形、半圓形至圓形，長軸為3 cm～10 cm，短軸為3.5 cm～7.0 cm，厚可達1.2 cm；菌蓋有漆狀光澤，呈紅褐色至深棕褐色。菌肉白色，有同心環(huán)紋，質地較軟，在成熟的擔子果中無黑色殼質線。菌柄側生或背側生，呈扁平狀或近圓柱形，表面光滑，有強烈漆狀光澤，紅褐色。皮層細胞棍棒狀，頂端略粗于底部，亮黃色，厚壁至亞實心，頂端或側面偶有分枝或突起，在成熟的擔子果中皮層細胞通常有中度至強烈的淀粉質反應。擔孢子卵圓形，大小為 （8.0～11.0） μm × （5.5～7.5）μm，臍狀突起不明顯，黃褐色，有淀粉質反應，雙層壁，外壁平滑，內壁表面有中度粗糙的點狀紋飾，未見擔子和擬擔子。

2.2 多基因分子系統(tǒng)發(fā)育分析結果

用于進行系統(tǒng)發(fā)育分析的靈芝屬樣品信息詳見表1。

如表1所示，Lz-124為試驗菌株采集號，本研究中共獲得ITS、TEF-α和RPB2三個片段。從GenBank中選擇了16個物種的序列（30條ITS序列，20條TEF-α序列和16條RPB2序列），選用Tomophagus colossus作為系統(tǒng)發(fā)育樹的外群?；贗TS、TEF1-α、RPB2序列構建最大似然 （Maximum Likelihood，ML） 分析靈芝屬系統(tǒng)發(fā)育樹，詳見圖2。

表1 研究采用的物種、標本、地理來源和GenBank登錄號Tab.1 Species,specimens,geographical origin and GenBank accession numbers used in the study

如圖2所示，試驗菌株Lz-124在系統(tǒng)發(fā)育中與已報道的白肉靈芝聚為一支[15]，支持率為80%。同時結合形態(tài)學特征，確定試驗中所采集的野生靈芝為白肉靈芝。

圖2 基于ITS、TEF1-α、RPB2序列最大似然（ML）分析靈芝屬系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.2 Phylogenetic tree of Ganoderma based on Maximum likelihood(ML)analysis of combined ITS、TEF1-α and RPB2 sequence

2.3 單因素試驗結果

2.3.1 碳源對菌絲生長速度的影響

不同碳源對菌絲生長速度及形態(tài)的影響結果見圖3。

由圖3可知，葡萄糖作為碳源時菌絲最為潔白和濃密，生長速度最快為（7.28±0.17） mm·d-1，與麥芽糖、蔗糖和CK1不存在顯著性差異。乳糖作為碳源時菌絲生長速度最慢，為（4.18±0.37） mm·d-1與可溶性淀粉不存在顯著性差異，且菌絲生長較其他碳源條件更潔白和濃密。

注：不同小寫字母表示差異顯著（P<0.05）。Note：Different lowercase letters indicate significant differences(P<0.05).

圖3 不同碳源條件下菌絲生長速度及形態(tài)圖Fig.3 Growth rate and morphology of mycelia under different carbon source conditions

2.3.2 氮源對菌絲生長速度的影響

不同氮源對菌絲生長速度及形態(tài)的影響結果見圖4。

由圖4可知，酵母粉作為氮源時菌絲最為潔白和濃密，生長速度最快，為（7.77±0.49） mm·d-1，與氯化銨、蛋白胨和CK2相比沒有顯著性差異。尿素作為氮源時菌絲生長速度最慢，為（1.60±0.40）mm·d-1，與其他氮源條件存在顯著性差異。

注：不同小寫字母表示差異顯著（P<0.05）。Note：Different lowercase letters indicate significant differences(P<0.05).

圖4 不同氮源條件下菌絲生長速度及形態(tài)圖Fig.4 Growth rate and morphology of mycelia under different nitrogen source conditions

2.3.3 無機鹽對菌絲生長速度的影響

不同無機鹽對菌絲生長的影響結果見圖5。

由圖5可知，三氯化鐵作為無機鹽時菌絲較為潔白，但濃密程度略低于其余條件，生長速度最快為（8.00±0.22） mm·d-1，與其余無機鹽存在顯著性差異。碳酸鈣為無機鹽時菌絲生長速度最慢，為（5.21±0.67） mm·d-1，與氯化鈉作為無機鹽不存在顯著性差異，碳酸鈣和氯化鈉作為無機鹽時，菌絲最為濃密，但生長速度較慢。

注：不同小寫字母表示差異顯著（P<0.05）。Note：Different lowercase letters indicate significant differences(P<0.05).

圖5 不同無機鹽條件下菌絲生長速度及形態(tài)圖Fig.5 Growth rate and morphology of mycelia under different inorganic salt conditions

2.3.4 溫度對菌絲生長速度的影響

不同溫度對菌絲生長速度及形態(tài)的影響結果見圖6。

由圖6可知，溫度為26℃時，白肉靈芝菌株Lz-124的菌絲最為潔白且濃密；生長速度最快為（7.28±0.21） mm·d-1，與溫度為24℃時不存在顯著性差異。當溫度為28℃時，菌絲生長速度最慢，為（4.17±0.22） mm·d-1，與其余溫度條件存在顯著性差異。

注：不同小寫字母表示差異顯著（P<0.05）。Note：Different lowercase letters indicate significant differences(P<0.05).

圖6 不同溫度條件下菌絲生長速度及形態(tài)圖Fig.6 Growth rate and morphology of mycelia at different temperatures

2.3.5 pH對菌絲生長速度的影響

不同pH條件對菌絲生長速度及形態(tài)的影響結果見圖7。

由圖7可知，白肉靈芝菌株Lz-124在pH 5.5條件下培養(yǎng)時菌絲濃密程度略低于其余pH條件，但菌絲生長速度最快，為（7.68±0.15） mm·d-1，與其余pH條件存在顯著性差異。pH為7.0時菌絲最為潔白且濃密，但生長速度最慢，為（5.70±0.16） mm·d-1，與pH為6.5時相比不存在顯著性差異。

注：不同小寫字母表示差異顯著（P<0.05）。Note：Different lowercase letters indicate significant differences(P<0.05).

圖7 不同pH條件下菌絲生長速度及形態(tài)圖Fig.7 GrowthrateandmorphologyofmyceliaunderdifferentpHconditions

2.4 正交試驗結果

結合以上單因素試驗結果，從中挑選出較優(yōu)的4個因素，從每個因素中選出較優(yōu)的3個水平，采用L9（34）正交表進行4因素3水平正交試驗，共計9組。4因素3水平表見表2。白肉靈芝菌絲生長的正交試驗結果見表3。

表2 正交試驗4因素3水平表Tab.2 The orthogonal test table of 4 factors and 3 levels

表3 白肉靈芝菌絲生長的正交試驗結果的直觀分析Tab.3 The results of direct-viewing analysis of mycelial growth of Ganoderma leucocontextum

如表3的正交分析結果可見，溫度對菌絲生長速度的極差最大，R為1.60，其次是氮源、無機鹽和碳源。結合X與R分析得出最佳配方為A2B1C1D1。

對正交試驗結果進行方差分析，結果詳見表4。

表4 白肉靈芝菌絲生長的正交試驗結果方差分析Tab.4 The results of F-test of myelial growth of Ganoderma leucocontextum

如表4所示，溫度的F值最大，其次是無機鹽、氮源和碳源。因此4因素顯著性差異由大到小依次是溫度>無機鹽>氮源>碳源。

2.5 馴化栽培試驗結果

試驗中白肉靈芝馴化栽培平均現(xiàn)蕾時間為25 d，分化時間為82 d，成熟期為116 d。

測量白肉靈芝子實體的農(nóng)藝性狀并計算生物學效率，結果詳見表5。

由表5可知，云南白肉靈芝馴化栽培的子實體單朵鮮質量平均為（61.60±5.80） g，干質量平均為（24.80±5.50） g；菌蓋直徑平均為 （13.04±1.30） cm；菌柄長度平均為（7.06±1.63） cm，菌柄直徑平均為（2.75±0.50） cm；平均生物學效率為（10.26±0.97）%。

表5 白肉靈芝農(nóng)藝性狀和生物學效率Tab.5 Agronomic traits and biological efficiency of Ganoderma leucocontextum

記錄白肉靈芝生長中的形態(tài)詳見圖8。

圖8 白肉靈芝發(fā)育過程中不同形態(tài)Fig.8 Different forms of Ganoderma leucocontextum during development

由圖8可知，馴化栽培的白肉靈芝菌蓋呈現(xiàn)不規(guī)則扇形，表面具有光澤，菌蓋中部顏色呈深棕褐色向外顏色逐漸變淺，菌蓋邊緣呈黃乳白色，表面具有同心溝紋，菌柄為單支或多分支。

2.6 活性成分測定結果

白肉靈芝活性成分含量測定結果詳見表6。

如表6所示，在白肉靈芝子實體中共檢測出18種氨基酸，總氨基酸含量為17.24%，必需氨基酸含量為6.81%，組氨酸含量最高為2.81%；蛋白質含量為17.20%；硒含量為0.06 mg·kg-1；脂肪含量為2.40%；靈芝多糖含量為1.51%，三萜含量為3.21%，靈芝酸含量為 11.20 mg·100-1g-1。

表6 白肉靈芝活性成分Tab.6 Active ingredient of Ganoderma leucocontextum

3 討論

基于ITS、TEF1-α和RPB2序列，采用最大似然法對供試樣品進行系統(tǒng)發(fā)育分析，結合形態(tài)學特征，將樣品鑒定為白肉靈芝Ganoderma leucocotextum。

通過開展碳源、氮源、無機鹽、溫度、pH單因素試驗，得出最適條件為無碳源、氮源為酵母粉、無機鹽為三氯化鐵、溫度為26℃，pH為5.5。該結果與其他靈芝最適固體培養(yǎng)條件相比存在一定的差異，詳見表7。

如表7所示，在碳源方面，葡萄糖、麥芽糖、蔗糖和CK1作為碳源時，菌絲生長速度沒有顯著性差異，表明白肉靈芝對碳源的吸收較為廣泛，最適碳源有待進一步探索。報道的白肉靈芝、有柄靈芝（Ganoderma gibbosum）、赤芝、樹舌靈芝（Ganoderma applanatum）和靈芝在乳糖作為碳源的情況下生長速度均最慢，與本研究中結果一致[34-38]。整體來看，不同靈芝品種菌絲固體培養(yǎng)對于復合碳源的吸收優(yōu)于單一碳源。在氮源方面，白肉靈芝最適氮源為酵母粉，與樹舌靈芝和韋伯靈芝試驗結果相一致，綜合比較發(fā)現(xiàn)不同靈芝品種對有機氮的吸收均優(yōu)于無機氮[37,40]。在無機鹽方面，三氯化鐵條件下菌絲生長最好。在溫度方面，固體培養(yǎng)最適溫度為26℃，與莫偉鵬等[34]研究的白肉靈芝最適溫度相近。很多栽培靈芝屬于高溫型食（藥）用菌，最適生長發(fā)育溫度為25℃～30℃；而白肉靈芝最適生長發(fā)育溫度為22℃～26℃，明顯低于普通靈芝品種，屬于中低溫型物種[35-40]。在pH方面，最適pH為5.5，與莫偉鵬等[34]研究的白肉靈芝最適pH為3.0有差異，大多數(shù)靈芝最適pH為6.0～7.0之間，可見白肉靈芝較其他靈芝更適宜在酸性條件生長。

表7 白肉靈芝與其他靈芝屬真菌菌絲培養(yǎng)特性對比Tab.7 Comparison of mycelial culture characteristics between Ganoderma leucocontextum and other Ganoderma spp.

結合正交試驗結果，發(fā)現(xiàn)不同單因素對菌絲生長速度影響由大到小依次是溫度>無機鹽>氮源>碳源；最佳培養(yǎng)組合為葡萄糖、蛋白胨、三氯化鐵、26℃。四川靈芝（Ganoderma sichuanense） 不同單因素影響排序為碳源>氮源>pH>無機鹽[41]，與本研究存在較大差異，表明不同單因素對不同靈芝物種菌絲生長的影響存在差異。

為進一步明確云南白肉靈芝的農(nóng)藝性狀，開展了馴化栽培試驗。采用袋料覆土栽培成功馴化白肉靈芝，白肉靈芝單朵干質量為（24.80±5.50） g。姚春馨等[42]研究的“云白靈芝2號”平均產(chǎn)量為干品38 g/袋，單朵干質量略高于本研究中結果。胡惠萍等[43]研究的西藏白肉靈芝單朵干質量為（12.40±1.13） g，單朵干質量略低于本研究白肉靈芝。目前廣泛栽培的赤芝[44]單朵平均干質量為25.91 g，紫芝[45]單朵鮮質量為（237.50±10.33）g，云南白肉靈芝子實體質量優(yōu)于赤芝，但與紫芝子實體質量相比存在一定差距。目前，針對白肉靈芝農(nóng)藝性狀的研究大多僅包括出菇產(chǎn)量及周期，但其余農(nóng)藝性狀的相關研究較少，有待進一步深入分析。

對馴化栽培的白肉靈芝子實體進行活性成分檢測。白肉靈芝含有7種人體必需氨基酸，同時還含有蛋白質、多糖、脂肪、三萜、微量元素、靈芝酸等物質。與不同靈芝活性成分對比情況詳見表8。

如表8所示，試驗中的白肉靈芝總氨基酸、蛋白質、脂肪、多糖、三萜均優(yōu)于紫芝和赤芝[46-47]。與潘俊等[48]研究的白肉靈芝進行對比，本研究白肉靈芝總氨基酸、總三萜含量顯著較高，其余活性成分差異較小。

表8 白肉靈芝與其他靈芝屬真菌子實體活性成分對比Tab.8 Comparison of active components of fruiting bodies of Ganoderma leucocontextum and other Ganoderma spp.

綜合上述結果表明，云南白肉靈芝生物學效率高，含有大量的活性物質，因此云南白肉靈芝具有巨大的市場潛力和開發(fā)價值。