食管癌組織中FHIT蛋白及mRNA的臨床意義分析

陳 鵬

（赤峰市醫(yī)院腫瘤外科，內(nèi)蒙古 赤峰，024000）

食管癌是一種基因型疾病，長期以來，我國食管癌病死率均較高，對我國居民的生命健康造成了嚴重威脅[1]?，F(xiàn)階段，在降低食管癌病死率的嘗試中，早期發(fā)現(xiàn)、診斷、治療癌前病變是唯一途徑。對疑似病例，均應(yīng)做食管吞稀鋇X 線雙重對比造影。早期可見食管黏膜皺襞紊亂、粗糙或有中斷現(xiàn)象。食管癌首發(fā)吞咽困難或者吃飯有哽咽感，甚至胸前區(qū)和后背有疼痛表現(xiàn)，出現(xiàn)上述癥狀要高度警惕。首選患者做食管鋇餐檢查，檢查后如果發(fā)現(xiàn)食管黏膜有破壞、有充盈缺損或者食管壁僵硬，高度懷疑食管癌，建議患者做胃鏡檢查、食管鏡檢查。食管鏡檢查，可以對病變部位的描述更清楚。通過活檢的辦法，取組織以便診斷更明確，如果經(jīng)病理診斷后，診斷是鱗狀細胞癌，可明確診斷。病理診斷為臨床上最常用的檢查方法，也是確診的方法，對于食管癌患者，沒有食管鏡活檢的病理檢查，不采用手術(shù)治療。因此，分析癌前病變基因蛋白表達變化，并分析其和組織病理學改變的相關(guān)性，對其分子機制進行探討，能夠為臨床提供食管癌發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)歸提供理論依據(jù)。近年來，分子生物學得到了飛速發(fā)展，臨床日益重視食管癌中抑癌基因的作用[2]。有研究表明，絕大部分腫瘤中脆性組氨酸三聯(lián)體基因（fragilehistidinetriad，F(xiàn)HIT）丟失或頻繁降低表達，而FHIT 基因轉(zhuǎn)錄和腫瘤的發(fā)生相關(guān)，因此在多種腫瘤中，F(xiàn)HIT 基因均是候選抑制基因[3-4]。本研究統(tǒng)計分析了2019年3月～2021年10月赤峰市醫(yī)院收治的60 例食管癌患者的資料，分析了食管癌組織中FHIT 蛋白及mRNA 的表達及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性選取2019年3月～2021年10月赤峰市醫(yī)院的食管癌患者60 例樣本作為病例組、內(nèi)鏡室的正常食管組織患者60 例樣本作為對照組。對照組60 例，年齡37～77 歲，平均年齡（53.98±6.65）歲；女23 例，男37 例。病例組60 例，年齡36～76 歲，平均年齡（53.26±6.47）歲；女24 例，男36例；在病理分期方面：Ⅰ期10 例，Ⅱ期12 例，Ⅲ期22 例，Ⅳ期16 例；在分化程度方面：低分化10 例，中分化25 例，高分化25 例；在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況方面：有40 例，無20 例。兩組患者的一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。所有患者均知情同意參與本研究并簽署知情同意書，且本研究已被赤峰市醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準。

1.2 納入與排除標準

納入標準：①均符合食管癌的診斷標準[5]；②均為鱗癌；③均經(jīng)內(nèi)鏡檢查確診；④均具有正常的語言溝通能力。

排除標準：①有凝血功能障礙者；②合并其他惡性腫瘤者；③有嚴重心腦血管疾病者；④中途退出研究者。

1.3 方法

1.3.1 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）

手術(shù)將食管癌組織及癌旁組織切取下來并凍存，制備成懸液，依據(jù)Trizol 試劑盒一步法將總RNA 提取出來。依據(jù)試劑盒要求的條件將cDNA 合成，在PCR 擴增中應(yīng)用所得逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。PCR 反應(yīng)條件：在94 ℃、94 ℃、55 ℃、72 ℃溫度下分別預(yù)變形、變性、退火、延伸2 min、40 s、40 s、40 s，共36個循環(huán)，然后在72 ℃的溫度下延伸7 min。外顯子FHIT、β-actin基因上游引物序列分別為5'-GCCAACATCTCATCAAGCCCT-3'、5'-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3'，下游引物序列分別為5'-TGGGTCGTCTGAAACAAATCG-3'、5'-CTCCTTAAT GTCACGCACGATTTC-3'，擴增片段分別為172 bp、500 bp。

1.3.2 免疫組化

運用SP 免疫組化檢測法，應(yīng)用免疫組化超敏試劑盒、抗FHIT 多克隆抗體一抗，陽性標準為有棕色顆粒出現(xiàn)在胞質(zhì)中，陽性細胞所占百分比：無評定為0 分、≤10%評定為1 分、11%～50%評定為2 分、51%～75%評定為3 分、>75%評定為4 分，染色強度：無評定為0 分、淺黃色評定為1 分、淺棕色評定為2 分、深棕色評定為3 分，二者相乘0～1 分、2～3 分、>3 分分別評定為缺失表達、弱表達、正常表達[6]。

1.4 觀察指標

①兩組組織中FHIT 蛋白表達；②兩組組織中FHIT mRNA；③病例組癌組織中FHIT mRNA 與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。臨床病理參數(shù)包括臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

1.5 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 20.0 軟件，計數(shù)資料用[n（%）]表示，比較采用χ2檢驗；計量資料以（±s）表示，比較采用t 檢驗。P<0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組組織中FHIT 蛋白表達比較

與對照組正常組織相比，病例組癌組織、癌旁組織中FHIT 蛋白缺失表達率、弱表達率均較高（P<0.05），正常表達率均較低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），而與癌旁組織相比，癌組織中FHIT 蛋白缺失表達率較高（P<0.05），弱表達率、正常表達率均較低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表1。

表1 兩組組織中FHIT 蛋白表達比較 [n（%）]

2.2 兩組組織中FHIT mRNA 比較

與對照組正常組織相比，病例組癌組織、癌旁組織中FHIT mRNA 缺失率均較高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），與癌旁組織相比，癌組織中FHIT mRNA 缺失率較高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表2、圖1。

表2 兩組組織中FHIT mRNA 比較 [n（%）]

2.3 病例組癌組織中FHIT 蛋白及mRNA 與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性分析

與Ⅰ期患者相比，病例組Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ期患者的FHIT 蛋白缺失率及mRNA 缺失率較高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與高分化患者相比，低分化、中分化患者的FHIT 蛋白缺失率及mRNA 缺失率均較高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者相比，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的FHIT 蛋白缺失率及mRNA 缺失率較高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表3。

表3 病例組癌組織中FHIT 蛋白與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性分析 [n（%）]

3 討論

食管癌是食管發(fā)生的惡性腫瘤，在不斷侵襲向腔內(nèi)生長后，就會引起患者吞咽不暢；向腔外生長，會引起周圍的臟器或軟組織受侵襲，然后會播散到全身，出現(xiàn)全身轉(zhuǎn)移。食管中段癌多與進食含亞硝酸鹽的食物等有關(guān)，食管下段癌與胃食管反流有關(guān)。治療方法有手術(shù)、放療、化療及綜合療法。如能行手術(shù)治療，根據(jù)情況選擇食管癌切除胃代食管吻合術(shù)，食管癌切除結(jié)腸代食管吻合術(shù)，食管癌切除空腸代食管吻合術(shù)。以食管癌切除胃代食管吻合術(shù)最為常用，并且效果好，為首選。同時可結(jié)合放化療提高切除率和生存率。晚期和不能耐受手術(shù)的患者可選擇放化療。

FHIT 是近年新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，F(xiàn)HIT 主要通過某種信號途徑誘導(dǎo)細胞凋亡、調(diào)控細胞周期、降解促使細胞增殖的二腺苷三磷酸（AP3A），從而抑制腫瘤細胞增殖。FHIT 基因是一種抑癌基因，其編碼的FHIT 蛋白能夠?qū)Χ嗔姿岫佘者M行區(qū)域特異性水解，使其向二磷酸腺苷及腺苷酸轉(zhuǎn)變，參與調(diào)控細胞周期、細胞凋亡。有研究表明，在多種腫瘤的發(fā)生過程中，F(xiàn)HIT 蛋白廣泛失活與缺失[7-8]。也有研究表明，在消化道腫瘤中，F(xiàn)HIT 基因具有異常的表達[9-10]。食管癌的發(fā)生發(fā)展和FHIT 蛋白及mRNA 表達下調(diào)與缺失關(guān)系密切，同時檢測兩種指標能夠為臨床早期診斷食管癌并判定預(yù)后提供有效依據(jù)[11-12]。本研究結(jié)果表明，與對照組正常組織相比，病例組癌組織、癌旁組織中FHIT 蛋白缺失表達率、弱表達率均較高，正常表達率均較低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），而與癌旁組織相比，癌組織中FHIT 蛋白缺失表達率較高，弱表達率、正常表達率均較低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。與對照組正常組織相比，病例組癌組織、癌旁組織中FHIT mRNA缺失率均較高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），與癌旁組織相比，癌組織中FHIT mRNA 缺失率較高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），說明癌組織中FHIT 蛋白及mRNA 表達隨著癌前細胞轉(zhuǎn)化為癌細胞而逐漸降低，因此組織學上正常組織在缺失FHIT 基因表達的情況下可能有癌變存在，早期診斷價值較高。同時，在食管癌的發(fā)生發(fā)展過程中，F(xiàn)HIT 基因的抑癌基因功能可能會在其缺失或減弱的情況下降低，從而促進食管癌易感性的增加。

本研究結(jié)果還表明，與Ⅰ期患者相比，病例組Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ期患者的FHIT 蛋白缺失率及mRNA 缺失率較高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與高分化患者相比，低分化、中分化患者的FHIT 蛋白缺失率及mRNA 缺失率均較高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者相比，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的FHIT 蛋白缺失率及mRNA 缺失率較高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），說明FHIT 基因的陽性表達和食管癌癌組織臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。現(xiàn)階段，早期診斷仍然是提高食管癌患者5年生存率的重要手段，尋找出一種具有較高靈敏度與特異度的診斷方法是早期診斷的關(guān)鍵，而檢測各種異常基因給臨床提供了新的思路[13-14]。有學者對血漿中FHIT 基因的甲基化進行了檢測，結(jié)果表明，血漿中FHIT 基因在腫瘤中甲基化，如果腫瘤患者的腫瘤長徑在2 cm 以下、病理分級為Ⅰ級，那么其就具有異常的血漿DNA FHIT 基因，認為在早期診斷食管癌的過程中，檢測血液中DNA FHIT 基因較為有效[15-16]。有學者采用高效熒光檢測技術(shù)開發(fā)出對FHIT DNA 及蛋白表達進行同時檢測的多功能生物芯片，其具有直接性、選擇性、靈敏性等優(yōu)勢[17-18]。近年來，醫(yī)學界逐漸確定了食管癌的發(fā)生發(fā)展與基因異常的關(guān)系，目前已經(jīng)開始探索對食管癌治療中基因異常的若干試驗性治療方法[19-20]。

綜上所述，食管癌組織中FHIT 蛋白及mRNA 的缺失表達率提升，能夠為臨床診斷與治療及預(yù)后判斷提供有效依據(jù)。