小檗堿逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的研究進(jìn)展

聶旭陽，高笑男，高敬林，花 麗，孫亞棋，馮章英，王明霞

(河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院臨床藥理研究部，河北 石家莊 050000)

據(jù)統(tǒng)計(jì)，90%以上的腫瘤轉(zhuǎn)移患者化療失敗及腫瘤初始治療緩解后3年內(nèi)的臨床復(fù)發(fā)均與腫瘤多藥耐藥性(multidrug resistance,MDR)有關(guān)[1]。其中，MDR意指長期使用一種化療藥后，腫瘤細(xì)胞不僅對(duì)其產(chǎn)生耐藥性，同時(shí)也對(duì)與其作用機(jī)制和結(jié)構(gòu)不同的多種化療藥物產(chǎn)生耐藥性。目前克服MDR的主要策略為藥物聯(lián)合療法，例如化療藥物與 P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)抑制劑、酪氨酸激酶抑制劑(tyrosine kinase inhibitors,TKI)或促凋亡劑等單一機(jī)制的藥物聯(lián)合使用[1]。但由于腫瘤細(xì)胞發(fā)生耐藥的機(jī)制是復(fù)雜多樣的，且聯(lián)合療法不可避免的會(huì)增大毒副作用。因此，迫切需要尋找低毒、多途徑逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥、提高化療效果的手段。

中藥作為臨床化療常見的輔助用藥，具有作用機(jī)制靶點(diǎn)多、毒副作用小的特點(diǎn)。隨著對(duì)中藥抗腫瘤作用的研究，中藥單體及其提取物成為研究腫瘤MDR逆轉(zhuǎn)劑的熱點(diǎn)之一[2]。小檗堿(C20H19NO5)亦稱黃連素，是從中藥黃連中分離的一種苯并異喹啉季銨型生物堿，低毒、價(jià)廉，是黃連抗菌的主要有效成分。目前臨床有鹽酸鹽及鞣酸鹽形式的單藥，用于治療細(xì)菌性胃腸炎、痢疾等消化道疾病[3]。近年來，研究發(fā)現(xiàn)，小檗堿可在多類腫瘤中通過促進(jìn)細(xì)胞凋亡、抑制藥物外排和腫瘤微環(huán)境調(diào)節(jié)因子改變等多種機(jī)制發(fā)揮逆轉(zhuǎn)腫瘤MDR的作用[4-6]。故而，本文對(duì)近年來國內(nèi)外有關(guān)小檗堿在腫瘤中抗耐藥的作用進(jìn)行了總結(jié)，為小檗堿今后成功應(yīng)用于臨床逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥提供參考。

1 小檗堿逆轉(zhuǎn)消化系統(tǒng)腫瘤的多藥耐藥

鉑類、氟尿嘧啶類等化療藥物及厄洛替尼、西妥昔單抗等靶向藥物是治療消化系統(tǒng)腫瘤常用藥物。但在治療初期或用藥一段時(shí)間后，由于細(xì)胞凋亡減少、藥物外排蛋白和腫瘤微環(huán)境的改變、耐藥相關(guān)酶和DNA損傷修復(fù)的增加等，消化系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞常出現(xiàn)MDR[4-6]。目前，已有多項(xiàng)研究顯示，小檗堿在逆轉(zhuǎn)上述消化系統(tǒng)腫瘤MDR方面有顯著的效果。以下結(jié)合國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)對(duì)其進(jìn)行總結(jié)。

1.1 小檗堿影響細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)逆轉(zhuǎn)耐藥細(xì)胞凋亡受阻是導(dǎo)致腫瘤 MDR 的重要原因。而小檗堿可通過多種機(jī)制影響細(xì)胞內(nèi)抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，逆轉(zhuǎn)消化系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞MDR。陳琳等[4]在小檗堿對(duì)奧沙利鉑(oxaliplatin,OXA)耐藥的人結(jié)腸癌THC-8307/OXA細(xì)胞株耐藥性影響的研究中發(fā)現(xiàn)，5～20 μmol·L-1低濃度的小檗堿對(duì)THC-8307細(xì)胞和THC-8307/OXA細(xì)胞存活率的影響無明顯差異。但與THC-8307細(xì)胞相比，小檗堿與OXA合用時(shí)可顯著降低THC-8307/OXA細(xì)胞存活率(P<0.05)，可呈劑量依賴遞增性逆轉(zhuǎn)細(xì)胞的耐藥性達(dá)5～20倍。提示小檗堿是潛在的結(jié)腸癌OXA耐藥逆轉(zhuǎn)劑。

半胱氨酸蛋白酶(Caspase)與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。其被活化后可發(fā)生凋亡蛋白酶的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，致使細(xì)胞不可逆性凋亡。在以人胃癌順鉑(cisplatin,DDP)耐藥細(xì)胞株BGC-823/DDP、SGC-7901/DDP及其親本細(xì)胞為研究對(duì)象的研究中發(fā)現(xiàn)，與其親本細(xì)胞相比，SGC-7901/DDP和BGC-823/DDP明顯對(duì)DDP耐藥。但經(jīng)小檗堿處理后，耐藥情況均可被部分逆轉(zhuǎn)。蛋白水平顯示，小劑量、不影響耐藥細(xì)胞增殖(抑制率低于5%)的小檗堿能部分恢復(fù)凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9在耐藥細(xì)胞中的表達(dá)和活性，從而促進(jìn)耐DDP腫瘤細(xì)胞凋亡[5-7]。因此，促進(jìn)Caspase依賴性凋亡可能是小檗堿發(fā)揮逆轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞DDP耐藥的機(jī)制。

信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3 (signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)是凋亡抑制蛋白存活素(Survivin)表達(dá)所必需的轉(zhuǎn)錄因子。Survivin-STAT3介導(dǎo)的致癌信號(hào)通路具有抗凋亡和促進(jìn)增殖的作用，是腫瘤原發(fā)耐藥的機(jī)制之一。與單用小檗堿或5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)相比，兩藥聯(lián)合應(yīng)用24 h時(shí)可顯著降低胃腺癌AGS細(xì)胞的存活率、下調(diào)Survivin(約95%)和pSTAT3表達(dá)(高達(dá)90%)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，該信號(hào)通路也是通過顯著升高活性蛋白Caspase-3和Caspase-9的表達(dá)，而與誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡，克服化療耐藥相關(guān)聯(lián)的[8]。

分子靶向藥物比傳統(tǒng)化療藥物具有更好的療效，但也不可避免腫瘤耐藥的發(fā)生[9]。Wang等[10]研究發(fā)現(xiàn)，在逆轉(zhuǎn)表皮生長因子受體-酪氨酸激酶抑制劑(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKI)厄洛替尼、西妥昔單抗等耐藥方面，小檗堿也具有較大的潛力。與小檗堿組、厄洛替尼單用組相比，聯(lián)用組可降低由STAT3通路調(diào)節(jié)的抗凋亡蛋白Bcl-xL和細(xì)胞周期蛋白D1(CyclinD1)等的表達(dá)，顯著升高聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)裂解水平，劑量依賴性抑制胃癌SGC7901、BGC823、MKN45細(xì)胞的增殖，使細(xì)胞凋亡率由單用17.7%和9.4%增加至56.2%(P<0.01)；胃癌移植瘤裸鼠模型顯示，小檗堿與西妥昔單抗聯(lián)用組的腫瘤體積和質(zhì)量明顯低于單藥組，生存時(shí)間明顯高于對(duì)照組(90 dvs50～70 d,P<0.05)。其聯(lián)合EGFR-TKI可通過EGFR/STAT3通路增加藥物療效，減少酪氨酸激酶受體旁路激活導(dǎo)致的EGFR抑制劑耐藥的現(xiàn)象。

miR-203可與mRNAs結(jié)合阻止蛋白質(zhì)翻譯或直接降解mRNA，已被證明具有抑制胃癌的作用。You等[5]采用DDP、小檗堿單藥和小檗堿聯(lián)合DDP分別處理BGC-823/DDP和SGC-7901/DDP細(xì)胞株。結(jié)果，與單藥組比，小檗堿聯(lián)合DDP可顯著降低DDP在耐藥細(xì)胞中的半數(shù)抑制濃度(half maximal inhibitory concentration,IC50)值，小檗堿有逆轉(zhuǎn)胃癌DDP耐藥的作用。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，加用小檗堿可使耐DDP腫瘤細(xì)胞內(nèi)過表達(dá)miR-203，進(jìn)而抑制其下游抗凋亡蛋白Bcl-w的表達(dá)，促進(jìn)凋亡，增強(qiáng)耐藥胃癌細(xì)胞對(duì)DDP的敏感性。故其逆轉(zhuǎn)作用可能是通過改變miR-203/Bcl-w相關(guān)的凋亡通路實(shí)現(xiàn)的。

此外，研究發(fā)現(xiàn)，伊立替康(irinotecan,CPT-11)可導(dǎo)致多種人結(jié)直腸癌細(xì)胞株中核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的激活，增加抗凋亡基因的表達(dá)，阻礙腫瘤細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致結(jié)直腸癌細(xì)胞對(duì)CPT-11普遍具有耐藥性。而2.5～10 μmol·L-1小檗堿可以劑量依賴性提高CPT-11對(duì)細(xì)胞的抑制率，降低c-IAP1、c-IAP2、Survivin和Bcl-xl等由NF-κB調(diào)控的抗凋亡蛋白的表達(dá)，從而增強(qiáng)CPT-11誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，減少化療抵抗[11]。當(dāng)熱休克蛋白90抑制劑NVP-AUY922聯(lián)合小檗堿處理不敏感的大腸癌細(xì)胞時(shí)，可通過抑制CDK4的表達(dá)和miR-296-5p介導(dǎo)的Pin1-β-catenin-cyclin D1信號(hào)通路而導(dǎo)致細(xì)胞生長停滯，抑制NVP-AUY922誘導(dǎo)的結(jié)直腸癌細(xì)胞耐藥性[12]。即小檗堿還可通過降低NF-κB有關(guān)的抗凋亡蛋白等促進(jìn)凋亡，發(fā)揮逆轉(zhuǎn)消化系統(tǒng)腫瘤MDR的作用。

1.2 小檗堿抑制藥物外排蛋白表達(dá)逆轉(zhuǎn)耐藥P-gp、MDR相關(guān)蛋白(multidrug resistance-associated protein,MRP)等藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白可與藥物結(jié)合將已進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的藥物從胞內(nèi)泵出胞外，致使細(xì)胞內(nèi)達(dá)不到有效藥物濃度，從而使腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥[13]。孫夢(mèng)瑤等[6]發(fā)現(xiàn)，與空白組比，應(yīng)用1 mg·L-1DDP后SGC-7901/DDP細(xì)胞株內(nèi)耐藥相關(guān)蛋白P-gp、MRP的表達(dá)顯著升高；而加入小劑量的小檗堿(8 μmol·L-1)與DDP共同作用24 h或48 h后，耐藥細(xì)胞內(nèi)P-gp、MRP的表達(dá)均明顯被抑制(P<0.01)。Kou等[7]在BGC-823/DDP細(xì)胞株也觀察到此類現(xiàn)象，并在利用SGC-7901/DDP細(xì)胞建立的小鼠皮下腫瘤模型中得到了與體外實(shí)驗(yàn)一致的結(jié)果。與空白對(duì)照組比較，DDP或小檗堿單用對(duì)腫瘤生長僅有輕微抑制作用，而聯(lián)合組可抑制耐藥細(xì)胞體內(nèi)腫瘤的生長約50%。提示小檗堿逆轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞MDR的機(jī)制也可能與降低P-gp、MRP等耐藥相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)、增加DDP在胃癌細(xì)胞內(nèi)累積有關(guān)。

1.3 小檗堿影響PI3K及其下游信號(hào)通路逆轉(zhuǎn)耐藥胃癌耐藥性相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，耐DDP胃癌細(xì)胞內(nèi)的蛋白激酶B (protein kinase B,Akt)和哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的磷酸化水平明顯高于其親本細(xì)胞株。PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路系調(diào)節(jié)多種腫瘤耐藥性的途徑之一。而小檗堿可抑制該通路發(fā)揮逆轉(zhuǎn)耐藥的作用[7]。與對(duì)照組相比，DDP或小檗堿單獨(dú)處理后，BGC-823/DDP和SGC-7901/DDP細(xì)胞內(nèi)Akt和mTOR的磷酸化僅略有下降。但當(dāng)兩藥聯(lián)合處理可顯著抑制上述DDP耐藥細(xì)胞中磷脂酰肌醇激酶(phosphatidylinositol 3 kinases，PI3K)、Akt和mTOR的磷酸化，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞增殖、促進(jìn)凋亡和自噬等[7]。即抑制PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路也可能是小檗堿提高胃癌對(duì)DDP化療敏感性的機(jī)制之一。

1.4 小檗堿抑制腫瘤微環(huán)境調(diào)節(jié)因子功能逆轉(zhuǎn)耐藥過表達(dá)的葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)可被分泌到胞外，產(chǎn)生強(qiáng)大的調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境的作用，如抵抗凋亡、逃逸免疫等，是腫瘤耐藥性產(chǎn)生的重要原因。而小檗堿可與ATP競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合GRP78，使GRP78成為無活性的二聚體或多聚體，抑制其進(jìn)入外泌體，最終使GRP78失去調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境的作用。當(dāng)10 μmol·L-1小檗堿聯(lián)合5-FU使用時(shí)，可顯著抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞系DLD1、HCT-116的生長增殖，提高5-FU的化療效果[14]。

綜上所述，小檗堿是具有發(fā)展前景的消化系統(tǒng)腫瘤MDR逆轉(zhuǎn)劑。小檗堿以促進(jìn)腫瘤耐藥細(xì)胞凋亡為主的方式逆轉(zhuǎn)消化系統(tǒng)腫瘤MDR，機(jī)制包括抑制抗凋亡蛋白NF-κB的激活、促進(jìn)Caspase依賴性凋亡；影響miR-203/Bcl-w、Survivin-STAT3、EGFR/STAT3等信號(hào)通路等。此外，抑制藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白MRP和P-gp、影響耐藥相關(guān)PI3K/Akt/mTOR 信號(hào)通路、阻礙GRP78調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境等也可能是小檗堿發(fā)揮逆轉(zhuǎn)MDR的作用機(jī)制。

2 小檗堿逆轉(zhuǎn)乳腺癌多藥耐藥

乳腺癌已成為女性發(fā)病率、死亡率最高的腫瘤。化療過程中癌細(xì)胞周期調(diào)控、自噬和能量代謝異常等，可使得乳腺癌對(duì)化療藥出現(xiàn)抵抗[15-17]。作為有潛力的消化系統(tǒng)腫瘤MDR逆轉(zhuǎn)劑，小檗堿在逆轉(zhuǎn)乳腺癌耐藥方面也得到了廣泛的關(guān)注。

2.1 小檗堿抑制藥物外排蛋白表達(dá)逆轉(zhuǎn)多藥耐藥Qian等[15]利用特異的熒光素酶報(bào)告分析生物發(fā)光成像技術(shù)分析發(fā)現(xiàn)，BBR/DOX配比為2 ∶1時(shí)，在體外對(duì)乳腺癌細(xì)胞株MCF-7/DOXFluc 有最佳的協(xié)同抑制增殖作用。小檗堿在耐藥細(xì)胞株異種移植模型體內(nèi)可顯著下調(diào)P-gp/ABCB1和MRP1/ABCC1的表達(dá)，減少DOX的外排，增加腫瘤組織對(duì)DOX的攝取，提高了DOX在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的濃度和滯留率。

2.2 小檗堿作為腫瘤細(xì)胞自噬抑制因子逆轉(zhuǎn)耐藥自噬能維持正常細(xì)胞內(nèi)環(huán)境和蛋白平衡等重要生命過程，但高水平的自噬也會(huì)使乳腺癌細(xì)胞對(duì)DOX耐藥，逃避凋亡[16]。小檗堿作為一種自噬抑制因子，有望改善自噬介導(dǎo)的腫瘤藥物抵抗。Wang等[16]建立了耐藥乳腺癌MCF-7/DOX細(xì)胞系及其裸鼠移植瘤模型，研究發(fā)現(xiàn)小檗堿聯(lián)合DOX能以劑量依賴的方式顯著抑制腫瘤細(xì)胞生長。其中，經(jīng)100 μmol·L-1小檗堿處理后，耐藥細(xì)胞對(duì)DOX的敏感性增加，細(xì)胞內(nèi)自噬相關(guān)蛋白LC3II積累降低，p62累積增加，自噬小體的形成受到抑制。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，小檗堿可通過抑制磷酸酶和張力蛋白同源缺失基因(phosphatase and tensin homolog,PTEN)的表達(dá)以及調(diào)節(jié)PTEN/Akt/mTOR信號(hào)通路發(fā)揮逆轉(zhuǎn)乳腺癌DOX耐藥的作用。

2.3 小檗堿影響活性氧水平逆轉(zhuǎn)耐藥HER2/EGFR 雙重TKI -拉帕替尼，是一種治療人表皮生長因子受體2 (human epidermal growth factor receptor 2,HER2)陽性乳腺癌的新型靶向藥物制劑，對(duì)曲妥珠單抗耐藥的乳腺癌細(xì)胞株也有效[17]。但當(dāng)單獨(dú)使用拉帕替尼6個(gè)月以上時(shí)，大多數(shù)患者會(huì)產(chǎn)生獲得性耐藥，致使治療失敗。研究顯示，拉帕替尼耐藥的發(fā)生與腫瘤細(xì)胞自噬水平較高、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平較低有關(guān)。拉帕替尼通過激活BT-474LapR細(xì)胞株內(nèi)C-Myc/pro-Nrf2 通路和GSK-3β信號(hào)來穩(wěn)定核因子E2相關(guān)因子2(nuclear factor erythroid 2 related factor 2,Nrf2)并維持低水平的ROS，致使該細(xì)胞株對(duì)拉帕替尼耐藥。而相較單藥組，小檗堿和拉帕替尼聯(lián)合應(yīng)用于上述耐藥細(xì)胞系時(shí)，可顯著抑制耐藥細(xì)胞內(nèi)C-Myc基因及其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物Nrf2，增加ROS的產(chǎn)生[18]。即小檗堿可通過逆轉(zhuǎn)乳腺癌耐拉帕替尼細(xì)胞株內(nèi)ROS水平低的方式發(fā)揮作用。

2.4 小檗堿逆轉(zhuǎn)缺氧誘導(dǎo)所致的耐藥缺氧、AMP依賴的蛋白激酶(adenosine 5′-monophosphate-activated protein kinase,AMPK)通路上調(diào)均會(huì)導(dǎo)致腫瘤能量的異常，產(chǎn)生耐藥性[19]。小于20 μmol·L-1小檗堿對(duì)乳腺癌細(xì)胞株 MCF-7/MDR 凋亡率影響與空白組無顯著差異，但聯(lián)合DOX時(shí)可通過激活A(yù)MPK，進(jìn)而下調(diào)缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)和P-gp的表達(dá)，降低MCF-7/MDR細(xì)胞株的藥物抵抗[19-20]，并在該耐藥瘤移植小鼠模型進(jìn)行了驗(yàn)證。故調(diào)節(jié)AMPK-HIF信號(hào)通路可能是小檗堿逆轉(zhuǎn)乳腺癌MDR的機(jī)制之一。

由上可見，小檗堿在乳腺癌MDR方面也有較好的前景。通過調(diào)節(jié)自噬、影響ROS水平、改善缺氧等是小檗堿在逆轉(zhuǎn)乳腺癌MDR方面目前發(fā)現(xiàn)的特有機(jī)制，在其他瘤種中是否也能利用上述機(jī)制發(fā)揮逆轉(zhuǎn)MDR作用有待進(jìn)一步探索。

3 小檗堿逆轉(zhuǎn)白血病的多藥耐藥

癌細(xì)胞異常的增殖、分化和凋亡與白血病的發(fā)病密切有關(guān)。而小檗堿大劑量單用有抑制增殖、促進(jìn)白血病細(xì)胞凋亡的作用；小劑量低濃度聯(lián)合化療藥時(shí)也能發(fā)揮改善腫瘤藥物抵抗的作用[21]。

3.1 小檗堿抑制藥物外排蛋白功能逆轉(zhuǎn)耐藥王天曉等[21]發(fā)現(xiàn)，無毒劑量的小檗堿可抑制白血病K562/DOX耐藥細(xì)胞的P-gp外排功能，增加耐藥細(xì)胞內(nèi)DOX蓄積量和細(xì)胞凋亡率，使DOX對(duì)耐藥細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度下降1.5倍，發(fā)揮逆轉(zhuǎn)K562細(xì)胞對(duì)DOX耐藥的作用。

3.2 小檗堿逆轉(zhuǎn)BCR-ABL 蛋白突變誘導(dǎo)耐藥分子靶向治療藥物伊馬替尼是第一代BCR-ABL抑制劑，是慢性粒細(xì)胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)患者的一線用藥。然而，40%～60%的患者在急性期會(huì)出現(xiàn)BCR-ABL 蛋白ABL激酶區(qū)域突變，影響伊馬替尼的結(jié)合，產(chǎn)生藥物抵抗，導(dǎo)致治療失敗[22]。小檗堿可抑制BCR-ABL以及T315I突變BCR-ABL蛋白的活性，募集和自噬降解E3泛素蛋白連接酶- LRSAM1。與兩藥單用相比，小檗堿和伊馬替尼合用時(shí)，BaF3-P210-T315I耐藥細(xì)胞株的活力明顯下降，耐藥CML小鼠模型的活性、集落形成受到抑制，存活時(shí)間延長[22-23]。提示小檗堿可通過泛素化途徑降解 BCR-ABL融合蛋白，克服慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞對(duì)伊馬替尼的耐藥性。

可見，抑制藥物外排蛋白表達(dá)和功能是小檗堿逆轉(zhuǎn)多類腫瘤MDR的通用機(jī)制。針對(duì)白血病特定的 BCR-ABL 蛋白突變導(dǎo)致的靶向藥物耐藥同樣具有逆轉(zhuǎn)作用。

4 小檗堿逆轉(zhuǎn)肺癌的多藥耐藥

有關(guān)小檗堿逆轉(zhuǎn)肺癌 MDR 方面的研究相對(duì)缺乏，已發(fā)現(xiàn)的機(jī)制如下。

4.1 小檗堿影響細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)逆轉(zhuǎn)順鉑耐藥鉑類也是肺癌推薦的一線化療藥物，其在不同腫瘤中有部分相同的耐藥機(jī)制。小檗堿促進(jìn)耐藥腫瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)制也能在DDP耐藥肺癌發(fā)揮作用。與單用320 μmol·L-1DDP相比，聯(lián)合20 μmol·L-1小檗堿用藥可使耐藥肺腺癌細(xì)胞A549/DDP存活率由55.27%降低為37.47%。小檗堿可抑制NF-κB的活性和耐藥細(xì)胞中p65的表達(dá)，增加IκBα蛋白的表達(dá)，逆轉(zhuǎn)肺腺癌DDP耐藥[24]。此外，曾玲芳等[25]發(fā)現(xiàn)，與空白對(duì)照組或單藥組比較，聯(lián)用組的促凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9、Bax表達(dá)明顯上調(diào)，而抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)明顯下調(diào)，小檗堿可時(shí)間-濃度依賴性抑制肺癌耐藥A549/DDP細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。

4.2 小檗堿干預(yù)增殖及EMT過程逆轉(zhuǎn)EGFR-TKI 耐藥 吉非替尼同樣屬于 EGFR-TKI ，其僅在治療初期對(duì)EGFR敏感突變的非小細(xì)胞肺癌患者療效好，用藥一段時(shí)間后或EGFR不敏感突變的患者通常會(huì)出現(xiàn)耐藥，治療效果欠佳[26]。Zheng等[26]發(fā)現(xiàn)，小檗堿與吉非替尼聯(lián)合后可通過PDPK1/Sp1/DNMT1信號(hào)通路顯著抑制 EGFR-TKI 不敏感的肺癌A549細(xì)胞和對(duì) EGFR-TKI耐藥的肺癌H1975細(xì)胞的增殖，并通過LncRNA HOTAIR/miR-34a-5p/Snail信號(hào)通路協(xié)同抑制上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)過程。體表荷瘤小鼠模型和尾靜脈注射肺癌轉(zhuǎn)移模型的腫瘤生長及相關(guān)基因的表達(dá)情況與體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，聯(lián)合用藥組比單藥組的腫瘤質(zhì)量更輕，體積更小(P<0.05)。以上結(jié)果說明,小檗堿可改變耐吉非替尼非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖，甚至逆轉(zhuǎn)其EMT過程。

Tab 1 Effect of berberine on reversing drug resistance of tumor to molecular targeted drugs

小檗堿對(duì)分子靶向藥物的耐藥作用總結(jié)見Tab 1。

5 其他

除上述瘤種外，小檗堿也能克服其他的類型的腫瘤MDR。利用順鉑耐藥的卵巢癌A2780/DDP、SKOV3細(xì)胞株進(jìn)行的研究中發(fā)現(xiàn)，小檗堿逆轉(zhuǎn)卵巢癌耐藥的機(jī)制與miRNA有關(guān)，其可能通過調(diào)節(jié)miR-93/PTEN/Akt信號(hào)通路或miR-21/PDCD4軸增加卵巢癌順鉑化療的敏感性[27]。Qu等[28]發(fā)現(xiàn)，小檗堿通過ERK1/2信號(hào)通路誘導(dǎo)替莫唑胺不敏感的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U87/TMZ-R和U251/TMZ-R株的自噬，從而降低替莫唑胺的耐藥性。小檗堿也可通過影響粘著斑激酶、尿激酶(Urokinase,uPA)和NF-κB信號(hào)通路抑制耐威羅菲尼(PLX4032)黑色素瘤A375-S2細(xì)胞的體外遷移率[29]。

6 總結(jié)與展望

MDR是目前腫瘤治療的關(guān)注熱點(diǎn)，小檗堿作為天然產(chǎn)物具有對(duì)多種類型的腫瘤治療的逆轉(zhuǎn)耐藥的作用，有望未來被開發(fā)為胃癌、乳腺癌等多種腫瘤治療的耐藥逆轉(zhuǎn)劑。但小檗堿水溶性和口服吸收差、靜注后在體內(nèi)分布廣泛且消除較快，使得靶組織藥物不能達(dá)到有效濃度或有效濃度維持時(shí)間短。雖然已有鹽酸小檗堿的控釋片、小檗堿和CPT-11的共遞送脂質(zhì)體lipBI、小檗堿與10-HCPT形成的脂質(zhì)納米粒及Janus型納米復(fù)合物(Fe3O4-MSN/Dox+Ber@HA-QD)等優(yōu)良劑型被設(shè)計(jì)成型，但目前仍都處于研究階段[30]。另外，小檗堿體外有效逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞MDR的結(jié)果是否可轉(zhuǎn)化至人體內(nèi)，小檗堿與化療藥的藥動(dòng)學(xué)行為和藥物效應(yīng)是否與體外實(shí)驗(yàn)一致尚有待繼續(xù)研究?？傊窈笮￠迚A的研究側(cè)重點(diǎn)應(yīng)在篩選優(yōu)良劑型、開展小檗堿抗腫瘤和逆轉(zhuǎn)腫瘤MDR的有效性和安全性的臨床試驗(yàn)等方面做進(jìn)一步研究。