固相萃取-氣相色譜法測(cè)定茶葉中甲氰菊酯含量的不確定度評(píng)定

曾永明 黃小芮 欒潔 蒙芳慧 周靜萱 陳松武

（廣西壯族自治區(qū)林業(yè)科學(xué)研究院 廣西南寧 530002）

中國(guó)是茶葉的故鄉(xiāng)，茶禮有緣，古已有之。種茶歷史悠久，敬茶禮節(jié)嚴(yán)格，飲茶風(fēng)俗奇特，飲茶至今已有4 700多年歷史。中國(guó)是種植茶葉國(guó)家之一，特別在中國(guó)南方地區(qū)均廣泛種植茶葉。在優(yōu)良的茶葉生產(chǎn)種植過(guò)程中，需要對(duì)品種、自然環(huán)境條件、管理方式以及加工技術(shù)等嚴(yán)格管理：一是保護(hù)好茶葉的種植環(huán)境，降低污染源的產(chǎn)生；二是通過(guò)種豆科類綠肥、鋪蓋稻草等綠色農(nóng)藝措施提升地力來(lái)減少農(nóng)藥的使用量，降低農(nóng)殘和重金屬污染；三是做好病蟲害綜合防治工作，以蟲制蟲，促進(jìn)茶園生態(tài)良性循環(huán)。但是目前，我國(guó)大部分茶園還處于粗放經(jīng)營(yíng)階段，經(jīng)營(yíng)管理工作尚不夠完善。此外，部分地區(qū)因大量施用農(nóng)藥，環(huán)境受到嚴(yán)重污染，環(huán)境中的農(nóng)藥通過(guò)食物鏈傳遞并富集，進(jìn)入人體，長(zhǎng)期食用農(nóng)殘超標(biāo)的農(nóng)產(chǎn)品將危害人體健康。在茶區(qū)調(diào)研中，茶農(nóng)紛紛反映，在噴施農(nóng)藥時(shí)，好壞不分，往往把益蟲一起殺死，而且效果也不夠理想。最令人擔(dān)憂的是，精制出的成品茶中，存在不同程度的農(nóng)藥殘留，這一點(diǎn)應(yīng)引起高度重視，政府監(jiān)管部門應(yīng)該加強(qiáng)監(jiān)督管理，真正實(shí)現(xiàn)食品生產(chǎn)過(guò)程中從“農(nóng)田到餐桌”的全程監(jiān)管。因此，市場(chǎng)監(jiān)督和監(jiān)測(cè)成了控制產(chǎn)品質(zhì)量的最后一道關(guān)口，也是保障人民身體健康最重要的一道防線。茶產(chǎn)業(yè)的農(nóng)殘污染問(wèn)題是食品安全的關(guān)鍵因素，對(duì)于整個(gè)產(chǎn)業(yè)的穩(wěn)定發(fā)展起著重要的作用。

甲氰菊酯(Fenpropathrin)，是20世紀(jì)七八十年代迅速發(fā)展起來(lái)的擬除蟲菊酯類殺蟲殺螨劑，化學(xué)名稱為α-氰基-3-苯氧基芐基-2,2,3,3-四甲基環(huán)丙烷酸酯，分子式為C22H23NO3，在世界各國(guó)廣泛使用。C22H23NO毒性中等，有觸殺、胃毒和一定的驅(qū)避作用，屬神經(jīng)毒劑，使昆蟲因神經(jīng)系統(tǒng)過(guò)度興奮、麻痹而死亡，無(wú)內(nèi)吸和熏蒸活性。甲氰菊酯具作用迅速、殺蟲譜廣、擊倒作用強(qiáng)、持效期長(zhǎng)、高效、快速、長(zhǎng)殘效等特性，其最大特點(diǎn)是對(duì)多種害蟲和葉螨同時(shí)具有良好的防治效果，特別適合用于預(yù)防茶樹(shù)害蟲茶尺蠖、茶毛蟲和茶小綠葉蟬[1]。但在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中，部分相關(guān)人員存在超量使用農(nóng)藥的現(xiàn)象，致使食品中農(nóng)藥殘留，可能對(duì)人體健康造成潛在的不良影響[2-3]。在食品安全監(jiān)測(cè)工作中，準(zhǔn)確地測(cè)量農(nóng)產(chǎn)品中甲氰菊酯含量，對(duì)維護(hù)食品安全具有重要意義。目前需要依靠第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)準(zhǔn)確的測(cè)量結(jié)果來(lái)幫助維護(hù)食品安全工作，而測(cè)量過(guò)程中人為操作因素、環(huán)境因素、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和儀器設(shè)備等方面都會(huì)對(duì)結(jié)果的不確定度造成影響[4-5]。為了提高測(cè)量結(jié)果的可靠性，找出影響測(cè)量結(jié)果的最主要因素，本研究參照J(rèn)JF 1059.1—2012《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》[6]，采用固相萃取-氣相色譜法測(cè)定茶葉中甲氰菊酯的含量，通過(guò)評(píng)定不確定度的方式，對(duì)測(cè)量過(guò)程中可能造成誤差的操作進(jìn)行測(cè)算，確定影響測(cè)量結(jié)果的主要因素，以改進(jìn)農(nóng)殘測(cè)量的精準(zhǔn)性，對(duì)保障茶葉質(zhì)量安全具有一定作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器設(shè)備MS3 basis旋渦混合器（IKA儀器有限公司）；離心機(jī)TD5A-WS（湘儀離心機(jī)儀器有限公司）；M32自動(dòng)高通量平行濃縮儀（北京萊伯泰科儀器股份有限公司）；VM24固相萃取裝置（天津博納艾杰爾儀器有限公司）；GC-2010Plus氣相色譜儀（日本島津公司）；配備電子捕獲ECD檢測(cè)器，色譜柱：SH-Rtx-1（30 m×0.25 mm× 0.25 μm毛細(xì)色譜柱)。

1.1.2 測(cè)量?jī)x器電子天平，最大允許誤差為±0.5 mg；瓶口分液器，最大允許誤差為0.03%；10 mL移液管，精度0.02 mL；0.1~1.0 mL移液槍，誤差范圍為±1%；20~200 μL移液槍，誤差范圍為±1%；10.00 mL容量瓶，精度0.10mL；ECD檢測(cè)器的定量允差1.2%等。

1.1.3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)甲氰菊酯，購(gòu)于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科學(xué)監(jiān)測(cè)研究所，濃度為100 μg/mL，不確定度U=±3%（k=2）。

1.1.4 化學(xué)試劑乙腈（色譜純，上海安譜公司）；正己烷（色譜純，上海安譜公司）；丙酮（色譜純，上海安譜公司）；氯化鈉（分析純，西隴科學(xué)股份有限公司）；無(wú)水硫酸鈉（分析純，西隴科學(xué)股份有限公司）；二級(jí)水（自制）。

1.1.5 耗材FLORISIL SPE小柱(1 g，6 mL)（上海安譜公司）；13 mm×0.2 μm有機(jī)濾膜（上海安譜公司）。

1.1.6 測(cè)定樣品茶葉，來(lái)自廣西壯族自治區(qū)市場(chǎng)管理局組織的能力驗(yàn)證機(jī)構(gòu)。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配置從冰箱取出濃度為100 μg/mL的甲氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液放在室溫為25℃的實(shí)驗(yàn)室回溫4 h后；用20~200 μL移液槍移取100 μL甲氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液于10.00 mL容量瓶中，用正己烷稀釋定容至刻度，配制成濃度為1 μg/mL的工作標(biāo)準(zhǔn)溶液（此工作標(biāo)準(zhǔn)溶液保存在4℃冰箱中，有效期一周）。檢測(cè)時(shí)通過(guò)稀釋在室溫為25℃的實(shí)驗(yàn)室回溫4 h的工作標(biāo)準(zhǔn)溶液，得到0.10、030、0.50、0.70、1.00 μg/mL共5個(gè)梯度濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液；采用GC-2010Plus氣相色譜儀進(jìn)行甲氰菊酯含量測(cè)定，每一濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液分別進(jìn)樣3次，得到相應(yīng)的色譜峰面積，用最小二乘法擬合得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。

1.2.2 供試品溶液的制備實(shí)驗(yàn)樣品為已粉碎的茶葉樣品，由廣西壯族自治區(qū)市場(chǎng)管理局組織的能力驗(yàn)證機(jī)構(gòu)加入甲氰菊酯農(nóng)藥。準(zhǔn)確稱取茶葉樣品和空白樣品各2.00 g（精確到0.01 g）于50 mL離心管中，加入18 mL蒸餾水渦旋1 min復(fù)原至茶葉鮮樣狀態(tài)，靜止30 min使茶葉充分浸潤(rùn)；然后加入20 mL的乙腈和3~5 g氯化鈉，用渦旋混合器渦旋2 min，采用TD5A-WS離心機(jī)4 000 r/min離心5 min；用10 mL移液管吸取10 mL上層乙腈溶液到15 mL離心管中，調(diào)節(jié)M32自動(dòng)高通量平行濃縮儀水浴溫度不大于40℃，以氮?dú)饬髁? psi吹至近干；加入2 mL正己烷，渦旋1 min，蓋上蓋子，待凈化[7]。

1.2.3 提取液的凈化和定容首先向FLORISIL SPE小柱（1 g，6 mL）中填充約2 cm厚的無(wú)水硫酸鈉，放入VM24固相萃取裝置中，按表1操作步驟進(jìn)行固相萃取操作：在FLORISIL SPE固相萃取小柱中，首先加入5.00 mL正己烷＋丙酮混合液，以1.0 mL/min流速潤(rùn)洗FLORISIL SPE小柱進(jìn)行活化；接著加入5.00 mL正己烷；以1.0 mL/min流速平衡SPE小柱；然后以1.5 mL/min 流速把待凈化樣品提取溶液上樣于SEP小柱中進(jìn)行凈化；最后洗脫，調(diào)節(jié)流速為1.5 mL/min，依次用2.5 mL正己烷+丙酮（9∶1）進(jìn)行洗脫，用15 mL離心管收集洗脫液約8~9 mL。在M32自動(dòng)高通量平行濃縮儀上控制水浴溫度不高于40℃，調(diào)節(jié)氮?dú)饬髁繛? psi，將收集的洗脫液氮吹濃縮至近干；用移液槍正確加入1 mL正己烷，在渦旋混合器渦旋1 min，過(guò)0.2 μm有機(jī)濾膜，裝瓶上機(jī)測(cè)定。

表1 提取液凈化和定容操作步驟

1.2.4 氣相色譜條件毛細(xì)管色譜柱：SH-Rtx-1（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；初始溫度180℃保持8 min，以15℃/min速度升至220℃，保持1 min，再以30℃/min升至250℃，保持10 min；進(jìn)樣體積：1 μL；進(jìn)樣口溫度：250℃；分流比1∶50；ECD檢測(cè)器溫度：280℃；氮?dú)饬魉伲?0 mL/min；柱流速：2 mL/min。

2 結(jié)果與分析

2.1 數(shù)學(xué)模型的建立

分別稱取10組試樣，進(jìn)行平行試驗(yàn)，用外標(biāo)法定性和定量，試樣中農(nóng)藥殘留量計(jì)算公式如下：

式（1）中：ω，試樣中農(nóng)藥殘留量，mg/kg；ρ，標(biāo)準(zhǔn)溶液中農(nóng)藥的質(zhì)量濃度，mg/L；A，樣品溶液中被測(cè)農(nóng)藥的峰面積；As，農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測(cè)農(nóng)藥的峰面積；V1，提取溶劑總體積，mL；V2，用于檢測(cè)的提取溶液的體積，mL；V3，樣品溶液定容體積，mL；m，試樣的質(zhì)量，g。

2.2 測(cè)定不確定度分量來(lái)源分析

根據(jù)測(cè)量過(guò)程和公式（1），茶葉中甲氰菊酯含量測(cè)定不確定度的來(lái)源如下：

（1）配制標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)引入的不確定度U1,rel，包括標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度引入的不確定度U1，標(biāo)準(zhǔn)工作溶液稀釋過(guò)程中移液器引入的不確定度U2，容量瓶容量引入的不確定度U3，定容時(shí)人為讀數(shù)誤差引入的不確定度U4，定容時(shí)溫度變化引入的不確定度U5[8-10]；

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線引入的不確定度U2,rel[11]；

（3）稱樣時(shí)電子天平引入的不確定度U3，rel；

（4）添加萃取溶劑時(shí)瓶口分液器引入的不確定度U4,rel；

（5）移取萃取溶液時(shí)10 mL刻度吸管引入的不確定度U5,rel；

（6）固相萃取過(guò)程中引入的不確定度U6,rel；

（7）樣品定容時(shí)1 mL移液槍引入的不確定度U7,rel；

（8）氣相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣引入的不確定度U8,rel；

（9）ECD檢測(cè)器響應(yīng)值引入的不確定度U9,rel；

（10）重復(fù)測(cè)量的相對(duì)不確定度U10,rel（A類）。

試驗(yàn)所用試劑均為色譜純，因而空白樣品測(cè)定所致的不確定度影響很小，可忽略不計(jì)。

2.3 各不確定度的評(píng)定

2.3.1 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)引入的不確定度U1,rel

2.3.1.1標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度引入的不確定度U1[12]根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書，甲氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度為100 μg/mL，不確定度為0.12 μg/mL，按矩形分布計(jì)算，k= 3，則：

2.3.1.2標(biāo)準(zhǔn)工作液稀釋過(guò)程中移液槍引入的不確定度U2用移液槍移取100 μL甲氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)品溶液于10 mL容量瓶中，用正己烷定容，配成標(biāo)準(zhǔn)工作液。移液槍說(shuō)明書給出誤差范圍為±1%，按矩形分布計(jì)算則：

2.3.1.3標(biāo)準(zhǔn)溶液定容過(guò)程中容量瓶引入的不確定度U3A級(jí)單標(biāo)線10 mL容量瓶最大誤差為±0.10 mL，按矩形分布計(jì)算，k＝ 3，則：

2.3.1.4定容時(shí)讀數(shù)誤差引入的相對(duì)不確定度U4定容時(shí)人為讀數(shù)誤差引入的不確定度可根據(jù)重復(fù)讀取實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算，表2為10 mL容量瓶重復(fù)6次定容實(shí)驗(yàn)結(jié)果，根據(jù)表2中的數(shù)據(jù)計(jì)算得：

表2 10 mL容量瓶重復(fù)定容實(shí)驗(yàn)結(jié)果 單位：mL

2.3.1.5定容時(shí)溫度引起體積變化引入的不確定度U5試驗(yàn)在25℃條件下進(jìn)行，而容量瓶是在20℃校準(zhǔn)的，正己烷體積膨脹系數(shù)為1.36×10–3℃–1，容量瓶和溶液溫度與校準(zhǔn)時(shí)不同所引起的體積變化為：±100 mL×5℃×1.36×10–3℃–1=0.68 mL，按矩形分布計(jì)算，則：

擬合以上5項(xiàng)得出配制標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)引入的不確定度為：

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線引入的不確定度U2,rel實(shí)驗(yàn)經(jīng)過(guò)初篩，確定配置5個(gè)梯度濃度的甲氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，其濃度分別為0.10、0.30、0.50 、0.70、1.00 μg/mL，采用GC-2010Plus氣相色譜儀進(jìn)行甲氰菊酯含量測(cè)定，每一濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液分別進(jìn)樣3次，得到相應(yīng)的色譜峰面積[5]（n=15，詳見(jiàn)表3）。

表3 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液色譜峰面積測(cè)量結(jié)果

用最小二乘法擬合得到線性回歸方程為Y=173 694x+637.352，R2=0.999[13-14]。同時(shí)對(duì)茶葉樣品溶液中甲氰菊酯的濃度重復(fù)測(cè)定3次，由線性回歸方程計(jì)算得樣品溶液的質(zhì)量濃度分別為0.60、0.59、0.61 mg/kg，平均值為0.60 mg/kg，則用標(biāo)準(zhǔn)曲線求得樣品溶液濃度引入的相對(duì)不確定度按式（8）計(jì)算：

式中：S，標(biāo)準(zhǔn)校正曲線殘差的標(biāo)準(zhǔn)偏差；對(duì)樣品中甲氰菊酯濃度進(jìn)行3次測(cè)定，由線性回歸方程求得樣品的平均質(zhì)量濃度，0.60 mg/L；a，線性回歸方程的斜率；N，樣品平行測(cè)定次數(shù)，N=3。將相關(guān)數(shù)據(jù)代入式（3），得：U2,rel=0.024。

2.3.3 樣品稱量時(shí)天平引入的相對(duì)不確定度U3,rel根據(jù)電子天平的檢定證書，其最大允許誤差為±0.5 mg。實(shí)驗(yàn)中稱取m=2 g（2 000 mg）樣品，按矩形分布計(jì)算，則稱重標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.3.4 添加萃取溶劑時(shí)瓶口分液器引入的不確定度U4,rel根據(jù)瓶口分液器說(shuō)明書，移取20 mL乙腈萃取溶劑，其最大允許誤差為0.03%×20 mL=0.006 mL，按均勻分布計(jì)算，k= 3，則：

2.3.5 移取萃取溶液時(shí)10 mL刻度吸管引入的不確定度U5,rel

2.3.5.1移液管體積刻度的不確定度依據(jù)JJG 196—2006《常用玻璃量器》，10 mL刻度吸管(A級(jí))容量允差為±0.050 mL，按均勻分布，標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：0.050/3＝0.029 mL[15]。

2.3.5.2液體充滿至移液管刻度線的估讀誤差依據(jù)JJF 1059.1—2012《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》，移液管刻度線誤差經(jīng)驗(yàn)值為0.02 mL，按均勻分布，標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：0.02/3=0.012 mL[16]。

2.3.5.3溫度變化引入體積變化的標(biāo)準(zhǔn)不確定度實(shí)驗(yàn)在25℃條件下進(jìn)行，水的膨脹系數(shù)為2.1×10–4/℃-1，按均勻分布，溫度變化引起的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

合成以上3項(xiàng)得出10 mL分刻度吸管不確定度為：

2.3.6 固相萃取過(guò)程中引入的不確定度U6,rel固相萃取過(guò)程需要經(jīng)過(guò)SPE的活化/平衡、上樣、洗脫、濃縮、定容等步驟，很難確定每一步驟對(duì)測(cè)量結(jié)果不確定度的貢獻(xiàn)，實(shí)驗(yàn)中一般采用方法的回收率對(duì)固相萃取過(guò)程引入的不確定度進(jìn)行評(píng)定[13]。取7份茶葉樣品，其中1份作為空白，其它6份分別加入0. 60 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)同樣品測(cè)定進(jìn)行平行試驗(yàn)。精密度和回收率結(jié)果如表4所示，回收率的標(biāo)準(zhǔn)差：

表4 回收率測(cè)定結(jié)果

2.3.7 樣品定容時(shí)1 mL移液槍引入的不確定度U7,rel樣品經(jīng)氮吹濃縮后定容過(guò)程的不確定度主要由1 mL移液槍產(chǎn)生，用移液槍移取1 mL正己烷定容，根據(jù)移液槍檢定證書給出誤差范圍為±1%，按矩形分布計(jì)算，k= 3，則[17]：

2.3.8 氣相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣引入的不確定度U8,rel進(jìn)樣體積引入的不確定度主要源于自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣針體積重現(xiàn)性。根據(jù)本氣相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣器技術(shù)參數(shù)（進(jìn)樣體積為1 μL，進(jìn)樣重現(xiàn)性不大于0.5%），按矩形分布計(jì)算（B類評(píng)定，k[18]，則：

2.3.9ECD檢測(cè)器響應(yīng)值引入的不確定度U9,rel氣相色譜儀靈敏度較高，故儀器穩(wěn)定性及測(cè)定值分散性是ECD檢測(cè)器測(cè)量不確定度的主要來(lái)源。采用標(biāo)準(zhǔn)工作溶液連續(xù)測(cè)定8次，測(cè)得質(zhì)量濃度數(shù)據(jù)見(jiàn)表5，以質(zhì)量濃度值的分散性計(jì)算相對(duì)不確定度：

表5 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液重復(fù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3.10 重復(fù)測(cè)量的相對(duì)不確定度U10,rel（A類）測(cè)量茶葉樣品中甲氰菊酯質(zhì)量濃度，共進(jìn)行了10次平行試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 平行試驗(yàn)結(jié)果值

3 不確定度的合成與擴(kuò)展

3.1 合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量來(lái)源、量值、貢獻(xiàn)率見(jiàn)下表7。

表7 標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量匯總

利用U1,rel~U10,rel不確定度分量結(jié)算結(jié)果計(jì)算合成相對(duì)不確定度[19-20]，得：

實(shí)驗(yàn)測(cè)得茶葉樣品中甲氰菊酯質(zhì)量濃度為0.60 mg/kg，合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：Uc(rel)=Urel×x=0.034×0.60 mg/kg=0.020 mg/kg

由表7可知，測(cè)量茶葉中甲氰菊酯含量過(guò)程中，不確定度的來(lái)源影響大小為標(biāo)準(zhǔn)工作曲線＞重復(fù)測(cè)量＞固相萃取過(guò)程＞ECD檢測(cè)器＞標(biāo)準(zhǔn)溶液配置＞10 mL分刻度吸管＞自動(dòng)進(jìn)樣器＞瓶口分液器＞樣品稱量＞1 mL移液槍；其中標(biāo)準(zhǔn)工作曲線、重復(fù)測(cè)量、固相萃取過(guò)程、ECD檢測(cè)器和標(biāo)準(zhǔn)溶液配置引入的不確定度較大，貢獻(xiàn)率達(dá)35.74%、31.27%、14.29%、6.85和6.25%。

3.2 擴(kuò)展不確定度

取95%的置信概率，包含因子k=2，則擴(kuò)展不確定度U(x)=k×Uc(rel)=0.040 mg/kg。因此，采用固相萃取-氣相色譜法測(cè)定茶葉中甲氰菊酯濃度，當(dāng)測(cè)量的數(shù)據(jù)為0.60 mg/kg時(shí)，測(cè)量的結(jié)果表示為（0.60±0.040）mg/kg，k=2。

4 討論與結(jié)論

4.1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的使用

檢驗(yàn)用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或標(biāo)準(zhǔn)溶液的準(zhǔn)確性直接影響到定量結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的溯源性至關(guān)重要，實(shí)驗(yàn)應(yīng)使用有證的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。本試驗(yàn)為農(nóng)藥殘留的能力驗(yàn)證活動(dòng)，對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)溶液的要求相對(duì)來(lái)說(shuō)比較高，具體有以下幾個(gè)方面：一是農(nóng)殘標(biāo)液應(yīng)該購(gòu)買新生產(chǎn)的，因?yàn)檗r(nóng)藥具有不穩(wěn)定性，在光、熱影響下容易發(fā)生分解及轉(zhuǎn)化；二是農(nóng)殘標(biāo)液應(yīng)在符合標(biāo)液證書的保存條件下進(jìn)行保存；三是農(nóng)殘的標(biāo)液不確定度相對(duì)來(lái)說(shuō)比較大，因此最好采用液標(biāo)和固體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的配制溶液進(jìn)行比較，以確保其可靠性；四是配制農(nóng)殘標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)要注意介質(zhì)的使用，根據(jù)母液與農(nóng)藥的溶解性、樣品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)方法中的提取液及定容上機(jī)的溶劑來(lái)進(jìn)行選擇。

4.2 樣品的保存和前處理

一是農(nóng)藥殘留量本身比較低，而且農(nóng)藥具有不穩(wěn)定的特性，因此實(shí)驗(yàn)室在接到樣品后應(yīng)立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，無(wú)法馬上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的應(yīng)將樣品處于（0~4）℃冷藏箱中避光保存；二是由于樣品是經(jīng)過(guò)冷藏的，在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)之前最好將樣品放置至室溫后再進(jìn)行稱樣，否則易吸收空氣中的水分造成稱量誤差；三是樣品的前處理要根據(jù)檢驗(yàn)方法選擇合適的有機(jī)溶劑，提取方式、時(shí)間應(yīng)按照檢驗(yàn)方法的要求嚴(yán)格進(jìn)行，否則會(huì)出現(xiàn)提取不完全的情況；四是由于茶葉樣品中的成分比較復(fù)雜，樣品中的色素及脂類成分都可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，所以最好對(duì)提取液進(jìn)行有效的凈化處理，而且要進(jìn)行多次洗脫，使目標(biāo)組分全部轉(zhuǎn)移到提取溶液中，避免組分的損失。

4.3 儀器設(shè)備

一是農(nóng)殘分析對(duì)于儀器的要求比較高，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)該對(duì)儀器的進(jìn)樣針、氣路、色譜柱、檢測(cè)器等進(jìn)行清洗及凈化，使樣品分析過(guò)程中不受污染；二是分析檢測(cè)時(shí)要確保分析儀器處于穩(wěn)定狀態(tài)，參數(shù)設(shè)置及分析條件優(yōu)化到最佳狀態(tài)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)所用儀器型號(hào)將儀器調(diào)整至最佳狀態(tài)；三是為了避免系統(tǒng)誤差，條件允許的情況下，可以用多臺(tái)儀器進(jìn)行結(jié)果比較，而且要注意進(jìn)樣過(guò)程中試劑的揮發(fā)對(duì)結(jié)果造成的影響。

4.4 檢驗(yàn)人員

一是檢驗(yàn)人員在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)熟悉檢驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)，掌握檢測(cè)方法基本原理，實(shí)驗(yàn)過(guò)程要求做到操作規(guī)范、熟練，嚴(yán)格按檢測(cè)方法的要求對(duì)樣品中的目標(biāo)組分進(jìn)行檢測(cè)；二是檢驗(yàn)人員應(yīng)熟知保證結(jié)果準(zhǔn)確性的驗(yàn)證方法，比如通過(guò)進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，將加標(biāo)實(shí)際結(jié)果與理論結(jié)果相比較，如果出現(xiàn)回收率過(guò)高或過(guò)低的情況應(yīng)及時(shí)進(jìn)行原因分析并糾正；三是檢測(cè)人員應(yīng)考慮農(nóng)殘的檢測(cè)中各種因素的影響，比如樣品中的基質(zhì)效應(yīng)對(duì)農(nóng)殘結(jié)果影響很大，因此應(yīng)該通過(guò)基質(zhì)曲線加標(biāo)的方式將這個(gè)影響降低到最小。

因此，用固相萃取-氣相色譜法測(cè)定茶葉甲氰菊酯的過(guò)程中，應(yīng)選用有證的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，精度較好的量器，規(guī)范移液管和容量瓶的操作，確保配置標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度的準(zhǔn)確性；選擇擬合線性高的工作曲線進(jìn)行校準(zhǔn)；規(guī)范樣品的保存和前處理步驟；對(duì)分析儀器進(jìn)行日常維護(hù)和按時(shí)檢定；加強(qiáng)檢驗(yàn)人員的檢測(cè)技術(shù)培訓(xùn)，適當(dāng)增加平行樣來(lái)降低不確定度，提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

本試驗(yàn)采用固相萃取–氣相色譜法測(cè)定茶葉中甲氰菊酯濃度，測(cè)量不確定度主要來(lái)源于甲氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)工作曲線、重復(fù)測(cè)量、固相萃取過(guò)程、ECD檢測(cè)器和標(biāo)準(zhǔn)溶液配置，貢獻(xiàn)率分別為35.74%、31.27%、14.29%、6.85和6.25%，其中標(biāo)準(zhǔn)曲線引入的不確定對(duì)測(cè)量結(jié)果的影響最大。