仔豬豬流行性腹瀉病毒與大腸桿菌混合感染的診治

陳亮，張蕾，沈思思，蘭世捷，苗艷，馮萬宇，李丹，鐘鵬，劉博超，吳憲，于辰龍

（黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)分院 黑龍江齊齊哈爾 161005)

引起仔豬腹瀉的傳染性因素有很多，主要分為病毒性病原和細(xì)菌性病原兩類。常見的病毒性病原主要包括豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、豬輪狀病毒（PRoV）、豬細(xì)小病毒（PPV）、豬瘟病毒（CSFV）、豬偽狂犬病毒（PRV）等，尤其腸道病毒感染仔豬后，臨床癥狀表現(xiàn)相似、病理變化差別不大，容易引起誤診，耽誤疾病的及時防治[1]。在這些腸道病毒中，PEDV 對哺乳仔豬的危害最重，發(fā)病率可達(dá)100%，病死率30%～80%[2]?；疾∝i是PEDV 的主要傳染源，此外，攜帶PEDV 的野豬是病毒的儲存宿主，對該病的流行和傳播具有重要作用[3]。2010 年起，我國的許多豬場大規(guī)模暴發(fā)PED，初生仔豬死亡率達(dá)90%以上[4]，原來的免疫方式和疫苗不能控制PED 發(fā)生，原因在于PEDV 發(fā)生了重要變異[5]。2013 年5 月，美國首次發(fā)現(xiàn)PED，傳播力強(qiáng)，致使美國31 個州的商品豬存欄量在18 個月內(nèi)損失10%[6]。

細(xì)菌性病原主要為大腸桿菌（E.coli），隨著養(yǎng)豬業(yè)規(guī)模迅速擴(kuò)大，仔豬黃痢和仔豬白痢在臨床上最常發(fā)生，其發(fā)病率和死亡率在仔豬疾病中占據(jù)首位[7]，極大阻礙了養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展[8]。由于E.coli 血清型復(fù)雜，易產(chǎn)生耐藥菌株，如何有效地防治該病正面臨著巨大的挑戰(zhàn)[9]。

PEDV 與E.coli 是目前引起仔豬腹瀉最主要的病原，當(dāng)仔豬同時感染PEDV 與E.coli 時，會給養(yǎng)豬場造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失?，F(xiàn)將一例仔豬PEDV 與E.coli 混合感染的情況報道如下。

1 發(fā)病情況

齊齊哈爾市泰來縣某一體化養(yǎng)豬場共養(yǎng)殖生豬1300 多頭，2022 年4 月下旬，母豬與新生仔豬陸續(xù)發(fā)病，母豬主要表現(xiàn)為嘔吐、噴射狀水樣腹瀉，精神狀態(tài)良好，食欲正常，持續(xù)1 周后康復(fù)；哺乳仔豬出生后第2 天，開始持續(xù)水樣腹瀉，后變?yōu)榘咨”?，精神沉郁，食欲減退，3～5d 后陸續(xù)出現(xiàn)死亡。畜主前期用過頭孢噻呋鈉、慶大霉素、環(huán)丙沙星及補(bǔ)液鹽等藥物，效果不佳，至來就診咨詢時，仔豬已陸續(xù)死亡25 頭。

2 剖檢變化

對剛死亡的2 頭小豬進(jìn)行剖檢，肝臟局部壞死（見圖1）；腎臟有密密麻麻點(diǎn)狀出血（見圖2）；脾臟邊緣出血、梗死（見圖3）；小腸壁變薄，腸系膜出血，腸內(nèi)充滿黃色液體（見圖4）。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 病毒檢測

1）病料處理取脾臟、腎臟、腦、淋巴結(jié)等組織及腸內(nèi)容物約2.0g，放于研磨中，剪碎，加入1mL 生理鹽水研磨，磨碎后放入EP 管中，6000rpm 離心3min。

2）RNA 提取取上清液按照相關(guān)說明進(jìn)行DNA 和RNA 的提取，獲得模板DNA 和模板RNA。

3）PCR 擴(kuò)增設(shè)計好程序，在PCR 擴(kuò)增儀上進(jìn)行TGEV、PEDV、PRoV、CSFV、PRRSV、PRV 的擴(kuò)增。

4）電泳取PCR 或RT-PCR 產(chǎn)物點(diǎn)樣于瓊脂糖凝膠孔中，以110V電壓于TAE 電泳緩沖液中進(jìn)行16min 的電泳，在凝膠成像系統(tǒng)上觀察結(jié)果。第2 泳道，在508bP 左右處出現(xiàn)亮帶，說明豬流行性腹瀉病毒陽性，其余病毒陰性（見圖5）。

3.2 細(xì)菌檢測

無菌取仔豬的肝臟、脾臟組織接種于瓊脂培養(yǎng)基，通過麥康凱和伊紅美藍(lán)鑒別培養(yǎng)基、革蘭氏染色及菌體形態(tài)，確定從仔豬體內(nèi)分離的菌體為大腸桿菌。

4 藥敏試驗(yàn)

將分離的菌均勻涂抹到營養(yǎng)瓊脂平板上，選擇6 種常用抗菌藥（頭孢噻呋鈉、慶大霉素、環(huán)丙沙星、多西環(huán)素、磺胺間甲氧嘧啶、卡那霉素）均勻放置于平板上，培養(yǎng)過夜。結(jié)果顯示，該菌對卡那霉素中度敏感，對其它抗生素不敏感。

5 防治

5.1 消毒與隔離

將病豬轉(zhuǎn)至隔離間，豬舍全面消毒，可選擇次氯酸成分的消毒水（84）或者是3%的氫氧化鈉溶液，對分娩舍清掃干凈，用百毒殺進(jìn)行徹底消毒后將臨產(chǎn)母豬趕入待分娩。禁止工作人員來回竄舍，防止交叉?zhèn)鞑ゲ【?/p>

5.2 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

不同階段的豬要進(jìn)行分開飼養(yǎng)，哺乳仔豬和妊娠母豬更要進(jìn)行單獨(dú)飼養(yǎng)，避免PEDV 的傳播和交叉感染，飼喂全價料保障豬的生長發(fā)育，補(bǔ)給微量元素和維生素。

5.3 藥物治療

丁胺卡那霉素肌注，發(fā)病仔豬按10mg/kg 體重給藥，1 次/d；白細(xì)胞干擾素2000～3000IU，皮下注射，1 次/d，同時口服補(bǔ)液鹽，飼喂乳酸桿菌，連用5d；全群用活性炭拌料，每100kg 飼料加0.5kg 活性炭，連喂3～5d。選用以黃連、黃芩為主藥的多種中藥方劑水煎服用。

5.4 血清治療

用康復(fù)仔豬的血清給發(fā)病仔豬注射，1mL/頭，連用4d。

6 討論

PEDV 主要侵染初生仔豬并致病，目前針對仔豬發(fā)病無有效的免疫治療方法，必須依賴母豬初乳獲得被動免疫進(jìn)行疫病防控。因此，需要做好母豬的PED 免疫。滅活疫苗免疫母豬可以產(chǎn)生較好的免疫效果，但肌肉或后海穴免疫途徑主要產(chǎn)生執(zhí)行體液免疫功能的IgG，執(zhí)行腸道黏膜保護(hù)的IgA 產(chǎn)生有限[10]，因此保護(hù)不了仔豬感染PEDV，經(jīng)典毒株和經(jīng)典毒株CV777 重組容易產(chǎn)生新型變異株[11]，且存在生物安全風(fēng)險；弱毒疫苗相對于滅活苗具有接種量少、抗體產(chǎn)生速度快等優(yōu)勢，但篩選疫苗毒株的周期過長；基因工程疫苗中的重組病毒可能存在過度致弱的問題。因此需要對包括母豬孕期免疫機(jī)理和PEDV 免疫防控的諸多方面加強(qiáng)研究，為更加完善的PEDV 免疫防控提供理論技術(shù)支撐。

由于一些豬場濫用抗生素，使得大腸桿菌耐藥質(zhì)粒轉(zhuǎn)移擴(kuò)散產(chǎn)生了耐藥性[12]，對抗生素的敏感性不斷下降，因此，合理選用抗生素是非常有必要的；在飼料禁抗的大背景下，使用一些益生菌或中藥添加劑可以降低仔豬腹瀉發(fā)病率。飼料中添加益生菌可有效地調(diào)節(jié)腸道菌群[13]。有試驗(yàn)證明，在仔豬出生后未吮吸母乳前飼喂乳酸桿菌能大幅降低腹瀉死亡率[14]。在生產(chǎn)中，可選擇“小柴胡散+阿莫西林”和“雙黃連+阿莫西林”來驅(qū)除寒濕和熱濕。

7d 后，筆者電話回訪，主訴豬群基本恢復(fù)正常。隨著集約化養(yǎng)殖業(yè)的不斷發(fā)展，仔豬腹瀉現(xiàn)象時常發(fā)生，需要高度重視，及時查明病因，精準(zhǔn)治療，除上面提到的方案外，還可以采取返飼的方式，將妊娠母豬暴露于病毒污染的糞便或者腸內(nèi)容物，激發(fā)母豬產(chǎn)生乳汁免疫力；給新生仔豬灌服抗PED 卵黃抗體等。預(yù)防仔豬腹瀉，最重要的是要做好妊娠母豬的疫苗免疫，尤其是PEDV 和E.coli 疫苗的合理接種，它直接關(guān)系到初乳中的抗體水平，間接影響豬場的經(jīng)濟(jì)效益?！?/p>