羊鏈球菌病病原分離鑒定及藥敏試驗

張寶泉

（黑龍江職業(yè)學(xué)院，哈爾濱 150028）

鏈球菌在自然界廣泛分布并且經(jīng)常構(gòu)成人類和動物菌群的一部分，擁有多種血清型（如A、B、M型等），不同血清型的鏈球菌致病性存在很大的差異性，是一種典型的人畜共患傳染性病原。羊鏈球菌病是羊的一種傳染性疫病，民間俗稱嗓喉病。該病的發(fā)生主要是由溶血性鏈球菌引起的一種嚴(yán)重危害羊的急性、發(fā)熱性傳染病，常發(fā)于冬春季節(jié)。該病的傳染方式主要是經(jīng)消化道和呼吸道進(jìn)行傳播，感染后的病羊常表現(xiàn)為下頜淋巴結(jié)與咽喉腫脹，各臟器出血、大葉性肺炎、膽囊腫大等，常常與其他病原菌混合感染，羊群發(fā)病后常造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。羊鏈球菌病在我國西北地區(qū)存在時間較為長久，20世紀(jì)50年代在青海省出現(xiàn)并流行，之后傳播至四川、新疆、甘肅、內(nèi)蒙古、河北等地。近年來，隨著全國羊養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展及規(guī)模不斷壯大，智能化設(shè)備設(shè)施的投入和使用進(jìn)一步提高了羊的養(yǎng)殖效率。但由于專業(yè)技術(shù)人員數(shù)量配備不足，專業(yè)基礎(chǔ)知識掌握不扎實(shí)，場區(qū)養(yǎng)殖管理混亂等因素，造成羊的傳染性疫病頻發(fā)，尤其是像羊鏈球菌一類的急性傳染病。對于小規(guī)模養(yǎng)殖戶，由于養(yǎng)殖技術(shù)缺乏，常常出現(xiàn)在發(fā)生該病后大量盲目選用抗生素進(jìn)行治療，導(dǎo)致耐藥菌不斷出現(xiàn)，使用現(xiàn)有的抗生素難以控制該病的傳播和流行，因此及時掌握羊鏈球病的發(fā)病特點(diǎn)、臨床特征、耐藥性、防治技術(shù)等情況，對于提升羊的養(yǎng)殖技術(shù)、增加羊場的養(yǎng)殖效率和效益具有重要作用。

1 羊鏈球菌病的病原

羊鏈球菌病的病原是羊鏈球菌，通常會根據(jù)菌落形態(tài)、溶血、生化反應(yīng)和血清學(xué)特異性進(jìn)行分類，一般根據(jù)血瓊脂溶血的類型將其分為三組：β溶血（紅細(xì)胞透明、完全溶解）、α溶血（不完全、綠色溶血）和γ溶血（無溶血）。血清學(xué)分組基于細(xì)胞壁碳水化合物（A組~V組）、細(xì)胞壁菌毛相關(guān)蛋白和B組鏈球菌多糖莢膜中的抗原差異。羊鏈球菌為需氧或兼性厭氧菌，在有氧和無氧的環(huán)境中均可生長，無運(yùn)動性，一般條件下不形成芽孢，革蘭氏染色呈現(xiàn)陽性，球狀?？纱嬖谟诓⊙虻母鱾€臟器組織之中，尤其是在呼吸系統(tǒng)器官，如鼻腔、氣管和肺中分布最多。不同血清型的鏈球菌具有不同的致病方式，如A組鏈球菌通過其表面特有的M蛋白和磷壁酸、具有抑制吞噬作用的透明質(zhì)酸、細(xì)胞外產(chǎn)生的致熱毒素等致病。

2 羊鏈球菌病的流行病學(xué)特點(diǎn)

病羊和帶菌羊是羊鏈球菌病的主要傳染源，該病通過呼吸道、消化道或者損傷的皮膚、黏膜以及節(jié)肢動物（虱、蠅等）叮咬而引起傳播，病死羊的皮毛、肉等也能成為傳播的病原。該病常發(fā)生在寒冷的冬季和初春季節(jié)，尤其是在飼草資源匱乏的時期，常呈現(xiàn)地方流行性或者散發(fā)性。該病菌可分布在病羊的任何臟器以及排泄物、分泌物中，如氣管分泌物、鼻液、糞便、尿液等，該病菌對外界環(huán)境具有較強(qiáng)的抵抗力，常溫條件下能夠存活100d。

3 羊鏈球菌病的臨床癥狀及病理變化

羊感染鏈球菌后一般會有1~3 d的潛伏期，潛伏期之后多呈急性經(jīng)過，部分病羊往往突然發(fā)病死亡，且沒有表現(xiàn)出任何明顯的癥狀。病情稍輕的患病羊常表現(xiàn)出精神萎頓、食欲減退、反芻遲緩甚至停止的癥狀，通常在1~3 d內(nèi)死亡，個別癥狀較輕的羊能夠耐過，之后表現(xiàn)出預(yù)后不良的癥狀。病初病羊表現(xiàn)為體溫升高，最高可達(dá)41℃，呼吸加快，達(dá)到50~75次·min-1；脈搏達(dá)到120~160次·min-1，精神沉郁，垂頭弓背，呆立不動，食欲不振，停止反芻，可視黏膜（如眼角膜）呈現(xiàn)充血的狀態(tài)，不停流淚，同時有膿性分泌物產(chǎn)生，如黏膿性鼻液，部分病羊的咽喉部有出血腫脹的情況，觸診能夠感受到發(fā)熱腫脹的狀態(tài)，個別羊還會表現(xiàn)出呼吸困難、間斷咳嗽的情況。妊娠母羊在孕期感染了羊鏈球菌會造成腸胃功能減弱和消化功能減退，子宮黏膜出現(xiàn)結(jié)節(jié)，還可能發(fā)生流產(chǎn)[1]。病羊臨死前臥地不起，四肢呈游泳狀劃動，四肢痙攣和頸部肌肉痙攣，部分羊不斷發(fā)出尖叫聲，有時表現(xiàn)出磨牙等神經(jīng)癥狀。

通過對病羊進(jìn)行病理解剖可見下頜淋巴結(jié)出血、腫大，局部伴有壞死；呼吸系統(tǒng)組織，如鼻、咽喉、氣管黏膜呈現(xiàn)廣泛性出血點(diǎn)、血絲，咽喉部會出現(xiàn)膠凍樣浸潤；肺臟呈現(xiàn)明顯腫大和出血的情況，肺大葉可見壞死灶，個別病羊的肺臟與胸壁呈現(xiàn)粘連的情況；胸腔、腹腔有大量黃色渾濁的積液；肝臟、膽囊腫大；脾臟明顯腫大，顏色呈現(xiàn)暗紅色；腎臟被膜難以剝離，其質(zhì)地變得脆、軟；大網(wǎng)膜、腸系膜出現(xiàn)大面積的出血點(diǎn)，淋巴結(jié)腫大；胃腸道多數(shù)呈現(xiàn)鼓氣現(xiàn)象，內(nèi)容物稀軟并呈流水樣流出；膀胱黏膜上也會呈現(xiàn)出點(diǎn)狀出血。

4 羊鏈球菌的分離鑒定

4.1 染色鏡檢和細(xì)菌培養(yǎng)

常常無菌采取病變的部位，包括病羊胸腔、腹腔的滲出液，肺、肝、脾、腎、淋巴結(jié)組織以及血液等。將采集的滲出液或者組織進(jìn)行涂片或者接片，然后進(jìn)行革蘭氏染色、瑞氏染色。通過鏡檢可見成對或4~6個短鏈狀的革蘭氏陽性球形菌，通過短暫時間的培養(yǎng)后，可見到呈現(xiàn)長鏈狀排列的革蘭氏陽性球形菌；瑞氏染色后可見有莢膜，多為成對或者3~5個短鏈狀排列的球形菌，并且分布比較集中。病料接種于普通培養(yǎng)基或者血瓊脂平板上37℃培養(yǎng)24 h，普通培養(yǎng)基上可見表面光滑、灰白透明、露滴狀的單個菌落，將其單個菌落進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢同樣也能夠看到成對或者短鏈狀排列的革蘭氏陽性菌[2]；在血瓊脂平板上生長出無色、透明、有β型溶血環(huán)的露滴狀菌落，溶血環(huán)直徑為1.0 mm左右。病料接種在馬丁肉湯中培養(yǎng)24 h后，肉湯變混濁，肉眼可見有少量絮狀沉淀，繼續(xù)培養(yǎng)1周后可見培養(yǎng)基部變?yōu)槌吻濉?/p>

4.2 生化試驗

采用生化試驗進(jìn)行羊鏈球菌的鑒定是在對病料進(jìn)行培養(yǎng)基培養(yǎng)生成單個菌落之后進(jìn)行的，一般是采用無菌棉簽或接種環(huán)將菌株分別接種到葡萄糖、蔗糖、乳糖、甘露醇等微量糖發(fā)酵管和明膠、0.1%美藍(lán)牛乳等生化培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，根據(jù)培養(yǎng)記錄結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)生化特性表對照后確定其血清類型。

4.3 致病性檢查

致病性檢查原理是通過收集病羊組織中的病原菌，并用一定劑量的病原菌接種健康動物，觀察健康動物的發(fā)病情況，再從發(fā)病的動物體內(nèi)分離病原菌進(jìn)行比對，從而確定其致病性。一般常采用的方法是取病死羊組織，如腸道內(nèi)容物，用生理鹽水進(jìn)行5倍左右稀釋并離心，離心后用一定劑量的上清液通過靜脈注射的方式接種給大鼠、小鼠、家兔等試驗動物，在接種后的數(shù)分鐘至數(shù)小時內(nèi)出現(xiàn)死亡的情況，則初步證明存在毒性較強(qiáng)的羊鏈球菌，若大鼠、小鼠或者家兔與對照組對比有明顯的異常表現(xiàn)，初步表明存在羊鏈球菌。再通過從死亡或者精神狀態(tài)異常的大鼠、小鼠或者家兔中采集病理組織進(jìn)行革蘭氏染色，同樣可見與接種到培養(yǎng)基中的菌染色結(jié)果相同，結(jié)果表明該菌對大鼠、小鼠或者家兔有致病性，反之無致病性。

5 羊鏈球菌的藥敏試驗

對羊鏈球菌進(jìn)行藥敏試驗檢測，一般先將采集的病料在常規(guī)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，之后將單個菌落接種于含有特定藥物的培養(yǎng)介質(zhì)（如藥敏紙片）中，通過觀察接種菌周圍呈現(xiàn)出的抑菌圈的大小來直接或者間接判斷羊鏈球菌對特定藥物的敏感程度或者耐藥程度。相關(guān)研究表明，在使用氧氟沙星和頭孢曲松后，羊鏈球菌接種后呈現(xiàn)的抑菌圈直徑大于15 mm，表明羊鏈球菌對這兩種藥物高度敏感，使用慶大霉素、卡那霉素、氨芐西林、林可霉素后，抑菌圈直徑為10~15 mm，表明羊鏈球菌對此類藥物中度敏感性，使用青鏈霉素、紅霉素后的抑菌圈直徑小于10 mm，表明羊鏈球菌對該類藥物的敏感性不強(qiáng)或者耐藥[3]。另外研究表明，羊鏈球菌對頭孢曲鈉、頭孢噻吩、頭孢噻肟、頭孢他啶、萬古霉素、克林霉素、沙拉沙星、頭孢拉定、阿米卡星和阿奇霉素高度敏感，對四環(huán)素、強(qiáng)力霉素、慶大霉素、環(huán)丙沙星表現(xiàn)出中度敏感，對氨芐青霉素、青霉素、復(fù)方新諾明、紅霉素、諾氟沙星及鏈霉素表現(xiàn)為不敏感[4]。但在生產(chǎn)實(shí)踐中由于條件所限，通?？芍苯硬杉湫筒⊙虻牟×现苯舆M(jìn)行藥敏試驗，根據(jù)具體藥敏試驗的結(jié)果進(jìn)行指導(dǎo)性用藥。若是沒有進(jìn)行藥敏試驗的條件，也可直接選用針對羊鏈球菌特別敏感的頭孢曲松或者氧氟沙星類藥物，從而達(dá)到快速治療的目的。

6 羊鏈球菌病的防治

羊鏈球菌病的預(yù)防原則是做好羊的日常飼養(yǎng)管理工作。首先應(yīng)針對不同生長階段的羊群提供營養(yǎng)豐富、全面、潔凈的飼草，建立科學(xué)合理的飼養(yǎng)管理模式，提高羊群的整體膘情，提高整體的抗病能力。其次，對羊養(yǎng)殖的內(nèi)外環(huán)境、使用過的器械進(jìn)行定期、周期性的消毒、殺菌處理；對羊群制定合理的疫苗免疫程序，如周期性（春秋兩季）對羊群進(jìn)行羊鏈球菌病疫苗的免疫接種工作，提高羊群的整體免疫狀態(tài)，同時定期開展免疫接種后的免疫狀態(tài)隨機(jī)抽檢監(jiān)測工作，針對免疫接種狀態(tài)不佳的羊進(jìn)行補(bǔ)免。另外，定期開展羊群的體內(nèi)體外驅(qū)蟲工作。再次，規(guī)范產(chǎn)地檢疫和引種檢疫制度，加強(qiáng)檢疫力度，嚴(yán)格控制疫病傳入非疫病區(qū)域；對于剛引種的羊群進(jìn)行隔離飼養(yǎng)。最后，若羊場發(fā)生本病，應(yīng)嚴(yán)格做好場區(qū)的封鎖、隔離并進(jìn)行場區(qū)的徹底消毒，對病死的羊只應(yīng)及時進(jìn)行無害化處理。

針對羊鏈球菌病的治療，一般是在羊發(fā)病的初期和中期階段會選擇敏感性強(qiáng)的藥物進(jìn)行治療。治療措施主要包括抗菌消炎、強(qiáng)心利尿、防止出血等。針對病情較輕的病羊一般進(jìn)行對癥治療，如按160萬IU·頭-1的劑量肌肉注射頭孢曲松鈉，2次·d-1，連續(xù)使用3 d；或者肌肉注射磺胺間甲氧嘧啶鈉，按照0.3~0.5 mg·kg-1體重的劑量，2次·d-1，連續(xù)使用3 d。針對病情較重的羊，采用全身性治療和對癥治療相結(jié)合的方式，如出現(xiàn)呼吸困難，可先肌肉注射尼可剎米，以緩解呼吸困難癥狀；如出現(xiàn)便血或者其他情況的出血可使用維生素K3，另外，在全身性治療中常常也會使用到10%葡萄糖、安鈉咖、輔酶A等藥物[5]，提高動物機(jī)體對藥物的消化吸收、轉(zhuǎn)化代謝等作用。

7 結(jié)語

羊鏈球菌病一年四季均可發(fā)生，主要發(fā)生在冬春季節(jié)。羊鏈球菌所產(chǎn)生的外毒素可直接破壞宿主組織的結(jié)構(gòu)和功能，造成機(jī)體器官功能紊亂，引發(fā)敗血型病變，同時羊鏈球菌的感染也最容易與支原體、巴氏桿菌等引起混合感染，從而增加羊群的病死率。羊養(yǎng)殖中由于養(yǎng)殖戶缺乏病原菌檢測的知識和技術(shù)手段，忽視對養(yǎng)殖環(huán)境的清理和消毒，在羊感染上鏈球菌病時，僅僅憑借生產(chǎn)中的經(jīng)驗給病羊大量盲目使用抗生素類藥物，或者將抗生素直接添加到飼料、飲水中進(jìn)行飼喂，會造成大量的細(xì)菌耐藥。在羊場出現(xiàn)發(fā)病羊后缺乏科學(xué)合理的防治和尸體處理方法，會增加細(xì)菌在羊群中傳播的風(fēng)險。藥敏試驗結(jié)果表明，通過分離得到的致病菌多數(shù)都是耐藥菌株，并且同株菌還存在多重耐藥性，因此，在生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)針對疑似病例進(jìn)行及時的致病菌診斷，排除其他病原的干擾，及時有針對性地應(yīng)用敏感藥物進(jìn)行治療。

同時規(guī)?；B(yǎng)羊場應(yīng)根據(jù)細(xì)菌分離鑒定及藥物敏感試驗結(jié)果合理選用抗菌藥物，嚴(yán)格遵守不同抗生素的使用量、休藥期及機(jī)體藥物最高殘留量的規(guī)定，從而減少耐藥菌產(chǎn)生。有條件的養(yǎng)殖場也可篩選優(yōu)勢菌株制作特異性更強(qiáng)的疫苗進(jìn)行整個羊群的群體免疫，提高羊群整體的抗病能力，從而達(dá)到高效、健康養(yǎng)殖的目的，為養(yǎng)殖場創(chuàng)造更大經(jīng)濟(jì)效益。