Fe3＋摻雜聚多巴胺納米球熒光適配體傳感器對小麥中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的檢測

路 念，馬 驥,4，成軍虎，孫大文,*

（1.華南理工大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，廣東 廣州 510641；2.華南理工大學(xué) 現(xiàn)代食品工程研究中心，廣東 廣州 510006；3.廣東省冷鏈?zhǔn)称分悄芨兄c過程控制工程技術(shù)研究中心，廣東省農(nóng)產(chǎn)品智能冷鏈物流設(shè)備工程實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510006；4.華南理工大學(xué) 發(fā)光材料與器件國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510640）

脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（deoxynivalenol，DON），是黃色鐮刀菌（Fusarium culmorum）和禾谷鐮刀菌（Fusarium graminearum）產(chǎn)生的高毒性次級(jí)代謝產(chǎn)物，屬于單端孢霉烯B族化合物[1]。因?yàn)樵摲N毒素可以引起豬產(chǎn)生嘔吐癥狀，故又命名為嘔吐毒素。DON的主要污染對象為小麥、玉米、燕麥等農(nóng)副產(chǎn)品[2-4]，且容易引起動(dòng)物的拒食反應(yīng)，還具有免疫毒性、器官毒性、抑制蛋白合成和致畸性等毒性作用[5-6]。此外，DON具有很強(qiáng)的熱穩(wěn)定性，一般的食品加工和烹飪方法均不能破壞其毒性[7-8]，對食品安全存在隱患。DON是糧食庫中小麥等農(nóng)副產(chǎn)品入庫的必要檢測指標(biāo)之一。

目前DON的測定方法主要有液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）法[9-10]、高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）法[11-12]、薄層色譜（thin layer chromatography，TLC）法等[13-14]，這些方法雖然具有高準(zhǔn)確性、高靈敏性、高選擇性等優(yōu)勢，但所需設(shè)備昂貴、樣品前處理繁瑣，且需要專門的技術(shù)操作人員。酶聯(lián)免疫檢測法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）具有成本低、操作簡便、靈敏度高、樣品前處理簡單等優(yōu)勢，但抗體與酶易變質(zhì)，且存在非特異性反應(yīng)、假陽性等問題[15]。因此，開發(fā)一種簡單、靈敏、快速且準(zhǔn)確性高的DON檢測方法具有十分重要的意義。

熒光分析方法是一種基于熒光信號(hào)探針的熒光強(qiáng)度對物質(zhì)進(jìn)行分析的方法，近年來被廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)診斷[16]、環(huán)境檢測[17]、食品安全檢測[18-20]等方面。核酸適配體是利用指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進(jìn)化（systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX）技術(shù)從核酸分子文庫中得到的一段寡聚核苷酸序列（DNA或RNA），它能與目標(biāo)物質(zhì)高特異性、高選擇性地結(jié)合[21]。此外，核酸適配體還具有分子質(zhì)量小、易于修飾功能性基團(tuán)等特點(diǎn)，因此被廣泛應(yīng)用于生物傳感器領(lǐng)域[22]。聚多巴胺納米球（polydopamine nanospheres，PDANS）是一種由多巴胺在堿性條件下發(fā)生自聚集形成的類黑色素聚合物，具有良好的生物相容性和生物降解性。有研究表明PDANS對氨基甲基香豆素乙酸酯、6-羧基熒光素（6-carboxyfluorescein，F(xiàn)AM）、6-羧基四甲基羅丹明和Cy5具有優(yōu)異的猝滅能力[23]。基于上述優(yōu)點(diǎn)，研究者們利用PDANS作為猝滅劑設(shè)計(jì)了多種熒光適配體傳感器用于對DNA、RNA、蛋白質(zhì)、真菌毒素等物質(zhì)進(jìn)行檢測[24-28]。然而，將基于PDANS的熒光適配體傳感器用于食品中DON的檢測鮮見報(bào)道。

本研究利用PDANS材料高效的猝滅性能，結(jié)合核酸適配體的特異性識(shí)別能力，通過摻入Fe3＋提高PDANS對FAM的熒光共振能量轉(zhuǎn)移（fluorescence resonance energy transfer，F(xiàn)RET）效率，從而提高PDANS對FAM的熒光猝滅效率，構(gòu)建一種熒光適配體傳感器用于DON的檢測。該傳感器設(shè)計(jì)簡單、響應(yīng)快速，可用于小麥中DON的定量檢測。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

鹽酸多巴胺、三(羥甲基)氨基甲烷（Tris）、NaCl、MgCl2、CaCl2、KCl、FeCl3·6H2O 上海麥克林生化科技有限公司；DON、NH4OH（質(zhì)量分?jǐn)?shù)25%） 美國Sigma-Aldrich公司；玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEN）、黃曲霉毒素G1（aflatoxin G1，AFG1）、黃曲霉毒素B1（flatoxin B1，AFB1） 壇墨質(zhì)檢科技股份有限公司；DON核酸適配體（5’-FAM-GCA TCA CTA CAG TCA TTA CGC ATC GTA GGG GGG ATC GTT AAG GAA GTG CCC GGA GGC GGT ATC GTG TGA AGT GCT GTC CC-3’）由生工生物工程（上海）股份有限公司合成及純化。所用試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水均為超純水（18.2 MΩ·cm）。

1.2 儀器與設(shè)備

Merlin高分辨場發(fā)射掃描電子顯微鏡 德國Zeiss公司；Nicolet Is50傅里葉變換紅外光譜儀 美國ThermoFisher公司；UV-1800紫外-可見分光光度計(jì)、RF-6000熒光分光光度計(jì) 日本島津公司；圓二色光譜儀英國Applied Photophysics Ltd.公司；SCIENTZ-18N冷凍干燥機(jī) 寧波新芝生物科技股份有限公司；JW-3024HR高速冷凍離心機(jī) 安徽嘉文儀器裝備有限公司。

1.3 方法

1.3.1 傳感器的構(gòu)建

適當(dāng)修改已報(bào)道文獻(xiàn)[29]的方法，合成了PDANS。將24 mL無水乙醇與56 mL超純水混合均勻后，加入0.8 mL氨水溶液（NH4OH，25%）并在室溫下攪拌30 min，然后加入200 mg鹽酸多巴胺，持續(xù)攪拌30 h后于9000 r/min離心20 min，收集沉淀并用超純水洗滌3 次，凍干后獲得PDANS，并于4 ℃保存?zhèn)溆谩：铣蒄e3＋摻雜聚多巴胺納米（Fe-PDANS）的方法與合成PDANS相似，區(qū)別是在加入鹽酸多巴胺的同時(shí)加入0.8 mL 10 mg/mL FeCl3溶液，其他步驟不變。

將40 μL 100 nmol/L標(biāo)記有FAM的DON核酸適配體（PDON）和40 μL 1 μg/mL的DON溶液于37 ℃振蕩孵育30 min，然后加入35 μL 1 mg/mL Fe-PDANS繼續(xù)振蕩孵育35 min，最后將溶液體積補(bǔ)充至1500 μL。

1.3.2 實(shí)驗(yàn)可行性驗(yàn)證

1.3.2.1 圓二色譜測定

通過圓二色譜驗(yàn)證DON和PDON間的結(jié)合作用。吸取500 μL 100 nmol/L PDON分別和500 μL 1.5、2 μg/mL和2.5 μg/mL DON于37 ℃反應(yīng)30 min，將該溶液在1 cm路徑長度的石英比色皿中進(jìn)行圓二色譜測定，分析該混合物的橢圓度光譜，并與作為參考的100 nmol/L PDON的光譜進(jìn)行比較。

1.3.2.2 熒光發(fā)射光譜掃描

熒光掃描參數(shù)設(shè)置激發(fā)波長為470 nm，發(fā)射波長測量范圍為490～650 nm，激發(fā)帶寬和發(fā)射帶寬均為5 nm，記錄520 nm波長下的最佳熒光發(fā)射強(qiáng)度。將測量體系僅存在PDON時(shí)的熒光強(qiáng)度記為F0，測量體系不存在DON時(shí)加入Fe-PDANS后的熒光強(qiáng)度記為F1，測量體系存在DON時(shí)加入Fe-PDANS后的熒光強(qiáng)度記為F2。

1.3.3 反應(yīng)條件優(yōu)化

為了獲得最佳的傳感性能，優(yōu)化反應(yīng)條件，包括Fe-PDANS合成過程中Fe3＋摻入量、DON檢測過程中Fe-PDANS加入量、Fe-PDANS和PDON孵育時(shí)間。

1.3.3.1 Fe3＋摻入量對PDON猝滅性能的影響

在Fe-PDANS的合成過程中，分別加入0、0.2、0.4、0.8 mL和1.0 mL 10 mg/mL的FeCl3溶液，制備Fe3＋摻入量相當(dāng)于鹽酸多巴胺加入量1%、2%、3%、4%和5%的Fe-PDANS。使用上述不同F(xiàn)e3＋摻入量的Fe-PDANS構(gòu)建傳感器并對傳感器進(jìn)行熒光掃描。經(jīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)，根據(jù)所得熒光強(qiáng)度計(jì)算Fe-PDANS對PDON的猝滅效率Q，通過比較猝滅效率得出最佳的Fe3＋摻入量。

式中：F0為測量體系僅存在PDON時(shí)的熒光強(qiáng)度；F1為測量體系不存在DON時(shí)的熒光強(qiáng)度；F2為測量體系存在DON時(shí)的熒光強(qiáng)度。

1.3.3.2 Fe-PDANS加入量的優(yōu)化

將40 μL 100 nmol/L PDON和40 μL 1 μg/mL DON溶液于37 ℃振蕩孵育30 min，分別加入10、15、20、25、30、35、40、45 μL 1 mg/mL Fe-PDANS，振蕩孵育30 min后取出，將溶液體積補(bǔ)充至1500 μL后進(jìn)行熒光掃描。經(jīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)，選取最佳的熒光強(qiáng)度比值（F2/F1）所對應(yīng)的Fe-PDANS用于構(gòu)建傳感器。

1.3.3.3 Fe-PDANS與PDON的孵育時(shí)間優(yōu)化

將40 μL 100 nmol/L PDON和40 μL 1 μg/mL DON溶液于37 ℃振蕩孵育30 min，然后加入35 μL Fe-PDANS分別振蕩孵育10、15、20、25、30、35、40 min和45 min后取出，將溶液體積補(bǔ)充至1500 μL后進(jìn)行熒光掃描。經(jīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)，選取最佳的F2/F1值所對應(yīng)的孵育時(shí)間用于構(gòu)建傳感器。

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

在上述步驟所得的最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下分別測定DON質(zhì)量濃度為0.2667、1.333、2.667、13.33、26.67 ng/mL和133.3 ng/mL條件下傳感器獲得的熒光強(qiáng)度，并根據(jù)DON質(zhì)量濃度及F2/F1值的關(guān)系建立標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行比較，考察線性范圍以及檢出限。

1.3.5 傳感器特異性和重復(fù)性分析

在上述步驟所得的最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下構(gòu)建傳感器，分別檢測1 μg/mL DON、1 μg/mL ZEN、1 μg/mL AFG1、1 μg/mL AFB1。經(jīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)，分析比較DON以及其他毒素存在時(shí)傳感器的熒光強(qiáng)度比值，以評估所構(gòu)建傳感器對DON的特異性。

在相同條件下，連續(xù)6 d用所構(gòu)建的傳感器測量1 μg/mL的DON，每批檢測重復(fù)3 次，以評估傳感器的重復(fù)性。

1.3.6 陽性樣品檢測

根據(jù)嘔吐毒素檢測試劑盒中的方法對小麥進(jìn)行預(yù)處理。將受DON污染的小麥經(jīng)研磨機(jī)磨碎后稱取2 g于50 mL離心管中，加入10 mL水，置于渦旋振蕩器中振蕩5 min，于4000 r/min離心10 min后收集上清液于干凈的容器中，得到陽性樣品。然后使用ELISA和本研究的方法對陽性樣品分別進(jìn)行檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1 實(shí)驗(yàn)原理

利用Fe-PDANS材料高效的猝滅性能、PDON的識(shí)別能力和Fe-PDANS對PDON的吸附能力，構(gòu)建一種基于FRET的熒光適配體傳感器。其檢測原理如圖1所示。

圖1 基于Fe-PDANS的熒光適配體傳感器對DON檢測原理圖Fig.1 Schematic illustration of the fluorescent aptasensor based on polydopamine nanospheres for DON detection

當(dāng)體系中不存在DON時(shí)，向體系中加入Fe-PDANS后，單鏈PDON通過其堿基芳香環(huán)結(jié)構(gòu)與Fe-PDANS間通過π-π堆積的非共價(jià)作用吸附到Fe-PDANS上，形成PDON/Fe-PDANS復(fù)合物。此時(shí)，由于FAM與Fe-PDANS間的FRET作用，F(xiàn)AM的熒光被Fe-PDANS猝滅，此時(shí)傳感體系的熒光信號(hào)較弱。當(dāng)體系中存在DON時(shí)，PDON將會(huì)首先與DON特異性結(jié)合，其空間構(gòu)象發(fā)生改變，阻礙了PDON與Fe-PDANS間的π-π堆積的非共價(jià)作用，從而使得FAM的熒光不能被Fe-PDANS所猝滅，產(chǎn)生熒光信號(hào)。

2.2 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的可行性

2.2.1 Fe-PDANS的形貌及光譜表征

利用掃描電鏡觀察Fe-PDANS的形貌及粒徑，如圖2A所示，F(xiàn)e-PDANS維持著較好的球形，尺寸約為170 nm。圖2B是多巴胺、PDANS和Fe-PDANS的傅里葉紅外光譜圖，其中，多巴胺在3370 cm-1和3340 cm-1處分別有一個(gè)寬峰和一個(gè)小峰，對應(yīng)N—H的伸縮振動(dòng)峰。PDANS在3430 cm-1處有一個(gè)峰，屬于N—H的伸縮振動(dòng)峰；在1620 cm-1處和1520 cm-1處分別有一個(gè)峰，為吲哚和吲哚二氫的特征峰，這與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道一致[26]，表明成功合成出PDANS。Fe-PDANS在3260 cm-1處有一個(gè)弱峰，且相對于PDANS發(fā)生了藍(lán)移。此外，1610 cm-1和1510 cm-1兩處的峰也發(fā)生了藍(lán)移，表明酚羥基上的氧原子參加了金屬配位，間接表明Fe3＋成功摻雜到PDANS中[30]。同時(shí)，由圖2C可知，PDANS和Fe-PDANS的紫外吸收光譜均與PDON的熒光發(fā)射光譜存在部分重疊，證明PDAND和Fe-PDANS均可與PDON發(fā)生FRET效應(yīng)[22]。此外，由于Fe-PDANS的光譜重疊部分大于PDANS的光譜重疊部分，因此Fe-PDANS比PDANS具有更高的FRET效率，這證明摻入Fe3＋可以提高FRET效率[22,31]。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明成功制備出Fe-PDANS，且將其用作PDON的猝滅劑可行。

圖2 Fe-PDANS的形貌及傳感器的光譜表征Fig.2 Morphology of Fe-PDANS and spectral characterization of the aptsensor

2.2.2 圓二色譜分析

為進(jìn)一步驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)原理的可行性，使用圓二色譜儀考察PDON與DON孵育引起PDON的構(gòu)象發(fā)生變化情況。如圖2D所示，PDON的圓二色譜顯示在243 nm處存在一個(gè)負(fù)峰，在272 nm處存在一個(gè)正峰，表明該適配體形成了具有小發(fā)夾結(jié)構(gòu)的主環(huán)[32-33]。加入DON后，272 nm處的正峰沒有顯著變化，但243 nm處的負(fù)峰隨著DON質(zhì)量濃度的增加而逐漸加深，這是由DON嵌入到PDON中，引起螺旋堿基數(shù)的增加所導(dǎo)致的[32,34]。證明該適配體可以和DON有效結(jié)合并導(dǎo)致適配體的空間構(gòu)象發(fā)生改變，從而可以通過改變適配體的空間構(gòu)象達(dá)到阻止其吸附到Fe-PDANS上的目的。

2.2.3 傳感器熒光光譜分析

所制備的傳感器對DON檢測所獲得的熒光發(fā)射光譜圖如圖2E所示。在傳感器僅存在PDON時(shí)，熒光強(qiáng)度較高，而在傳感器存在PDON和DON時(shí)，熒光強(qiáng)度與僅存在PDON時(shí)無明顯差別，證明DON與PDON結(jié)合后對FAM的發(fā)光性能沒有影響，可將PDON用作傳感器的信號(hào)探針。當(dāng)向傳感器中加入Fe-PDANS時(shí)，在不存在DON的情況下，傳感器的熒光被猝滅。在存在DON的情況下，傳感器的熒光被猝滅的程度降低，證明DON與PDON結(jié)合，阻礙了PDON與Fe-PDANS間的π-π堆積的非共價(jià)作用，從而降低了PDON與Fe-PDANS間的FRET效應(yīng)。這與CD分析所得到的結(jié)果一致，進(jìn)一步表明所構(gòu)建的傳感器具有可行性，能夠?qū)崿F(xiàn)檢測DON的目的。

2.3 反應(yīng)條件優(yōu)化

2.3.1 Fe3＋摻入量對Fe-PDANS猝滅性能的影響

如圖3A所示，PDON的熒光強(qiáng)度隨著Fe3＋摻入量的增加而下降，在摻入相當(dāng)于鹽酸多巴胺加入量4%的Fe3＋時(shí)達(dá)到最低值，此時(shí)Fe-PDANS對PDON的熒光猝滅效率最高。此外，如圖3A3所示，在DON存在的情況下，4%Fe-PDANS具有最高的F2/F1值，說明在此條件下傳感器具有最佳的檢測性能。過少Fe3＋對Fe-PDANS的猝滅性能有限，而過多Fe3＋可能會(huì)破壞Fe-PDANS的形態(tài)，影響到其對PDON的吸附作用[35]。因此選擇摻入4% Fe3＋的Fe-PDANS作為PDON的猝滅劑。

圖3 傳感器制備條件優(yōu)化Fig.3 Selection of optimal preparation conditions for the aptasensor

2.3.2 Fe-PDANS加入量的優(yōu)化

如圖3B所示，PDON的熒光強(qiáng)度隨著Fe-PDANS加入量的增加而逐漸下降，加入量達(dá)到35 μL后不再發(fā)生變化。相應(yīng)的，F(xiàn)e-PDANS對PDON的熒光猝滅效率隨著Fe-PDANS加入量的增加而逐漸上升，加入量達(dá)到35 μL后不再發(fā)生變化。此外，如圖3B3所示，加入35 μL Fe-PDANS的傳感器具有最高的F2/F1值，在此之后F2/F1值逐漸下降，這是由于過量的Fe-PDANS會(huì)對PDON產(chǎn)生過猝滅效應(yīng)[36]。因此選擇加入35 μL 1 mg/mL Fe-PDANS來構(gòu)建傳感器，此時(shí)傳感器中Fe-PDANS終質(zhì)量濃度為0.02333 mg/mL。

2.3.3 Fe-PDANS與PDON孵育時(shí)間優(yōu)化

如圖3C所示，傳感體系的熒光強(qiáng)度隨著時(shí)間的延長逐漸下降，在不存在DON的情況下，至35 min時(shí)傳感體系的熒光強(qiáng)度達(dá)到最小值，此后不再發(fā)生變化。相應(yīng)的，F(xiàn)e-PDANS對PDON的猝滅效率隨著時(shí)間的延長逐漸升高，35 min后不再發(fā)生變化，這表明孵育35 min即可使傳感體系中所有的PDON全部吸附到Fe-PDANS上。而當(dāng)存在DON時(shí)，孵育30 min時(shí)傳感體系的熒光強(qiáng)度達(dá)到最小值，此后不再發(fā)生變化。這可能是因?yàn)椴糠諴DON與DON結(jié)合，減少了能與Fe-PDANS結(jié)合的PDON，因此反應(yīng)時(shí)間縮短。此外，如圖3C3所示，傳感體系的熒光強(qiáng)度比值F2/F1在35 min達(dá)到最佳，表明此時(shí)可達(dá)到最佳的傳感性能。因此，為確保PDON可以識(shí)別傳感體系內(nèi)所有的DON，選擇35 min作為Fe-PDANS與PDON的孵育時(shí)間。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

通過上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在最優(yōu)的條件下建立傳感體系，對0.2667、1.333、2.667、13.33、26.67 ng/mL和133.3 ng/mL質(zhì)量濃度的DON進(jìn)行測試，以研究DON質(zhì)量濃度與F2/F1的相關(guān)性。由圖4A可知，傳感體系的熒光強(qiáng)度隨著毒素質(zhì)量濃度的上升而增強(qiáng)。由圖4B可以看出，F(xiàn)2/F1在此質(zhì)量濃度區(qū)間具有良好的線性關(guān)系，其線性方程為F2/F1=0.1583lgCDON＋1.3112（R2=0.9954），檢出限為0.1182 ng/mL（RSN=3）。與現(xiàn)有的用于DON檢測的熒光適配體傳感器相比，本實(shí)驗(yàn)具有較高的靈敏度，表明本實(shí)驗(yàn)所制備的傳感器具有優(yōu)越性[37]。

圖4 熒光強(qiáng)度與DON質(zhì)量濃度的關(guān)系Fig.4 Relationship between fluorescence intensity and DON concentration

2.5 傳感器的特異性

通過檢測質(zhì)量濃度為1 μg/mL的不同真菌毒素（DON、ZEN、AFB1、AFG1）評估所構(gòu)建傳感器的特異性。如圖5所示，在DON存在的情況下，F(xiàn)2/F1大于1，而在其他毒素的F2/F1值接近1，這表明該傳感器僅與DON相互作用，具有良好的特異性。

圖5 傳感器的特異性評估Fig.5 Selectivity assessment of the aptasensor

2.6 重復(fù)性分析

為考察所制備的傳感器的重復(fù)性，在最佳條件下，測定6 批1 μg/mL DON溶液，結(jié)果見表1。相對標(biāo)準(zhǔn)偏差值小于3%，說明該傳感器具有良好的重復(fù)性。

表1 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 1 Results of repeatability tests

2.7 陽性樣品中DON的檢測

為驗(yàn)證該熒光適配體傳感器的可靠性，使用國標(biāo)方法ELISA和所構(gòu)建的熒光適配體傳感器同時(shí)對受DON污染的小麥進(jìn)行檢測，測試結(jié)果如表2所示。同時(shí)利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對兩種方法的檢測結(jié)果進(jìn)行顯著性分析，t檢驗(yàn)和f檢驗(yàn)的P值分別為0.4513和0.5297，在95%的置信水平下均超過0.05，結(jié)果表明，所構(gòu)建的熒光傳感器在精度上與ELISA無顯著性差異。證明該熒光適配體傳感器可應(yīng)用于小麥中的DON檢測。

表2 陽性小麥樣品中DON的檢測Table 2 Results of detection of DON in positive wheat samples

3 結(jié)論

利用PDANS材料良好的猝滅性能，以及對DON具有特異性識(shí)別能力的核酸適配體，通過摻入Fe3＋提高PDANS與核酸適配體上修飾的FAM間的FRET效率，從而提高PDANS對FAM的熒光猝滅效率，構(gòu)建一種基于FRET的熒光適配體傳感器，用于檢測DON。該傳感器反應(yīng)快速、靈敏，且具有良好的特異性和重復(fù)性，其檢出限為0.1182 ng/mL，對陽性小麥樣品中DON的檢測結(jié)果與ELISA所得結(jié)果無顯著差異（P＞0.05）。