延時(shí)成像監(jiān)測技術(shù)在體外受精-胚胎移植中的應(yīng)用研究進(jìn)展

王世凱(綜述)， 薛林濤(審校)

體外受精-胚胎移植技術(shù)(in vitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET)發(fā)展至今近30年，盡管臨床治療和胚胎體外培養(yǎng)技術(shù)不斷優(yōu)化完善，但該技術(shù)的每移植周期臨床妊娠率仍然在40%左右，且多胎妊娠率居高不下[1]。目前降低多胎妊娠最有效的方法是單胚胎移植，而單胚胎移植的關(guān)鍵是選擇最具發(fā)育潛能的胚胎進(jìn)行移植，這也是胚胎評估工作中面臨的最主要挑戰(zhàn)。近年來，臨床工作者希望發(fā)掘一種可以客觀評估胚胎發(fā)育潛能的參數(shù)，如基因組學(xué)[2]、蛋白組學(xué)[3]、代謝組學(xué)[4]、線粒體DNA含量[5]和活性氧檢測[6]等，但這些評估方法的準(zhǔn)確性不一且操作復(fù)雜或需要特殊且昂貴的儀器而沒有得到廣泛使用。目前對胚胎發(fā)育潛能的評估仍是采用在特定時(shí)間點(diǎn)對胚胎進(jìn)行形態(tài)學(xué)評價(jià)的靜態(tài)評估方法。這種評估方法對于2個(gè)觀察點(diǎn)之間的胚胎發(fā)育細(xì)節(jié)是不清楚的，多數(shù)研究也證實(shí)形態(tài)學(xué)評估胚胎發(fā)育潛能具有局限性[7-8]，因此開發(fā)更為準(zhǔn)確客觀的胚胎評估體系是亟需解決的問題。近年來，隨著延時(shí)成像監(jiān)測技術(shù)(time-lapse imaging monitoring technology,time-lapse)的發(fā)展和應(yīng)用，彌補(bǔ)靜態(tài)評估2個(gè)觀察點(diǎn)之間缺失的信息。time-lapse是一種瞬時(shí)曝光連續(xù)拍攝的成像技術(shù)，能夠精確記錄胚胎從受精到囊胚發(fā)育的整個(gè)過程，并通過智能數(shù)據(jù)分析建立胚胎質(zhì)量評估的數(shù)據(jù)模型。該技術(shù)可以發(fā)現(xiàn)靜態(tài)胚胎評估難以發(fā)現(xiàn)的分裂事件，例如各種異常分裂模式和胚胎發(fā)育的動態(tài)時(shí)間參數(shù)，這些動態(tài)參數(shù)和胚胎發(fā)育潛能具有密切相關(guān)性[7-8]。臨床實(shí)踐中挑選發(fā)育潛能較好的胚胎進(jìn)行移植，不僅可以提高胚胎著床率與妊娠率，還可以減少移植胚胎數(shù)和降低多胎妊娠的發(fā)生率[9-10]。本文針對time-lapse在體外受精-胚胎移植中應(yīng)用現(xiàn)狀和研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 time-lapse在受精評估中的應(yīng)用

1.1原核的評估時(shí)間 在體外受精中原核的出現(xiàn)和形成標(biāo)志著受精的完成，原核一般在受精后6 h開始出現(xiàn)，靜態(tài)評估系統(tǒng)中受精的評估時(shí)間在受精后(17±1)h，但這個(gè)觀察時(shí)間段并不是最佳的觀察時(shí)間。有臨床研究通過在受精后(17±1)h評估22 308個(gè)受精卵，結(jié)果顯示大約8%的原核需要在早于這個(gè)時(shí)間段評估，在這個(gè)時(shí)間段評估原核可能會有部分正常受精的原核過早消失而評估為異常受精或未受精，降低了正常受精率[11]。Barrie等[12]采用time-lapse分析了78 348個(gè)胚胎的受精情況，其結(jié)果顯示對受精評估的最佳時(shí)間為受精后(16.5±0.5)h，并建議對目前的共識進(jìn)行修改，以減少錯(cuò)過評估受精的機(jī)會。還有研究也顯示使用time-lapse評估的正常受精率顯著高于靜態(tài)評估系統(tǒng)(71.44% vs 64.07%)[13]。使用time-lapse評估受精情況，可以不受評估時(shí)間的限制完整地觀察到原核的出現(xiàn)和消失事件，避免正常受精的原核過早消失而錯(cuò)過評估時(shí)間。

1.2原核的形態(tài)評估 評估原核形態(tài)一般采用原核數(shù)量、大小、位置和核仁數(shù)目、排列方式的Scott-Z評分系統(tǒng)[14]，但這種評估方法對于預(yù)測胚胎發(fā)育的價(jià)值一直存在爭議。因?yàn)樵嗽诎l(fā)育過程中其排列位置和原核中的核仁分布及排列并不是固定不變的，而是動態(tài)發(fā)育的，且該評估方法受觀察時(shí)間點(diǎn)影響較大。Coticchio等[15]使用time-lapse回顧分析了500個(gè)受精卵原核的27個(gè)動態(tài)參數(shù)，包括雌雄原核的出現(xiàn)和消失、兩原核的運(yùn)動方式、原核的并列位置和胞漿暈的出現(xiàn)和消失等，其結(jié)果顯示雌雄原核大約在受精后6.2 h同時(shí)出現(xiàn)。雌原核總是在第二極體附近出現(xiàn)，雄原核可出現(xiàn)在胞漿中不同位置，可以預(yù)測2個(gè)原核并置位置，而且雌原核總是朝向雄原核靠攏。同時(shí)也發(fā)現(xiàn)原核并置位于卵膜邊緣與胚胎的直接分裂(1個(gè)細(xì)胞分裂為3個(gè)細(xì)胞)具有密切相關(guān)，細(xì)胞暈消失到原核消失之間的時(shí)間間隔可以高度預(yù)測卵裂球數(shù)量和碎片的比例(P<0.01)。該研究數(shù)據(jù)代表了人類受精卵原核期最詳細(xì)的形態(tài)動力學(xué)描述，而這些動態(tài)數(shù)據(jù)在靜態(tài)評估中很難發(fā)現(xiàn)，利用這些指標(biāo)可以進(jìn)一步細(xì)化成能夠預(yù)測胚胎發(fā)育潛能的新算法。

2 time-lapse在胚胎發(fā)育潛能評估中的應(yīng)用

2.1胚胎評估方法 評估胚胎發(fā)育潛能仍然是輔助生殖實(shí)驗(yàn)室工作人員面臨的最大挑戰(zhàn)之一。在這個(gè)領(lǐng)域，卵裂期胚胎的評估目前仍然是依賴于胚胎的發(fā)育速度、碎片比例和卵裂球的均一性等形態(tài)特征作為主要參數(shù)的形態(tài)學(xué)評估方法；囊胚期評估主要參考Gardner等[16]提出的方法，采用囊胚的發(fā)育速度、擴(kuò)張程度、內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞和滋養(yǎng)外胚層細(xì)胞等指標(biāo)對囊胚的形態(tài)進(jìn)行評估。這兩種形態(tài)學(xué)評估方法依然是評估胚胎和囊胚發(fā)育潛能的主要方法。隨著time-lapse的廣泛應(yīng)用，針對該技術(shù)的胚胎發(fā)育潛能評估方法的研究也越來越多。目前大部分評估標(biāo)準(zhǔn)都是采用動態(tài)時(shí)間參數(shù)和動態(tài)分裂模式兩部分的綜合評分，最后再結(jié)合胚胎形態(tài)學(xué)評分得到最終評分。

2.2動態(tài)時(shí)間參數(shù)在胚胎發(fā)育潛能評估中的應(yīng)用 靜態(tài)評估方法中早期卵裂的評估時(shí)間為受精后(28±1)h，D2的評估時(shí)間為(44±1)h，D3的評估時(shí)間為(68±1)h，D5囊胚期的評估時(shí)間為(116±2)h[11]。胚胎在體外發(fā)育過程中并非按照預(yù)期的時(shí)間節(jié)點(diǎn)發(fā)育，非連續(xù)的評估方法不一定能夠反映真實(shí)的胚胎發(fā)育潛能，而time-lapse的連續(xù)性評估方法可能更能反映胚胎的發(fā)育潛能。在time-lapse評估方法中大部分采用受精后到2細(xì)胞時(shí)間(t2)、3細(xì)胞(t3)、4細(xì)胞(t4)、5細(xì)胞(t5)、2細(xì)胞到3細(xì)胞的時(shí)間(CC2=t3-t2)和3細(xì)胞到4細(xì)胞的時(shí)間(S2=t4-t3)等動態(tài)時(shí)間參數(shù)來預(yù)測胚胎發(fā)育潛能[17]。Meseguer等[18]回顧性分析了247個(gè)種植成功或失敗的移植胚胎的卵裂時(shí)間，他們發(fā)現(xiàn)了最具胚胎發(fā)育潛能預(yù)測性的參數(shù)有：t5(48.8～56.6 h)、S2(≤0.76 h)和CC2(≤11.9 h)。另一項(xiàng)回顧性隊(duì)列研究分析了165對夫婦的834個(gè)胚胎，使用time-lapse分析形態(tài)動力學(xué)參數(shù)與培養(yǎng)后囊胚形成之間的關(guān)系，結(jié)果顯示t2、t3、t4、t5、S2和CC2等參數(shù)與囊胚形成率和優(yōu)質(zhì)囊胚率具有密切相關(guān)性[19]。之前的研究也證實(shí)胚胎動力學(xué)參數(shù)t2、t3和t4與優(yōu)質(zhì)胚胎和囊胚形成顯著相關(guān)[20]。使用這些胚胎發(fā)育的動態(tài)時(shí)間參數(shù)結(jié)合形態(tài)學(xué)評估可以更好地預(yù)測胚胎的發(fā)育潛能，提高臨床妊娠率。

2.3動態(tài)分裂模式在胚胎發(fā)育潛能評估中的應(yīng)用 胚胎的動態(tài)分裂模式是在time-lapse評估中發(fā)現(xiàn)的多種異常分裂，包括直接分裂(一個(gè)細(xì)胞直接分裂為≥3個(gè)細(xì)胞，direct cleavage，DC)、逆分裂(在8細(xì)胞前2個(gè)獨(dú)立的細(xì)胞重新融合為1個(gè)細(xì)胞，reverse cleavage，RC)、無序分裂(第一次分裂時(shí)細(xì)胞無規(guī)則分裂為≥4個(gè)細(xì)胞并伴隨大量碎片的產(chǎn)生，chaotic cleavage，CC)、多核(在2細(xì)胞或4細(xì)胞階段任何一個(gè)細(xì)胞出現(xiàn)多核，multinucleation，Mn)等異常分裂事件，而這些異常分裂在靜態(tài)評估時(shí)是不能被發(fā)現(xiàn)的。有研究顯示DC與正常分裂的胚胎相比，優(yōu)質(zhì)胚胎率(46.9% vs 59.4%)和囊胚形成率(11.7% vs 43.1%)顯著降低，種植率(3.7% vs 18.0%)也有降低的趨勢[7，21]。Liu等[8]回顧分析RC對胚胎發(fā)育潛能的影響，其結(jié)果顯示出現(xiàn)RC胚胎的優(yōu)質(zhì)胚胎率顯著降低，與未出現(xiàn)RC的胚胎相比，胚胎種植率更低(0/22 vs 29/131)，結(jié)果證實(shí)RC顯著損害胚胎發(fā)育而導(dǎo)致種植潛能下降。與CC異常分裂相關(guān)的研究結(jié)果顯示，與對照組(無CC)比較，CC的胚胎在D3卵裂期評估時(shí)胚胎形態(tài)評分較差，高度碎片化胚胎的比率較高和顯著降低囊胚形成率(14.1% vs 42.3%，P<0.01)，有CC的胚胎具有較差的發(fā)育潛能[7]。這種異常分裂模式顯著影響胚胎發(fā)育潛能，可以作為首先排除的標(biāo)準(zhǔn)。胚胎發(fā)育過程中卵裂球的多核現(xiàn)象比較常見，一般認(rèn)為多核現(xiàn)象會影響胚胎的發(fā)育潛能，降低胚胎種植率和臨床妊娠率。Ergin等[22]回顧性分析511個(gè)卵胞漿內(nèi)單精子注射(intracytoplasmic sperm injection，ICSI)周期共686個(gè)胚胎，研究了多核胚胎的形態(tài)動力學(xué)對胚胎發(fā)育潛能和臨床妊娠率的影響。結(jié)果顯示，與無多核胚胎的周期相比，多核胚胎的臨床妊娠率(23.4% vs 44.0%)和種植率(23.3% vs 43.6%)顯著降低，通過time-lapse觀察多核現(xiàn)象與較低的種植率和臨床妊娠率顯著相關(guān)。有研究也顯示，異常分裂胚胎的優(yōu)質(zhì)胚胎率、囊胚形成率、優(yōu)質(zhì)囊胚率和可凍囊胚率均顯著低于分裂正常胚胎(P<0.05)，胚胎的種植率和臨床妊娠率均顯著低于正常組(P<0.05)[23]。胚胎動態(tài)分裂模式是預(yù)測胚胎體外發(fā)育效率和種植潛力的一個(gè)很有價(jià)值的參數(shù)，在臨床應(yīng)用中這些異常分裂可以在胚胎評估中作為排除指標(biāo)，選擇分裂正常的胚胎移植可以顯著提高臨床妊娠率和降低流產(chǎn)率。

3 time-lapse的胚胎篩選模型的臨床應(yīng)用現(xiàn)狀

自time-lapse技術(shù)的廣泛應(yīng)用以來，單一的動態(tài)時(shí)間參數(shù)或動態(tài)分裂模式評估也存在一定的局限性，對于胚胎發(fā)育潛能的預(yù)測能力還有一定局限性。胚胎篩選模型就是綜合了動態(tài)時(shí)間參數(shù)、動態(tài)分裂模式和胚胎形態(tài)學(xué)三者參數(shù)，通過賦予各種參數(shù)不同權(quán)重后得出的計(jì)算方法來預(yù)測胚胎發(fā)育潛能。2011年Meseguer等[18]首次將胚胎篩選模型應(yīng)用到臨床，以t5、CC2、S2和直接分裂、多核等異常分裂模式作為指標(biāo)將胚胎質(zhì)量分為5個(gè)級別，通過邏輯回歸分析建立了一個(gè)回歸模型，受試者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲線顯示該模型對胚胎的發(fā)育潛能具有較高的預(yù)測價(jià)值[ROC曲線下的面積(AUC)=0.720]。隨后他們團(tuán)隊(duì)在2015年對該模型進(jìn)行了擴(kuò)大樣本量和對參數(shù)適當(dāng)修改優(yōu)化，回顧性分析了1 664個(gè)周期，其中799個(gè)周期用于建立胚胎篩選模型，865個(gè)周期用于驗(yàn)證其預(yù)測能力。該研究使用t3、CC2和t5時(shí)間參數(shù)和直接分裂、不均衡卵裂、多核等異常分裂現(xiàn)象作為指標(biāo)將胚胎級別分為A、B、C、D、E 5個(gè)級別，其結(jié)果顯示隨著胚胎級別的降低，胚胎的種植率也顯著降低，邏輯回歸分析結(jié)果顯示該模型對胚胎的種植率具有較好的預(yù)測價(jià)值(AUC=0.61)[24]。Liu等[25]的研究以原核消失時(shí)間、t5、CC2、2和直接分裂、RC和細(xì)胞間接觸點(diǎn)等異常分裂模式作為指標(biāo)將胚胎質(zhì)量分為A+、A、B、C、D、E、F 7個(gè)等級，ROC曲線分析表明該模型對胚胎種植率有顯著預(yù)測能力(AUC=0.762，P=0.000)。另一項(xiàng)大樣本量的回顧性分析使用了3 275個(gè)胚胎建立篩選模型預(yù)測D3胚胎質(zhì)量和11 218個(gè)胚胎預(yù)測囊胚形成，以原核消失、t2、t3和t5等指標(biāo)將胚胎質(zhì)量分為1、2、3、4、5共5組，其結(jié)果顯示此模型預(yù)測D3胚胎的種植率的AUC值為0.650，預(yù)測囊胚形成率的AUC值為0.745[9]。上述幾項(xiàng)回顧性研究均顯示胚胎篩選模型可以使胚胎學(xué)家更準(zhǔn)確和客觀地進(jìn)行胚胎選擇，也可以更好地預(yù)測胚胎的發(fā)育潛能，有利于在臨床中為患者挑選發(fā)育潛能最優(yōu)的胚胎進(jìn)行移植，提高周期的臨床妊娠率，縮短患者達(dá)到妊娠的時(shí)間。

4 time-lapse在胚胎非整倍檢測中的應(yīng)用

在體外受精-胚胎移植周期中胚胎的種植率仍然較低，胚胎的倍性是影響胚胎種植失敗和反復(fù)流產(chǎn)的重要原因之一。有研究顯示在體外發(fā)育的卵裂期胚胎的非整倍體率約有65%，而囊胚的非整倍體率也有45%左右[26]。目前對胚胎的非整倍體檢測主要是應(yīng)用胚胎植入前遺傳學(xué)檢測。但該檢測需要技術(shù)準(zhǔn)入、檢測費(fèi)用昂貴和對胚胎的有創(chuàng)操作等缺點(diǎn)限制了其廣泛應(yīng)用。time-lapse可以提供胚胎發(fā)育的大量詳細(xì)的動態(tài)參數(shù)，使得更多臨床工作者開始研究胚胎發(fā)育動態(tài)參數(shù)與胚胎倍性的相互關(guān)系，希望可以應(yīng)用相關(guān)動態(tài)參數(shù)來預(yù)測胚胎的倍性。一項(xiàng)研究納入530個(gè)PGT周期1 730個(gè)囊胚，比較整倍體囊胚和非整倍體囊胚的胚胎動力學(xué)參數(shù)的差異，其結(jié)果顯示S2、t4、開始形成囊胚時(shí)間、擴(kuò)張囊胚時(shí)間和囊胚孵出時(shí)間兩組存在顯著差異，這些參數(shù)可能可以預(yù)測胚胎的倍性[27]。Chawla等[28]的研究共納入430個(gè)胚胎使用CGH微陣列分析整倍體胚胎和非整倍體胚胎形態(tài)動力學(xué)參數(shù)之間的差異，結(jié)果顯示原核消失時(shí)間(tPNf)、t2、t5、CC2、t5-t2的平均持續(xù)時(shí)間在整倍體和非整倍體胚胎之間有顯著差異。國內(nèi)也有學(xué)者研究了550個(gè)評分在5BC和5CB及以上的囊胚，采用單核苷多態(tài)性芯片技術(shù)檢測胚胎的倍性，比較整倍體胚胎和非整倍體胚胎的胚胎形態(tài)動力學(xué)參數(shù)，其結(jié)果顯示胚胎早期形態(tài)動力學(xué)參數(shù)t4、S2和晚期形態(tài)動力參數(shù)囊胚孵出時(shí)間可能成為預(yù)測胚胎整倍性的重要指標(biāo)[29]。然而，也有學(xué)者的研究認(rèn)為胚胎的形態(tài)動力參數(shù)在整倍體和非整倍體胚胎之間沒有顯著差異，并不能預(yù)測胚胎的倍性[30]。一項(xiàng)納入13項(xiàng)研究的薈萃分析結(jié)果顯示，沒有單一或組合的形態(tài)動力學(xué)參數(shù)可以預(yù)測胚胎的倍性，因此，形態(tài)動力學(xué)參數(shù)還不能作為預(yù)測胚胎整倍體的替代指標(biāo)[31]?？傊?，對于形態(tài)動力學(xué)參數(shù)預(yù)測胚胎整倍體的研究結(jié)果不一致，需要大樣本的前瞻性隨機(jī)對照研究證實(shí)，因此使用time-lapse來預(yù)測胚胎整倍體要慎重。

5 time-lapse應(yīng)用的安全性

5.1time-lapse培養(yǎng)箱的安全性 time-lapse技術(shù)實(shí)質(zhì)就是在培養(yǎng)箱內(nèi)加裝內(nèi)置攝像裝置，每間隔一定時(shí)間對胚胎進(jìn)行自動拍照，再通過軟件合成就可以看到胚胎發(fā)育的實(shí)時(shí)圖像。醫(yī)療設(shè)備廣泛應(yīng)用的安全性值得考慮，time-lapse培養(yǎng)箱是否會影響胚胎的培養(yǎng)效果也值得關(guān)注。胚胎很容易受外在環(huán)境影響，需要一個(gè)穩(wěn)定的體外培養(yǎng)環(huán)境來保證胚胎的發(fā)育，而time-lapse的另一優(yōu)勢就是觀察胚胎時(shí)不用像傳統(tǒng)培養(yǎng)箱那樣把胚胎從培養(yǎng)箱中取出，以保持與母體相似的環(huán)境，這樣就可以大大減少開關(guān)培養(yǎng)箱的次數(shù)來維持胚胎處于一個(gè)恒定的培養(yǎng)條件，減少外界因素的影響，更有利于胚胎的生長發(fā)育。一項(xiàng)隨機(jī)對照的臨床研究納入59例患者的676個(gè)卵母細(xì)胞隨機(jī)分配到time-lapse培養(yǎng)箱和常規(guī)培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，主要評估指標(biāo)是受精后D2、D3的胚胎質(zhì)量、D5的囊胚形成率和胚胎種植率，其結(jié)果顯示兩組的D2、D3的胚胎質(zhì)量、D5的囊胚形成率和妊娠結(jié)局沒有顯著差異，time-lapse培養(yǎng)箱可以得到和常規(guī)培養(yǎng)箱相似的培養(yǎng)結(jié)果[32]。另一項(xiàng)隨機(jī)對照研究共納入386例ICSI周期的患者，其中195例被分配到time-lapse組，191例被分配到常規(guī)培養(yǎng)組，主要觀察指標(biāo)為胚胎種植率和胚胎形態(tài)分級。研究結(jié)果顯示兩組胚胎種植率無顯著差異，但time-lapse組D2的優(yōu)質(zhì)胚胎的比例顯著高于常規(guī)培養(yǎng)組(40.4% vs 35.2%)[33]。有研究結(jié)果也證實(shí)，time-lapse培養(yǎng)對胚胎在體外的生長發(fā)育沒有顯著影響，而且可以實(shí)時(shí)監(jiān)測胚胎發(fā)育的動態(tài)過程，可以為胚胎的選擇提供更多信息[13]。這些研究均證實(shí)time-lapse培養(yǎng)是安全的，在臨床上可以更好地用于對胚胎發(fā)育潛能的預(yù)測評估。

5.2time-lapse的光暴露 time-lapse需要每間隔5～10 min曝光一次進(jìn)行拍照，有研究顯示胚胎頻繁暴露在可見光下可能對其在體外發(fā)育不利，影響胚胎種植率[34]。而現(xiàn)在time-lapse每次拍照所需的曝光時(shí)間極短，全程體外培養(yǎng)每枚胚胎所曝光時(shí)間總和與常規(guī)觀察方法暴露在光源下的時(shí)間基本相同。Nakahara等[35]前瞻性地對比分析了常規(guī)培養(yǎng)箱和每間隔15 min拍照的time-lapse培養(yǎng)箱的光效應(yīng)對胚胎發(fā)育的影響，結(jié)果顯示兩組在受精率和優(yōu)質(zhì)胚胎率方面沒有顯著差異，說明time-lapse培養(yǎng)箱的光效應(yīng)對胚胎體外發(fā)育沒有顯著影響。有回顧性研究結(jié)果也顯示使用每間隔10 min拍照頻率和每小時(shí)7個(gè)等距的焦平面連續(xù)拍攝6 d并沒有對體外胚胎的發(fā)育產(chǎn)生顯著影響，說明該項(xiàng)技術(shù)可以安全有效地用于臨床[13]。

6 time-lapse應(yīng)用的局限性

目前大部分研究都趨向time-lapse可通過動態(tài)參數(shù)結(jié)合胚胎形態(tài)學(xué)建立能顯著預(yù)測胚胎的發(fā)育潛能的胚胎篩選模型，在臨床上可顯著提高胚胎的種植率。但也有研究顯示通過time-lapse挑選胚胎并不能提高胚胎種植率和臨床妊娠率。2018年的一項(xiàng)單中心、隨機(jī)、開放標(biāo)簽、主動對照的研究納入600例患者比較time-lapse分級分類模型的D3單個(gè)卵裂期胚胎移植和常規(guī)形態(tài)學(xué)選擇D5囊胚移植的臨床結(jié)局，其結(jié)果顯示與采用常規(guī)形態(tài)選擇的D5單囊胚移植相比，采用分級分類模型的D3單胚胎移植的臨床妊娠結(jié)局明顯較低[36]。對于該技術(shù)對預(yù)測胚胎發(fā)育潛能的準(zhǔn)確性需要更多大樣本的隨機(jī)對照試驗(yàn)去證實(shí)。臨床應(yīng)用上time-lapse也有局限性：(1)建立的胚胎篩選模型受胚胎實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)條件和所使用的設(shè)備品牌不同的影響，并不能在每個(gè)生殖中心通用，需要根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況對某一模型進(jìn)行修改和優(yōu)化以適用于本中心[37]。(2)用于胚胎動態(tài)時(shí)間參數(shù)和動態(tài)分裂模式等參數(shù)的定義沒有權(quán)威的共識定義，各個(gè)生殖中心所用的參數(shù)不盡相同，對其他研究者參考價(jià)值不大。Ciray等[38]對time-lapse動態(tài)參數(shù)規(guī)范定義，仍需要不斷優(yōu)化和完善。(3)胚胎在體外的發(fā)育受較多的因素的影響，例如受精方式、培養(yǎng)液品牌、促排方案和精子質(zhì)量等[39-40]，在對動態(tài)參數(shù)進(jìn)行權(quán)重計(jì)算時(shí)也要充分考慮上述影響因素，使動態(tài)評估方法更具有效性和實(shí)用性。

7 結(jié)語

time-lapse已廣泛應(yīng)用于體外受精-胚胎移植周期中，不僅克服了靜態(tài)學(xué)評估的局限，而且可以提供更多的預(yù)測胚胎發(fā)育潛能的參數(shù)，使選擇移植胚胎更加客觀和方便。通過該技術(shù)建立的胚胎篩選模型可以顯著提高胚胎的種植率，改善臨床妊娠結(jié)局。同時(shí)該技術(shù)也存在一定的局限性，在胚胎染色體整倍體預(yù)測效率及胚胎篩選模型的通用性等問題上，仍需要大樣本的前瞻性隨機(jī)對照研究來證實(shí)其有效性，使該技術(shù)不斷優(yōu)化和完善，為在體外受精-胚胎移植中的胚胎發(fā)育潛能評估提供一個(gè)全新途徑。