鹿苓安腎顆粒大鼠急性毒性試驗(yàn)研究*

楊元鳳 ，熊高才，黎豫川，羅玉玲，張敬杰

(1貴州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，貴州 貴陽(yáng) 550003；2貴州省第三人民醫(yī)院，貴州 貴陽(yáng) 550000；3貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽(yáng) 550025)

據(jù)現(xiàn)有資料顯示，腎病的種類(lèi)較多，如慢性腎功能衰竭證、原發(fā)性腎病綜合癥、繼發(fā)性腎病及糖尿病腎病等[1]，其中慢性腎功能衰竭是由多種因素引起的進(jìn)行性、不可逆的功能性損害，據(jù)統(tǒng)計(jì)，慢性腎功能衰竭預(yù)后較差，不僅危及患者生命，而且給全球衛(wèi)生保健帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)[2]，因此尋找新的治療策略尤為重要。近年來(lái)中藥因其副作用小、療效好在治療慢性腎功能衰竭上被廣泛應(yīng)用[3-4]。鹿苓安腎顆粒為貴州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院的協(xié)定處方，是根據(jù)慢性腎功能衰竭證屬氣陰虧虛型的證候擬方，主要由鹿血晶、茯苓、石斛、白術(shù)等藥物組成。且已有相關(guān)研究證實(shí)鹿血晶、茯苓、石斛、白術(shù)等在治療腎損傷或腎陰虧虛中均具有顯著的療效[5-10]。根據(jù)《中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》[11]，在鹿苓安腎顆粒藥效研究的基礎(chǔ)上，對(duì)鹿苓安腎顆粒進(jìn)行急性毒性實(shí)驗(yàn)，觀察動(dòng)物在接受過(guò)量鹿苓安腎顆粒所產(chǎn)生的的急性中毒反應(yīng)，為鹿苓安腎顆粒的后續(xù)毒性實(shí)驗(yàn)或臨床使用劑量提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF清潔級(jí)的Wistar大鼠20只，7～9周齡，雌雄各一半，體重為170～200 g，購(gòu)買(mǎi)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司(生產(chǎn)許可證號(hào)為：SCXK(京)2021-0011)。大鼠生長(zhǎng)環(huán)境為：12 h/12 h明暗交替，室溫為21～24℃，濕度為：40%～65%，分籠飼養(yǎng)，每籠1只大鼠。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 鹿苓安腎顆粒的制備

茯苓、石斛、白術(shù)三味藥材，裝入2層滅菌過(guò)濾袋，加8倍量的水(第一次加水10.5倍)，浸泡1小時(shí)，煎煮2次，每次45 min，合并煎液，濾過(guò)。濾液常壓濃縮至相對(duì)密度為1.25～1.28(70℃)的浸膏，浸膏加入鹿血晶混勻后，與適量可溶性淀粉混合均勻，20目篩制粒，濕顆粒60 ℃干燥3 h，14目篩整粒，制成1000 g顆粒，即得。

1.2.2 急性毒性預(yù)實(shí)驗(yàn)

按照半數(shù)急性毒性實(shí)驗(yàn)要求先進(jìn)行毒性實(shí)驗(yàn)預(yù)實(shí)驗(yàn)預(yù)測(cè)本品的致死量(LD50)。Wistar大鼠20只，標(biāo)記，稱(chēng)重，按體質(zhì)量隨機(jī)分為鹿苓安腎顆粒組和空白對(duì)照組，每組雌、雄各半，禁食不禁水12 h后，給藥組以本品可供灌胃的最大濃度(0.5 g/mL)，大鼠灌胃可承受的最大體積(20 mL/kg)，給藥后自由進(jìn)食和飲水，對(duì)照組給予等容積的蒸餾水，連續(xù)觀察14 d。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后根據(jù)每組動(dòng)物死亡數(shù)量，查詢(xún)霍恩氏表(Horn氏)求得大鼠的半數(shù)致死量(LD50)及其95%可信區(qū)間。

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中若大鼠未出現(xiàn)任何中毒癥狀或中毒癥狀不明顯，因該劑量遠(yuǎn)大于中藥無(wú)毒劑量標(biāo)準(zhǔn)(LD50>50 g/kg)，則初步說(shuō)明鹿苓安腎顆粒無(wú)毒副作用或毒副作用不明顯，此時(shí)可使用該劑量直接進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。若大鼠出現(xiàn)中毒癥狀則需根據(jù)具體結(jié)果，重新設(shè)定給藥梯度。

1.2.3 急性毒性正式實(shí)驗(yàn)

Wistar 大鼠20 只適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后，隨機(jī)分為正常組與用藥組，每組10只，雌雄各半。用藥組每日間隔6 h分2次給予10 g/kg 鹿苓安腎顆粒灌胃，正常組給予等體積水灌胃，連續(xù)觀察14 d。

1.2.4 觀察指標(biāo)

每天都對(duì)兩組大鼠稱(chēng)重并記錄，包括進(jìn)食量以及飲水量。

大鼠14 d觀察期結(jié)束后，摘除眼球取血，使用血常規(guī)分析儀對(duì)各組大鼠分別進(jìn)行血常規(guī)白細(xì)胞(WBC)、紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(HGB)、血小板(PLT)、淋巴細(xì)胞(LYM)的檢測(cè)。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 22.3統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析和t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 急性毒性預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

大鼠灌胃給予鹿苓安腎顆粒后，觀察到用藥組和對(duì)照組大鼠活動(dòng)均減少，30 min 內(nèi)兩組大鼠均迅速恢復(fù)正常，飲食飲水正常，觀察期內(nèi)無(wú)動(dòng)物死亡，連續(xù)7 d 觀察中均未見(jiàn)不良反應(yīng)，其背毛、膚色、鼻、眼、口腔分泌物均未見(jiàn)異常；未見(jiàn)任何中毒癥狀，無(wú)動(dòng)物死亡，提示本品的安全范圍較大。

2.2 鹿苓安腎顆粒對(duì)大鼠體質(zhì)量的影響

如表1所示，雌性用藥組與雌性對(duì)照組比較、雄性用藥組與雄性對(duì)照組比較，不同時(shí)間的大鼠體質(zhì)量差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，說(shuō)明給藥后，鹿苓安腎顆粒對(duì)大鼠體質(zhì)量無(wú)影響。

2.3 鹿苓安腎顆粒對(duì)大鼠進(jìn)食量的影響

由表2可見(jiàn)，用藥組與對(duì)照組比較，不同時(shí)間點(diǎn)雌、雄性大鼠體進(jìn)食量均無(wú)明顯差異(P均>0.05)，說(shuō)明給藥后，鹿苓安腎顆粒對(duì)大鼠進(jìn)食量無(wú)影響。

2.4 鹿苓安腎顆粒對(duì)大鼠飲水量的影響

用藥組與對(duì)照組比較，各時(shí)間點(diǎn)雌、雄性大鼠體飲水量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，說(shuō)明給藥后，鹿苓安腎顆粒對(duì)大鼠飲水量無(wú)影響，見(jiàn)表3。

表1 鹿苓安腎顆粒急毒實(shí)驗(yàn)對(duì)大鼠體質(zhì)量的影響(x±s，g)Tab.1 Effect of Luling Anshen granule on body weight of rats

表2 鹿苓安腎顆粒急毒實(shí)驗(yàn)對(duì)大鼠進(jìn)食量的影響(x±s，m/g)Tab.2 Effect of Luling Anshen granule on food intake of rats

表3 鹿苓安腎顆粒急毒實(shí)驗(yàn)對(duì)大鼠飲水量的影響(x±s，V/mL)Tab.3 Effect of Luling Anshen granule on water intake of rats

2.5 鹿苓安腎顆粒對(duì)大鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響

用藥組與對(duì)照組比較，雌、雄性大鼠體白細(xì)胞數(shù)(WBC)、紅細(xì)胞數(shù)(RBC)、血紅蛋白數(shù)(HGB)、血小板(PLT)以及淋巴細(xì)胞絕對(duì)值(LYM)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，說(shuō)明給藥后，鹿苓安腎顆粒對(duì)大鼠的血常規(guī)指標(biāo)無(wú)影響，詳見(jiàn)表4。

表4 鹿苓安腎顆粒對(duì)大鼠血常規(guī)指標(biāo)量的影響Tab.4 Effect of Luling Anshen granule on blood routine indexes of rats

3 討論

鹿苓安腎顆粒主要由鹿血晶、茯苓、白術(shù)、石斛等中藥組成，石斛又名仙斛蘭韻、不死草、還魂草，其中流蘇石斛是石斛的主要來(lái)源之一[8-9]，具益胃生津，滋陰清熱之功。石斛得鹿血晶則津液精血生化有源，鹿血晶得石斛則咸熱之性大減，養(yǎng)陰之力更強(qiáng)，為佐藥。白術(shù)有運(yùn)脾燥濕、燥濕利水、化濁之效[12-13]，得茯苓則健脾功效更著，茯苓得白術(shù)又增利水滲濕之效，亦為佐藥，綜觀全方，彼此兼顧，互為輔助，相得益彰，共奏養(yǎng)陰生津、健脾益氣之功。鹿血晶、茯苓、白術(shù)、石斛等中藥具有廣泛的藥理作用，臨床應(yīng)用前景廣闊，因此通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)開(kāi)展鹿苓安腎顆粒的體內(nèi)急性毒性研究，有利于產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)，以期為臨床鹿苓安腎顆粒的研究應(yīng)用提供新的理論依據(jù)。

在本研究預(yù)實(shí)驗(yàn)中，灌胃給予大鼠最大濃度的鹿苓安腎顆粒，發(fā)現(xiàn)在觀察期內(nèi)各組大鼠均無(wú)死亡，且各組大鼠背毛、膚色、鼻、眼、口腔分泌物均未見(jiàn)明顯異常，各組均未見(jiàn)不良反應(yīng)和中毒癥狀，這提示鹿苓安腎顆粒的安全范圍較大。接著在急性毒性正式實(shí)驗(yàn)中，我們連續(xù)兩周每天對(duì)各組大鼠體質(zhì)量、進(jìn)食量、飲水量以及血常規(guī)相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用藥組與對(duì)照組比較，雌、雄性大鼠的體質(zhì)量、進(jìn)食量、飲水量以及白細(xì)胞數(shù)(WBC)、紅細(xì)胞數(shù)(RBC)、血紅蛋白數(shù)(HGB)、血小板(PLT)、淋巴細(xì)胞絕對(duì)值(LYM)均無(wú)明顯差異，提示鹿苓安腎顆粒不影響大鼠體質(zhì)量、進(jìn)食量、飲水量以及血常規(guī)相關(guān)指標(biāo)水平，表明鹿苓安腎顆粒無(wú)明顯的急性毒性反應(yīng)，臨床使用的安全范圍較大。