基于胰腺PI3K/AKT/BMAL1通路探討針刺對(duì)2型糖尿病大鼠血糖晝夜節(jié)律的影響*

王栩，張?jiān)?，劉漢東，李潔，趙文清，周瓊陽，張智龍

（1．天津市中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院針灸科，天津 300120；2．天津市紅橋醫(yī)院中醫(yī)科，天津 300131；3．天津中醫(yī)藥大學(xué)研究生院，天津 301617）

糖尿病嚴(yán)重威脅著人類的健康，根據(jù)2019年國(guó)際糖尿病聯(lián)盟發(fā)布的數(shù)據(jù)顯示，至2045年將有1．472億人患有糖尿病[1]。在2020年美國(guó)糖尿病學(xué)會(huì)頒布糖尿病醫(yī)學(xué)診療標(biāo)準(zhǔn)中，新增了對(duì)2型糖尿?。═2DM）患者應(yīng)用動(dòng)態(tài)血糖譜報(bào)告評(píng)估血糖管理的推薦[2]，由此說明血糖晝夜節(jié)律的調(diào)節(jié)對(duì)T2DM的治療具有重要意義。血糖晝夜節(jié)律受胰島生物鐘節(jié)律的影響。目前，改善血糖晝夜節(jié)律的西藥主要包括胰高血糖素樣肽-1受體激動(dòng)劑、磺脲類等，但上述藥物存在諸多不良反應(yīng)，如低血糖、胃腸道反應(yīng)、皮疹等，影響藥物的長(zhǎng)期應(yīng)用。血糖晝夜節(jié)律失衡而引起的持續(xù)高血糖可引起多種急慢性并發(fā)癥，嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量。

研究認(rèn)為，腦和肌肉芳香烴受體核轉(zhuǎn)位蛋白1（BMAL1）可調(diào)節(jié)胰島生物鐘的節(jié)律性，維持血糖晝夜節(jié)律[3]。其上游受磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）通路的調(diào)控，PI3K可磷酸化下游絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶（AKT）的蘇氨酸 308位點(diǎn)（pAkt T308）而激活A(yù)KT[4]。而AKT又可進(jìn)一步激活BMAL1，從而調(diào)節(jié)血糖晝夜節(jié)律[5]。同時(shí)，針灸對(duì)T2DM具有治療作用，1項(xiàng)系統(tǒng)評(píng)價(jià)表明單純針刺和針刺配合降糖藥均可降低T2DM患者空腹及餐后2 h血糖、糖化血紅蛋白，且療效優(yōu)于假針刺及單純使用降糖藥[6]。筆者前期的臨床及機(jī)制研究顯示，調(diào)理脾胃針法可有效降低血糖；改善PI3K通路上下游關(guān)鍵蛋白表達(dá)及胰島結(jié)構(gòu)[7-9]，但對(duì)PI3K/AKT/BMAL1介導(dǎo)針刺調(diào)節(jié)血糖晝夜節(jié)律的作用尚不明確。故本研究以高脂高糖結(jié)合小劑量腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ）的T2DM大鼠為針刺效應(yīng)平臺(tái)，重點(diǎn)研究調(diào)理脾胃針法調(diào)節(jié)血糖晝夜節(jié)律失衡的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選擇SPF級(jí)雄性Sprague-Dawley大鼠36只，體質(zhì)量（120±20）g，5周齡。購自斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司，動(dòng)物許可證編號(hào)：SCXK（京）2019-0010。動(dòng)物飼養(yǎng)于天津市中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所，研究方案獲研究所倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（No．IRM-DWLL-2020132），實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處置符合2006年發(fā)布的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》。

1.2 主要試劑及儀器 STZ（S0130，Sigma公司），大鼠胰島素（INS）酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）Kit（CSB-E05070r，武漢華美生物公司），PI3K、AKT、p-AKT、BMAL1 抗 體（ab183957，ab233755，ab38449，ab273648，英國(guó)Abcam公司），二抗（北京博奧森生物技術(shù)有限公司），ECLplus超敏發(fā)光液（PE0010，北京索萊寶公司），TUNEL試劑盒（Roche公司）；中研太和針灸針（0．3 mm×13 mm），血糖儀及試紙（越佳型至新，雅培公司），酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Tek公司），凝膠成像系統(tǒng)（美國(guó)Bio-Rad公司），脫水機(jī)及包埋機(jī)（武漢俊杰電子有限公司），病理切片機(jī)（上海徠卡儀器有限公司），熒光顯微鏡（OLYMPUS公司）。

1.3 模型建立 將大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，采用高脂高糖飼料喂養(yǎng)2個(gè)月（高脂高糖飼料配方：蔗糖20%、豬油10%、蛋黃粉5%、膽固醇1%、豬膽汁酸鈉0．1%、普通飼料63．9%）。后將造模大鼠禁食12 h，并按體質(zhì)量一次性快速腹腔注射STZ溶液（以 0．1 mol枸櫞酸鹽緩沖液配制，pH=4．6），并按注射體積10 mL/kg，注射劑量25 mg/kg，STZ濃度2．5 mg/mL注射，30 min內(nèi)使用完。于注射完成72 h后采用尾靜脈取血方式，使用血糖儀測(cè)量血糖，以連續(xù)5 d隨機(jī)血糖＞16．7 mmol/L為T2DM造模成功[10]。動(dòng)物成模后均予以普通飼料喂養(yǎng)。

1.4 動(dòng)物分組及干預(yù)方法 采用隨機(jī)數(shù)字表法將36只大鼠隨機(jī)分為空白組10只與造模組26只，造模組按照上述造模方法造模，最終死亡6只，并將剩余的20只大鼠隨機(jī)分為針刺組10只，模型組10只。針刺組取穴為：曲池、合谷、血海、足三里、豐隆、陰陵泉、地機(jī)、三陰交、太沖（以上穴位均取雙側(cè)），中脘，具體穴位定位參照李忠仁主編的《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[11]。具體操作：首先將大鼠置于自制大鼠針刺服中[8]，以減少躁動(dòng)。身著大鼠針刺服后，大鼠躁動(dòng)基本消失，可同時(shí)多針刺、久留針，并可多只同時(shí)針刺操作，具有針刺可行性。而后穴位與針具常規(guī)消毒，選用中研太和0．3 mm×13 mm針灸針進(jìn)行針刺，并于 23：30、05：30、11：30、17：30 進(jìn)行針刺，每次留針30 min，每日治療1次，每周治療5次，共治療4周?？瞻捉M及模型組不予干預(yù)。

1.5 檢測(cè)指標(biāo)

1.5.1 一般情況 對(duì)造模前后大鼠的精神狀態(tài)、毛色、進(jìn)食量、飲水量、尿量、便質(zhì)進(jìn)行觀察。

1.5.2 4時(shí)相即時(shí)血糖檢測(cè) 于干預(yù)前及針刺4周后，將各組大鼠禁食12 h，自由飲水。分別于0、6、12、18時(shí)采用尾靜脈取血法，用血糖儀測(cè)量即時(shí)血糖。

1.5.3 平均血糖的標(biāo)準(zhǔn)差（SDBG）和最大血糖波動(dòng)幅度（LAGE）檢測(cè) SDBG：先計(jì)算4時(shí)相血糖平均值，再將4時(shí)相血糖值與平均值之差的平方和除以6，最后將值開方。LAGE：最高血糖值與最低血糖值之差。

1.5.4 空腹血清胰島素（Fins）含量 于干預(yù)前及針刺4周后，將各組大鼠禁食12 h，自由飲水。于18時(shí)血糖檢測(cè)完畢后，采用眼眶靜脈取血法，取3 mL血液，然后將血液低溫離心，取上清液，采用ELISA檢測(cè)Fins。

1.5.5 胰腺熒光TUNEL染色 于針刺4周后，眼眶靜脈取血完畢后，將各組大鼠處死，分離胰腺并于冰生理鹽水中洗去血液至液體澄清。固定后將石蠟切片脫蠟，滴加破膜工作液覆蓋組織，孵育漂洗后，滴加配制好的TUNEL混合液覆蓋組織，37℃恒溫箱孵育2 h，而后進(jìn)行DAPI復(fù)染細(xì)胞核，再用抗熒光淬滅封片劑封片，最后于熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。采用凋亡細(xì)胞數(shù)/胰島總細(xì)胞核數(shù)×100%，計(jì)算凋亡指數(shù)（AI），取平均值。

1.5.6 蛋白質(zhì)印跡法（Western blot)檢測(cè)PI3K、AKT、p-AKT、BMAL1蛋白表達(dá) 取胰腺組織加入裂解液研磨，離心后取上清液，采用BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果調(diào)整各個(gè)蛋白的上樣量，上樣后進(jìn)行電泳、轉(zhuǎn)膜，并將膜置于封閉液中封閉2 h，后配置合適比例的一抗封閉液（PI3K、AKT、BMAL1稀釋比例 1∶1 000；p-AKT 稀釋比例 1∶800），于 4 ℃孵育過夜后再加二抗封閉液室溫孵育，滴入ECL plus超敏發(fā)光液，并采用凝膠成像系統(tǒng)分析灰度值。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 選取SPSS 24軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間計(jì)量資料比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD法，組內(nèi)前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。重復(fù)測(cè)量資料比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析，P＜0．05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 造模前大鼠精神狀態(tài)反應(yīng)敏捷，行動(dòng)迅速，毛發(fā)光澤，便質(zhì)成型；造模后精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，瞇眼少動(dòng)，縮肩拱背，體型消瘦，毛發(fā)蓬松，毛色暗黃，食量倍增，頻繁飲水，尿量增加，大便溏稀。干預(yù)結(jié)束后，針刺組大鼠精神狀態(tài)良好，反應(yīng)敏捷，體質(zhì)量增加明顯，毛發(fā)順澤，食飲水及尿量如常，便質(zhì)基本成形。

2.2 4 時(shí)相血糖值 如表1所示，干預(yù)前與空白組比較，模型組與針刺組各時(shí)相即時(shí)血糖顯著升高（P＜0．01），但針刺組與模型組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。干預(yù)后，針刺組較模型組各時(shí)相即時(shí)血糖顯著下降（P＜0．01），但兩組各時(shí)相即時(shí)血糖均顯著高于空白組（P＜0．01）。模型組血糖與干預(yù)前相比無顯著變化（P＞0．05），而針刺組血糖顯著下降（P＜0．01）。

表1 各組大鼠干預(yù)前后0、6、12、18時(shí)即時(shí)血糖比較（±s）Tab.1 Comparison of 0，6，12，18 hours of glucose levels in rats of each group before and after intervention（±s）mmol/L

表1 各組大鼠干預(yù)前后0、6、12、18時(shí)即時(shí)血糖比較（±s）Tab.1 Comparison of 0，6，12，18 hours of glucose levels in rats of each group before and after intervention（±s）mmol/L

注：同一時(shí)相與空白組比較，**P＜0．01；同一時(shí)相與模型組比較，##P＜0．01；同一組別與干預(yù)前比較，▲▲P＜0．01。

組別 動(dòng)物數(shù) 0時(shí)血糖 6時(shí)血糖 12時(shí)血糖 18時(shí)血糖干預(yù)前 干預(yù)后 干預(yù)前 干預(yù)后 干預(yù)前 干預(yù)后 干預(yù)前 干預(yù)后空白組 10 6．1±0．72 6．1±0．84 6．2±0．65 6．1±0．73 5．5±0．71 5．5±0．63 5．3±0．66 5．1±0．74模型組 10 22．5±0．92** 22．4±1．14** 20．3±1．36** 21．2±1．43** 18．5±1．52** 19．1±1．62** 21．3±1．21**22．0±1．32**針刺組 10 22．6±1．23** 9．0±0．93**##▲▲ 19．5±1．52** 9．4±0．75**##▲▲ 18．8±1．08** 8．5±0．54**##▲▲ 21．5±2．76** 7．7±0．62**##▲▲

2.3 SDBG與LAGE值 如表2所示，干預(yù)前與空白組比較，模型組與針刺組SDBG與LAGE顯著升高（P＜0．01），但針刺組與模型組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。干預(yù)后，針刺組較模型組SDBG與LAGE顯著下降（P＜0．01），但兩組 SDBG 與 LAGE 均顯著高于空白組（P＜0．01）。模型組 SDBG 與 LAGE 與干預(yù)前相比無顯著變化（P＞0．05），而針刺組 SDBG 與LAGE 顯著下降（P＜0．01）。

表2 各組大鼠干預(yù)前后SDBG與LAGE值比較（±s）Tab.2 Comparison of SDBG and LAGE levels in rats of each group before and after intervention（±s）mmol/L

表2 各組大鼠干預(yù)前后SDBG與LAGE值比較（±s）Tab.2 Comparison of SDBG and LAGE levels in rats of each group before and after intervention（±s）mmol/L

注：與空白組比較，**P＜0．01；與模型組比較，##P＜0．01；與干預(yù)前比較，▲▲P＜0．01。

組別 動(dòng)物數(shù) SDBG LAGE干預(yù)前 干預(yù)后 干預(yù)前 干預(yù)后空白組 10 0．6±0．48 0．6±0．36 1．7±1．03 1．7±1．11模型組 10 4．2±0．78**4．3±0．85** 7．0±1．93**7．1±2．09**針刺組 10 4．1±0．63**2．8±0．57**##▲▲ 7．1±2．03**4．8±2．13**##▲▲

2.4 Fins含量 由表3可知，干預(yù)前與空白組比較，模型組與針刺組 Fins含量顯著降低（P＜0．01），但針刺組與模型組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。干預(yù)后針刺組較模型組Fins含量顯著升高（P＜0．01），但兩組Fins含量均顯著低于空白組（P＜0．01）。模型組 Fins含量與干預(yù)前相比無顯著變化（P＞0．05），而針刺組 Fins含量顯著升高（P＜0．01）。

表3 各組大鼠干預(yù)前后Fins的比較（±s）Tab.3 Comparison of Fins levels in rats of each group before and after intervention（±s） μU/L

表3 各組大鼠干預(yù)前后Fins的比較（±s）Tab.3 Comparison of Fins levels in rats of each group before and after intervention（±s） μU/L

注：與空白組比較，**P＜0．01；與模型組比較，##P＜0．01；與干預(yù)前比較，▲▲P＜0．01。

組別 動(dòng)物數(shù) Fins干預(yù)前 干預(yù)后空白組 10 72．91±7．62 69．51±3．36模型組 10 36．45±1．58** 37．43±1．65**針刺組 10 35．25±4．76** 54．91±2．38**##▲▲

2.5 胰腺熒光TUNEL染色及AI值 由圖1、表4可知，鏡下空白組胰島未見明顯凋亡，僅有極少量散在綠色著色的凋亡細(xì)胞。而模型組可見大量凋亡細(xì)胞，AI值則明顯高于空白組（P＜0．01）。經(jīng)針刺后，針刺組凋亡情況明顯改善，可見夾雜少量凋亡細(xì)胞，AI值較模型組明顯下降（P＜0．01）。

圖1 各組胰腺熒光TUNEL染色（×200）Fig.1 Fluorescence TUNEL staining of pancreas of each group(×200)

表4 干預(yù)后各組大鼠胰腺細(xì)胞凋亡率的比較（±s）Tab.4 Comparison of lslet cell apoptosis rate in rats of each group of after intervention（±s）%

表4 干預(yù)后各組大鼠胰腺細(xì)胞凋亡率的比較（±s）Tab.4 Comparison of lslet cell apoptosis rate in rats of each group of after intervention（±s）%

注：與空白組比較，**P＜0.01；與模型組比較，##P＜0.01。

組別 動(dòng)物數(shù) AI空白組 10 2.53±0.79模型組 10 87.32±5.31**針刺組 10 40.59±7.28##

2.6 各組大鼠 PI3K、AKT、p-AKT、BMAL1 蛋白檢測(cè) 由表5、圖2可知，干預(yù)后針刺組各蛋白表達(dá)較模型組顯著升高（P＜0．01），但均顯著低于空白組（P＜0．01）。

表5 干預(yù)后各組大鼠PI3K、AKT、p-AKT、BMAL1蛋白相對(duì)表達(dá)量（±s）Tab.5Comparison of PI3K，AKT，p-AKT，BMAL1 levels in rats of each group of after intervention（±s）

表5 干預(yù)后各組大鼠PI3K、AKT、p-AKT、BMAL1蛋白相對(duì)表達(dá)量（±s）Tab.5Comparison of PI3K，AKT，p-AKT，BMAL1 levels in rats of each group of after intervention（±s）

注：與空白組比較，**P＜0.01；與模型組比較，##P＜0.01。

組別 動(dòng)物數(shù) PI3K AKT p-AKT BMAL1空白組 10 1.02±0.03 0.93±0.04 0.74±0.06 0.81±0.03模型組 10 0.41±0.04** 0.36±0.06** 0.26±0.06** 0.23±0.03**針刺組 10 0.58±0.08**##0.52±0.07**##0.53±0.09**##0.42±0.04**##

圖2 干預(yù)后各組大鼠PI3K、AKT、p-AKT、BMAL1的蛋白表達(dá)Fig.2 Protein expression of PI3K，AKT，p-AKT and BMAL1 in rats of each group after intervention

3 討論

人體的生理、代謝方面存在晝夜節(jié)律性，這種節(jié)律性受體內(nèi)生物鐘控制。人體生物鐘主要由位于視交叉上核的中央生物鐘和外周生物鐘（如胰島、肝臟、肌肉等）組成。中央生物鐘通過神經(jīng)、體液調(diào)控外周生物鐘，但葡萄糖信號(hào)可使外周生物鐘（如胰島）擺脫中央生物鐘控制，而具有相對(duì)自主的生物節(jié)律，其中胰島的自主生物節(jié)律性主要體現(xiàn)在胰島素分泌方面[12]。胰島功能的完整性是胰島素分泌的前提。有資料顯示，T2DM患者胰島分泌的正常節(jié)律消失，胰島素脈沖式的分泌模式紊亂，血糖晝夜節(jié)律失衡[13]。故恢復(fù)胰島功能及正常的“生物鐘效應(yīng)”對(duì)維持T2DM血糖晝夜節(jié)律至關(guān)重要。

晝夜節(jié)律產(chǎn)生和維持的分子機(jī)制是由BMAL1與生物鐘循環(huán)輸出蛋白（CLOCK）形成異二聚體作為節(jié)律性震蕩的起始，隨后與其他時(shí)鐘基因結(jié)合，形成以約24 h為周期的節(jié)律性表達(dá)振蕩。PI3K/AKT通路是BMAL1的上游通路，有別于生物鐘基因（CLOCK），BMAL1的缺乏會(huì)出現(xiàn)高血糖和葡萄糖刺激下的胰島素分泌紊亂等現(xiàn)象[14]。BMAL1蛋白可與胰島素基因啟動(dòng)子E-box結(jié)合，調(diào)控胰島素的表達(dá)，并可促進(jìn)胰島素分泌囊泡的胞吐。敲除BMAL1可影響胰島節(jié)律性胞吐[15]。故PI3K/AKT/BMAL1通路與T2DM血糖晝夜節(jié)律失衡關(guān)系密切。

同時(shí)，人體五臟六腑與自然界生物節(jié)律亦有聯(lián)系，如《靈樞·經(jīng)別》云：“余聞人之合于天道也，內(nèi)有五臟，以應(yīng)五音、五色、五時(shí)、五味、五位也；外有六腑，以應(yīng)六律，六律建陰陽諸經(jīng)，而合之十二月、十二辰、十二節(jié)、十二經(jīng)水、十二時(shí)、十二經(jīng)脈者，此五臟六腑之所以應(yīng)天道?！倍⒉∫鄷?huì)導(dǎo)致生物節(jié)律性的失常，如《素問·藏氣法時(shí)論》曰：“脾病者，日昳慧，日出甚，下晡靜?！逼渲小叭粘錾酢奔囱悦髌⒉』颊咴诶杳髦畷r(shí)病情嚴(yán)重，而T2DM的“黎明現(xiàn)象”正是發(fā)于此時(shí)，這也為生物鐘紊亂從脾論治提供理論依據(jù)。同時(shí)，血糖是由水谷精微化生而成，源于脾胃的升降運(yùn)化，故血糖異常亦應(yīng)從脾論治。《素問·遺篇》曰：“脾者，諫議之官，知周出焉。”筆者認(rèn)為脾諫議是監(jiān)督防衛(wèi)之功的體現(xiàn)。血糖晝夜節(jié)律失衡正是由于脾胃受損，脾虛失運(yùn)，運(yùn)化失節(jié)，諫議失司而引起。因此，提出血糖晝夜節(jié)律失衡應(yīng)從脾論治，調(diào)理脾胃升降運(yùn)化，復(fù)其諫議之職，使運(yùn)化有節(jié)。

本研究結(jié)果顯示，造模成功后，大鼠顯示出了脾胃升降運(yùn)化失常所引起的一系列癥狀，如精神萎靡，體型消瘦，毛色暗黃，大便溏稀等。在針刺后上述癥狀較前改善。此外，在正常情況下大鼠血糖分別于6、18時(shí)為一晝夜血糖變化的波峰及波谷，并于0、24時(shí)回落至基本水平[16]，而T2DM大鼠的血糖則無晝夜波動(dòng)的節(jié)律性，而呈現(xiàn)出異常高水平[17]，故采用4時(shí)相即時(shí)血糖以評(píng)價(jià)血糖波動(dòng)的節(jié)律性，但波動(dòng)的節(jié)律性亦不可過度離散，故進(jìn)一步結(jié)合SDBG與LAGE以評(píng)價(jià)其離散程度。研究表明，干預(yù)前由于胰腺的破壞，故胰島素分泌不足，TUNEL染色亦證明胰島細(xì)胞存在大量凋亡。因此，干預(yù)前針刺、模型組Fins含量較空白組下降，各時(shí)相即時(shí)血糖、SDBG、LAGE及AI值較空白組升高，血糖晝夜節(jié)律失衡。隨著針刺的干預(yù)，AI值降低，提示胰島修復(fù)，而胰島功能的完整性又是胰島素分泌的前提，隨著胰島修復(fù)，胰島素節(jié)律性分泌得到改善，針刺組各時(shí)相血糖、SDBG、LAGE趨于正常，且針刺結(jié)束后Fins含量亦接近空白組，血糖晝夜節(jié)律失衡得到糾正。同時(shí)，治療前模型組大鼠PI3K/AKT通路各蛋白表達(dá)量降低，信號(hào)下傳障礙，BMAL1表達(dá)量減少，是血糖晝夜節(jié)律失衡的機(jī)制。但隨著針刺的介入，針刺對(duì)PI3K/AKT/BMAL1通路具有良性調(diào)節(jié)作用，可提高 PI3K、AKT、p-AKT、BMAL1 蛋白的表達(dá)量，促進(jìn)針刺信號(hào)的下傳，隨著BMAL1的表達(dá)增加，其可促進(jìn)胰島素生成，改善血糖分泌的節(jié)律性，故使各時(shí)相血糖下降，血糖晝夜節(jié)律得到改善。

調(diào)理脾胃針法正是用于治療脾胃升降運(yùn)化失常的1種針刺方法，中脘可助運(yùn)化，功善升清降濁；足三里可益脾胃，補(bǔ)臟腑之虛損；陰陵泉可化濕滯，開通水道，上述3個(gè)穴位相配健脾祛濕，調(diào)中焦之升降運(yùn)化。三陰交、地機(jī)、血?？苫兄疂狃觯铕錾?，調(diào)和氣血。豐隆可化濕祛痰，和胃降逆。曲池、合谷通降胃腸，蕩滌邪穢。太沖平肝調(diào)肝，防肝木橫克脾土。諸穴合用，使升降有序，健運(yùn)有常，精微得布，臟腑得養(yǎng)，諫議之職可復(fù)[18]。