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    靈芝孢子油對(duì)四氯化碳聯(lián)合高脂飲食誘導(dǎo)大鼠肝纖維化的作用研究

    2023-02-09 07:25:30路子佳范春雪
    關(guān)鍵詞:血漿劑量差異

    路子佳,范春雪,辛 念,謝 瑤,*

    (1.北京東方紅航天生物技術(shù)股份有限公司, 北京 100043;2.北京理工亙舒科技有限公司, 北京 100081)

    肝纖維化是肝損傷、肝炎等問題導(dǎo)致的肝星形細(xì)胞被激活,肝內(nèi)膠原纖維發(fā)生異常增生的病理過程[1-2]。研究表明,早期肝纖維化具有可逆轉(zhuǎn)性,采用調(diào)整膳食結(jié)構(gòu)及制劑干預(yù)等方式可以改善肝組織的病理情況,包括降低肝纖維化指標(biāo)、減少炎癥細(xì)胞的浸潤等[3-4]。

    靈芝是我國傳統(tǒng)藥食兩用真菌,具有幾千年的食用歷史?,F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn),靈芝中多種活性成分具有良好的肝臟保護(hù)作用,其中含量最高的是靈芝多糖和三萜類化合物,以及多種微量成分,包括生物堿、核苷、甾醇、多肽、氨基酸等[5-6]。在靈芝成熟期,靈芝孢子從菌蓋彈射出來,呈淡霧狀,含有靈芝子實(shí)體幾乎所有的活性物質(zhì),其中總?cè)?、總多糖含量明顯高于靈芝子實(shí)體[7]。目前,關(guān)于靈芝在肝臟保護(hù)作用及機(jī)制方面的研究已有較多報(bào)道,但相關(guān)研究主要集中在靈芝子實(shí)體、靈芝孢子、靈芝提取物對(duì)肝損傷的保護(hù)作用,發(fā)揮作用的有效成分通常被認(rèn)為是靈芝多糖、三萜類等。而對(duì)于靈芝孢子油(Ganodermalucidumspore oil,GSO)的研究較少。

    GSO是以破壁靈芝孢子粉經(jīng)二氧化碳超臨界萃取得到的脂溶性混合物,其主要成分為脂肪酸、靈芝三萜、甾醇等[8-10]。趙灝等[11]研究發(fā)現(xiàn),GSO能顯著降低四氯化碳(CCl4)誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠血漿谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)的水平,降低肝組織中丙二醛(MDA)的含量,減輕肝臟纖維化程度。三萜類物質(zhì)作為靈芝的主要活性成分之一,能有效改善乙酰氨基酚誘導(dǎo)的肝損傷,降低血清中ALT、AST和乳酸脫氫酶水平以及肝組織中MDA含量,提高肝臟還原型谷胱甘肽(GSH)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性[12]。Li等[13]研究發(fā)現(xiàn),靈芝三萜灌胃后,雞肝臟中抗氧化酶的活性提高,鎘累積、MDA含量以及炎癥因子腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-6等的水平均出現(xiàn)顯著下降。由此可見,GSO可以通過抗氧化和抗炎等途徑對(duì)肝損傷起到改善作用,其保肝活性可能與含有三萜類化合物活性成分相關(guān)。

    CCl4是一種較為常用的肝損傷誘導(dǎo)劑,所致的肝損傷可導(dǎo)致肝纖維化的發(fā)生,最終發(fā)展為肝硬化[14-15]。采用低濃度的CCl4配合高脂飼料造模還可以模擬日常生活中高熱量等飲食因素對(duì)肝纖維化的影響,如脂肪在肝細(xì)胞內(nèi)積累,細(xì)胞內(nèi)脂肪空泡增多等,使研究更貼近于臨床實(shí)際[16]。本研究旨在通過對(duì)不同濃度的GSO對(duì)CCl4聯(lián)合高脂飼料喂養(yǎng)致肝纖維化大鼠的肝功能損傷、氧化損傷及肝纖維化的影響進(jìn)行研究,探究其可能的機(jī)制,以期為GSO在保護(hù)肝部健康及肝纖維化的改善方面提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    雄性SPF級(jí)SD大鼠(體質(zhì)量150~170 g)60只,中國食品藥品檢定研究院[許可證號(hào):SCXK(京)2017-0005]。普通生長飼料(22023211),北京科澳協(xié)力飼料有限公司。高脂飼料(20210463),北京華阜康生物科技股份有限公司[許可證號(hào):京飼證(2019)06076]。各組大鼠均飼養(yǎng)于北京理工大學(xué)SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(動(dòng)物倫理號(hào):SYXK-BIT-20211223025),12 h晝夜循環(huán)、溫度(22±2)℃、濕度50%±5%環(huán)境下,動(dòng)物均自由進(jìn)食飲水。

    1.2 材料與試劑

    復(fù)方鱉甲軟肝片(國藥準(zhǔn)字:Z19991011),內(nèi)蒙古福瑞醫(yī)療科技股份有限公司;CCl4(CAS:56-23-5),北京普諾欣生物科技有限公司;ALT測試盒(貨號(hào):C009-2-1)、總膽紅素(TBIL)試劑盒(貨號(hào):C019-1-1)、AST測試盒(貨號(hào):C010-2-1)、堿性磷酸酶(AKP)測定試劑盒(貨號(hào):A059-2-2)、羥脯氨酸(Hyp)測定試劑盒(貨號(hào):A030-2-1)、MDA測試盒(貨號(hào):A003-1-2)、GSH測試盒(貨號(hào):A006-2-1)、SOD測試盒(貨號(hào):A001-3-2),南京建成生物工程研究所;透明質(zhì)酸(HA)測試盒、層黏蛋白(LN)測試盒、Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)測試盒、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)測試盒、MMPs組織抑制物-1(TIMP-1)測試盒,上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

    1.3 儀器與設(shè)備

    C3M型酶標(biāo)儀,美國伯騰儀器有限公司;TU-1810型紫外可見分光光度計(jì),北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;JY6001型電子天平,上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司;HHS-4S型水浴鍋,上海光地儀器設(shè)備有限公司;5 mL肝素鈉抗凝采血管,石家莊康衛(wèi)仕醫(yī)療器械有限公司。

    1.4 實(shí)驗(yàn)方法

    1.4.1靈芝孢子油的制備

    將破壁靈芝孢子粉過60目篩后置于萃取釜中,在壓力30 MPa、溫度45 ℃、二氧化碳流速2.0~2.5 m3/h的條件下萃取4 h,減壓蒸餾后得淡黃色透明的GSO。經(jīng)測定,GSO過氧化值為1.1 mg/g,含有總?cè)?以齊墩果酸計(jì),310 mg/g)、麥角甾醇(1.12 mg/g)[17]。GSO中剩余成分以脂肪酸為主[8,18]。

    1.4.2動(dòng)物分組及處理

    SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周,按照體質(zhì)量隨機(jī)分為空白對(duì)照組(BC)、模型對(duì)照組(MC)、陽性藥物組(PC)、靈芝孢子油低(GSOL)、中(GSOM)、高(GSOH)劑量組,每組10只大鼠。BC大鼠不造模,使用普通生長飼料進(jìn)行飼養(yǎng)。其余各組大鼠連續(xù)灌胃含有體積分?jǐn)?shù)為0.40的CCl4的玉米油6周,每周2次,按照大鼠體質(zhì)量首次灌胃5 mL/kg,其余每次灌胃3 mL/kg,同時(shí)使用高脂飼料進(jìn)行飼養(yǎng),建立大鼠肝纖維化模型[19]。造模的同時(shí)開始灌胃GSO和陽性對(duì)照藥物。按照大鼠體質(zhì)量進(jìn)行灌胃處理,MC大鼠灌胃玉米油,PC大鼠灌胃復(fù)方鱉甲軟肝片540 mg/kg,GSOL、GSOM、GSOH大鼠分別灌胃900、2 700、5 400 mg/kg的GSO。所有大鼠每日灌胃1次,連續(xù)8周。

    陽性藥物復(fù)方鱉甲軟肝片適應(yīng)用慢性肝炎,脂肪肝等多種原因所引起的肝纖維化[20]。靈芝孢子油人體推薦量為2 g/d,按成人體質(zhì)量70 kg計(jì)算,人體推薦劑量為28.6 mg/kg,按人體推薦量的5、15、30倍劑量給大鼠灌胃[21]。實(shí)驗(yàn)期間,密切觀察大鼠的精神狀態(tài)。每周測定各組大鼠體質(zhì)量、飲水量、進(jìn)食量。

    1.4.3指標(biāo)測定

    GSO干預(yù)8周后,采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的水合氯醛溶液,按照大鼠體質(zhì)量(350 mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠。負(fù)壓采血管(肝素抗凝管)腹主動(dòng)脈取血,室溫靜置2 h,2 500 r/min、4 ℃離心15 min,分離血漿。解剖取肝臟,按質(zhì)量(g)與體積(mL)比1∶9,加入生理鹽水,冰水浴條件下,制備肝臟組織勻漿液,2 500 r/min離心10 min,取上清液待測。微板法及ELSA法檢測血漿中ALT、AST、TBIL、Hyp、AKP、HA、LN、Col Ⅳ的水平,及肝組織中SOD活性和MDA、GSH、MMP-9、TIMP-1的含量。

    1.4.4肝組織病理檢測

    取大鼠左葉肝臟,制作石蠟切片后,進(jìn)行蘇木精- 伊紅(HE)染色、顯微鏡觀察;石蠟切片脫蠟水化后進(jìn)行Masson染色、顯微鏡觀察,具體操作步驟參照文獻(xiàn)[22]。使用Eclipse Ci-L拍照顯微鏡選取組織的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行200倍成像。Masson染色結(jié)果使用Image-Pro Plus 6.0軟件分析,測定膠原纖維累積光密度值(integral optimistically,IOD)、組織像素的面積(Area),計(jì)算膠原面積占比及面密度(IOD/Area)。

    1.5 數(shù)據(jù)處理

    2 結(jié)果與討論

    2.1 GSO對(duì)大鼠存活率和體質(zhì)量的影響

    肝纖維化大鼠生存情況見表1。由表1可知,BC大鼠在8周的實(shí)驗(yàn)期間無死亡,而MC大鼠及GSOL、GSOM大鼠出現(xiàn)死亡情況。在前6周的CCl4聯(lián)合高脂飲食誘導(dǎo)期間,MC和GSOM大鼠死亡1只,2組大鼠存活率降低至90%。在CCl4聯(lián)合高脂飲食誘導(dǎo)后2周期間,MC、GSOL、GSOM大鼠繼續(xù)出現(xiàn)死亡數(shù)量增加的趨勢,其中MC和GSOL大鼠死亡數(shù)量最高,存活率降低至70%。對(duì)照藥物和高劑量GSO干預(yù)能夠有效降低肝纖維化大鼠的死亡率,GSOM大鼠的存活率上升至80%。高劑量GSO保護(hù)效果最優(yōu),大鼠存活率達(dá)到100%。由表1可知,實(shí)驗(yàn)開始前后各組大鼠體質(zhì)量差異不顯著(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,GSO可以改善實(shí)驗(yàn)大鼠的生存狀態(tài),對(duì)CCl4聯(lián)合高脂飼料造大鼠肝纖維化模型具有明顯的提升大鼠存活率作用。

    表1 大鼠存活率及體質(zhì)量Tab.1 Survival rate and body weight of rats

    2.2 GSO對(duì)大鼠肝組織病理變化的影響

    大鼠肝臟切片HE染色結(jié)果見圖1。由圖1可知,BC大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)、肝細(xì)胞大小正常,匯管區(qū)未見纖維組織增生及炎細(xì)胞浸潤,無脂肪變性等異常。采用CCl4配合高脂飼料造模后,MC、GSOL、GSOM大鼠的肝組織出現(xiàn)不同程度的肝損傷病變。MC大鼠的肝臟組織出現(xiàn)明顯的肝索和肝血竇紊亂,匯管區(qū)及中央靜脈周圍可見明顯的膠原纖維增生、炎性細(xì)胞浸潤、靜脈間互相連接,形成纖維橋接(黑色箭頭)。同時(shí)MC大鼠肝臟組織還伴隨匯管區(qū)周圍膽管增生、膽管輕度擴(kuò)張(綠色箭頭),出現(xiàn)明顯的肝細(xì)胞脂肪變性、肝細(xì)胞體積增大。MC大鼠肝臟胞質(zhì)內(nèi)可見大量甘油三酯蓄積導(dǎo)致的圓形空泡(黃色箭頭),出現(xiàn)較多的肝細(xì)胞水腫、胞質(zhì)疏松淡染(紅色箭頭)。肝臟組織切片形態(tài)觀察結(jié)果顯示,與MC大鼠相比,陽性藥物和GSO干預(yù)能夠顯著緩解肝纖維化大鼠相應(yīng)癥狀。PC大鼠肝臟出現(xiàn)脂質(zhì)沉積、纖維橋接、膽管增生和擴(kuò)張等癥狀減輕。GSO干預(yù)也顯著抑制了大鼠肝纖維化的進(jìn)展,GSOM大鼠肝臟僅出現(xiàn)少量的脂質(zhì)沉積。而高劑量GSO干預(yù)的保護(hù)效果最優(yōu),大鼠肝臟組織形態(tài)基本恢復(fù)至正常狀態(tài)。研究結(jié)果證實(shí),GSO能夠顯著改善肝纖維化病變,并與PC大鼠相比,GSO還顯著抑制了高脂飲食導(dǎo)致的肝脂肪變性。

    黑色箭頭標(biāo)識(shí)纖維形成,綠色箭頭標(biāo)識(shí)膽管病變,黃色箭頭標(biāo)識(shí)脂質(zhì)積累,紅色箭頭標(biāo)識(shí)細(xì)胞病變。圖1 大鼠肝臟HE染色Fig.1 HE staining of rat liver

    大鼠肝臟切片Masson染色結(jié)果如圖2。由圖2可知,MC大鼠肝臟組織出現(xiàn)不同靜脈間增生的膠原纖維(藍(lán)色)互相連接形成假小葉(橙色箭頭)。GSO干預(yù)組大鼠肝組織病理變化較MC組均有改善,其中高劑量GSO改善效果最優(yōu),GSOH大鼠的肝組織大部分肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整、排列整齊,炎性細(xì)胞浸潤、膽管擴(kuò)張、脂肪變性、細(xì)胞水腫等異常改變明顯減輕。膠原面積占比及面密度結(jié)果顯示,MC大鼠肝臟組織膠原面積占比及面密度均極顯著高于BC大鼠(P<0.01)。而與MC相比,GSOM、GSOH膠原面積占比值及面密度顯著降低。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,GSO可顯著改善CCl4聯(lián)合高脂飲食誘導(dǎo)的大鼠肝臟病變。

    橙色箭頭標(biāo)識(shí)假小葉。與BC比較,*表示差異具有顯著性(P<0.05),** 表示差異具有極顯著性(P<0.01);與MC組比較,#表示差異具有顯著性(P<0.05),## 表示差異具有極顯著性(P<0.01)。圖2 大鼠肝臟纖維化分析Fig.2 Analysis of liver fibrosis in rats

    2.3 GSO對(duì)大鼠肝功能的影響

    各組大鼠肝功能相關(guān)指標(biāo)檢測結(jié)果見圖3。如圖3所示,與BC大鼠比較,MC大鼠血漿中ALT、AST、TBIL、AKP水平極顯著升高(P<0.01)。而與MC大鼠比較,陽性藥物、中、高劑量GSO可以顯著降低肝纖維化引起的血漿ALT、AST、AKP的升高,PC、GSOM、GSOH大鼠血漿中ALT水平分別降低36.1%、55.2%、44.6%,AST水平分別降低30.2%、36.3%、35.0%,AKP水平分別降低23.5%、33.6%、33.8%。與MC組比較,PC和GSO干預(yù)組均可以極顯著改善由于CCl4聯(lián)合高脂飲食誘導(dǎo)引起的大鼠血漿TBIL水平的升高(P<0.01)。相較于MC,PC、GSOL、GSOM、GSOH大鼠血漿TBIL水平分別降低了54.7%、35.6%、64.0%、55.9%。且與BC大鼠相比,PC和GSO干預(yù)組大鼠血漿TBIL水平差異不顯著(P>0.05)。在4項(xiàng)肝功能指標(biāo)中,GSOM和GSOH大鼠的肝功能指標(biāo)水平與PC大鼠不具有顯著性差異(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,GSO能夠顯著改善CCl4聯(lián)合高脂飲食誘導(dǎo)的大鼠肝損傷,并且中、高劑量GSO對(duì)于肝損傷的保護(hù)效果與陽性藥物一致。

    各組大鼠肝臟氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測結(jié)果見圖4。由圖4可知,與BC大鼠比較,MC大鼠肝組織中MDA含量顯著升高(P<0.01),GSH含量與SOD活性顯著降低(P<0.01)。而與MC組比較,陽性藥物和高劑量GSO可以顯著降低大鼠肝損傷引起的肝臟MDA含量的升高(P<0.01),顯著升高GSH含量(P<0.05),其中MDA含量分別降低了11%、19%,GSH含量分別升高9%、12%。陽性藥物和中、高劑量GSO則可顯著提高肝纖維化大鼠肝組織中SOD活性,分別提高13%、12%、19%。同時(shí),高劑量GSO對(duì)于肝臟氧化應(yīng)激指標(biāo)的改善,與PC大鼠相比不具有顯著性差異(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,高劑量GSO能夠顯著改善CCl4聯(lián)合高脂飲食誘導(dǎo)的大鼠肝臟氧化應(yīng)激,并且其保護(hù)作用與陽性藥物的保護(hù)效果一致。

    2.4 GSO對(duì)大鼠肝纖維化的影響

    大鼠血漿肝纖維化相關(guān)指標(biāo)檢測結(jié)果見圖5。由圖5可知,與BC大鼠比較,MC大鼠血漿中HA、LN、Col Ⅳ、Hyp的含量均出現(xiàn)極顯著升高(P<0.01)。而與MC比較,GSOH大鼠血漿中HA的含量降低15.9%,LN的含量降低6.8%,且差異均具有顯著性(P<0.05)。同時(shí),GSOM、GSOH大鼠血漿中Col Ⅳ的含量分別降低9.0%、9.7%,Hyp的含量分別降低14.6%、26.5%,且差異均具有顯著性。高劑量GSO對(duì)于肝纖維化指標(biāo)的改善效果與陽性藥物之間的差異不具有顯著性(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,高劑量GSO能夠顯著改善CCl4聯(lián)合高脂飲食誘導(dǎo)的大鼠肝臟纖維化,并且其保護(hù)作用與陽性藥物的保護(hù)效果一致。

    2.5 GSO對(duì)大鼠肝臟MMP-9和TIMP-1蛋白水平的影響

    大鼠肝纖維化相關(guān)蛋白表達(dá)水平如圖6。由圖6可知,與BC大鼠比較,MC大鼠肝組織中MMP-9水平明顯降低(P<0.05)。而陽性藥物與GSO干預(yù)均不同程度升高肝組織中MMP-9水平,其中GSOH大鼠肝組織中MMP-9水平升高最為顯著(P<0.05),其MMP-9水平提高7.16%。與BC組比較,MC大鼠肝臟的TIMP-1水平明顯升高(P<0.05);陽性藥物與GSO干預(yù)均不同程度的降低,其中PC大鼠肝臟TIMP-1水平降低最為顯著(P<0.05),其水平降低11.9%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,高劑量GSO能夠顯著改善CCl4聯(lián)合高脂飲食誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化相關(guān)蛋白表達(dá)改變,并且其保護(hù)效果可能依賴MMP-9的表達(dá)。

    與BC比較,*表示差異具有顯著性(P<0.05),**表示差異具有極顯著性(P<0.01);與MC組比較,#表示差異具有顯著性(P<0.05),##表示差異具有極顯著性(P<0.01)。圖3 大鼠血漿肝功能相關(guān)指標(biāo)Fig.3 Liver function related-indexs of rat plasma

    與BC比較,*表示差異具有顯著性(P<0.05),**表示差異具有極顯著性(P<0.01);與MC組比較,#表示差異具有顯著性(P<0.05),##表示差異具有極顯著性(P<0.01)。圖4 大鼠肝組織氧化應(yīng)激水平Fig.4 Level of oxidative stress in rat liver tissues

    與BC比較,*表示差異具有顯著性(P<0.05),**表示差異具有極顯著性(P<0.01);與MC組比較,#表示差異具有顯著性(P<0.05),##表示差異具有極顯著性(P<0.01)。圖5 大鼠血漿肝纖維化相關(guān)指標(biāo)Fig.5 Liver fibrosis indexs of rat plasma

    與BC比較,*表示差異具有顯著性(P<0.05);與MC組比較,#表示差異具有顯著性(P<0.05)。圖6 大鼠肝臟MMP-9與TIMP-1水平Fig.6 Level of MMP-9 and TIMP-1 in rat liver

    3 討 論

    CCl4致肝損傷時(shí),會(huì)使血漿中ALT、AST、TBIL水平升高,同時(shí)還可降低肝組織中GSH水平及SOD活性,引起脂質(zhì)過氧化,從而使得MDA含量激增,這些指標(biāo)的變化程度與肝細(xì)胞或組織的受損程度密切相關(guān)。采用GSO進(jìn)行干預(yù)后,肝纖維化大鼠肝組織結(jié)構(gòu)得到不同程度的改善,其中GSOH大鼠的肝組織與MC比較,大部分肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整且排列整齊,炎性細(xì)胞浸潤、膽管擴(kuò)張、脂肪變性、細(xì)胞水腫等異常改變明顯減輕,同時(shí)可顯著降低大鼠血漿中ALT、AST、TBIL、AKP水平及大鼠肝臟組織中MDA的水平,提高GSH含量與SOD活性,證明GSO具有提高肝臟抗氧化能力的作用,可改善肝功能、減輕肝損傷。

    當(dāng)肝細(xì)胞損傷使周圍非實(shí)質(zhì)細(xì)胞受到不斷刺激,導(dǎo)致HA、LN、Col Ⅳ、Hyp等肝臟細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix,ECM)大量形成并沉淀,進(jìn)而導(dǎo)致肝組織結(jié)構(gòu)破壞,肝纖維化的形成[23-24]。其中HA 由肝間質(zhì)細(xì)胞合成,其水平與肝內(nèi)纖維量及肝細(xì)胞受損程度呈正相關(guān)[25-26]。LN為基底膜中特有,是慢性肝炎、肝硬化及肝癌指標(biāo)[26]。Col Ⅳ在肝纖維化時(shí)最早出現(xiàn),纖維組織生成過程中大量沉積,是肝纖維化早期與肝硬化的重要指標(biāo)之一[27]。Hyp是膠原代謝的重要產(chǎn)物,是組織纖維化檢測的基本指標(biāo)[28]。MMP-9具有降解ECM中的各種蛋白成分等作用[29];而蛋白酶抑制劑TIMP-1則具有抑制MMP-9的表達(dá)的作用,因此MMP-9/TIMP-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)失調(diào)是促進(jìn)肝纖維化及肝癌發(fā)展的重要原因[29-30]。采用GSO進(jìn)行干預(yù)后,各給藥組大鼠肝臟不同靜脈間膠原纖維增生的情況明顯改善。其中GSOH大鼠的肝臟膠原面積占比值及面密度、血漿中肝纖維化指標(biāo)(HA、LN、Col Ⅳ、Hyp)水平顯著降低。同時(shí),GSOH大鼠的肝臟MMP-9表達(dá)水平顯著上調(diào)(P<0.05),而TIMP-1表達(dá)下調(diào)未出現(xiàn)顯著差異。研究結(jié)果證明,GSO具有抗肝纖維化的作用,包括降低ECM含量、抑制ECM的形成。因此,本研究推測GSO發(fā)揮保肝作用機(jī)理與其調(diào)控MMP-9的表達(dá)有關(guān)。

    本研究結(jié)果與趙灝等[11]、胡宗苗等[31]采用注射 CCl4構(gòu)建肝纖維化模型,并以GSO、破壁靈芝孢子粉進(jìn)行干預(yù)的研究結(jié)果一致。同時(shí),結(jié)合陳潔等[32]、敖艷霞等[12]對(duì)靈芝三萜在肝保護(hù)方面的研究結(jié)果,即靈芝三萜可降低肝臟中MDA水平,提高肝臟GSH水平和SOD活性,能通過下調(diào)TGF-β1 mRNA、MMP-2蛋白的表達(dá)抑制肝組織的纖維化。推測GSO中起到減輕肝損傷、抑制肝臟纖維化的作用與其含有的生物活性成分三萜類化合物有關(guān)。

    4 結(jié) 論

    本研究結(jié)果表明,靈芝孢子油可以改善CCl4聯(lián)合高脂飲食誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠生存狀態(tài)和肝損傷。高劑量GSO干預(yù)可顯著改善肝組織病理情況,降低血漿肝功能相關(guān)指標(biāo)(ALT、AST、TBIL)水平及肝組織中MDA含量,提高GSH含量與SOD活性。本研究結(jié)果表明,中、高劑量GSO(人體推薦量的15、30倍劑量)能夠提高肝抗氧化能力,減輕肝損傷。同時(shí),GSO干預(yù)可降低大鼠血漿HA、LN、Col Ⅳ、Hyp的含量,顯著升高肝臟MMP-9蛋白的表達(dá),具有抑制肝臟纖維化的作用,其作用機(jī)理可能與調(diào)控MMP-9/TIMP-1信號(hào)通路有關(guān)。本研究旨在探究GSO改善肝纖維化的規(guī)律及作用機(jī)制,以期為GSO在保護(hù)肝臟健康及肝纖維化的改善方面提供科學(xué)依據(jù)。

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