LncRNA NALT通過(guò)調(diào)控Notch信號(hào)通路對(duì)H2O2誘導(dǎo)的人晶狀體上皮細(xì)胞損傷的影響

王妍茜 康海軍 周娟 陳穎 楊濤 王敏 趙越越 康剛勁

1西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院眼科（四川瀘州 646000）；2遂寧市中心醫(yī)院眼科（四川遂寧 629000）

白內(nèi)障是一種由多種因素引起的晶狀體蛋白質(zhì)變性產(chǎn)生混濁而導(dǎo)致嚴(yán)重的可逆性視力損害和失明的眼部疾病，是全世界最常見(jiàn)的致盲原因。據(jù)有關(guān)數(shù)據(jù)分析顯示，我國(guó)70 ～79 歲人群白內(nèi)障患病率為55.5%，而80 歲以上人群白內(nèi)障患病率高達(dá)71.1%［1］，其嚴(yán)重危害老年人身心健康。晶狀體上皮細(xì)胞（lens epithelial cells，LECs）是位于晶狀體前表面的功能性細(xì)胞，由于其是光線入眼的必經(jīng)通道，極易遭受氧化損傷，進(jìn)而促進(jìn)晶狀體混濁，故該過(guò)程被認(rèn)為是白內(nèi)障發(fā)生的分子基礎(chǔ)［2-4］。眾多研究［5-8］顯示，靶向調(diào)控氧化平衡能夠顯著抑制LECs 氧化損傷，提高細(xì)胞活性，并改善白內(nèi)障的發(fā)生發(fā)展。因此，改善LECs 氧化應(yīng)激損傷可能是預(yù)防、延緩甚至逆轉(zhuǎn)晶狀體混濁及治療白內(nèi)障的潛在策略。

長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long noncoding RNAs，lncRNAs）是一類(lèi)不編碼蛋白質(zhì)、長(zhǎng)度大于200 nt 的非編碼RNA，具有調(diào)控細(xì)胞增殖、周期、代謝、凋亡、分化等多種生物學(xué)功能［9］。有研究［10］表明，老年性白內(nèi)障晶狀體中LncRNAs 的表達(dá)譜與透明晶狀體不同，存在大量差異性表達(dá)的LncRNAs，提示LncRNAs 異常表達(dá)可能參與白內(nèi)障的形成。LncRNA NALT（Notch1 associated lncRNA in T cell acute lymphoblastic leukemia，NALT，簡(jiǎn)稱(chēng)NALT）位于Notch1 基因上游，長(zhǎng)度為546 nt，位于9q34.3，可作為轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子激活Notch1 信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)［11］。Notch1 信號(hào)通路的激活可以促進(jìn)細(xì)胞存活，抵抗氧化應(yīng)激損傷［12-13］。NALT 是否可通過(guò)調(diào)控Notch1 信號(hào)通路促進(jìn)H2O2暴露下LECs 的存活目前尚不明確。本研究采用H2O2刺激人LECs建立體外氧化損傷細(xì)胞模型，探討NALT 過(guò)表達(dá)對(duì)LECs 氧化損傷的影響，并探討其可能作用機(jī)制，旨在為臨床預(yù)防、延緩白內(nèi)障提供更多的理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑人晶狀體上皮細(xì)胞株SRA01/04 來(lái)源于中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院眼科晶狀體實(shí)驗(yàn)室；DMEM 低糖培養(yǎng)基、胎牛血清購(gòu)于美國(guó)Gibco公司；NALT 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒（pVAX1-NALT）及其空載質(zhì)粒（Vector）由漢恒生物科技（上海）有限公司提供；Lipofectamine 3000 試劑購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司；雙氧水（H2O2）購(gòu)自上海阿科瑪雙氧水有限公司；Notch 抑制劑DAPT 購(gòu)自購(gòu)自美國(guó)MedChemExpress 公司；LncRNA cDNA 第一鏈合成試劑盒和LncRNA 熒光定量檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自天根生化科技（北京）有限公司；CCK-8 試劑盒購(gòu)于北京安必奇生物科技有限公司；活性氧（ROS）檢測(cè)試劑盒、Annexin V-FITC/PI 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒均購(gòu)于上海碧云天生物技術(shù)有限公司；丙二醛（MDA）含量檢測(cè)試劑盒、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所；Notch1 抗體、Hes1 抗體和GAPDH 抗體購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology 公司。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)及H2O2 濃度篩選將復(fù)蘇后的SRA01/04 細(xì)胞置于含有體積分?jǐn)?shù)為10%胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中混合均勻，再置于5%CO2、37℃的常規(guī)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每2 d 換液1次，細(xì)胞鋪滿皿底時(shí)進(jìn)行傳代培養(yǎng)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期SRA01/04 細(xì)胞，按照2 000 個(gè)/孔的密度接種于96 孔板中，待細(xì)胞貼壁后達(dá)到70%匯合度時(shí)，采用不同濃度（0、25、50、100、200、400 μmol/L）H2O2干預(yù)SRA01/04 細(xì)胞24 h，隨后采用下述CCK-8 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖活性以確定本研究中H2O2最佳干預(yù)濃度。

1.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及分組處理取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期SRA01/04 細(xì)胞，按照5 × 104個(gè)/孔的密度接種于6 孔板中，待細(xì)胞生長(zhǎng)至70%匯合度時(shí)，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)將NALT 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒（pVAX1-NALT）及其空載質(zhì)粒（Vector）經(jīng)Lipofectamine 3000 試劑分別轉(zhuǎn)染至SRA01/04細(xì)胞中，分為pVAX1-NALT組和Vector組，另設(shè)置空白對(duì)照組（blank 組）。轉(zhuǎn)染48 h 后，采用qRT-PCR 檢測(cè)各組細(xì)胞中NALT 表達(dá)水平。再根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要分為對(duì)照組（Control 組，不經(jīng)任何處理）、H2O2組（采用100 μmol/L H2O2干預(yù)24 h 建立細(xì)胞損傷模型）、H2O2+Vector 組（轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒的SRA01/04 細(xì)胞經(jīng)100 μmol/L H2O2干預(yù)24 h）、H2O2+NALT組（轉(zhuǎn)染NALT 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒的SRA01/04 細(xì)胞經(jīng)100 μmol/L H2O2干預(yù)24 h）和H2O2+NALT+DAPT 組（轉(zhuǎn)染NALT 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒的SRA01/04 細(xì)胞，再經(jīng)10 μmol/L Notch 抑制劑DAPT 和100 μmol/L H2O2干預(yù)24 h）。

1.4 CCK-8 法檢測(cè)細(xì)胞增殖活力將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的各組細(xì)胞按照2 000 個(gè)/孔的密度接種于96 孔板中，設(shè)置空白孔和對(duì)照孔，待細(xì)胞貼壁后達(dá)到70%匯合度時(shí)進(jìn)行分組處理24 h。隨后每孔中加入10 μL CCK-8 溶液，于37 ℃避光孵育4 h，采用酶標(biāo)儀于450 nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)各孔吸光度（A）值，細(xì)胞增殖活力=［（A實(shí)驗(yàn)-A空白）/（A對(duì)照-A空白）］×100%。

1.5 qRT-PCR 檢測(cè)細(xì)胞中NALT 表達(dá)水平采用不同濃度H2O2（0、25、50、100、200、400 μmol/L）干預(yù)SRA01/04 細(xì)胞24 h 或SRA01/04 細(xì)胞轉(zhuǎn)染后，收集細(xì)胞沉淀，采用Trizol 法提取細(xì)胞總RNA，采用分光光度計(jì)測(cè)定總RNA 濃度及純度。按照LncRNA cDNA 第一鏈合成試劑盒說(shuō)明進(jìn)行去基因組DNA，并將總RNA 逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，再以cDNA為模板按照LncRNA 熒光定量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR 反應(yīng)。引物序列：NALT，上游引物5′-GTCATCCAGTAGGCTCAAG-3′，下游引物5′-ATAAGTGGAGAAAGGCAGAT-3′；GAPDH，上游引物5′-GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT-3′，下游引物5′-GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG-3′。PCR 擴(kuò)增反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性3 min，然后95 ℃變性5 s、60 ℃退火10 s、72 ℃延伸15 s，共40 個(gè)循環(huán)。以GAPDN 為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計(jì)算NALT 相對(duì)表達(dá)水平。

1.6 DCFH-DA 熒光探針標(biāo)記法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS水平 將各組細(xì)胞接種于6 孔板中，分組干預(yù)后，采用0.25%胰酶消化細(xì)胞后收集細(xì)胞，加入1 mL終濃度為10 μmol/L 的熒光探針DCFH-DA 重懸細(xì)胞，并于37 ℃下避光孵育20 min，每隔5 min 顛倒混勻1 次，用無(wú)血清培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞3 次，采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.7 化學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞中MAD含量及SOD活性將各組細(xì)胞接種于6 孔板中，分組干預(yù)后，棄細(xì)胞培養(yǎng)液，收集細(xì)胞沉淀，根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)分別采用比色法和WST-1 法檢測(cè)細(xì)胞中MDA 含量和SOD活性。

1.8 Annexin V-FITC/PI 法檢測(cè)細(xì)胞凋亡水平將各組細(xì)胞接種于6 孔板中，分組干預(yù)后，收集細(xì)胞并轉(zhuǎn)移至1.5 mL Doff 管中，1 000g離心5 min，棄上清，用PBS 輕輕重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)，取5 × 104個(gè)細(xì)胞1 000g離心5 min，棄上清后加入195 μL Annexin V-FITC 結(jié)合液輕輕重懸細(xì)胞，加入5 μL Annexin V-FITC 和10 μL 碘化丙啶（PI）染色液，充分混勻，并于室溫避光條件下孵育15 min，采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.9 Western blot 檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Notch1 和Hes1 蛋白表達(dá)水平分組干預(yù)后收集各組細(xì)胞沉淀，加入RIPA 裂解液于冰上裂解細(xì)胞，4 ℃條件下12 000g離心25 min，取上清蛋白溶液，采用BCA 法測(cè)定蛋白濃度。取30 μg 蛋白經(jīng)沸水浴變性后配置上樣體系，行10%SDS-PAGE 凝膠電泳分離蛋白，采用濕轉(zhuǎn)法將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF 膜上，取出PVDF 膜TBST 洗滌3 次，再經(jīng)5%脫脂奶粉室溫封閉1 h，TBST 洗滌3 次，分別加入Notch1 抗體（1∶1 000）、Hes1 抗體（1∶1 000）和GAPDH 抗體（1∶1 000），于4 ℃條件下孵育過(guò)夜。TBST 洗滌3 次，加入HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG 二抗，室溫封閉1.5 h，TBST 洗滌3 次，滴加ECL 顯影液，曝光顯影。蛋白相對(duì)表達(dá)量=目的蛋白條帶灰度值/內(nèi)參GAPDH 條帶灰度值。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用GraphPad Prism 5 進(jìn)行柱形圖的繪制，其CCK-8 和qRT-PCR 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以對(duì)照組結(jié)果作為量化標(biāo)準(zhǔn)，被定義為100%或1，對(duì)不同試驗(yàn)組結(jié)果數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)化。采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，均符合正態(tài)分布，多組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 H2O2干預(yù)對(duì)SRA01/04細(xì)胞存活率及NALT表達(dá)水平的影響見(jiàn)圖1A，不同濃度H2O2干預(yù)24 h后，SRA01/04 細(xì)胞增殖活力隨著H2O2濃度的增加而逐漸降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F= 93.670，P＜0.001）。與0 μmol/L 比較，100 μmol/L H2O2干預(yù)可將SRA01/04 細(xì)胞增殖活力降低至60%左右，故后續(xù)選擇100 μmol/L H2O2干預(yù)24 h 作為細(xì)胞損傷造模條件。如圖1B 所示，隨著H2O2濃度的增加，SRA01/04 細(xì)胞中NALT 表達(dá)水平逐漸降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F= 85.323，P＜0.001）。

圖1 H2O2干預(yù)對(duì)SRA01/04 細(xì)胞存活率及NALT 表達(dá)水平的影響Fig.1 Effect of H2O2 intervention on the survival rate of SRA01/04 cells and the expression level of NALT

2.2 過(guò)表達(dá)NALT 對(duì)H2O2 干預(yù)下SRA01/04 細(xì)胞存活率的影響見(jiàn)圖2A，轉(zhuǎn)染NALT 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒后，與blank 組或Vector 組比較，pVAX1-NALT 組SRA01/04 細(xì)胞中NALT 表達(dá)水平顯著升高（P＜0.001）。見(jiàn)圖2B，與Control 組比較，H2O2組SRA01/04 細(xì)胞增殖活力顯著降低（P＜0.001）；與H2O2組比較，H2O2+NALT 組SRA01/04 細(xì)胞增殖活力顯著升高（P＜0.001），而H2O2+Vector 組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與H2O2+NALT 組比較，H2O2+NALT+DAPT 組SRA01/04 細(xì)胞增殖活力又顯著降低（P＜0.001）。

圖2 NALT 過(guò)表達(dá)對(duì)H2O2干預(yù)下SRA01/04 細(xì)胞存活率的影響Fig.2 Effect of NALT overexpression on the survival rate of SRA01/04 cellsexposed to H2O2

2.3 過(guò)表達(dá)NALT 對(duì)H2O2 干預(yù)下SRA01/04 細(xì)胞氧化應(yīng)激水平的影響見(jiàn)圖3，與Control 組比較，H2O2組SRA01/04 細(xì)胞中ROS 水平顯著升高（P＜0.001）；與H2O2組比較，H2O2+NALT 組SRA01/04細(xì)胞中ROS 水平顯著降低（P＜0.001），而H2O2+Vector 組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與H2O2+NALT 組比較，H2O2+NALT+DAPT 組SRA01/04 細(xì)胞中ROS 水平又顯著增加（P＜0.001）。見(jiàn)圖4，與Control 組比較，H2O2組SRA01/04 細(xì)胞中MDA 含量顯著升高（P＜0.001），而SOD 活性顯著下降（P＜0.001）；與H2O2組比較，H2O2+NALT 組SRA01/04 細(xì)胞中MDA 含量顯著降低（P＜0.001），SOD 活性顯著升高（P＜0.001），而H2O2+Vector 組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與H2O2+NALT 組比較，H2O2+NALT+ DAPT 組SRA01/04 細(xì)胞中MDA 含量又顯著增加（P＜0.001），而SOD 活性又顯著降低（P＜0.001）。

圖3 各組細(xì)胞中ROS 水平比較Fig.3 Comparison of ROS levels in cells of each group

圖4 各組細(xì)胞中MDA 含量及SOD 活性比較Fig.4 Comparison of MDA content and SOD activity in cells of each group

2.4 過(guò)表達(dá)NALT 對(duì)H2O2 干預(yù)下SRA01/04 細(xì)胞凋亡的影響見(jiàn)圖5，與Control 組比較，H2O2組SRA01/04 細(xì)胞凋亡水平顯著增加（P＜0.001）；與H2O2組比較，H2O2+NALT 組SRA01/04 細(xì)胞凋亡水平顯著降低（P＜0.001），而H2O2+Vector 組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與H2O2+NALT 組比較，H2O2+NALT+DAPT 組SRA01/04 細(xì)胞凋亡水平又顯著增加（P＜0.001）。

圖5 各組細(xì)胞凋亡水平比較Fig.5 Comparison of apoptosis levels in each group

2.5 過(guò)表達(dá)NALT 對(duì)H2O2 干預(yù)下SRA01/04 細(xì)胞Notch 信號(hào)通路的影響見(jiàn)圖6，與Control 組比較，H2O2組SRA01/04 細(xì)胞中Notch1 和Hes1 蛋白表達(dá)水平顯著降低（P＜0.01）；與H2O2組比較，H2O2+NALT 組SRA01/04 細(xì)胞中Notch1 和Hes1 蛋白表達(dá)水平顯著增加（P＜0.001），而H2O2+Vector 組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與H2O2+NALT 組比較，H2O2+NALT+DAPT 組SRA01/04 細(xì)胞中Notch1 和Hes1 蛋白表達(dá)水平又顯著降低（P＜0.001）。

圖6 各組細(xì)胞中Notch1 和Hes1 蛋白表達(dá)水平比較Fig.6 Comparison of the expression levels of Notch1 and Hes1 proteins in each group of cells

3 討論

lncRNAs 在白內(nèi)障中的作用越來(lái)越受關(guān)注。ZHANG 等［14］通過(guò)高通量測(cè)序技術(shù)進(jìn)行對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)，在健康志愿者及老年白內(nèi)障患者晶狀體前囊膜中存在7 000 多種差異表達(dá)的lncRNAs。且多項(xiàng)研究［15-17］顯示，lncRNAs 的異常表達(dá)可導(dǎo)致晶狀體發(fā)育異常、LECs 凋亡及晶狀體透明度降低。本研究通過(guò)體外培養(yǎng)SRA01/04 細(xì)胞，采用H2O2處理模擬LECs 氧化應(yīng)激損傷模型，結(jié)果顯示，H2O2可呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性抑制SRA01/04 細(xì)胞增殖活性，并且100 μmol/L H2O2干預(yù)可提高SRA01/04 細(xì)胞內(nèi)ROS水平及MDA 含量，降低SOD 活性，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，表明LECs 氧化應(yīng)激損傷體外模型構(gòu)建成功。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，在不同濃度H2O2刺激后的SRA01/04 細(xì)胞中NALT 的表達(dá)逐漸下調(diào)，說(shuō)NALT 可能參與調(diào)控LECs 氧化應(yīng)激損傷。

NALT，又稱(chēng)LINC01573，是一種長(zhǎng)度為546 nt的lncRNA，由WANG 等［11］于2015年在T 細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病中首次發(fā)現(xiàn)，并證實(shí)其可通過(guò)順式調(diào)控作用調(diào)控Notch1 基因的表達(dá)。PIAO 等［18］研究證實(shí)，NALT 在胃癌組織中高表達(dá)，并促進(jìn)胃癌細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移，其作用機(jī)制也是通過(guò)調(diào)控Notch1 表達(dá)從而激活Notch 信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)。然而，目前暫無(wú)更多有關(guān)NALT 的功能研究報(bào)道。因此，為了進(jìn)一步探討NALT 在H2O2誘導(dǎo)的LECs 氧化應(yīng)激損傷中作用與功能，本研究將NALT 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至SRA01/04 細(xì)胞中，構(gòu)建NALT 過(guò)表達(dá)的SRA01/04 細(xì)胞株，再進(jìn)一步采用H2O2干預(yù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)NALT 過(guò)表達(dá)可以提高H2O2暴露下SRA01/04 細(xì)胞的增殖活性，降低胞內(nèi)ROS 水平及MDA 含量，提高SOD 活性，抑制細(xì)胞凋亡，同時(shí)還可提高細(xì)胞中Notch1 和Hes1 等蛋白的表達(dá)水平，說(shuō)明NALT 過(guò)表達(dá)可以改善H2O2誘導(dǎo)的SRA01/04 細(xì)胞損傷，其作用機(jī)制也可能與激活Notch 信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)。

Notch 信號(hào)通路是一個(gè)進(jìn)化上相對(duì)較為保守的細(xì)胞與細(xì)胞之間的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，決定著哺乳動(dòng)物發(fā)育過(guò)程中細(xì)胞的命運(yùn)。Notch 受體（包括Notch1～4）及其配體（包括DLL1、DLL3、DLL4、Jagged1 和Jagged2）均是具有較大胞外結(jié)構(gòu)域的跨膜蛋白，二者結(jié)合后受體發(fā)生蛋白水解裂解，釋放出Notch 胞內(nèi)活化片段（Notch intracellular domain，NICD），NICD 進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)并與轉(zhuǎn)錄因子CSL 相結(jié)合，聚集核轉(zhuǎn)錄激活蛋白MAML 家族，形成NICD-CSL-MAML 轉(zhuǎn)錄復(fù)合物，激活下游靶基因的轉(zhuǎn)錄，如Hes 和Hey 家族基因等，從而調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、凋亡、黏附、周期等［19］。LE 等［20］研究顯示，Notch 信號(hào)通路的正常轉(zhuǎn)導(dǎo)是正常小鼠晶狀體發(fā)育的必要組成部分。有研究表明，Notch 信號(hào)通路的激活可以抵抗H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，并促進(jìn)細(xì)胞存活。此外，鑒于NALT 可通過(guò)順式調(diào)控作用調(diào)控Notch1 基因的表達(dá)［11］，且本研究顯示，NALT過(guò)表達(dá)可上調(diào)H2O2暴露下SRA01/04 細(xì)胞中Notch1和Hes1 蛋白表達(dá)，推測(cè)NALT 過(guò)表達(dá)對(duì)H2O2誘導(dǎo)的SRA01/04 細(xì)胞損傷的改善作用可能與激活Notch 信號(hào)通路有關(guān)。為了進(jìn)一步證實(shí)該推測(cè)，本研究使用Notch 抑制劑DAPT 進(jìn)行聯(lián)合干預(yù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)聯(lián)合DAPT 干預(yù)可逆轉(zhuǎn)NALT 過(guò)表達(dá)對(duì)H2O2誘導(dǎo)的SRA01/04 細(xì)胞損傷的改善作用，提示NALT過(guò)表達(dá)可能通過(guò)激活Notch 信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)改善H2O2誘導(dǎo)的SRA01/04 細(xì)胞損傷。

綜上所述，NALT 在H2O2誘導(dǎo)的LECs 中表達(dá)下調(diào)，其過(guò)表達(dá)可通過(guò)促進(jìn)Notch 信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)促進(jìn)H2O2暴露下LECs 的存活，抑制H2O2誘導(dǎo)的氧化損傷和細(xì)胞凋亡，對(duì)H2O2暴露下的LECs 具有保護(hù)作用。然而，本研究?jī)H為體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，對(duì)白內(nèi)障臨床治療的指導(dǎo)價(jià)值有限，下一步將著重開(kāi)展體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證NALT 對(duì)白內(nèi)障的防治作用，以期為基于LECs 防治白內(nèi)障提供新的思路。

【Author contribution】WANG Yanxi and ZHOU Juan：Performed the experiments and wrote the article. WANG Min，CHEN Yin，YANG Tao and ZHAO Yueyue：Performed the experiments.KANG Haijun and KANG Gangjin：Revised the article. KANG Gangjin：Designed the study and reviewed the article. All authors read and aplproved the final manuscript as sub-mitted.