不同處理對歐月初代培養(yǎng)的影響

蘇 陽 崔 錦 郝金倩 高 澤 崔澤華

（1河北小五臺山國家級自然保護(hù)區(qū)管理中心，河北蔚縣 075000；2河北工程大學(xué)，河北邯鄲 056000；3河北廊坊職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河北廊坊 065000；4河北政法職業(yè)學(xué)院，河北石家莊 050061）

歐月通常是指2000年之后從歐美、日本等地引進(jìn)的新品種月季，但也有少數(shù)20世紀(jì)80年代例如伊芙伯爵之類從歐洲引進(jìn)的品種。相對國月而言，歐月具有鮮明特點(diǎn)，首先，典型的歐月花型渾圓飽滿，花瓣數(shù)量繁多，層層疊疊、緊密包裹；其次，歐月花色豐富，柔和典雅，多見復(fù)雜混合以及漸變的色彩；第三，歐月中多數(shù)品種花香迷醉，香氣濃郁，有茶香、果香，沒藥香、辛香等［1-3］。因此其園林及景觀應(yīng)用更為廣泛，很受花卉愛好者的喜愛。但是繁殖方式多為扦插和嫁接，成活率較低，且費(fèi)時費(fèi)力，因此，該試驗(yàn)通過歐月初代腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，篩選出適宜的消毒試劑和消毒時間，以期為歐月的組培快繁及種質(zhì)資源保存提供技術(shù)支撐［4-6］。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料取自河北高澤科技有限公司從河南南陽引種栽培的粉和平、果汁陽臺，河北省林業(yè)和草原科學(xué)研究院從江蘇沐陽引種栽培的薩曼莎。

1.2 方法

1.2.1 外植體獲取及處理 選取生長健壯、無病蟲害、芽體飽滿的當(dāng)年生嫩枝為外植體，剪成帶2個芽眼長1～2 cm的莖段，剪去葉片和刺、保留少許葉柄，用小毛刷蘸中性洗衣粉將莖段涮洗干凈，然后用自來水沖2～3 h［7-8］。

1.2.2 培養(yǎng)基 初代培養(yǎng)腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基：選用含蔗糖的MS培養(yǎng)基，添加瓊脂1 g/L，氫氧化鈉100 μL/L，pH為5.8。

1.2.3 接種 在超凈工作臺上用75%乙醇處理30 s，無菌水沖洗3～5次，隨后用0.1% HgC12和6%次氯酸鈉進(jìn)行不同處理的消毒。試驗(yàn)設(shè)6種處理，如表1所示，完全隨機(jī)設(shè)計，每個處理接種10瓶，設(shè)3次重復(fù)。

表1 試驗(yàn)設(shè)計

1.2.4 培養(yǎng)條件 接種后置于（25±2）℃培養(yǎng)室，光照強(qiáng)度2 000～2 500 lx，光照時間12～16 h/d，20 d后統(tǒng)計莖段污染率、萌芽率、成活率、死亡情況等，選擇歐月外植體的最佳消毒方式。

萌芽率（%）=側(cè)芽萌發(fā)出小苗的外植體數(shù)量/接種外植體總數(shù)×100；

污染率（%）=污染的外植體數(shù)/接種外植體總數(shù)×100；

成活率（%）=成活數(shù)/接種數(shù)×100

2 結(jié)果與分析

2.1 氯化汞消毒處理對歐月莖段誘導(dǎo)的影響從圖1、表2可以看出，粉和平、果汁陽臺、薩蔓莎在氯化汞不同處理下均能誘導(dǎo)莖段腋芽萌發(fā)，且腋芽長勢健壯。果汁陽臺的污染率最低，薩曼莎次之，粉和平的污染率最高。不同品種各處理間的污染率均隨消毒時間的增加表現(xiàn)為持續(xù)下降的趨勢。T3處理情況下，3個品種的污染率均最低，以果汁陽臺的污染率最低，為6.67%，成活率最高；T1處理下粉和平的污染率達(dá)到最高值63.33%，成活率僅為36.67%。因此，誘導(dǎo)粉和平、果汁陽臺、薩蔓莎莖段分化最適宜的氯化汞消毒時間為15 min。

表2 氯化汞消毒處理時間對歐月莖段誘導(dǎo)分化的影響

圖1 3個歐月品種不同氯化汞處理莖段萌芽情況

2.2 次氯酸鈉消毒處理對歐月莖段誘導(dǎo)的影響從圖2、表3可以看出，粉和平、果汁陽臺、薩蔓莎3個品種在次氯酸鈉不同處理下莖段的萌芽率和誘導(dǎo)率較低，而污染率較高。次氯酸鈉處理下3個品種的污染率變化趨勢與氯化汞處理相似，薩曼莎的污染率隨次氯酸鈉處理時間的增加而下降。T6處理下的果汁陽臺成活率最高，為83.33%，粉和平的成活率最低，為66.67%；T4處理下的粉和平污染率高達(dá)63.33%，T4、T5處理下的薩曼莎萌芽率最高，達(dá)90%。因此，誘導(dǎo)莖段分化最適宜的次氯酸鈉的消毒時間為25 min。

表3 次氯酸鈉消毒處理時間對歐月莖段誘導(dǎo)分化的影響

圖2 3個歐月品種不同次氯酸鈉處理莖段萌芽情況

3 討論與小結(jié)

初代腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)時，滅菌試驗(yàn)通常先用乙醇對外植體進(jìn)行表面消毒，再配合氯化汞、次氯酸鈉等進(jìn)行滅菌，都能達(dá)到理想的滅菌效果。乙醇浸泡一方面能夠起到滅菌作用，另一方面能夠使細(xì)胞收縮，以防進(jìn)一步消毒時劇毒物質(zhì)對外植體的傷害。此次試驗(yàn)在使用氯化汞、次氯酸鈉滅菌前已用75%乙醇消毒30 s，達(dá)到了理想的消毒效果。

該試驗(yàn)對3個歐月外植體采用了6種不同的滅菌方式進(jìn)行處理，試驗(yàn)結(jié)果顯示，0.1%HgC1215 min處理方式最優(yōu)，成活率達(dá)到93.33%，污染率最低為6.67%。6%次氯酸鈉消毒25 min處理最佳，成活率達(dá)到83.33%，污染率最低為13.33%。試驗(yàn)中3個品種污染率在氯化汞處理下均隨消毒時間的增加表現(xiàn)為下降的趨勢，與朱淑新［9］、袁婉君等［10］在月季組培中消毒時間研究的結(jié)果類似，說明消毒時間過短不利于解決外植體的帶菌問題，會造成消毒不徹底，從而導(dǎo)致初代培養(yǎng)下的莖段成活率較低，污染率較高，適當(dāng)提升消毒時間會降低污染率，保證初代培養(yǎng)順利進(jìn)行，但是因時間條件有限，試驗(yàn)設(shè)置的時間梯度較少，未能找到消毒效果最好的時間臨界值，有待繼續(xù)探究。比較3個品種來看，果汁陽臺在不同處理下的成活率均最高，污染率低，可能是因?yàn)楸绕溆?個品種的抗病性強(qiáng)，不容易滋生細(xì)菌，不容易染病，適宜進(jìn)行組織培養(yǎng)。