基于柱前衍生化GC-MS技術(shù)探究紫蘇葉與白蘇葉的質(zhì)量差異

陳家寶，楊貴雅，郭 龍，齊琳琳，溫春秀，鄭玉光，王 蕾*

1河北中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院；2河北省中藥炮制技術(shù)創(chuàng)新中心；3河北省中藥資源利用與質(zhì)量評(píng)價(jià)國(guó)際聯(lián)合研究中心，石家莊 050200；4河北省農(nóng)林科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所，石家莊 050051；5河北化工醫(yī)藥職業(yè)技術(shù)學(xué)院，石家莊 050026

紫蘇Perillafrutescens(L.) Britt.為唇形科紫蘇屬一年生直立草本植物[1]。歷代重要本草稱葉兩面全紫或面青背紫的為“蘇”或“紫蘇”，而將葉片全綠的稱為“荏”，即“白蘇”[2]。二者皆可作為蔬菜食用，但在使用過(guò)程中仍有一些區(qū)別。紫蘇因富含天然色素廣泛應(yīng)用于天然食品著色劑領(lǐng)域[3]，參考《中國(guó)藥典》(2020版)中對(duì)紫蘇葉藥材的“兩面紫或上表面綠色，下表面紫色”的性狀描述，可知紫蘇則為正品紫蘇類藥材的植物來(lái)源[4]。白蘇除了作為蔬菜食用，還可用作食品防腐劑[5]。20世紀(jì)70年代《中國(guó)植物志》參考國(guó)外分類學(xué)家Elmer Drew Merrill的意見(jiàn)將“紫蘇”和“白蘇”合并為一種，稱該原變種為P.frutescensvar.frutescens[1]。20世紀(jì)80年代，國(guó)內(nèi)中醫(yī)藥學(xué)者基于對(duì)紫蘇和白蘇本草考證及功效差異的考量，建議將“紫蘇”定名為P.frutescensvar.arguta，“白蘇”定名為P.frutescensvar.frutescens.[6-8]，并且Liu等[9]根據(jù)野外觀察和栽培試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)紫蘇種子播種后仍全部為紫蘇，白蘇種子播種后其葉全部為兩面綠的白蘇，未發(fā)現(xiàn)變異?？梢?jiàn)，紫蘇在植物分類上至今仍存在一定的爭(zhēng)議，需相關(guān)學(xué)者不斷尋找可靠、普遍適用的特征作為紫蘇與白蘇分類的依據(jù)。

紫蘇葉為紫蘇P.frutescens(L.) Britt.的干燥葉(或帶嫩枝)，具有解表散寒，行氣和胃的功效，常用于治療風(fēng)寒感冒，咳嗽嘔惡，妊娠嘔吐，魚(yú)蟹中毒[4]。既然《中國(guó)植物志》將紫蘇與白蘇合并為一種，那么紫蘇葉的來(lái)源植物也應(yīng)包括白蘇，然而白蘇葉與紫蘇葉在外觀形態(tài)、化學(xué)成分等方面二者存在較大差異。Li等[10]收集了來(lái)自國(guó)內(nèi)各地的不同紫蘇種質(zhì)，種植后觀察記錄形態(tài)特征并采用GC-MS技術(shù)確定其化學(xué)型，結(jié)果顯示白蘇葉多為兩面綠色、PK(紫蘇酮)型，紫蘇葉多為兩面紫色、PA(紫蘇醛)型，二者的葉片大小、葉片平整度、葉片邊緣等形態(tài)特征存在明顯差異；Dai等[11]利用HPLC技術(shù)對(duì)紫蘇葉與白蘇葉中酚酸類物質(zhì)的含量進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)紫蘇葉中原兒茶醛、咖啡酸、阿魏酸與迷迭香酸的含量均高于白蘇葉；Shangguan等[12]采用可見(jiàn)分光光度法比較紫蘇葉和白蘇葉中的總黃酮的含量差異，結(jié)果表明紫蘇葉中的總黃酮含量高于白蘇葉；Huang等[13]利用HPLC技術(shù)比較分析了紫蘇葉與白蘇葉中的迷迭香酸的含量，發(fā)現(xiàn)在同一采收期紫蘇葉中迷迭香酸的含量高于白蘇葉。目前對(duì)紫蘇葉與白蘇葉化學(xué)成分差異的研究主要集中于揮發(fā)油、黃酮、酚酸等成分，尚缺乏對(duì)二者氨基酸、有機(jī)酸、糖類等成分含量差異的研究，有必要更加系統(tǒng)全面地分析紫蘇葉與白蘇葉的差異性。

本研究擬以紫蘇葉與白蘇葉為研究對(duì)象，建立柱前衍生化GC-MS分析方法，測(cè)定二者氨基酸、有機(jī)酸、糖類、脂肪酸、酚酸類等成分的含量；并通過(guò)主成分分析(principal component analysis，PCA)和正交偏最小二乘法判別分析(orthogonal partial least squares discrimination analysis，OPLS-DA)等多元統(tǒng)計(jì)分析方法比較二者化學(xué)成分差異，篩選出差異性標(biāo)志物；通過(guò)系統(tǒng)研究紫蘇葉與白蘇葉化學(xué)成分差異，將為紫蘇植物學(xué)分類及紫蘇不同種質(zhì)資源應(yīng)用提供一定參考。

1 材料

Agilent 7890B-5977B型GC-MS儀(美國(guó)Agilent公司)；SQP型十萬(wàn)分之一電子分析天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；BSA224S-CW型萬(wàn)分之一電子分析天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；Eppendorf 5418型高速臺(tái)式離心機(jī)(艾本德中國(guó)有限公司)；DUO型GeneVac miVac真空離心濃縮儀(上海德祥科技有限公司)；MTH-100型恒溫混勻儀(杭州米歐儀器有限公司)。

甲醇(美國(guó)飛世爾科技中國(guó)有限公司，純度≥99.9%)；甲酸(美國(guó)ROE SCIETIFIC INC，純度≥99%)；水(Milli-Q系統(tǒng)制備超純水)；水楊酸(上海羅恩試劑公司，純度≥99.5%)；無(wú)水吡啶(上海阿拉丁生化科技股份有限公司，純度≥99.8%)；甲氧胺鹽酸鹽(美國(guó)Sigma Aldrich公司，純度≥97.5%)；衍生化試劑MSTFA[N-甲基-N-(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺](美國(guó)Sigma Aldrich公司，純度≥98.5%)；氨基酸混標(biāo)(日本和光純藥株式會(huì)社(WAKO)，批號(hào)：KCN6130，內(nèi)含L-天冬氨酸、L-蘇氨酸、L-絲氨酸、L-谷氨酸、L-脯氨酸、L-甘氨酸、L-丙氨酸、L-胱氨酸、L-纈氨酸、L-甲硫氨酸、L-異亮氨酸、L-亮氨酸、L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-賴氨酸、L-組氨酸、L-精氨酸)；有機(jī)酸混標(biāo)(天津阿爾塔科技有限公司，批號(hào)：S051847，內(nèi)含乳酸、酒石酸、蘋(píng)果酸、檸檬酸、琥珀酸、富馬酸)；單糖混標(biāo)(天津阿爾塔科技有限公司，批號(hào)：S029641，內(nèi)含D-果糖、D-葡萄糖、D-蔗糖、D-麥芽糖、D-乳糖)；棕櫚酸(天津阿爾塔科技有限公司，批號(hào)：1ST1714，純度≥99.9%)；油酸(天津阿爾塔科技有限公司，批號(hào)：1ST1738，純度≥99.5%)；α-亞麻酸(天津阿爾塔科技有限公司，批號(hào)：1ST1776，純度≥98.5%)；咖啡酸(上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)：Y09J8C28349，純度≥98.0%);迷迭香酸(上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)：Y06A9K67402，純度≥98.0%)。

12批紫蘇葉與10批白蘇葉均由河北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所溫春秀教授提供，經(jīng)河北中醫(yī)學(xué)院鄭玉光教授分別鑒定為紫蘇P.frutescensvar.arguta及白蘇P.frutescensvar.frutescens的干燥葉，樣品存放于河北中醫(yī)學(xué)院中藥炮制技術(shù)創(chuàng)新中心，樣品來(lái)源信息見(jiàn)表1。

表1 紫蘇葉與白蘇葉樣品信息Table 1 Information of leaves of Perilla frutescens var.arguta and P.frutescens var.frutescens samples

2 方法

2.1 GC-MS條件

氣相色譜條件：以HP-5石英毛細(xì)管柱(0.32 mm×30.0 m，0.25 μm)為色譜柱，分流比為5∶1，載氣為高純氦氣，進(jìn)樣口溫度250 ℃，進(jìn)樣量1 μL，程序升溫(初始溫度從80 ℃開(kāi)始，以10 ℃/min升溫到200 ℃；以6 ℃/min升到250 ℃，以10 ℃/min升溫到310 ℃，保持5 min)。

質(zhì)譜條件：采用電子轟擊離子源(electron impact ion source，EI)，離子能量70 eV，接口溫度為250 ℃，離子源溫度230 ℃，四級(jí)桿溫度150 ℃，TIC掃描質(zhì)量范圍m/z50～500，溶劑延遲時(shí)間為3 min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液的制備

將干燥的紫蘇葉樣品凈選后粉碎，過(guò)60目篩。分別稱取各樣品粉末0.1 g，置于1.5 mL離心管中，加入1 mL提取溶劑(甲醇-水-甲酸70∶28∶2)，充分振搖，室溫下超聲(功率300 W，頻率40 kHz)15 min。13 000 r/min高速離心10 min，取上清液50 μL，加入20 μL水楊酸(1 mg/mL)作為內(nèi)標(biāo)，真空濃縮90 min(40 ℃)揮干溶劑后加入20 μL甲氧胺吡啶溶液(40 mg/mL)，充分振搖，在金屬浴30 ℃下肟化90 min。接著加入80 μLN-甲基-N-(三甲基硅烷)三氟乙酰胺(MSTFA)，在金屬浴37 ℃下充分反應(yīng)30 min，進(jìn)行硅烷化反應(yīng)。最后將樣本于13 000 r/min離心10 min，取上清液，制備供試品衍生化溶液。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備

稱取或吸取氨基酸混標(biāo)、有機(jī)酸混標(biāo)、單糖混標(biāo)、棕櫚酸、油酸、α-亞麻酸、咖啡酸、迷迭香酸對(duì)照品適量，加溶劑(甲醇-水-甲酸70∶28∶2)配制成含氨基酸混標(biāo)2.5 μmol/mL、有機(jī)酸混標(biāo)4.0 mg/mL、單糖混標(biāo)5.0 mg/mL、棕櫚酸0.5 mg/mL、油酸2.0 mg/mL、α-亞麻酸0.5 mg/mL、咖啡酸2.0 mg/mL、迷迭香酸20.0 mg/mL的混合對(duì)照品母液。將對(duì)照品母液用溶劑(甲醇-水-甲酸70∶28∶2)逐級(jí)稀釋呈一系列梯度濃度溶液(氨基酸混標(biāo)0.1562～2.50 μmol/mL、有機(jī)酸混標(biāo)0.25～4.0 mg/mL、單糖混標(biāo)0.3125～5.0 mg/mL、棕櫚酸0.0312～0.5 mg/mL、油酸0.125～2.0 mg/mL、α-亞麻酸0.0312～0.5 mg/mL、咖啡酸0.125～2.0 mg/mL、迷迭香酸1.25～20.0 mg/mL)，取上清液20 μL進(jìn)行衍生化反應(yīng)，衍生化后按“2.1”項(xiàng)下條件進(jìn)行GC-MS分析，測(cè)定峰面積。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 精密度試驗(yàn)

取紫蘇葉(Z1)供試品衍生化溶液，按照“2.1”項(xiàng)下條件進(jìn)行GC-MS分析，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。以水楊酸(內(nèi)標(biāo))峰為參照峰，計(jì)算各代謝物的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，結(jié)果各代謝物相對(duì)保留時(shí)間RSD≤0.07%(n=6)，相對(duì)峰面積的RSD在0.53%～2.13%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.3.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取紫蘇葉(Z1)供試品衍生化溶液，分別于室溫密封條件下在0，2，4，8，12，24 h進(jìn)樣分析，以水楊酸(內(nèi)標(biāo))色譜峰為參照峰，計(jì)算各對(duì)照品衍生物的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，結(jié)果各對(duì)照品衍生物相對(duì)保留時(shí)間RSD≤0.16%(n=6)，相對(duì)峰面積的RSD在0.83%～2.06%(n=6)，表明供試品衍生化溶液在24 h之內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.3 重復(fù)性試驗(yàn)

取紫蘇葉(Z1)樣品粉末6份，每份0.1 g，按“2.2.1”項(xiàng)下方法平行制備供試品衍生化溶液，按照“2.1”項(xiàng)下條件進(jìn)行GC-MS分析，以水楊酸(內(nèi)標(biāo))色譜峰為參照峰，計(jì)算各對(duì)照品衍生物的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，結(jié)果各對(duì)照品衍生物相對(duì)保留時(shí)間RSD≤0.24%(n=6)，相對(duì)峰面積的RSD在0.53%～2.01%(n=6)，表明所建方法重復(fù)性良好。

2.3.4 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的紫蘇葉或白蘇葉樣品粉末6份，每份0.05 g，分別加入混合對(duì)照品溶液適量，按“2.2.1”項(xiàng)下方法平行制備供試品衍生化溶液，進(jìn)行GC-MS分析，計(jì)算含量。結(jié)果顯示各對(duì)照品衍生物的平均加樣回收率在96.73%～104.61%(n=6)，RSD在0.93%～2.55%(n=6)，表明所建的含量測(cè)定方法準(zhǔn)確性良好，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 加樣回收率考察結(jié)果Table 2 Recovery test results of the samples

續(xù)表2(Continued Tab.2)

2.4 數(shù)據(jù)處理與分析

數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)Qualitative Navigator(B.08.00)軟件分析并與NIST17標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜檢索庫(kù)進(jìn)行檢索比對(duì)，對(duì)各色譜峰進(jìn)行定性分析；利用Quant Analysis(B.09.00)批處理軟件提取各樣品中對(duì)應(yīng)峰的峰面積；利用多元變量統(tǒng)計(jì)分析軟件SIMCA 14.1進(jìn)行主成分分析(PCA)及正交偏最小二乘法判別分析(OPLS-DA)篩選出差異性代謝物(VIP>1，P<0.05)；采用Origin 2018軟件繪制相關(guān)圖形。

3 結(jié)果與討論

3.1 定性分析

將“2.2.1”與“2.2.2”項(xiàng)下所得到的供試品與對(duì)照品衍生化溶液按“2.1”項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)樣分析，得到紫蘇葉和白蘇葉樣品GC-MS總離子流圖(見(jiàn)圖1A、1B)與對(duì)照品GC-MS總離子流圖(見(jiàn)圖1C)。采用Qualitative Navigator(B.08.00)軟件對(duì)樣品代謝產(chǎn)物的總離子流圖進(jìn)行匹配。結(jié)果，共得到58個(gè)特征峰(包含內(nèi)標(biāo)水楊酸)，約占總峰面積90%。通過(guò)將各峰質(zhì)譜圖與NIST17.0數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索比對(duì)，鑒別得到58個(gè)特征峰所對(duì)應(yīng)的代謝產(chǎn)物(見(jiàn)表3)，分別屬于有機(jī)酸類、糖類、氨基酸類、脂肪酸類等。

圖1 基于柱前衍生化的紫蘇葉(A)與白蘇葉(B)樣品及混合對(duì)照品(C)GC-MS總離子流圖Fig.1 Total ion chromatograms (TIC) of leaves of P.frutescens var.arguta (A) and P.frutescens var.frutescens (B) and reference substance (C) by GC-MS after pre-column derivatization

表3 紫蘇葉與白蘇葉代謝產(chǎn)物相關(guān)信息Table 3 The information of metabolites in leaves of P.frutescens var.arguta and P.frutescens var.frutescens

續(xù)表3(Continued Tab.3)

3.2 差異性化合物的篩選

為比較紫蘇葉和白蘇葉化學(xué)成分差異，采用Quant Analysis(B.09.00)批處理定量分析軟件積分并提取所有樣品中所鑒定的代謝產(chǎn)物的峰面積并進(jìn)行相對(duì)含量分析，將共有化合物的峰面積合并歸一化后的數(shù)據(jù)導(dǎo)入SIMCA 14.1軟件中進(jìn)行無(wú)監(jiān)督的主成分分析(PCA)。主成分分析結(jié)果顯示紫蘇葉(Z1～Z12)與白蘇葉(B13～B22)明顯分布于2個(gè)區(qū)域(見(jiàn)圖2A)，提示紫蘇葉和白蘇葉中代謝產(chǎn)物的含量存在一定差異性。為了進(jìn)一步區(qū)分紫蘇葉和白蘇葉，尋找二者之間關(guān)鍵差異性成分，在進(jìn)行了無(wú)監(jiān)督的主成分分析的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對(duì)樣品數(shù)據(jù)進(jìn)行了有監(jiān)督的正交偏最小二乘法判別分析(OPLS-DA)。建立的偏最小二乘法判別分析模型中，累計(jì)解釋能力參數(shù)R2Y與Q2分別為0.981、0.957，提示所建立的模型穩(wěn)定性和預(yù)測(cè)能力較好，可用于區(qū)分紫蘇葉和白蘇葉樣品。OPLS-DA得分圖與主成分分析結(jié)果一致，紫蘇葉和白蘇葉可以較好地分為2類(見(jiàn)圖2B)。進(jìn)一步根據(jù)OPLS-DA模型中各化學(xué)成分的變量重要性投影(variable importance in projection，VIP)預(yù)測(cè)值來(lái)篩選差異性化合物。一般認(rèn)為在95%的置信區(qū)間內(nèi)，VIP>1.0的化合物在2組分類中發(fā)揮著重要作用。在此基礎(chǔ)上，比較各成分在紫蘇葉及白蘇葉中的平均相對(duì)含量是否存在顯著性差異(P<0.05)，基于上述標(biāo)準(zhǔn)，從鑒別出來(lái)的代謝物中篩選得到8個(gè)差異性代謝物，分別為D-阿拉伯糖醇(峰27，VIP=1.109，P<0.001)、D-果糖(峰32，VIP=1.509，P<0.001)、D-半乳糖(峰33，VIP=1.022，P<0.001)、D-葡糖醇(峰37，VIP=1.483，P<0.001)、D-山梨糖醇(峰38，VIP=1.236，P<0.001)、咖啡酸(峰43，VIP=2.022，P<0.001)、麥芽糖(峰53，VIP=3.002，P<0.001)、迷迭香酸(峰57，VIP=4.872，P<0.001)(見(jiàn)圖3)。比較這8個(gè)差異性代謝物在紫蘇葉與白蘇葉中的平均含量表明，紫蘇葉中D-果糖、D-葡糖醇、咖啡酸、迷迭香酸的含量顯著高于白蘇葉，D-阿拉伯糖醇、D-半乳糖、D-山梨糖醇的含量顯著低于白蘇葉(見(jiàn)圖4)。

圖2 PCA(A)和OPLS-DA(B)的得分圖Fig.2 PCA (A) and OPLS-DA (B) score plots注：Z：紫蘇葉；B：白蘇葉。Note:Z:Leaves of P.frutescens var.arguta;B:Leaves of P.frutescens var.frutescens.

圖3 P值與VIP值分布散點(diǎn)圖Fig.3 Scatter plot of P-value and VIP value注：綠色的點(diǎn)代表VIP>1、P<0.05的差異性化合物。Note:Green points represent the differential compounds with VIP>1,P<0.05.

圖4 差異性代謝產(chǎn)物柱狀圖 Fig.4 Bar chart of significantly different metabolites 注：二者相互比較，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。Note:Both compared with each other,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001.

3.3 定量分析

3.3.1 線性關(guān)系考察

分別以對(duì)照品質(zhì)量濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo)(X)，相應(yīng)對(duì)照品衍生物的峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到各成分回歸方程。所測(cè)定的27個(gè)化學(xué)成分在各自質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，R2在0.997 2～0.999 6之間(見(jiàn)表4)。

表4 對(duì)照品的線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)Table 4 Linear regression equation and correlation coefficient of reference substances

3.3.2 含量測(cè)定

按照“2.2.1”項(xiàng)下方法制備22批樣品供試品衍生化溶液，按“2.1”項(xiàng)下條件進(jìn)行GC-MS分析，將測(cè)定的各對(duì)照品成分的峰面積代入各回歸方程進(jìn)行計(jì)算，得到樣品中各對(duì)照品成分的含量，計(jì)算紫蘇葉與白蘇葉中各成分含量的平均值見(jiàn)表5。其中紫蘇葉中的L-亮氨酸、L-天冬氨酸、咖啡酸、α-亞麻酸、乳糖、麥芽糖及迷迭香酸平均含量顯著高于白蘇葉；而L-谷氨酸、棕櫚酸、油酸平均含量則顯著低于白蘇葉(P<0.05)。

表5 紫蘇葉和白蘇葉中對(duì)照品成分的含量測(cè)定結(jié)果Table 5 Results of the determination of reference substances in leaves of P.frutescens var.arguta and P.frutescens var.frutescens

4 討論與結(jié)論

當(dāng)前紫蘇與白蘇的分類爭(zhēng)議尚未解決，《中國(guó)植物志》的拉丁名將紫蘇與白蘇合并為一種，但《中國(guó)藥典》性狀描述中明確提出葉片單面紫或雙面紫，可見(jiàn)藥典規(guī)定的藥用紫蘇品種不包括白蘇。多年來(lái)，對(duì)紫蘇葉與白蘇葉差異性研究主要集中于次級(jí)代謝產(chǎn)物，目前已在紫蘇葉中分離鑒定出超過(guò)兩百種[14]化學(xué)物，主要為揮發(fā)油類(紫蘇醛、紫蘇酮等)、酚酸類(迷迭香酸、咖啡酸等)與黃酮類(木犀草素、芹菜素等)。這些成分對(duì)紫蘇葉的品質(zhì)有重要貢獻(xiàn)[15-17]。其實(shí)，除了這些前人研究較多的次級(jí)代謝產(chǎn)物外，紫蘇葉中還存在一些極性較強(qiáng)的初級(jí)代謝產(chǎn)物，如糖類、氨基酸、有機(jī)酸等，對(duì)紫蘇葉品質(zhì)亦有重要貢獻(xiàn)[18,19]。對(duì)于這些初級(jí)代謝產(chǎn)物的研究較少的部分原因是缺乏完善的分析方法。為了比較紫蘇葉與白蘇葉中這些成分的含量差異，本文采用了柱前衍生化GC-MS技術(shù)，該技術(shù)是在樣品進(jìn)行GC-MS分析前利用化學(xué)方法將目標(biāo)物質(zhì)修飾成類似化合物，從而使目標(biāo)化合物的極性和沸點(diǎn)降低，增強(qiáng)物質(zhì)的揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性，更方便于非揮發(fā)性物質(zhì)定性定量分析的一種技術(shù)。本研究所建立的紫蘇葉樣品柱前衍生化方法，條件溫和、操作簡(jiǎn)單、樣品穩(wěn)定性好、結(jié)果準(zhǔn)確，可以用作紫蘇葉中氨基酸類、糖類、脂肪酸類、酚酸類等成分快速、高通量分析測(cè)定的方法。

紫蘇葉為傳統(tǒng)的藥食兩用植物。本研究對(duì)紫蘇葉與白蘇葉中多種成分的定性和定量分析結(jié)果顯示二者中均含有6種人體必需氨基酸(L-纈氨酸、L-亮氨酸、L-異亮氨酸、L-蘇氨酸、L-苯丙氨酸、L-賴氨酸)，且它們?cè)谧咸K葉中的平均含量均高于白蘇葉，表明就氨基酸水平而言，紫蘇葉的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值優(yōu)于白蘇葉。同時(shí)發(fā)現(xiàn)紫蘇葉與白蘇葉中均含有較高含量的迷迭香酸。迷迭香酸是一種天然存在的酚酸類物質(zhì)，主要有抗炎、抗癌、抗菌、抗氧化和免疫抑制等多種活性[20-24]，比較結(jié)果顯示紫蘇葉中迷迭香酸含量顯著高于白蘇葉，提示紫蘇葉為更好的藥用植物來(lái)源。而白蘇葉中酒石酸、L-丙氨酸、L-甘氨酸、L-谷氨酸、棕櫚酸、油酸等成分的含量高于紫蘇葉，也存在一定食用與藥用價(jià)值。上述結(jié)果表明紫蘇葉與白蘇葉的初級(jí)代謝產(chǎn)物存在顯著差異，在植物學(xué)分類上將紫蘇與白蘇分開(kāi)，有利于紫蘇類藥材的正本清源。上述結(jié)果對(duì)于紫蘇葉的質(zhì)量控制及優(yōu)質(zhì)紫蘇種質(zhì)的篩選具有重要的意義。