miR-23a-3p通過(guò)調(diào)控SIRT1/FOXO1通路影響NAFLD小鼠肝臟脂質(zhì)代謝的研究*

孫雪蓮，楊佳楠，姜同連，朱福彬，于閃閃，李 響，2，李洪志，2△

（1北華大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，吉林 吉林 132000；2吉林省腎臟病基因測(cè)序精準(zhǔn)醫(yī)療創(chuàng)新中心，吉林 吉林 132000）

非酒精性脂肪性肝?。╪on-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是由非酒精因素引起的肝臟內(nèi)脂肪蓄積或脂肪合成、利用失衡的一類(lèi)肝臟疾病總稱(chēng)［1］。臨床表現(xiàn)范圍廣泛，從無(wú)癥狀的肝臟脂肪變性到更為嚴(yán)重的非酒精性脂肪性肝炎（nonalcoholic steatohepatitis，NASH）、肝硬化和肝癌，常見(jiàn)于糖尿病和代謝綜合征患者［2］。對(duì)NAFLD的治療常采用胰島素增敏劑、腸促胰島素藥物、減肥降脂藥物以及減脂手術(shù)和極少的肝移植手術(shù)等方法［3］。微小RNA（microRNA，miRNA，miR）是一種由18～25個(gè)核苷酸組成的非編碼RNA，參與調(diào)節(jié)眾多生物學(xué)功能，包括細(xì)胞增殖、蛋白質(zhì)分泌、脂質(zhì)代謝、細(xì)胞炎癥和生存［4］。我們前期的研究證明，miR-23b可以通過(guò)調(diào)控靶 基 因ACOT4改 善NAFLD［5］。而miR-23a是 否 在NAFLD中發(fā)揮作用還不明確。本研究通過(guò)高脂飲食（high-fat diet，HFD）誘導(dǎo)miR-23a-3p基因敲除（miR-23a KO）小鼠，建立NAFLD模型，驗(yàn)證miR-23a-3p對(duì)小鼠肝臟沉默信息調(diào)節(jié)因子1（silent information regulator 1，SIRT1）/叉 頭 框 蛋 白O1（forkhead box O1，F(xiàn)OXO1）信號(hào)通路的調(diào)控作用，以期為NAFLD研究提供一定參考。

材料和方法

1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)8周齡雄性C57BL/6小鼠20只，體重20～24 g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)為SCXK（京）2016-0006；miR-23a KO小鼠訂購(gòu)于江蘇集萃藥康生物科技有限公司［許可證號(hào)為SCXK（蘇）2018-0008；miR-23a KO雜合子小鼠合籠后，通過(guò)基因型鑒定篩選子代純合子繼續(xù)繁育，選取雄性純合子小鼠，8周齡，體重在20～24 g之間用于實(shí)驗(yàn)］；db/db小鼠肝臟組織存放于本實(shí)驗(yàn)室-80℃冰箱；高脂飼料購(gòu)自北京科奧協(xié)力飼料有限公司。小鼠繁殖、飼養(yǎng)和基因型鑒定在北華大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院吉林省腎臟病基因測(cè)序精準(zhǔn)醫(yī)療科技創(chuàng)新中心動(dòng)物室完成。實(shí)驗(yàn)所用動(dòng)物經(jīng)北華大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并按《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)管理和使用辦法》進(jìn)行。

2 主要試劑

L-02和HepG2細(xì)胞株購(gòu)自北納創(chuàng)聯(lián)生物科技有限公司；miR-23a-3p類(lèi)似物及檢測(cè)試劑盒購(gòu)自廣州銳博生物有限公司；總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三脂（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）測(cè)定試劑盒購(gòu)自南京建成生物有限公司；引物序列購(gòu)自生工生物工程（上海）股份有限公司；RNA提取試劑盒購(gòu)自Invitrogen；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒SYBR Green Master Mix購(gòu)自Roche；pmirGLO Dual-Luciferase載體及Dual-Luciferase?Reporter Assay System購(gòu) 自Promega；SIRT1、FOXO1和Ac-FOXO1抗體購(gòu)自Abcam；AMP活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）、p-AMPK和過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α

（peroxisome proliferator-activated receptor α，PPARα）抗體購(gòu)自Cell Signaling Technology；β-actin抗體和Ⅱ抗購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司；油紅O染色試劑盒購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司。

3 主要方法

3.1 動(dòng)物造模與分組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分4組：野生型（wild-type，WT）C57BL/6小鼠正常飲食（normal diet，ND）組和HFD組及miR-23a KO小鼠ND組和HFD組，每組10只。各組小鼠自由飲水進(jìn)食，分籠飼養(yǎng)在明暗各12 h、22～26℃的標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物室。8周齡時(shí)給予高脂飼料喂養(yǎng)建立NAFLD模型，持續(xù)喂養(yǎng)12周，定期記錄體重變化。20周齡時(shí)，依據(jù)文獻(xiàn)NAFLD動(dòng)物模型標(biāo)準(zhǔn)［6］，篩選符合實(shí)驗(yàn)要求的動(dòng)物（WT和miR-23a KO小鼠各6只），禁食不禁水12 h，次日上午稱(chēng)重，腹腔注射10%水合氯醛（3.5 mL/kg）麻醉，眼底靜脈竇取血，1 200×g離心15 min，分離血清保存于-80℃冰箱。分離肝臟組織，記錄肝臟重量，一部分保存于-80℃冰箱，一部分用于形態(tài)學(xué)染色固定于10%的甲醛溶液中備用。肝臟指數(shù)（%）=肝臟濕重（g）/體重（g）×100%。

3.2 qPCR檢測(cè)基因表達(dá)量用RNA提試劑盒提取肝臟細(xì)胞和組織總RNA，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。采用qPCR法檢測(cè)肝臟細(xì)胞和組織中miR-23a-3p的表達(dá)情況以及HFD后小鼠肝臟中與脂代謝有關(guān)基因的表達(dá)情況。引物序列見(jiàn)表1。反應(yīng)體系（20 μL）：cDNA 2 μL，2×SYBR Mix 10 μL，正反向引物各1 μL，ddH2O 6 μL。qPCR條件：95℃5 min；95℃30 s，60℃30 s，72℃30 s，45個(gè)循環(huán)；72℃5 min。采集循環(huán)退火后的熒光信號(hào)。

3.3 HE染色和油紅O染色肝臟組織的HE染色：經(jīng)10%的甲醛溶液固定后，經(jīng)脫水、包埋處理，制作4 μm石蠟切片，經(jīng)過(guò)烘片、脫水、二甲苯、梯度乙醇、蘇木素-伊紅染色，中性樹(shù)脂封片拍照。油紅O染色：肝臟組織制作4 μm冰凍切片，按照油紅O染色試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作，甘油封片，拍照。

3.4 生化指標(biāo)檢測(cè)血清中脂質(zhì)指標(biāo)（TC、TG、HDL-C和LDL-C）及肝功能指標(biāo)（ALT和AST）按照試劑盒說(shuō)明利用酶標(biāo)儀法進(jìn)行檢測(cè)。

3.5 雙螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)利用PCR方法，根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)小鼠SIRT1基因序列信息，設(shè)計(jì)3′-UTR擴(kuò)增引物，以正常小鼠mRNA逆轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板擴(kuò)增3′-UTR序列，測(cè)序正確后連接到pmirGLO Dual-Luciferase載體中，轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后按照Dual-Luciferase?Reporter Assay System說(shuō)明進(jìn)行熒光值的測(cè)定。

3.6 Western blot檢測(cè)取肝臟組織80 mg，盡量剪碎，加入適量PMSF裂解液和0.5 mm鋯珠，利用組織研磨機(jī)勻漿3 min，至于冰上10 min，4℃、10 000×g離心10 min。取上清用BCA試劑盒蛋白定量；取30 μg蛋白與等體積2×上樣緩沖液混合煮沸8 min后進(jìn)行SDS-PAGE，并轉(zhuǎn)移至PVDF膜；2% BSA室溫封閉1 h，PBST洗膜；Ⅰ抗4℃孵育過(guò)夜，PBST洗膜；加入對(duì)應(yīng)的Ⅱ抗，室溫孵育1 h，PBST洗膜后進(jìn)行ECL顯影。采用Image Lab軟件進(jìn)行灰度值分析。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本實(shí)驗(yàn)所得到的數(shù)據(jù)應(yīng)用GraphPad Prism 8.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示。兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)；多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），兩兩比較采用Student-Newman-Keuls法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 動(dòng)物和細(xì)胞模型中miR-23a-3p的表達(dá)變化

C57BL/6小鼠給予HFD 12周后，通過(guò)qPCR檢測(cè)肝臟中miR-23a-3p的表達(dá)情況，結(jié)果如圖1A顯示，與ND（WT）組相比較，HFD（WT）組miR-23a-3p的表達(dá)顯著升高（P＜0.01），同樣，5月齡db/db小鼠的肝臟中miR-23a-3p的表達(dá)也顯著高于ND（WT）組（P＜0.01）；在對(duì)L-02和HepG2細(xì)胞通過(guò)棕櫚酸油酸誘導(dǎo)后，與正常組對(duì)比，miR-23a-3p的表達(dá)同樣顯著升高（P＜0.05），見(jiàn)圖1B。

Figure 1.Expression of miR-23a-3p in animal（A）and cellular（B）models of fatty liver.ND：normal diet；HFD：high-fat diet；WT：wild-type；PA：palmitic acid；OA：oleic acid.Mean±SD.**P＜0.01 vs ND（WT）group；△P＜0.05 vs control group.圖1脂肪肝動(dòng)物模型與脂肪肝細(xì)胞模型中miR-23a-3p的表達(dá)

為驗(yàn)證基因敲除是否成功，對(duì)miR-23a KO小鼠主要組織器官miR-23a-3p表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，與WT組比較，miR-23a KO小鼠各組織器官miR-23a-3p表達(dá)均顯著降低（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 miR-23a KO小鼠器官組織中miR-23a-3p的表達(dá)Table 2.Expression of miR-23a-3p in miR-23a KO mice（Mean±SD.n=10）

2 HFD對(duì)miR-23a KO小鼠體重、肝臟臟器系數(shù)和肝臟形態(tài)學(xué)的影響

各組小鼠的體重變化如圖2A所示，與ND（WT）組比較，HFD（WT）組小鼠體重顯著升高（P＜0.01）；與HFD（WT）組比較，HFD（miR-23a KO）組小鼠的體重顯著降低（P＜0.01）。肝臟指數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)圖2B，與ND（WT）組比較，HFD（WT）組小鼠的肝臟指數(shù)顯著升高（P＜0.01）；與HFD（WT）組比較，HFD（miR-23a KO）組小鼠的肝臟指數(shù)顯著降低（P＜0.05）。而與ND（WT）組比較，ND（miR-23a KO）組小鼠體重和肝臟指數(shù)均無(wú)顯著變化。

HE染色顯示，ND（WT）組肝臟組織形態(tài)學(xué)正常，肝細(xì)胞分界明顯，細(xì)胞核圓而清晰；而HFD（WT）組出現(xiàn)肝細(xì)胞索紊亂，細(xì)胞腫脹，胞質(zhì)疏松，可見(jiàn)大量脂肪空泡；HFD（miR-23a KO）組肝細(xì)胞內(nèi)脂滴減少，大部分接近正常形態(tài)。油紅O染色顯示，ND（WT）組小鼠肝細(xì)胞內(nèi)未見(jiàn)明顯深紅色脂滴；而HFD（WT）組視野內(nèi)可見(jiàn)大面積彌漫性的深紅色脂滴蓄積；與HFD（WT）組比較，HFD（miR-23a KO）組肝臟組織脂滴沉積明顯減少，脂質(zhì)蓄積減輕。見(jiàn)圖2C。

3 HFD對(duì)miR-23a KO小鼠肝功能相關(guān)生化指標(biāo)的影響

肝功能相關(guān)生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果顯示，與ND（WT）組比較，HFD（WT）組小鼠血清TC、TG、AST、ALT和LDL-C水平顯著升高（P＜0.01），HDL-C水平顯著降低（P＜0.01）；與HFD（WT）組小鼠比較，HFD（miR-23a KO）組小鼠血清TC、TG、AST和LDL-C水平顯著降低（P＜0.05），HDL-C水平顯著升高（P＜0.05），ALT降低趨勢(shì)不顯著，見(jiàn)圖3。

4 miR-23a KO小鼠肝臟組織中脂代謝相關(guān)基因表達(dá)水平

Figure 2.The body weight（A），liver index（B）and liver morphological changes（C）of mice in each group.Mean±SD.n=10.**P＜0.01 vs ND（WT）group；#P＜0.05，##P＜0.01 vs HFD（WT）group.圖2高脂飲食后各組小鼠體重、肝臟系數(shù)及肝臟形態(tài)學(xué)變化

qPCR結(jié)果顯示，與ND（WT）組比較，HFD（WT）組Srebp1、Fas、Pparγ和Acc1的mRNA水平顯著升高（P＜0.05），Pparα和Cpt1的mRNA水平顯著降低（P＜0.01）；與HFD（WT）組比較，HFD（miR-23a KO）組Srebp1、Fas、Pparγ和Acc1的mRNA水 平顯 著降 低（P＜0.05），Cpt1的mRNA水平顯著升高（P＜0.05），而Pparα的mRNA水平升高趨勢(shì)不顯著，見(jiàn)圖4。

5 雙螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)證明miR-23a-3p靶定SIRT1基因

通過(guò)TargetScan數(shù)據(jù)庫(kù)（http://www.targetscan.org/.）預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)，miR-23a-3p可以與SIRT1的3′-UTR序列反向互補(bǔ)結(jié)合，見(jiàn)圖5A。雙螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示，miR-23a-3p模擬物顯著抑制了螢光素酶的活性，而當(dāng)SIRT13′UTR中的結(jié)合位點(diǎn)發(fā)生突變時(shí)，這種抑制完全消失，見(jiàn)圖5B。

6 miR-23a KO影響SIRT1/FOXO1通路

將各組實(shí)驗(yàn)小鼠肝臟中總蛋白進(jìn)行Western blot檢測(cè)，結(jié)果如圖6所示，與HFD（WT）組比較，HFD（miR-23a KO）組SIRT1和PPARα表達(dá)顯著增加（P＜0.05），p-AMPK/AMPK比值顯著升高（P＜0.05），而Ac-FOXO1/FOXO1比值顯著降低（P＜0.01）。

討 論

隨著人們生活水平的提高和生活習(xí)慣、飲食結(jié)構(gòu)等因素的改變，NAFLD逐漸成為一種全球性高發(fā)病率的代謝性綜合征，最終可能導(dǎo)致肝臟纖維化、肝硬化或肝細(xì)胞癌的發(fā)生，而且有低齡化的趨勢(shì)，并與高脂血癥、肥胖等密切相關(guān)［7］。研究表明，肝臟中的脂肪堆積引起氧化應(yīng)激或炎癥細(xì)胞因子的釋放，從而導(dǎo)致脂肪性肝炎、纖維化，甚至非酒精性脂肪性肝炎［2］。因此，迫切需要探索能夠抑制NAFLD中脂質(zhì)積累的有效治療方案。在本研究中，我們指出抑制miR-23a-3p的表達(dá)可以緩解高脂誘導(dǎo)的肝臟脂質(zhì)的積累，進(jìn)而減弱NAFLD小鼠模型的肝損傷，為研究NAFLD的發(fā)病機(jī)制提供新線索。

Figure 3.Effects of high-fat diet（HFD）on biochemical indexes of liver function in miR-23a-3p knockout（miR-23a KO）mice.Mean±SD.n=10.**P＜0.01 vs ND（WT）group；#P＜0.05，##P＜0.01 vs HFD（WT）group.圖3高脂飲食對(duì)miR-23a-3p基因敲除小鼠肝功能的影響

Figure 4.The mRNA expression of lipid metabolism-related genes in mouse liver tissues.The mRNA levels of the genes involved in lipid anabolism，including Srebp1，F(xiàn)as，Pparγ，Pparα，Acc1 and Cpt1，were detected by qPCR.Mean±SD.n=10.*P＜0.05，**P＜0.01 vs ND（WT）group；#P＜0.05 vs HFD（WT）group.圖4小鼠肝臟組織中脂代謝相關(guān)基因的mRNA表達(dá)

Figure 5.Dual-luciferase reporter assay to validate the targeting of miR-23a-3p to SIRT1.A：sequence diagram of target gene loci；B：wild-type SIRT1 3′-UTR（3′-UTR WT）and mutant SIRT1 3′-UTR（3′-UTR Mut）constructs were inserted into pmir-GLO plasmid and co-transfected with miR-23a-3p into 293T cells，and then the luciferase activity was quantified.Mean±SD.n=3.**P＜0.01 vs control group.圖5雙螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證miR-23a-3p與SIRT1的靶向關(guān)系

Figure 6.Relative protein levels of SIRT1，p-AMPK/AMPK，Ac-FOXO1/FOXO1 and PPARα in hepatic tissues of mice in different groups were detected by Western blot.Mean±SD.n=10.*P＜0.05，**P＜0.01 vs HFD（WT）group.圖6 Western blot檢測(cè)肝臟組織中SIRT1、p-AMPK/AMPK、Ac-FoxO1/FoxO1及PPARα的蛋白水平

以往研究證實(shí)，一些miRNAs包括miR-21、miR-27a、miR-34a和miR-122等，在NAFLD中發(fā)揮一定的調(diào)控作用。miR-21在NASH患者的肝臟組織中高表達(dá)［4］，抑制miR-21可以減少肝細(xì)胞損傷和纖維化的發(fā)生；miR-27a通過(guò)抑制PPARg抑制 脂 肪 生成［8］；miR-34a是肝臟中對(duì)脂質(zhì)代謝調(diào)控最靈敏的miRNA之一，沉默miR-34a導(dǎo)致SIRT1和PPARα表達(dá)增加，從而改善肝臟脂肪變性［9］；miR-122是肝臟中表達(dá)豐度較高的miRNA［4］，NASH患者miR-122水平顯著低于正常人，通過(guò)沉默miR-122，使FAS、SREBP-1c和SREBP-2表達(dá)增加。而miR-23a和miR-23b是miR-23～27～24-2超家族成員，miR-24和miR-27皆參與脂質(zhì)代謝的調(diào)控。我們前期研究證實(shí)，抑制或敲除miR-23b可以誘導(dǎo)小鼠出現(xiàn)肝臟脂肪堆積，在糖尿病肥胖db/db小鼠體內(nèi)過(guò)表達(dá)miR-23b能夠逆轉(zhuǎn)肝臟炎性的改變和纖維化程度，并證實(shí)miR-23b可以通過(guò)靶定ACOT4進(jìn)而調(diào)控NAFLD進(jìn)展［5］。Li等［10］證實(shí)miR-23a/b-3p可以通過(guò)調(diào)節(jié)SREBP-1c和FAS促進(jìn)肝臟脂質(zhì)積累，但實(shí)驗(yàn)對(duì)象存在一定局限，以HFD喂養(yǎng)C57BL/6小鼠、db/db小鼠和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)開(kāi)展，沒(méi)有涉及基因敲除動(dòng)物模型。在本研究中，我們構(gòu)建和繁育miR-23a KO小鼠作為研究對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行HFD誘導(dǎo)，結(jié)果顯示miR-23a KO后肝臟脂肪積累減少，同時(shí)肝臟生化指標(biāo)得到改善，脂代謝相關(guān)基因Srebp1、Fas、Pparγ、Acc1、Pparα和Cpt1發(fā)生顯著改變，這些結(jié)果進(jìn)一步表明，miR-23a-3p在調(diào)控肝臟脂肪細(xì)胞分化方面發(fā)揮著重要作用。

SIRT1是脂質(zhì)代謝和糖代謝中關(guān)鍵的調(diào)節(jié)分子之一，它可以改善肝臟和其他組織的胰島素敏感性，并減輕肝臟脂肪發(fā)生變性［11］。本研究中，HFD誘導(dǎo)后，相比于WT，miR-23a KO小鼠SIRT1表達(dá)上調(diào)，并伴隨脂質(zhì)積累減少。SIRT1參與預(yù)防肝臟脂肪變性已有相關(guān)研究報(bào)道，并證實(shí)SIRT1的表達(dá)水平在NAFLD患者中下降［12］。通過(guò)雙螢光素酶實(shí)驗(yàn)我們證實(shí)了miR-23a-3p與SIRT1之間的靶向關(guān)系，而SIRT1作為第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的sirtuins家族成員，可以通過(guò)非組蛋白去乙?；饔谜{(diào)節(jié)多種代謝過(guò)程，包括PGC-1α、胰島素受體底物2、PPARα、PPARγ、SREBP等進(jìn)而調(diào)節(jié)胰島素分泌、脂肪生成和肌細(xì)胞生成。我們通過(guò)qPCR方法檢測(cè)了HFD誘導(dǎo)的miR-23a KO小鼠肝臟中脂代謝相關(guān)基因的表達(dá)，結(jié)果顯示Srebp1、Fas、Pparγ和Acc1顯著降低，Cpt1顯著升高，可能是因miR-23a KO后使SIRT1上調(diào)，進(jìn)而影響了這些基因表達(dá)變化。同時(shí)，F(xiàn)OXO1轉(zhuǎn)錄因子在脂肪生成中具有重要作用，它在早期階段抑制脂肪細(xì)胞的分化［13］。有研究表明，SIRT1可以通過(guò)與FOXO1的多個(gè)賴(lài)氨酸殘基發(fā)生去乙?；饔?，激活FOXO1表達(dá)進(jìn)而增加脂聯(lián)素的分泌［14］。本研究的Western blot結(jié)果顯示，HFD誘導(dǎo)后miR-23a KO小鼠PPARα和p-AMPK/AMPK表達(dá)顯著增加，而Ac-FOXO1/FOXO1表達(dá)顯著降低，這一結(jié)果初步證實(shí)miR-23a可以通過(guò)調(diào)控SIRT1/FOXO1影響肝臟脂肪代謝。因此，下調(diào)miR-23a-3p可以降低HFD造成的肝臟脂質(zhì)蓄積及血脂異常在內(nèi)的代謝紊亂，緩解NAFLD小鼠肝臟的損傷情況。盡管我們的研究表明系統(tǒng)性敲除miR-23a-3p有效降低了HFD誘導(dǎo)下體重增長(zhǎng)和脂肪蓄積，但這一現(xiàn)象需要在HFD誘導(dǎo)下才有顯著的表現(xiàn)。進(jìn)一步證實(shí)miR-23a-3p在NAFLD中的直接作用，還需使用肝臟組織特異性敲除miR-23a-3p動(dòng)物來(lái)進(jìn)行后續(xù)深入的研究。同時(shí)miR-23a和miR-23b作為同一簇的miRNA，在發(fā)揮脂代謝調(diào)控作用時(shí)，相互之間的關(guān)系是怎樣的？后續(xù)需要利用miR-23a和miR-23b雙敲除小鼠予以驗(yàn)證。

綜上所述，我們的研究證明miR-23a-3p在肝臟脂肪代謝中發(fā)揮一定的調(diào)控作用，miR-23a-3p的缺失可誘導(dǎo)SIRT1表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而通過(guò)去乙?；饔眉せ頕OXO1及下游相關(guān)因子，有助于緩解HFD誘導(dǎo)的肝臟脂肪蓄積，減輕肝臟炎癥和纖維化損傷。