石蒜堿靶向激活脊髓AMP活化蛋白激酶通路緩解大鼠關(guān)節(jié)炎痛的機(jī)制研究*

胡引娣，陳春喜，謝 敏，李 岱，王柏軍△

（1湖北科技學(xué)院醫(yī)學(xué)部藥學(xué)院，湖北咸寧437100；2湖北科技學(xué)院附屬浠水醫(yī)院，湖北黃岡438802）

骨關(guān)節(jié)炎是一種以疼痛、關(guān)節(jié)僵硬和關(guān)節(jié)功能障礙為特征的退行性關(guān)節(jié)疾病，全球患病人數(shù)已超過(guò)3.5億。預(yù)計(jì)到2032年，45歲以上人群中骨關(guān)節(jié)炎患病率可增至29.5%［1］。關(guān)節(jié)炎痛在疾病早期階段為間歇性發(fā)生，隨著病程的進(jìn)展逐漸變得頻繁而嚴(yán)重，是導(dǎo)致老年人致殘的主要原因，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量［2］。目前，常見的治療藥物為對(duì)乙酰氨基酚、非甾體抗炎藥和阿片類藥物。由于這些藥物的限制性療效及副作用，關(guān)節(jié)炎疼痛治療存在很大不足，已成為一個(gè)公共衛(wèi)生問(wèn)題。因此，關(guān)節(jié)炎疼痛的病理生理機(jī)制及相關(guān)鎮(zhèn)痛藥物的開發(fā)研究具有重要的臨床價(jià)值和社會(huì)價(jià)值。

在關(guān)節(jié)炎疼痛的病理進(jìn)程中，軟骨損傷及滑膜炎等激活外周傷害感受器，傳入痛覺(jué)纖維將疼痛信號(hào)從關(guān)節(jié)傳遞至脊髓，在脊髓整合及處理后，痛覺(jué)信號(hào)進(jìn)一步上升至丘腦和大腦皮層，導(dǎo)致中樞敏化并形成病理性疼痛［3］。在一項(xiàng)對(duì)150名關(guān)節(jié)炎患者的調(diào)查報(bào)告中，觀察到35.3%的患者中樞致敏，其特征為神經(jīng)元反應(yīng)增強(qiáng)和神經(jīng)炎癥［4］。脊髓神經(jīng)炎癥被認(rèn)為是中樞致敏的主要因素，其特點(diǎn)是膠質(zhì)細(xì)胞激活及炎癥介質(zhì)產(chǎn)生增加［5］。關(guān)節(jié)炎大鼠脊髓中星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的活化程度增加，白細(xì)胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）和IL-6的mRNA和蛋白水平均顯著升高，鞘內(nèi)抑制IL-1受體可改善關(guān)節(jié)病理學(xué)并減輕關(guān)節(jié)疼痛［6］。因此，靶向抑制脊髓神經(jīng)炎癥可作為治療關(guān)節(jié)炎疼痛的一個(gè)有效手段。

石蒜堿是從石蒜中分離出來(lái)的一種天然生物堿，具有抗腫瘤、抗病毒和抗炎的功效，在病理性疼痛動(dòng)物模型中也表現(xiàn)出抗傷害效應(yīng)。在醋酸和角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠疼痛模型中，石蒜堿給藥表現(xiàn)出抗傷害和抗炎活性［7］。在椎間盤退變大鼠模型中，石蒜堿可抑制促炎因子表達(dá)并發(fā)揮保護(hù)作用［8］。在糖尿病周圍神經(jīng)病變模型中，石蒜堿可激活A(yù)MP活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）通路下調(diào)自噬從而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用［9］。因此，為明確石蒜堿在關(guān)節(jié)炎痛中的作用及病理機(jī)制，我們構(gòu)建了大鼠關(guān)節(jié)炎模型，并進(jìn)行鞘內(nèi)給石蒜堿后檢測(cè)動(dòng)物行為學(xué)、形態(tài)學(xué)及脊髓相關(guān)蛋白表達(dá)的變化，從而為石蒜堿在關(guān)節(jié)炎痛中的治療作用提供參考資料。

材料和方法

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本研究使用40只SPF級(jí)雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，體重210～230 g，6～8周齡，均購(gòu)于湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證編號(hào)為42000600043734。大鼠自購(gòu)買后飼養(yǎng)在室溫為（22±2）℃且12 h/12 h晝夜交替的環(huán)境中，并為其提供充足的水和食物。本研究中所有實(shí)驗(yàn)程序均符合當(dāng)?shù)睾蛧?guó)際動(dòng)物倫理使用指南的要求，并將使用動(dòng)物的數(shù)量和疼痛降至最低。本研究所涉及的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)湖北科技學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 主要試劑PMSF、SDS-PAGE凝膠快速配制試劑盒、完全弗氏佐劑（complete Freund′s adjuvant，CFA）和DMSO均購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司。脫脂奶粉、加強(qiáng)型RIPA裂解液、BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒和特超敏ECL化學(xué)發(fā)光底物試劑盒均購(gòu)自Biosharp。AMPK激動(dòng)劑AICAR和AMPK抑制劑dorsomorphin購(gòu)自Selleck。石蒜堿購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司。本研究中購(gòu)自武漢愛博泰克生物科技有限公司的Ⅰ抗有cleaved caspase-3和Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bcl-2 associated X protein，Bax）抗體；購(gòu)自江蘇親科生物有限公司的Ⅰ抗有膠質(zhì)細(xì)胞原纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）、IL-1β、β-actin、p-AMPK、AMPK及caspase-3抗體。本研究購(gòu)自武漢愛博泰克生物科技有限公司的Ⅱ抗有HRP Goat Anti-Rabbit IgG H&L和HRP Goat Anti-Mouse IgG H&L；購(gòu)自艾博抗（上海）貿(mào)易有限公司的熒光Ⅱ抗有山羊抗小鼠IgG H&L（FITC）和山羊抗兔IgG H&L（FITC）。

2 主要方法

2.1 動(dòng)物分組及模型建立大鼠適應(yīng)環(huán)境6～7 d后，隨機(jī)分為4組（每組10只）：對(duì)照組、模型組、石蒜堿給藥組及AICAR給藥組。構(gòu)建關(guān)節(jié)炎大鼠病理模型：剔除大鼠左后肢注射部位毛發(fā)并用碘伏進(jìn)行皮膚表面消毒，模型組以及給藥組用無(wú)菌微量注射器垂直進(jìn)針于左后肢膝關(guān)節(jié)腔，腔內(nèi)注射完全弗氏佐劑混懸液（每只40 μL）［10］。對(duì)照組大鼠于相同部位皮下注射等體積生理鹽水。關(guān)節(jié)炎大鼠模型構(gòu)建14 d后，進(jìn)行給藥處理：在模型組基礎(chǔ)上，用無(wú)菌微量注射器于L5和L6脊椎棘突間隙垂直進(jìn)針，每只大鼠 鞘 內(nèi) 注 射1 mg/kg石 蒜 堿［7］或AICAR溶 液［11］10 μL；模型組大鼠鞘內(nèi)注射同等體積的DMSO和0.9%氯化鈉混合液（體積比1∶1）。石蒜堿和AICAR分別溶入DMSO中，使用前用0.9%氯化鈉按1∶1稀釋。

2.2 大鼠自發(fā)性縮足反射次數(shù)記錄以大鼠自發(fā)性縮足（或舔爪）反射次數(shù)評(píng)估大鼠自發(fā)性疼痛。大鼠置于30 cm×30 cm×30 cm玻璃盒中適應(yīng)30 min，觀察并視頻記錄大鼠自發(fā)性縮足（或舔爪）反射次數(shù)，每次5 min，共記錄3次，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中保持環(huán)境安靜［14］。

2.3 50%縮足閾值（paw withdrawal threshold，PWT）檢測(cè)以大鼠50% PWT評(píng)估大鼠機(jī)械痛敏情況。大鼠放在透明有機(jī)玻璃盒內(nèi)適應(yīng)環(huán)境30 min，用0.4～26 g的von Frey纖維垂直剌激大鼠后足底正中部，刺激時(shí)間持續(xù)≤5 s，連續(xù)刺激時(shí)需間隔2～3 min。若出現(xiàn)舔足或抬足等行為則視為陽(yáng)性反應(yīng)，反之則視為陰性反應(yīng)。若出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，則用相鄰較低一級(jí)力度的von Frey纖維再次刺激；若出現(xiàn)陰性反應(yīng)，則用相鄰較高一級(jí)力度再次刺激，測(cè)6次，并記錄。根據(jù)公式50%PWT（g）=10（Xf+Kδ）/10 000來(lái)計(jì)算各組大鼠縮足閾值（Xf為測(cè)試中使用的最后一個(gè)von Frey纖維的階數(shù)；K為痛覺(jué)閾矯正系數(shù)；δ為相鄰不同纖維刺激之間的差異［15］）。

2.4 轉(zhuǎn)棒運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)以轉(zhuǎn)棒停留時(shí)間和運(yùn)動(dòng)距離來(lái)評(píng)估大鼠運(yùn)動(dòng)能力的變化。實(shí)驗(yàn)開始前將大鼠放在轉(zhuǎn)棒儀器上以每分鐘4圈的速度適應(yīng)10 min，間隔休息30 min，重復(fù)3次。正式實(shí)驗(yàn)時(shí)以每分鐘10圈的速度運(yùn)動(dòng)10 s，勻加速10 s，以每分鐘15圈的速度運(yùn)動(dòng)30 s，勻加速10 s，以每分鐘20圈的速度運(yùn)動(dòng)9 min［16］。記錄大鼠運(yùn)動(dòng)的距離和在轉(zhuǎn)棒上停留的時(shí)間。

2.5 分子對(duì)接PDB數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.rcsb.org/）下載AMPK蛋白結(jié)構(gòu)（ID為4EAI）；Pubchem數(shù)據(jù)庫(kù)（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）下載石蒜堿二維結(jié)構(gòu)；Autodock_vina對(duì)接AMPK和石蒜堿；OpenBabel（v2.3.1）39分離文件，添加氫鍵并分配可旋轉(zhuǎn)鍵和電荷；PDBQT進(jìn)一步對(duì)接；PyMOL可視化對(duì)接結(jié)果［17］。

2.6 Western blot檢測(cè)脊髓組織蛋白質(zhì)表達(dá)各組行為學(xué)測(cè)試結(jié)束后，每組隨機(jī)各取5只大鼠并給予過(guò)量戊巴比妥鈉（150 mg/kg）處死，分離腰段脊髓；在含蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液中裂解；在冰上進(jìn)行組織勻漿，勻漿后冰上靜置裂解20 min；收集組織勻漿液于離心管中，4℃、13 523×g條件下離心15 min后取上清；加入組織上清1/3體積的4×上樣緩沖液，沸水浴加熱10 min變性；BCA蛋白分析試劑盒檢測(cè)樣品中的蛋白質(zhì)濃度；SDS-PAGE分離等質(zhì)量的蛋白質(zhì)樣品后電轉(zhuǎn)移至PVDF膜；脫脂奶粉溶液室溫下封閉1 h；TBS-T洗膜3次，每次5 min，4℃條件下加入Ⅰ抗（1∶1 000）孵育過(guò)夜；TBS-T洗膜3次，每次5 min，加入Ⅱ抗（1∶10 000）室溫孵育1 h，再用TBS-T洗膜3次，每次10 min；特超敏ECL化學(xué)發(fā)光底物試劑盒顯色，用LAS500凝膠成像系統(tǒng)掃描觀察PVDF膜；ImageJ軟件分析條帶灰度值。

2.7 免疫熒光法檢測(cè)大鼠脊髓組織中蛋白質(zhì)的表達(dá)和定位每組隨機(jī)各取5只大鼠給予50 mg/kg戊巴比妥鈉深度麻醉后，用4%多聚甲醛經(jīng)心臟灌流固定，分離脊髓；脫水；石蠟包埋，切成4 μm厚的石蠟組織切片；脫蠟；抗原修復(fù)20 min；PBS漂洗3次，每次10 min，3%過(guò)氧化氫孵化10 min；PBS漂洗3次，每次10 min，免疫熒光封閉液封閉1 h；免疫熒光Ⅰ抗（1∶100）孵育過(guò)夜；PBS清洗3次，每次10 min，熒光素標(biāo)記的Ⅱ抗（1∶1 000）孵育1 h；PBS清洗3次，每次10 min，加免疫熒光抗淬滅劑，封片，于熒光顯微鏡下觀察并拍片，ImageJ軟件分析熒光強(qiáng)度值。

2.8 細(xì)胞培養(yǎng)及給藥處理將C6大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞（廣州吉尼歐生物科技有限公司）培養(yǎng)于含有10%胎牛血清、50 U/mL青霉素和50 μg/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)液中，分為對(duì)照組、石蒜堿給藥組、石蒜堿和dorsomorphin共同給藥組，置于37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。石蒜堿給藥組給予1 μmol/L石蒜堿［12］，石蒜堿和dorsomorphin共同給藥組分別給與1 μmol/L石蒜堿和1 μmol/L dorsomorphin［13］。藥物處理24 h后用胰蛋白酶消化細(xì)胞并收集用于Western blot。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 26.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。數(shù)據(jù)資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示。組間比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA）。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 石蒜堿鞘內(nèi)給藥可顯著改善動(dòng)物行為學(xué)

如表1所示，與對(duì)照組相比，模型組大鼠50%縮足閾值顯著降低（P＜0.05），自發(fā)性縮足次數(shù)顯著增加（P＜0.05）；同時(shí)在轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)中的停留時(shí)間和運(yùn)動(dòng)距離均顯著下降（P＜0.05）。鞘內(nèi)注射石蒜堿后，與模型組大鼠相比，石蒜堿給藥組大鼠50%縮足閾值顯著升高（P＜0.05），自發(fā)縮足次數(shù)顯著減少（P＜0.05），轉(zhuǎn)棒停留時(shí)間和運(yùn)動(dòng)距離顯著增加（P＜0.05）。

表1 石蒜堿對(duì)關(guān)節(jié)炎大鼠行為學(xué)的影響Table 1.Effect of lycorine on the behaviors of model rats（Mean±SD.n=10）

2 鞘內(nèi)注射石蒜堿顯著降低大鼠脊髓炎癥

與對(duì)照組相比，免疫熒光結(jié)果顯示，模型組大鼠脊髓背角中IL-1β熒光強(qiáng)度顯著增加（P＜0.05）。Western blot顯示，模型組大鼠脊髓組織中IL-1β表達(dá)量顯著增加（P＜0.05）。與模型組相比，石蒜堿給藥組大鼠脊髓IL-1β熒光強(qiáng)度降低，表達(dá)量也顯著下調(diào)（P＜0.05）。見圖1。

Figure 1.Effect of lycorine on spinal cord inflammation in arthritic rats.A：representative fluorescence images of IL-1β in spinal dorsal horn（scale bar=20 μm）；B：relative fluorescence intensity of IL-1β in spinal dorsal horn；C：representative Western blot bands and relative gray values of IL-1β in spinal cord.Mean±SD.n=5.*P＜0.05 vs control group；#P＜0.05 vs model group.圖1石蒜堿對(duì)關(guān)節(jié)炎大鼠脊髓炎癥的影響

3 鞘內(nèi)注射石蒜堿抑制大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞激活

與對(duì)照組相比，免疫熒光結(jié)果顯示模型組大鼠脊髓背角處星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物GFAP熒光強(qiáng)度顯著增加（P＜0.05）；Western blot顯示模型組大鼠脊髓組織中GFAP表達(dá)量顯著增加（P＜0.05）。與模型組相比，石蒜堿給藥組大鼠脊髓GFAP熒光強(qiáng)度降低，表達(dá)量也下調(diào)（P＜0.05）。見圖2。

4 鞘內(nèi)注射石蒜堿靶向激活大鼠脊髓AMPK

分子對(duì)接結(jié)果顯示，石蒜堿可分別與AMPK第45位賴氨酸和第138位的精氨酸形成形成1個(gè)共價(jià)鍵和1個(gè)離子鍵，鍵長(zhǎng)分別為1.7?和2.5?，見圖3。免疫熒光和Western blot結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，模型組大鼠脊髓p-AMPK熒光強(qiáng)度和表達(dá)量均顯著降低（P＜0.05）；與模型組相比，石蒜堿給藥組大鼠脊髓p-AMPK熒光強(qiáng)度和表達(dá)量均顯著增加（P＜0.05），見圖4。

5 鞘內(nèi)注射石蒜堿阻斷大鼠脊髓Bax/caspase-3信號(hào)

與對(duì)照組相比，免疫熒光結(jié)果顯示，模型組大鼠脊髓背角中炎癥反應(yīng)誘導(dǎo)因子caspase-3熒光強(qiáng)度顯著增加（P＜0.05）。Western blot結(jié)果顯示，模型組大鼠脊髓組織中cleaved caspase-3表達(dá)量顯著增加（P＜0.05）。與模型組相比，石蒜堿給藥組大鼠脊髓caspase-3熒光強(qiáng)度降低（P＜0.05），cleaved caspase-3表達(dá)量也下調(diào)（P＜0.05）。進(jìn)而，我們檢測(cè)了Bax蛋白表達(dá)變化。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，模型組大鼠脊髓組織中Bax蛋白表達(dá)量顯著上調(diào)（P＜0.05）；而經(jīng)石蒜堿給藥后，Bax表達(dá)顯著降低（P＜0.05）。見圖5。

6 鞘內(nèi)注射AICAR激活A(yù)MPK緩解大鼠痛覺(jué)行為

與模型組大鼠相比，AICAR給藥組大鼠50%縮足閾值顯著升高（P＜0.05），自發(fā)縮足次數(shù)顯著減少（P＜0.05），轉(zhuǎn)棒停留時(shí)間和運(yùn)動(dòng)距離均顯著增加（P＜0.05）。同時(shí)，AICAR給藥組大鼠脊髓背角處p-AMPK表達(dá)量顯著升高（P＜0.05）。見表1和圖6。

Figure 2.Effect of lycorine on spinal astrocytic activation in arthritic rats.A：representative fluorescence images of GFAP（scale bar=20 μm）；B：relative fluorescence intensity of GFAP in spinal dorsal horn；C：representative Western blot bands and relative gray values of GFAP in spinal dorsal horn.Mean±SD.n=5.*P＜0.05 vs control group；#P＜0.05 vs model group.圖2石蒜堿對(duì)關(guān)節(jié)炎大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響

Figure 3.Diagram of the interaction between lycorine and AMPK.Green color presents lycorine，blue color presents AMPK，and red color presents the residues of AMPK binding with lycorine.圖3石蒜堿和AMPK相互作用示意圖

7 dorsomorphin阻斷石蒜堿對(duì)AMPK磷酸化的上調(diào)作用

在C6細(xì)胞水平，與對(duì)照組相比，石蒜堿給藥可顯著上調(diào)p-AMPK水平（P＜0.05）；而石蒜堿和dorsomorphin共同給藥處理后，與石蒜堿給藥組相比，p-AMPK水平顯著下調(diào)（P＜0.05），見圖7。

討 論

我們研究顯示石蒜堿可結(jié)合AMPK并緩解關(guān)節(jié)炎痛。AMPK是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶，與各種類型的疼痛有關(guān)。AMPK第172位蘇氨酸的磷酸化可導(dǎo)致AMPK活性增加1 000倍。二甲雙胍和白藜蘆醇均可激活A(yù)MPK第172位蘇氨酸磷酸化并在炎癥痛、神經(jīng)損傷、糖尿病性神經(jīng)疼痛以及腫瘤痛中發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用［18］。在炎癥痛模型大鼠中，AMPK特異性激動(dòng)劑AICAR給藥可抑制促炎因子IL-1β表達(dá)并緩解炎癥痛，而AMPK抑制劑dorsomorphin和shRNA處理逆轉(zhuǎn)了AICAR的鎮(zhèn)痛作用［19］。小檗堿可增加AMPK第172位蘇氨酸磷酸化并減輕關(guān)節(jié)炎痛，而在AMPK敲除小鼠中不發(fā)揮作用［20］。同時(shí)，研究報(bào)道，在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中，石蒜堿可促進(jìn)AMPK-Y172磷酸化進(jìn)而促進(jìn)自噬并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［21］。在糖尿病周圍神經(jīng)病變模型小鼠中，石蒜堿給藥激活A(yù)PMK通路并促進(jìn)細(xì)胞自噬改善周圍神經(jīng)功能［9］。在本研究中，顯示石蒜堿和AICAR均可激活A(yù)MPK-Y172磷酸化并緩解關(guān)節(jié)炎大鼠疼痛行為學(xué)。因此，我們推測(cè)，石蒜堿可成為一種緩解關(guān)節(jié)炎疼痛的潛在藥物。

Figure 4.Effect of lycorine on spinal AMPK activation of rats.A：representative fluorescence images of p-AMPK（scale bar=20 μm）；B：relative fluorescence intensity of p-AMPK in spinal dorsal horn；C：representative Western blot bands and relative gray values of p-AMPK in spinal cord.Mean±SD.n=5.*P＜0.05 vs control group；#P＜0.05 vs model group.圖4石蒜堿對(duì)大鼠脊髓AMPK活性的影響

Figure 5.Effect of lycorine on Bax/caspase-3 signaling of spinal cord in rats.A：representative fluorescence images of caspase-3（scale bar=20 μm）；B：relative fluorescence intensity of caspase-3 in spinal dorsal horn；C：representative Western blot bands and relative gray values of Bax and cleaved caspase-3 in spinal cord.Mean±SD.n=5.*P＜0.05 vs control group；#P＜0.05 vs model group.圖5石蒜堿對(duì)大鼠脊髓Bax/caspase-3信號(hào)的影響

Figure 6.Effect of AICAR on spinal AMPK in arthritic rats.Mean±SD.n=5.*P＜0.05 vs control group；#P＜0.05 vs model group.圖6 AICAR對(duì)關(guān)節(jié)炎大鼠脊髓AMPK的影響

Figure 7.Dorsomorphin blocked the up-regulation of AMPK phosphorylation by lycorine at cellular level.Mean±SD.n=5.*P＜0.05 vs control group；#P＜0.05 vs lycorine group.圖7在細(xì)胞水平dorsomorphin阻斷石蒜堿對(duì)AMPK磷酸化的上調(diào)作用

石蒜堿可激活A(yù)MPK降低脊髓炎癥。AMPK作為一種能量傳感激酶，是一個(gè)抗炎的作用靶點(diǎn)［22］。在動(dòng)脈粥樣硬化模型中顯示，AMPK激活可降低NFκB途徑的激活及IL-1β的釋放［23］。在慢性疼痛模型中，AMPK激活可降低IL-1β表達(dá)同時(shí)抑制炎性疼痛［24］。在腫瘤模型中，二甲雙胍可激活A(yù)MPK，增強(qiáng)Bax信號(hào)，促進(jìn)細(xì)胞凋亡［25］。Bax信號(hào)可促進(jìn)caspase-3介導(dǎo)的IL-1β表達(dá)［26］。在肝癌細(xì)胞中，小檗堿給藥激活A(yù)MPK，增加Bax/Bcl-2的比例，激活caspase-3和9，從而抑制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)［27］。在順鉑誘導(dǎo)的腎損傷模型中，AMPK抑制劑dorsomorphin及siRNA處理可抑制APMK磷酸化、Bax表達(dá)、caspase3激活和細(xì)胞凋亡［28］。在阿爾茨海默疾病中顯示，caspase-3可介導(dǎo)GFAP的裂解并激活星形膠質(zhì)細(xì)胞［29］。在本研究中觀察到，石蒜堿給藥可激活A(yù)MPK、降低脊髓Bax表達(dá)、抑制caspase-3和膠質(zhì)細(xì)胞活化從而抑制脊髓炎癥反應(yīng)。因此，上述結(jié)果表明，石蒜堿可降低脊髓炎癥從而緩解大鼠骨關(guān)節(jié)炎痛。

綜上所述，石蒜堿靶向激活A(yù)MPK通路抑制脊髓炎癥從而緩解實(shí)驗(yàn)性大鼠關(guān)節(jié)炎痛。該研究為石蒜堿作為關(guān)節(jié)炎鎮(zhèn)痛藥物開發(fā)提供參考資料。