不同劑量彝藥小紅參乙酸乙酯提取物預(yù)防灌胃給藥對大鼠心肌缺血再灌注損傷的防治作用及其機(jī)制

肖湉，王礴，楊麗萍，段小花

云南中醫(yī)藥大學(xué)民族醫(yī)藥學(xué)院云南省傣醫(yī)藥與彝醫(yī)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，昆明 650500

缺血性心臟疾病嚴(yán)重危害人類生命健康，首要治療原則是恢復(fù)血液灌注，但心肌在缺血后重新恢復(fù)血流灌注時(shí)反而容易出現(xiàn)血壓驟降、心律失常等損傷加重的現(xiàn)象，稱之為心肌缺血再灌注損傷（MIRI）［1-2］。MIRI 嚴(yán)重影響缺血性心臟疾病的治療進(jìn)程，因此減輕MIRI是該病防治過程中需要解決的重要問題［3］。再灌注后產(chǎn)生大量活性氧引起的氧化應(yīng)激是MIRI 發(fā)生的關(guān)鍵因素之一［4］。為了緩解這一損傷的發(fā)生，藥理性預(yù)適應(yīng)在治療過程中啟到至關(guān)重要的作用，近年越來越多藥物靶點(diǎn)被發(fā)現(xiàn)，用來激活機(jī)體內(nèi)源性保護(hù)MIRI 免受氧化應(yīng)激的影響［5-6］。核因子E2 相關(guān)因子 2（Nrf2）/抗氧化反應(yīng)元件（ARE）是抗氧化應(yīng)激中的一個(gè)關(guān)鍵信號(hào)通路，對高氧化應(yīng)激疾病具有一系列的保護(hù)作用［7-8］。傳統(tǒng)醫(yī)藥在抗?fàn)嶮IRI方面具有顯著優(yōu)勢，中醫(yī)藥雖沒有治療MIRI的相關(guān)明確記載，但根據(jù)其病位病癥將該證歸屬于胸痹心悸之范疇，以活血化瘀、行氣通絡(luò)藥為主，且如今已有多種單味藥如丹參、人參、白芍等提取物用以防治MIRI［9］。小紅參又名云南茜草，是茜草科茜草屬植物滇南茜草Rubia yunnanensis（Franch.）Diels的干燥根及根莖，是云南民間常用的中草藥［10］。小紅參作為云南彝族、普米族常用的活血化瘀藥，其根部水溶性部分可用于治療心絞痛，且能增加小鼠心肌ATP 的含量、提高動(dòng)物耐氧能力，和保護(hù)缺血缺氧心肌作用一致［11-12］。扆雪濤等［13］研究證明，小紅參治療垂體后葉素誘導(dǎo)的大鼠急性心肌缺血的重要活性成分主要存在于乙酸乙酯提取物，曹東等［14］報(bào)道，小紅參乙酸乙酯提取物可抗小鼠常壓耐缺氧，提示其具有較強(qiáng)的抗心肌缺血活性。但小紅參乙酸乙酯提取物防治MIRI 的具體作用及其機(jī)制尚不明確。2021 年 10 月—2022 年 1 月，我們觀察了彝藥小紅參乙酸乙酯提取物預(yù)防灌胃給藥對大鼠MIRI 的防治作用，并探討其作用機(jī)制，旨在為今后小紅參防治心肌缺血性損傷及其進(jìn)一步的研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及主要試劑、儀器 SPF 級(jí)健康SD雄性大鼠，體質(zhì)量（280±20）g，購自昆明楚商科技有限公司，許可證號(hào)：SCXK（湘）2013-0004。每籠6 只飼養(yǎng)，每日光照約12 h，自由飲食、飲水，環(huán)境清潔、通風(fēng)，溫度（22 ± 2）℃，濕度40%～60%。動(dòng)物飼養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)均符合《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理實(shí)施細(xì)則》要求。彝藥小紅參Rubia yunnanensis（Franch.）Diels（由云南綠生藥業(yè)有限公司提供并鑒定為正品）；復(fù)方丹參片（云南白藥集團(tuán)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字：Z53021243）；依達(dá)拉奉（國藥集團(tuán)國瑞藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字：H20130051）；蘇木素—伊紅（HE）染液（上海瑞谷生物科技有限公司，批號(hào)：G1120）；Evans blue（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20160228）；肌酸激酶同工酶（CK-MB）測試盒、心肌肌鈣蛋白I（cTnI）測試盒、總超氧化物歧化酶（SOD）測試盒、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）測試盒、丙二醛（MDA）測試盒（南京建成生物工程研究所，序號(hào)：H197-1-2、H149-2、A001-3-2、A005-1-2、A003-1-2）；Nrf2、SOD1、NQO1、HO-1、β-actin 基因序列（由昆明碩擎生物科技有限公司合成）。BL-420N 型生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）；EOS60D 型Canon 相機(jī)（佳能（中國）有限公司）；心臟切片模具（上海玉研科學(xué)儀器有限公司）；Varioskan5250040 型全波長掃描式多功能酶標(biāo)儀（賽默飛世爾科技公司）；NX-1R 冷凍型高速臺(tái)式離心機(jī)（天津鼎昊源生物科技有限公司）；C1000型PCR 自動(dòng)系列化分析儀（美國BIO-RAD公司）。

1.2 彝藥小紅參的制備 稱取2 kg 藥材打成粉末平均分成四份。將每份藥材粉末分別加入4、3、2 L的95%乙醇浸泡30 min后，加熱回流提取3次，合并提取液后抽濾，濾液減壓回收乙醇，得到小紅參濃縮液；將濃縮液用大型分液漏斗分離出乙酸乙酯部分后，減壓回收得到小紅參乙酸乙酯提取物，置于-80 ℃冰箱內(nèi)冷凍保存。配制藥液時(shí)，按照高、中、低濃度配制（低劑量為大鼠等效量給藥濃度：0.005 67 g/mL；中劑量為大鼠3 倍等效量給藥濃度：0.017 g/mL；高劑量為大鼠5 倍等效量給藥濃度：0.028 g/mL），每次灌胃時(shí)提前半小時(shí)加熱藥物。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組、小紅參乙酸乙酯提取物灌胃及心肌缺血再灌注操作 選同一批次心電圖檢測合格的大鼠60 只，隨機(jī)分為小紅參高劑量組、小紅參中劑量組、小紅參低劑量組、MIRI 組、復(fù)方丹參組（陽性對照組）、假手術(shù)組（陰性對照組）各10 只。小紅參高劑量組、小紅參中劑量組、小紅參低劑量組制模前分別灌胃給予 0.028、0.017、0.005 67 g/mL 的小紅參乙酸乙酯提取物，每日一次，飼養(yǎng)灌胃7 d 后進(jìn)行大鼠心肌缺血30 min/再灌注120 min 損傷操作，即通過冠狀動(dòng)脈左前降支下部結(jié)扎法聯(lián)合氣管插管；復(fù)方丹參組制模前灌胃給予復(fù)方丹參片水磨液1 mL/（100 g·d），飼養(yǎng)灌胃 7 d 后進(jìn)行 MIRI 操作；MIRI 組灌胃給予同體積 1 mL/（100 g·d）蒸餾水，飼養(yǎng)灌胃7 d 后進(jìn)行MIRI 操作；假手術(shù)組灌胃給予同體積1 mL/（100 g·d）蒸餾水，飼養(yǎng)灌胃7 d后不進(jìn)行MIRI操作，僅穿線但不結(jié)扎。通過監(jiān)測大鼠心電圖變化及雙染法染色觀察心肌梗死面積，篩除MIRI操作未成功或已死亡的大鼠［15］。

1.4 大鼠心電圖監(jiān)測 除假手術(shù)組外，各組大鼠于結(jié)扎前10 min、結(jié)扎后30 min、剪線再灌注120 min后3個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀察大鼠心電圖并截圖記錄。

1.5 大鼠心肌病理組織學(xué)觀察 采用蘇木素-伊紅（HE）染色。再灌注120 min 后，迅速剪取大鼠心臟，4 ℃、0.9%生理鹽水沖洗干凈，切取結(jié)扎位置至心尖部分的心肌組織放入4%多聚甲醛溶液中固定，24 h 后制作石蠟切片使用HE 染色，顯微鏡下觀察大鼠心肌組織形態(tài)。

1.6 大鼠心肌梗死面積 再灌注120 min 后，進(jìn)行復(fù)位結(jié)扎，使心肌再次處于缺血狀態(tài)，隨后剖開大鼠腹腔下部，經(jīng)下腔靜脈注射1%Evans blue 2 mL，觀察心臟非缺血區(qū)充分藍(lán)染后，與此同時(shí)可見口唇爪面全身變藍(lán)時(shí)，取出心臟，置于4 ℃生理鹽水中，反復(fù)沖洗干凈，后用濾紙吸干心臟上附著的生理鹽水，置于小托盤中并在-80 ℃冰箱冰凍2 min 左右，使其足夠硬以后期便切取，從心尖至心底方向縱切成厚度為2 mm 左右的薄片。將切好的心臟切片放入盛有1%TTC 磷酸鹽緩沖液的棕色溶劑瓶中，置于37 ℃恒溫水浴鍋，振蕩浸泡15 min 后取出，用濾紙吸去殘液冷，10%甲醛固定，24 h后取出切片并用濾紙吸干平鋪于白色打印紙上，數(shù)碼相機(jī)拍照，用Image-Pro-Plus6.0 和Photo shop 圖像分析軟件處理圖片，分析各組大鼠的心肌缺血面積、梗死面積。心肌顏色分布中，藍(lán)色為正常心肌組織，代表非缺血區(qū)；白色為梗死心肌組織，代表梗死區(qū)（IS）；紅色為缺血心肌組織，紅色區(qū)域（含白色區(qū)）代表缺血區(qū)（AAR）。梗死范圍計(jì)算公式：IS（%）=IS/AAR×100%。

1.7 大鼠血清心肌肌鈣蛋白I（cTnI）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）、總超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）檢測 再灌注120 min 后，大鼠腹主動(dòng)脈采血5 mL，靜置30 min后，置于離心機(jī)中（4 ℃，3 000 r/ min）離心15 min，吸取上清液并分裝。嚴(yán)格按照相關(guān)試劑盒說明書測定大鼠血清中 cTnI、CK-MB、GSH-PX、SOD 和 MDA含量。

1.8 大鼠心肌組織Nrf2、超氧化物歧化酶1（SOD1）、血紅素氧合酶1（HO-1）、醌氧化還原酶1（NQO1）mRNA檢測 采用RT-PCR法。取大鼠心肌組織提取總RNA 后逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。反應(yīng)條件：95 ℃、30 s，95 ℃、5 s，60 ℃、34 s，40 個(gè)循環(huán)。以 βactin 為內(nèi)參，采用 2-ΔΔCt法測定各組大鼠基因相對表達(dá)量。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0 統(tǒng)計(jì)軟件。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以表示，多組間比較采用單因素方差分析，完全隨機(jī)設(shè)計(jì)兩組間比較使用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)T檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠心電圖比較 假手術(shù)組大鼠心電圖顯示其心臟電活動(dòng)全程保持正常狀態(tài)。MIRI 組結(jié)扎30 min后，大鼠局部心肌組織蒼白或發(fā)紺，二導(dǎo)聯(lián)圖顯示ST段弓背上抬0.2 mv以上，QRS寬大畸形，T波高聳，出現(xiàn)心律失常；再灌注120 min 后大鼠心尖復(fù)紅，ST 段回落50%以上。復(fù)方丹參組與小紅參高、中、低劑量組結(jié)扎30 min 后，大鼠局部心肌組織蒼白或發(fā)紺，二導(dǎo)聯(lián)圖顯示ST 段弓背上抬，QRS 寬大畸形，T波高聳，出現(xiàn)心律失常但ST段抬高程度均低于MIRI 組；再灌注120 min 后大鼠心尖復(fù)紅，ST段回落50%以上，各藥物組ST 段回落明顯，ST 段幾乎回落到正常范圍，小紅參高劑量組更為明顯。

2.2 各組大鼠心肌病理組織學(xué)比較 各組大鼠心肌病理組織學(xué)比較詳見圖1。假手術(shù)組心肌纖維大小結(jié)構(gòu)均顯示正常，肌絲排列整齊，細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)界線清楚，染色均勻，未見壞死、出血等表現(xiàn)。MIRI組心肌纖維腫脹紊亂，部分出現(xiàn)斷裂細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)界線模糊，心肌細(xì)胞局灶性壞死，間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤損壞肌纖維內(nèi)部，水腫明顯。小紅參高、中、低劑量組與復(fù)方丹參組可見心肌細(xì)胞輕度腫脹，散見少數(shù)壞死和間質(zhì)出血，與MIRI 組比較，間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤明顯減少，其中高劑量組改善效果更為明顯。

圖1 各組大鼠心肌病理組織學(xué)比較（HE，×400）

2.3 各組大鼠心肌梗死面積比較 小紅參高劑量組、小紅參中劑量組、小紅參低劑量組、復(fù)方丹參組、MIRI 組、假手術(shù)組心肌梗死范圍IS 數(shù)值分別為（12.86 ± 2.94）% 、（15.09 ± 4.87）% 、（15.36 ±5.38）%、（17.05 ± 5.14）%、（56.31 ± 9.71）%、0%，假手術(shù)組、四種藥物組與MIRI 組比較，以及小紅參高劑量組與低劑量組相比較，P均＜0.05。

2.4 各組大鼠血清 cTnI、CK-MB、MDA、GSH-Px、SOD 活性比較 大鼠血清cTnI、CK-MB、MDA、GSHPx、SOD活性比較見表1。

表1 各組大鼠血清cTnI、CK-MB、MDA、GSH-Px、SOD活性比較（）

表1 各組大鼠血清cTnI、CK-MB、MDA、GSH-Px、SOD活性比較（）

注：與假手術(shù)組比較，#P＜0.05；與MIRI組比較，*P＜0.05；與復(fù)方丹參組比較，△P＜0.05；與小紅參低劑量組比較，▲P＜0.05；與小紅參中劑量組比較，▽P＜0.05。

MDA（mmol/mgprot）1.29±0.33*1.76±0.51*2.31±0.41*2.06±0.22*4.18 ± 1.57#△▲▽1.25±0.23*組別小紅參高劑量組小紅參中劑量組小紅參低劑量組復(fù)方丹參組MIRI組假手術(shù)組cTn I（μg/L）758.8 ± 80.5*△▲▽910.6±112.1*988.7± 93.8#939.2±148.0 1 070.0 ± 72.5#▽818.8 ± 80.5*▲CK-MB（U/L）60.11 ± 8.36*△▲71.55± 4.07*76.22± 7.46#*83.66± 8.63#*158.20 ± 18.13#△▲▽60.36 ± 9.01*△▲GSH-Px（U/mL）2.85 ± 3.72*△▲2.41±3.34#*2.39±3.22#*2.17±3.00#*1.45 ± 3.49#△▲▽3.05 ± 2.38*△▲▽SOD（U/mgprot）24.67±2.73#*▲22.29±0.83#*21.81±0.68#*22.74±0.84#*18.95 ± 1.56#△▲▽28.28 ± 3.82*△▲▽

2.5 各 組 大 鼠 心 肌 組 織 Nrf2、SOD、HO-1、NQO1 mRNA 相對表達(dá)量比較 大鼠心肌組織Nrf2、SOD、HO-1、NQO1 mRNA 相對表達(dá)量比較見表2。

表2 各組大鼠心肌組織Nrf2、SOD、HO-1、NQO1 mRNA相對表達(dá)量比較（）

表2 各組大鼠心肌組織Nrf2、SOD、HO-1、NQO1 mRNA相對表達(dá)量比較（）

注：與假手術(shù)組比較，#P＜0.05；與MIRI組比較，*P＜0.05；與復(fù)方丹參組比較，△P＜0.05；與小紅參低劑量組比較，▲P＜0.05；與小紅參中劑量組比較，▽P＜0.05。

NQO1 mRNA 8.57 ± 1.11#*△▲6.98±0.78#*▲4.83±0.32#▽6.13±0.64#*4.43 ± 0.57#△▽2.80 ± 0.44*△▲▽組別小紅參高劑量組小紅參中劑量組小紅參低劑量組復(fù)方丹參組MIRI組假手術(shù)組Nrf2 mRNA 5.51 ± 0.98#*△▲4.28±0.90#*3.71±0.74#*3.27±0.65#1.93± 0.51▲▽1.19± 0.23△▲▽SOD1 mRNA 4.77±0.89#*3.56±0.53#2.10±0.56#2.12±0.20#1.72±0.19 1.17± 0.26△▲▽HO-1 mRNA 3.49±0.62#*2.72±0.79#2.21±0.30 2.47±1.08 1.72±0.50 1.62±0.32▽

3 討論

MIRI 發(fā)生時(shí)重新恢復(fù)的血流灌注，反而容易出現(xiàn)損傷加重的現(xiàn)象，表現(xiàn)為血壓驟減、心功能不全、心律失常，甚至猝死的癥狀［16］。由于MIRI病理生理過程的復(fù)雜性，臨床上將MIRI 治療分為四大方向：缺血預(yù)適應(yīng)、藥理性預(yù)適應(yīng)、缺血后適應(yīng)、藥物后處理，在缺血預(yù)適應(yīng)與缺血后適應(yīng)研究中發(fā)現(xiàn)，機(jī)體具有較強(qiáng)的內(nèi)源性保護(hù)作用［17］。因此，藥理性預(yù)適應(yīng)可激活相關(guān)保護(hù)通路進(jìn)而改善MIRI帶來的損傷，此方案安全性、可控性較高、操作更為簡便，臨床應(yīng)用范圍較廣［18］。為了預(yù)防和緩解MIRI，改善心肌損傷程度及長期預(yù)后，因此對于心肌缺血的預(yù)處理研究具有重大意義［19］。MIRI 因其胸部悶痛，心痛徹背，背痛徹心，心悸不得安等臨床表現(xiàn)，中醫(yī)將其歸屬于“胸痹、心痛、心悸、真心痛、怔忡”的范疇。中醫(yī)活血法可疏通周身微血管，有效代謝病理產(chǎn)物，保護(hù)受損心?。?0］。

據(jù)《滇南本草》記載，小紅參可“通行十二經(jīng)絡(luò)”，其性甘溫，具有活血通經(jīng)、調(diào)養(yǎng)氣血等功效［21］。昆明市延安醫(yī)院使用小紅參制作的酒浸劑與糖漿劑可治療神經(jīng)衰弱引起的失眠癥狀，且相關(guān)針劑對治療心臟疾病亦有一定療效［22］。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，小紅參醇提物可通過改善線粒體功能、抗氧化等途徑顯著改善MIRI損傷，同時(shí)經(jīng)過篩選發(fā)現(xiàn)其有效活性部位主要位于乙酸乙酯提取物中［23-24］。但小紅參乙酸乙酯提取物在MIRI 中發(fā)揮作用及其具體機(jī)制尚不明確，因此本實(shí)驗(yàn)通過進(jìn)行MIRI 操作，探討小紅參乙酸乙酯提取物預(yù)給藥對MIRI損傷保護(hù)作用，挖掘其相關(guān)機(jī)制。

心電圖代表心臟興奮的電活動(dòng)過程，可以反映心肌損傷的程度和發(fā)展。大鼠心電圖ST 段抬高是觀察心肌梗死的的重要途徑，通過觀察大鼠弓背抬高ST 段的回落情況可反映心肌組織血供的恢復(fù)情況，快速且幅度較大的ST段回落則顯示冠狀動(dòng)脈再通和冠狀動(dòng)脈再灌注效果良好［25-26］。假手術(shù)組結(jié)扎前后無明顯變化，提示假手術(shù)組穿線對心肌無明顯損傷；MIRI 組和各藥物組結(jié)扎后30 min 后ST 段上抬大于0.2 mv，且藥物組上抬幅度小于MIRI 組，提示MIRI 組和各藥物組MIRI 操作成功，小紅參乙酸乙酯提取物預(yù)處理有提高心肌損傷耐受的作用；再灌注2 h 后，MIRI 組ST 段回落不如藥物組明顯。同時(shí)文獻(xiàn)［27］報(bào)道，心肌組織形態(tài)變化可以直接反映心肌損傷的程度。本研究顯示，假手術(shù)組肌絲排列整齊，無明顯炎細(xì)胞浸潤和水腫現(xiàn)象；MIRI 組心肌纖維腫脹紊亂，間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤損壞肌纖維，且內(nèi)部水腫明顯；小紅參乙酸乙酯提取物高、中、低三組劑量可見心肌細(xì)胞輕度腫脹，與MIRI 組比較，間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤明顯減少，提示小紅參乙酸乙酯提取物可能對MIRI有保護(hù)作用；復(fù)方丹參組見少量間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤損壞肌纖維內(nèi)部，提示陽性藥對受損心肌有保護(hù)作用。而心肌梗死面積作為判斷MIRI 嚴(yán)重程度的診斷標(biāo)準(zhǔn)，心肌缺血區(qū)和梗死面積的大小是衡量MIRI 程度的最明顯指標(biāo)，能直觀、客觀地反映心肌梗死的程度［28］。TTC-伊文思藍(lán)雙染為判別心肌損傷程度的金標(biāo)準(zhǔn)，剪線再灌注2 h 后，假手術(shù)組缺血和梗死面積為0；MIRI組缺血和梗死面積明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示MIRI 會(huì)造成明顯的心肌損傷，并說明MIRI操作成功。各藥物組梗死面積顯著減小，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示小紅參乙酸乙酯提取物可以誘導(dǎo)心肌產(chǎn)生耐受，降低梗死面積，緩解心肌損傷程度。心肌酶學(xué)指標(biāo)的變化反映心肌缺血的早期變化，當(dāng)心肌細(xì)胞處于壞死狀態(tài)時(shí)，線粒體、細(xì)胞膜遭到損傷，膜通透性異常增加，此時(shí)便會(huì)引起細(xì)胞膜破壞以及心肌標(biāo)志物外漏［29］。CK-MB 為心肌壞死的重要標(biāo)志物，當(dāng)心肌細(xì)胞受到損傷時(shí)血清中CK-MB含量會(huì)顯著升高，為診斷心肌壞死的金標(biāo)準(zhǔn)；cTnI是心肌細(xì)胞特有的一種蛋白質(zhì)，對于反映心肌細(xì)胞損害程度具有較高的敏感性和特異性，均可反映心肌壞死程度［30-31］。本研究發(fā)現(xiàn)，藥物組預(yù)處理后CKMB、cTnI 水平均低于MIRI 組，其中小紅參高劑量組與中、低劑量組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。綜上結(jié)果可知，小紅參乙酸乙酯提取物對心肌具有明顯的保護(hù)作用，尤其以高劑量組改善效果最為顯著。

同時(shí)血清中的GSH-Px 和SOD 可間接代表抗氧自由基的能力，心肌組織中MDA 的活性是心肌脂質(zhì)過氧化損傷的直接指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)，藥物組預(yù)處理后 MDA 水平均低于 MIRI 組，GSH-Px 和 SOD 活性明顯改善，說明小紅參乙酸乙酯提取物可以通過減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)從而降低心肌缺血再灌注心肌損傷程度，達(dá)到治療效果。在MIRI 過程中，如果過量的氧化產(chǎn)物超過了機(jī)體的清除能力，就會(huì)導(dǎo)致心肌細(xì)胞死亡。因此，尋找能夠激活抗氧化途徑的藥物治療MIRI 起到至關(guān)重要的作用。Nrf2/ARE 是抗氧化劑系統(tǒng)中的關(guān)鍵信號(hào)通路［32］。當(dāng)細(xì)胞受到氧自由基或其他親核試劑的刺激時(shí)，Keap1 釋放Nrf2，然后Nrf2 進(jìn)入細(xì)胞核，識(shí)別ARE 并開始表達(dá)下游基因NQO1、SOD 和 HO-1。HO-1 和 NQO1 是 Nrf2 開始表達(dá)后的兩個(gè)關(guān)鍵靶蛋白，而SOD1 是超氧化物歧化酶中的一種，是好氧生物超氧陰離子歧化的主要酶。若SOD1 活性降低，則SOD-1 的抗氧化作用減弱，氧自由基濃度增加，導(dǎo)致氧化應(yīng)激損傷［33-34］。本文結(jié)果表明，MIRI 組中MIRI 大鼠相關(guān)mRNA 表達(dá)雖有輕微增加以對抗氧化應(yīng)激帶來的心肌損傷，但與假手術(shù)組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而小紅參乙酸乙酯提取物各藥物組和復(fù)方丹參組相關(guān)mRNA表達(dá)較假手術(shù)組組均有明顯提高，其中高劑量組Nrf2、NQO1 mRNA 表達(dá)較中低劑量上升最為顯著，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，小紅參乙酸乙酯提取物保護(hù)MIRI的藥理機(jī)制很可能與激活Nrf2/ARE 信號(hào)通路進(jìn)而減輕氧化應(yīng)激損傷有關(guān)。

總之，不同劑量小紅參乙酸乙酯提取物預(yù)防灌胃給藥均對大鼠心肌缺血再灌注損傷有防治作用，尤以0.028 g/mL 效果最佳，機(jī)制可能與其激活氧化信號(hào)通路Nrf2/ARE有關(guān)。