長鏈非編碼RNA6030408B16RIK結(jié)合微小RNA-326-3p參與腹膜透析超濾衰竭發(fā)生的機(jī)制

李欣緒，周忠啟，王志奎，張磊，孫麗娜，蔄瑜林

終末期腎臟病（end stage renal disease，ESRD）發(fā)病率高、病情危重且預(yù)后較差，且家庭、社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)高，因而一直是全球關(guān)注的重要衛(wèi)生問題［1］。腹膜透析（peritoneal dialysis，PD）以清除腎損傷病人尿毒癥毒素的方式改善腹膜透析病人生活質(zhì)量［2-3］。目前的統(tǒng)計(jì)表明，中國過去十年間腹膜透析的使用率急劇上升（超過10倍）［1］。但長期接觸生物不相容性的腹透液會(huì)導(dǎo)致明顯的腹膜纖維化（peritoneal fibrosis， PF），這些變化包括腹膜間皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化、細(xì)胞外基質(zhì)沉積致間皮細(xì)胞下層增厚以及血管生成。并且高糖溶液能夠引起腹膜組織發(fā)生上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化（epithelial-musenchymal transdifferentiation，EMT）［4］。反復(fù)發(fā)生腹膜炎、腹膜纖維化易致腹膜損傷后超濾衰竭（ultrafiltration failure， UFF），成為目前退出腹膜透析最主要、最常見的原因之一。據(jù)研究，包括LncRNA、miRNA等內(nèi)的非編碼RNA參與了腹膜透析的超濾衰竭［5-8］。劉瑩等［9］報(bào)道，LncRNA NEAT-1通過miR-34a激活PI3KAKT信號通路影響上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化。本課題組通過生物學(xué)預(yù)測網(wǎng)站預(yù)測了LncRNA6030408B16RIK與miR-326-3p之間的結(jié)合位點(diǎn)，并且前期實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)LncRNA6030408B16RIK的表達(dá)下調(diào)可能改善了腹膜纖維化進(jìn)程延緩了超濾衰竭的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟谑褂秒p熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)以及RNA pull down實(shí)驗(yàn)研究LncRNA6030408B16RIK與miR-326-3p的靶向關(guān)系，在超濾衰竭的生發(fā)、始動(dòng)環(huán)節(jié)進(jìn)行預(yù)防，為保護(hù)腹膜功能提供新的靶點(diǎn)和思路。本研究于2019年7月至2020年6月通過雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)以及RNA pull down實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證LncRNA6030408B16RIK結(jié)合miR-326-3p參與腹膜透析超濾衰竭發(fā)生的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料36只使用5/6腎臟切除術(shù)造模成功的尿毒癥模型Sprague Dawley大鼠，體質(zhì)量為185～200 g（廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物許可證號SCXK，粵2013-0002）。3%戊巴比妥鈉麻醉注射液、3%H2O2（美 國 Sigma-Aldrich Chemical Company），4.25%腹透液、一抗兔抗膠原Ⅲ抗體、二抗山羊抗兔免疫球蛋白G（英國Abcam Inc，Cambridge），兔源抗Collagen Ⅲ、CD31抗體，miR-326-3p模擬物、miR-326-3p抑制劑和NCs（廣州RiboBio Co，Ltd.）。本研究符合一般動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理學(xué)原則。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 尿毒癥模型構(gòu)建及分組 選取40只正常喂養(yǎng)1周的大鼠參照文獻(xiàn)［10-11］進(jìn)行尿毒癥模型構(gòu)建，首先抽取大鼠尾部血測正常肌酐值，后用3%戊巴比妥鈉麻醉，碘伏液消毒，選擇左側(cè)距離肋下肌約1.5 cm，平行于脊柱旁開1 cm的位置行縱行切口，依次切開大鼠的皮膚、筋膜層及肌層，識別左側(cè)腎臟。后充分分離腎臟周圍組織，結(jié)扎后將左側(cè)腎臟的上1/3和下1/3一起取出，后用明膠海綿壓迫止血，檢查無出血后，逐層縫合切口。1周后以同樣方法行右側(cè)腎臟切除，確定右側(cè)腎臟準(zhǔn)確位置后，用絲線于腎門處結(jié)扎腎臟，后從結(jié)扎處切下右腎，檢查確認(rèn)無出血后，依次縫合肌層及皮膚。2次手術(shù)后都給予青霉素注射3日預(yù)防感染發(fā)生。造模手術(shù)4周后，抽取大鼠尾血測肌酐值，測量為正常值的2～3倍者則造模成功。造模手術(shù)過程中2只大鼠死亡，后有2只死于腹膜炎，將構(gòu)建成功的36只大鼠尿毒癥模型分為六組，每組6只大鼠（不成功大鼠已經(jīng)剔除），分別為：尿毒癥組（不進(jìn)行腹膜透析治療），空白組（腹膜透析4周），NC組（腹膜透析4周+轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒），inhibitor NC組（腹膜透析4周+轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒抑制劑），miR-326-3p mimic組（腹膜透析4周+miR-326-3p模擬物），miR-326-3p inhibitor組（腹膜透析4周+miR-326-3p抑制劑）。

1.2.2 腹膜平衡試驗(yàn)（PET） 大鼠腹膜透析誘導(dǎo)結(jié)束2 d后，將2 mL 4.25%的腹膜透析液注入大鼠腹腔中，并留取0.1 mL測量0 h大鼠的超濾量及葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)量。透析2 h后，沿腹白線行一切口打開腹腔，抽取其中的腹透液，而后準(zhǔn)確量取腹透液量，并用紗布吸凈腹腔內(nèi)殘余液體，稱重，后計(jì)算超濾量及葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)量。計(jì)算方法：超濾量（ultrafiltration，UF）=（總出量-入量）mL；葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)量（mass transfer of glucose，MTG）=（葡萄糖濃度-初始×透析液量-初始）-（葡萄糖濃度-透析末×透析液量-透析末）mmol/kg。

1.2.3 HE染色 處死大鼠后收集腹膜組織，切片制作完成后室溫下干燥1.5 h。過濾去除氧化的雜質(zhì)，經(jīng)蘇木精染色液染色5 min后，浸泡入蒸餾水中洗去多余的染色液，后以1%的鹽酸乙醇分化5 s。將樣品置于流水中至少洗滌30 min，直到細(xì)胞變藍(lán)。用1%曙紅染液染色1 min后，依次在梯度乙醇（70%、80%、95%、100%）中脫水，分別用 95% 和100%乙醇洗滌2次，每次5 min。然后經(jīng)二甲苯（Ⅰ）、二甲苯（Ⅱ）清洗，各5 min，擦去多余的二甲苯，并在二甲苯干燥前以中性膠密封，蓋上蓋玻片干燥過夜。使用直立顯微鏡觀察樣品，并用CTS成像系統(tǒng)記錄照片。

1.2.4 Masson染色 切片脫蠟后，依次經(jīng)自來水、蒸餾水洗滌，細(xì)胞核用Regaud蘇木精染液染色。水洗后，將切片在Ponceau酸液中浸泡8 min，在2%冰醋酸溶液中浸泡1 min。甩干玻片上的水分后以1%磷鉬酸水溶液分化4 min，擦掉多余液體后，用苯胺鹽染色5 min。將切片置于0.2%冰醋酸溶液和95%無水乙醇中浸泡2 min，以去除多余染液。最后，經(jīng)二甲苯清洗后，以中性樹膠封固。

1.2.5 免疫組化 將切片于60 ℃的恒溫箱里加熱1 h，浸入二甲苯溶液中脫蠟，而后依次置于梯度乙醇中脫水，然后在37 ℃的3%H2O2中孵育30 min，經(jīng)磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌后，浸入95 ℃的1%檸檬酸緩沖液中煮沸20 min。冷卻至室溫后，切片用PBS沖洗，在37 ℃下用山羊血清封閉10 min，后加入一抗兔抗膠原Ⅲ抗體，于4 ℃下放置12 h。然后PBS沖洗后，加入二抗山羊抗兔免疫球蛋白G（IgG），于37 ℃下孵育10 min。在標(biāo)本中滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素溶液，并孵育10 min。然后將DAB顯色劑加入樣本中，置于室溫暗室中顯色8 min。切片用蘇木精復(fù)染，脫水封片后，在光學(xué)顯微鏡下觀察。

1.2.6 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn) 使用生物學(xué)預(yù)測網(wǎng)站（https：//cm.jefferson.edu/rna22/）進(jìn)行 miR-326-3p與LncRNA6030408B16RIK的結(jié)合位點(diǎn)分析，并獲取含有作用位點(diǎn)的片段序列?？寺ncRNA603040 8B16RIK的全長到pmirGLO Luciferase載體上，命名為pLncRNA6030408B16RIK-Wt。利用生物信息軟件預(yù)測miR-326-3p與LncRNA6030408B16RIK的結(jié)合位點(diǎn)，定點(diǎn)突變。構(gòu)建pLncRNA6030408B16RIKMut載體，將 miR-326-3p 模擬物及 miR-326-3p 陰性對照物分別與熒光素酶報(bào)告載體共轉(zhuǎn)染入HEK-293T細(xì)胞，然后用熒光檢測儀器檢測熒光強(qiáng)度。

1.2.7 RNA Pull Down實(shí)驗(yàn) 將50 nmol/L生物素化的Wt-miR-326-3p和Mut-miR-326-3p轉(zhuǎn)染到大鼠腹膜間皮細(xì)胞。48 h后，收獲細(xì)胞并在特異性裂解緩沖液中孵育10 min。將細(xì)胞裂解物與預(yù)涂有無RNase的牛血清白蛋白（BSA）和酵母轉(zhuǎn)移RNA（tRNA）的M280鏈霉親和素磁珠一起孵育。然后將小珠在4 ℃下孵育3 h，加入預(yù)冷的細(xì)胞裂解液洗滌2次。將小珠分別經(jīng)低鹽緩沖液洗滌3次，再用高鹽緩沖液洗滌1次。通過Trizol試劑純化的RNA，經(jīng)實(shí)時(shí)定量PCR以檢測LncRNA6030408B16RIK的富集。

1.2.8 實(shí)時(shí)定量PCR 使用Trizol試劑提取大鼠腹膜間皮細(xì)胞和大鼠腹膜組織中的RNA，讀取260 nm及280 nm處分光光度計(jì)值，后用Nano Drop2000測定RNA的濃度和純度。采用primer5.0和mirprimer2軟件設(shè)計(jì)RT-qPCR的引物，確認(rèn)后由上海吉瑪有限公司（中國上海）合成。使用ABI PRISM 7500系統(tǒng)進(jìn)行RT-qPCR。內(nèi)參選用β-肌動(dòng)蛋白和U6，并計(jì)算目標(biāo)基因的表達(dá)。

1.2.9 蛋白質(zhì)印跡法（Western blotting） 從大鼠腹膜間皮細(xì)胞和大鼠腹膜組織中提取總蛋白質(zhì)，用二辛可寧酸（BCA）試劑確定每個(gè)蛋白質(zhì)的濃度。蛋白質(zhì)經(jīng)10%的聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后，在100 mV的恒定壓力下使用濕轉(zhuǎn)移法將印跡轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。加入濃度5%BSA，室溫下封閉1 h，然后用抗β-肌動(dòng)蛋白、α-SMA的一抗兔抗體在4℃下封閉過夜。洗滌后，加入二抗山羊抗兔IgG，并在室溫下孵育1 h，然后使用化學(xué)發(fā)光試劑顯影。使用Image J軟件來量化譜帶強(qiáng)度。β-肌動(dòng)蛋白用作內(nèi)參，靶條帶與β-肌動(dòng)蛋白的灰度值之比表示相對蛋白表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法本課題分析數(shù)據(jù)使用SPSS 21.0軟件。服從正態(tài)分布和方差均勻性的數(shù)據(jù)表示為±s。使用獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)比較兩組之間的數(shù)據(jù)，而用單因素方差分析比較多組之間的數(shù)據(jù)，而后進(jìn)行Tukey后檢驗(yàn)。P＜0.05時(shí)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 下調(diào)miR-326-3p對腹膜組織結(jié)構(gòu)及功能變化和腹膜纖維化的影響（1）腹膜透析4周后，通過HE染色、Masson染色、免疫組化的實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察腹膜組織結(jié)構(gòu)發(fā)生的變化，與inhibitor NC組相比，miR-326-3p inhibitor組細(xì)胞變?yōu)槊黠@的圓形，間皮基質(zhì)增加并伴有許多成纖維樣細(xì)胞；相反，與mimic NC組相比，miR-326-3-p mimic組的尿毒癥大鼠間皮細(xì)胞成規(guī)律的扁平狀，無明顯巨噬細(xì)胞浸潤及膠原纖維沉積。此外，miR-326-3p mimic組大鼠的腹膜厚度降低，膠原蛋白Ⅲ和CD31表達(dá)量下降，而miR-326-3p inhibitor組腹膜厚度增加，膠原蛋白Ⅲ和CD31陽性表達(dá)量明顯增加。見表1。

表1 大鼠腹膜形態(tài)比較/± s

表1 大鼠腹膜形態(tài)比較/± s

注：①與模擬物空白組相比，P＜0.001。②與抑制物空白組相比，P＜0.001。

組別mimic NC組miR-326-3p組inhibitor NC組miR-326-3p inhibitor組F值P值鼠數(shù)6 6 6 6腹膜厚度/mm 18.57±1.95 13.11±1.36①17.32±1.88 27.18±2.82②48.84＜0.001 CollagenⅢ/%22.44±2.45 6.44±0.74①20.09±3.08 44.69±5.12②142.56＜0.001 CD31/%14.22±5.04 3.94±0.82①16.49±5.63 32.60±5.48②38.43＜0.001

（2）通過腹膜平衡實(shí)驗(yàn)觀察腹膜功能變化，miR-326-3p mimic組大鼠的超濾能力較mimic NC組明顯增加，葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)量明顯下降；而miR-326-3p inhibitor組相比inhibitor NC組，超濾量明顯下降，而葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)量增加。見表2。

表2 大鼠腹膜超濾量及葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)量/± s

表2 大鼠腹膜超濾量及葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)量/± s

注：MTG為葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)量。①與模擬物空白組相比，P＜0.001。②與抑制物空白組相比，P＜0.001。

組別mimic NC組miR-326-3p組inhibitor NC組miR-326-3p inhibitor組F值P值鼠數(shù)6 6 6 6超濾量/mL 5.10±0.52 7.02±0.71①5.12±0.52 3.01±0.31②56.12＜0.001 MTG/（mmol/kg BW）12.54±1.27 6.12±0.65①12.16±1.24 19.64±1.99②97.28＜0.001

（3）RT-PCR和Western blotting的結(jié)果顯示，miR-326-3p mimic組中，間皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的標(biāo)志物α-SMA、FSP1和波形蛋白表達(dá)下降，E-鈣黏蛋白表達(dá)增加，在miR-326-3p inhibitor組中結(jié)果相反。見表3，表4。

表3 大鼠腹膜中mRNA的表達(dá)水平/± s

表3 大鼠腹膜中mRNA的表達(dá)水平/± s

注：FSP1為成纖維細(xì)胞特異性蛋白-1，α-SMA為α-平滑肌肌動(dòng)蛋白，Vimentin為波形蛋白，E-cadherin為E-鈣黏蛋白。①與模擬物空白組相比，P＜0.001。②與抑制物空白組相比，P＜0.001。

組別mimic NC組miR-326-3p組Inhibitor NC組miR-326-3p inhibitor組F值P值鼠數(shù)6 6 6 6 FSP1 1.02±0.14 0.38±0.04①1.01±0.12 1.69±0.18②104.26＜0.001 α-SMA 0.99±0.10 0.42±0.04①1.03±0.12 1.54±0.16②103.95＜0.001 Vimentin 1.00±0.10 0.59±0.06①0.99±0.10 1.63±0.17②88.87＜0.001 E-cadherin 1.01±0.12 1.90±0.19①1.02±0.12 0.58±0.05②108.05＜0.001 miR-326-3p 1.01±0.13 2.56±0.26①1.01±0.11 0.31±0.04②221.15＜0.001

表4 大鼠腹膜中蛋白質(zhì)的表達(dá)水平/± s

表4 大鼠腹膜中蛋白質(zhì)的表達(dá)水平/± s

注：α-SMA為α-平滑肌肌動(dòng)蛋白，F(xiàn)SP1為成纖維細(xì)胞特異性蛋白-1，Vimentin為波形蛋白，E-cadherin為E-鈣黏蛋白。①與模擬物空白組相比，P＜0.001。②與抑制物空白組相比，P＜0.001。

組別mimic NC組miR-326-3p組inhibitor NC組miR-326-3p inhibitor組F值P值鼠數(shù)6 6 6 6 α-SMA 0.81±0.09 0.51±0.06①0.92±0.09 1.57±0.16②107.78＜0.001 FSP1 0.62±0.08 0.22±0.03①0.64±0.07 1.16±0.18②82.80＜0.001 Vimentin 0.96±0.10 0.61±0.06①0.92±0.10 1.72±0.17②101.60＜0.001 E-cadherin 1.14±0.14 1.99±0.21①1.14±0.15 0.62±0.06②85.01＜0.001

2.2 LncRNA6030408B16RIK與miR-326-3p靶向關(guān)系驗(yàn)證通過生物學(xué)預(yù)測網(wǎng)站分析miR-326-3p與LncRNA6030408B16RIK的結(jié)合位點(diǎn)，雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示與miR-326-3p mimic相結(jié)合的LncRNA6030408B16RIK-Wt的熒光帶強(qiáng)度明顯下降，而LncRNA6030408B16RIK-Mut的強(qiáng)度相較于NC組則無明顯變化；RNA pull down實(shí)驗(yàn)中，與Wt-miR-326-3p結(jié)合的LncRNA6030408B16RIK富集量明顯高于Mut-miR-326-3p組。結(jié)果說明LncRNA603040 8B16RIK特異性結(jié)合miR-326-3p。見表5，6。

表5 與miR-326-3p結(jié)合LncRNA6030408B16RIK的熒光強(qiáng)度/± s

表5 與miR-326-3p結(jié)合LncRNA6030408B16RIK的熒光強(qiáng)度/± s

組別mimic NC組miR-326-3p組F值P值鼠數(shù)6 6 pWt-LncRNA60304 08B16RIK 1.01±0.11 0.49±0.05 53.88＜0.001 pMut-LncRNA6030 408B16RIK 1.03±0.12 1.00±0.10 0.09＜0.001

表6 與LncRNA6030408B16RIK結(jié)合miR-326-3p的富集量/± s

表6 與LncRNA6030408B16RIK結(jié)合miR-326-3p的富集量/± s

注：①與空白組相比，P＜0.001。

組別NC組Wt-miR-326-3p組Mut-miRNA-326-3P組F值P值鼠數(shù)6 6 6 miR-326-3p 1.01±0.12 2.87±0.29①1.02±0.12 90.98＜0.001

3 討論

腹膜透析 （PD） 是終末期腎病治療常用的重要連續(xù)替代方案，在生存、病人獨(dú)立性和醫(yī)療保健成本方面具有相當(dāng)大的初始益處［3］。然而，其更廣泛使用的障礙之一是基于葡萄糖的PD溶液由于纖維化對腹膜的形態(tài)完整性和功能產(chǎn)生影響。主要是由高糖刺激引起的，通過激活多種細(xì)胞因子和轉(zhuǎn)錄因子信號通路影響膠原蛋白和其他細(xì)胞外膜成分的合成，使腹膜發(fā)生上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化，致超濾衰竭的發(fā)生，但具體機(jī)制尚不清楚［12］。越來越多的證據(jù)證明了不同類別的非編碼 RNA （ncRNA）在腹膜纖維化中的調(diào)節(jié)作用。miRNA屬于一類獨(dú)特的ncRNA，目前研究顯示miRNA通過介導(dǎo)多種信號通路參與了上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化過程［13-16］。miR-326-3p在腎臟腫瘤疾病中對細(xì)胞增殖、侵襲、遷移和凋亡有重要影響，且在一些女性相關(guān)疾?。ò▽m頸癌、子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌和多種自身免疫性疾病）中存在異常表達(dá)［17-20］。本課題探討了miR-326-3p是否通過EMT參與了腹膜纖維化過程，HE染色、Masson染色、免疫組化結(jié)果表明miRNA-326-3p mimic組細(xì)胞排列規(guī)則，形態(tài)呈扁平狀，無明顯間皮細(xì)胞脫落、間質(zhì)增厚、巨細(xì)胞浸潤表現(xiàn)；而miRNA-326-3p inhibitor組中作為間皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化標(biāo)志物的α-SMA和波形蛋白表達(dá)上調(diào)，而E-鈣黏蛋白表達(dá)下調(diào)說明發(fā)生了腹膜纖維化。Katsunori等［21］發(fā)現(xiàn)，與正常小鼠相比，腹膜纖維化的小鼠中miRNA表達(dá)異常。大量研究表明miR-15b、miR-21促進(jìn)腹膜纖維化的發(fā)生，而miR-200c、miR-29b和miR-30a則一定程度上抑制纖維化的發(fā)生［13］。這些研究間接驗(yàn)證了我們的實(shí)驗(yàn)中miRNA-326-3P過表達(dá)可延緩腹膜纖維化的進(jìn)程。

本課題組前期實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)下調(diào)LncRNA6030 408B16RIK的表達(dá)可延緩大鼠超濾衰竭的發(fā)生，且經(jīng)生物學(xué)預(yù)測網(wǎng)站分析LncRNA6030408B16RIK與miRNA-326-3p存在靶向結(jié)合位點(diǎn)。有研究顯示LncRNA結(jié)合miRNA介導(dǎo)不同的通路，調(diào)節(jié)下游蛋白質(zhì)的表達(dá)，對細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化產(chǎn)生影響［22-28］。本實(shí)驗(yàn)采用 RT-PCR、Western blotting等方法，檢測大鼠腹膜組織中LncRNA6030408B 16RIK與miR-326-3p相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)水平，且通過雙螢光素酶實(shí)驗(yàn)對LncRNA6030408B16RIK與miR-326-3p的靶向關(guān)系進(jìn)行研究。結(jié)果顯示miR-326-3p mimic組與mimic NC組相比LncRNA6030408B16RIK-Wt富集量明顯升高，而LncRNA6030408B16RIK-Mut的富集量在兩組中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；且與NC組以及LncRNA6030408B16 RIK-Mut組相比，miR-326-3p與LncRNA6030408B16 RIK-Wt相結(jié)合的熒光強(qiáng)度明顯下降，說明LncRNA6030408B16RIK與miR-326-3p存在相互作用。通過本實(shí)驗(yàn)可得出結(jié)論，LncRNA6030408B16RIK通過結(jié)合miR-326-3p參與腹膜透析大鼠的超濾衰竭，過表達(dá)miR-326-3p可一定程度上抑制尿毒癥大鼠腹膜透析超濾衰竭的發(fā)生，或可為我們預(yù)防超濾衰竭延緩腹膜纖維化提供新的思路。目前有文獻(xiàn)表明mi-RNA可調(diào)控WISP因子影響足細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化以及器官的纖維化［29-31］。目前經(jīng)過生物預(yù)測網(wǎng)站分析，miR-326-3p與WISP因子存在靶向結(jié)合位點(diǎn)，可在以后閱讀大量文獻(xiàn)后，設(shè)計(jì)更加科學(xué)的實(shí)驗(yàn)以此作為進(jìn)一步研究的方向。