ε-聚賴氨酸發(fā)酵工藝的研究進(jìn)展

王月，扶教龍，張昳

(蘇州科技大學(xué) 化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，江蘇 蘇州，215009)

同源多聚氨基酸是線性合成聚合物，由獨(dú)特類型氨基酸的重復(fù)單元組成。迄今為止，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了由微生物分泌的4種同源多聚氨基酸，包括聚ε-L-賴氨酸(ε-poly-L-lysine，ε-PL)、聚γ-谷氨酸、聚γ-L-二氨基丁酸和聚L-α，γ-二氨基丁酸[1-3]。其中，ε-PL是一種新型的天然同型單體聚合物，由25～35個(gè)L-賴氨酸通過(guò)α-羧基和ε -氨基形成的酰胺鍵連接而成。

由于其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)，ε -PL具有很多優(yōu)異的性能，例如可生物降解、水溶性、熱穩(wěn)定、抗菌、可食用和無(wú)毒等。此外，它還表現(xiàn)出良好的內(nèi)毒素選擇性去除和抗肥胖特性，改善細(xì)胞黏附，抑制胰腺脂肪酶活性，并防止口腔細(xì)菌毒素產(chǎn)生[4]。因此，ε-PL具有作為抗菌食品防腐劑，治療基因或藥物載體，酶穩(wěn)定劑和化妝品成分的巨大潛力。ε-PL對(duì)單增李斯特菌、大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌等微生物表現(xiàn)出優(yōu)異的抗菌效果且抗菌譜廣，這些優(yōu)點(diǎn)使得ε -PL主要用作天然食品防腐劑[5]。日本在19世紀(jì)80年代首次將ε-PL批準(zhǔn)作為食品防腐劑。后來(lái)，陸續(xù)被美國(guó)、韓國(guó)、中國(guó)等國(guó)家和地區(qū)批準(zhǔn)使用。

目前，ε -PL主要通過(guò)白色鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)。與化學(xué)方法相比，微生物法生產(chǎn)ε-PL具有條件溫和、原料來(lái)源廣、操作簡(jiǎn)便和綠色環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)[6]。ε-PL是1977年在SHIMA等[1]篩選Dragendorff-Positive(DP)化合物時(shí)首次發(fā)現(xiàn)的，至此為了開(kāi)發(fā)ε-PL進(jìn)行了越來(lái)越多的研究，包括產(chǎn)ε-PL菌株的選育[7]、ε-PL發(fā)酵工藝開(kāi)發(fā)[8]以及ε-PL生物合成機(jī)制的探究[9]等。近年來(lái)，隨著基因工程、代謝組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、生物信息學(xué)以及先進(jìn)測(cè)試技術(shù)的發(fā)展，對(duì)ε-PL生物合成機(jī)理的研究越來(lái)越深入。當(dāng)然，ε-PL的高效低成本生產(chǎn)是一個(gè)不變的主題，最近幾年研究人員開(kāi)發(fā)出了一些新型高效的發(fā)酵工藝用于ε-PL生產(chǎn)。本文對(duì)高產(chǎn)ε-PL菌株的選育方法和合成機(jī)理進(jìn)行了簡(jiǎn)要概述，著重綜述了其發(fā)酵工藝優(yōu)化的最新研究進(jìn)展。希望幫助相關(guān)研究者和生產(chǎn)技術(shù)人員了解這種新型聚合物的最新進(jìn)展和未來(lái)發(fā)展趨勢(shì)。

1 ε-聚賴氨酸的概述

1977年日本學(xué)者SHIMA和SAKAI從微生物中篩選DP物質(zhì)時(shí)，篩選到1株穩(wěn)定且能大量產(chǎn)生DP物質(zhì)的放線菌(白色鏈霉菌Streptomycesalbulus)，通過(guò)對(duì)其產(chǎn)物進(jìn)行酸水解并進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析得知該物質(zhì)為一種通過(guò)α-羥基和ε-氨基之間脫水縮合而形成的聚合物——ε-聚賴氨酸[1]。ε-PL的抑菌譜非常廣，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性菌及真菌都有較好的抑制效果。其抑菌效果主要受其表面陽(yáng)離子量及聚合度影響，通過(guò)靜電吸附與目標(biāo)的細(xì)胞膜相結(jié)合，進(jìn)而細(xì)胞喪失正常的流動(dòng)性，細(xì)胞膜破裂，胞內(nèi)物質(zhì)外溢，最終導(dǎo)致細(xì)胞自溶死亡[5]。ε-PL分子質(zhì)量在 3 600～4 300 Da 具有較好的抑菌性能，當(dāng)分子質(zhì)量低于1 300 Da 的時(shí)候，就會(huì)失去抑菌活性。對(duì)ε-PL的水溶液進(jìn)行核磁共振和圓二色譜分析后發(fā)現(xiàn)，不同pH條件對(duì)ε-PL在溶液中的構(gòu)型有很大的影響[10]。

目前，學(xué)界認(rèn)可的合成途徑為：ε-PL產(chǎn)生菌通過(guò)二氨基庚二酸途徑合成前體L-賴氨酸，并將其用于ε-PL的組裝，圖1為其可能的簡(jiǎn)化生物合成途徑。隨后，研究人員嘗試探究其生物合成機(jī)理。SHIMA等[11]用14C 放射性同位素標(biāo)記證明L-Lys是ε-PL的前體。然而，賴氨酸單體組裝成聚合物的機(jī)理尚不清楚。經(jīng)過(guò)很長(zhǎng)時(shí)間后，KAWAI等[12]在無(wú)細(xì)胞系統(tǒng)中實(shí)現(xiàn)了ε-PL生物合成，膜部分的合成活性主要依賴于ATP，不受核糖核酸酶、氯霉素或卡那霉素的影響。這些結(jié)果表明，膜中存在的非核糖體肽合成酶(non ribosomal peptide synthetase，NRPSs)最有可能催化ε-PL的生物合成。2008年，CHEN等[9]成功純化并表征了ε-PL合成酶(Pls)。通過(guò)對(duì)Pls結(jié)構(gòu)的分析，發(fā)現(xiàn)Pls是具有典型A域和T域的單模塊NRPSs。其中A和T結(jié)構(gòu)域負(fù)責(zé)L-賴氨酸的捕捉、活化和轉(zhuǎn)化，而傳統(tǒng)的C域變?yōu)镃1、C2和C3結(jié)構(gòu)域來(lái)負(fù)責(zé)將已活化的L-賴氨酸連接，這種新型的單模塊 NRPS 結(jié)構(gòu)可能是這些均聚氨基酸合成酶的共同特征，結(jié)構(gòu)域的相互連接作用對(duì)酶活性至關(guān)重要。Pls是ε-PL合成途徑中的主要限速酶之一，這些研究為進(jìn)一步利用基因工程方法提高白色鏈霉菌生產(chǎn)ε-PL能力奠定了良好基礎(chǔ)。

圖1 ε-PL的合成途徑示意圖Fig.1 The synthetic route of ε-poly-L-lysine

2 產(chǎn)ε-PL菌株分離和改造

如引言部分所述，高產(chǎn)ε-PL菌株的篩選是實(shí)現(xiàn)ε-PL工業(yè)生產(chǎn)的關(guān)鍵。野生型產(chǎn)生菌的ε-PL產(chǎn)量極低[一般ρ(ε-PL)<0.2 g/L]，故借助菌株選育方法提升其合成能力是實(shí)現(xiàn)ε-PL工業(yè)化生產(chǎn)的必經(jīng)之路[13]。目前，已用于高產(chǎn)ε-PL生產(chǎn)菌選育的方法有檢測(cè)堿性/酸性染料與培養(yǎng)基中分泌的聚陽(yáng)離子ε-PL之間的相互作用。如NISHIKAWA等[14]采用Poly R-478酸性染料篩選的方法從土壤中發(fā)現(xiàn)了超過(guò)10種產(chǎn)生ε-PL的菌株。此后，根據(jù)這種方法或改進(jìn)的方法篩選了其他幾種高效產(chǎn)ε-PL的菌株，如S.albulusNK660[15]和S.griseofuscusH1[16]。另一種常用的菌株篩選方法是“兩階段控制法”。SHIMA等[17]基于細(xì)胞生長(zhǎng)的最適pH值與S.albulusNo.346 中 ε-PL 積累之間的差異提出了這種方法。隨后，HIROHARA等[18]開(kāi)發(fā)了兩階段培養(yǎng)方法，其中每個(gè)菌落首先在生長(zhǎng)培養(yǎng)基(pH 6.8)中培養(yǎng)20～48 h(細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)階段)，然后收集、洗滌、重懸菌絲體并在生產(chǎn)發(fā)酵液中培養(yǎng)(pH 4.5，ε- PL生產(chǎn)培養(yǎng)階段)?！皟呻A段控制法”已經(jīng)被廣泛使用，許多產(chǎn)ε-PL菌株已成功分離和研究，例如Streptomycessp.USE-11[18]和StreptomycesahygroscopicusGIM8[19]。

為了提高ε-聚賴氨酸產(chǎn)生菌的合成能力，對(duì)菌株進(jìn)一步改造具有重要意義。王靚[20]運(yùn)用核糖體工程選育ε- PL高產(chǎn)菌株，并結(jié)合傳統(tǒng)誘變和基因組重排，構(gòu)建了單抗和多抗突變株，大幅提高了ε-PL的搖瓶產(chǎn)量。LIU等[21]引入鏈霉素抗性，通過(guò)1 631個(gè)突變體的篩選獲得了產(chǎn)量最高的突變體S.albulusSS-62，其ε-PL搖瓶發(fā)酵的產(chǎn)量為3.04 g/L比親本菌株高1.79倍。XIANG等[22]在細(xì)胞和分子水平上研究了常壓室溫等離子體(atmospheric room temperature plasma，ARTP)誘變對(duì)白色鏈霉菌的影響，誘變后ε-PL產(chǎn)量增加了18.46%。越來(lái)越多研究表明通過(guò)引入耐藥突變可以顯著激活抗生素對(duì)鏈霉菌次級(jí)代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)。近年來(lái)除了傳統(tǒng)理化誘變育種，基因組重排、核糖體工程、基因工程和高通量篩選等方法也在提高菌株的初級(jí)和次級(jí)代謝物上廣泛應(yīng)用，加快了我們對(duì)ε-PL生物合成機(jī)制的深入了解和構(gòu)建ε-PL高產(chǎn)菌株進(jìn)程。

3 ε-PL生產(chǎn)的發(fā)酵工藝

3.1 培養(yǎng)基的優(yōu)化

培養(yǎng)基成分可能會(huì)影響微生物的生長(zhǎng)和產(chǎn)物代謝積累。早在2006年SHIH等[23]通過(guò)響應(yīng)面法開(kāi)發(fā)了一種適用于S.albulusIFO 14147的培養(yǎng)基。結(jié)果顯示，S.albulusIFO 14147生產(chǎn)的ε-PL產(chǎn)量增加了約9倍。同樣，BANKAR等[24]使用Placket-Burman設(shè)計(jì)方法優(yōu)化的培養(yǎng)基成分，用于S.nourseiNRRL 5126生產(chǎn)，ε-PL產(chǎn)量從基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的41.81 g/L提高到98.07 g/L。CHHEDA等[25]使用正交設(shè)計(jì)方法確定了新型ε-PL生產(chǎn)者蠟狀芽孢桿菌的最佳培養(yǎng)基組成，使得ε-PL產(chǎn)量從36.29 mg/L顯著提高至83.49 mg/L。盡管培養(yǎng)基優(yōu)化方法可能工作量繁重，但是對(duì)于ε-PL的生產(chǎn)非常有效。M3G培養(yǎng)基是第一個(gè)被報(bào)道用于ε-PL發(fā)酵的培養(yǎng)基，并且仍然常用。目前基于這種原始培養(yǎng)基設(shè)計(jì)了各種優(yōu)化培養(yǎng)基的方法，例如單因子法，正交陣列法[25]，響應(yīng)面法[8,23-24]和人工智能神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)[26]。

同時(shí)，在研究ε-PL的過(guò)程中，研究人員發(fā)現(xiàn)某些工業(yè)副產(chǎn)物可以替代ε-PL生產(chǎn)中常用的碳源和有機(jī)氮源，這不僅可以降低ε-PL生產(chǎn)的成本，而且將副產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為增值化合物。例如扶教龍等[27]發(fā)明了一種以木薯渣水解液為碳源生產(chǎn)ε-PL的方法，其特征在于以木薯渣水解液作為發(fā)酵培養(yǎng)基或補(bǔ)料培養(yǎng)基中的碳源。木薯渣是淀粉廠和酒精廠的下腳料，國(guó)內(nèi)外每年廢棄量相當(dāng)大，嚴(yán)重污染環(huán)境，這種開(kāi)發(fā)利用是環(huán)保和經(jīng)濟(jì)的，因?yàn)樗鼘U棄的原料轉(zhuǎn)化為高價(jià)值產(chǎn)品。另外一些研究人員嘗試?yán)冒ǜ视秃透收崽敲墼趦?nèi)的替代碳源來(lái)生產(chǎn)ε-PL，特別是近年來(lái)大量開(kāi)發(fā)的粗甘油基化學(xué)品與新材料研究具有廣闊的發(fā)展前景[28]。甘油在ε-PL生產(chǎn)中應(yīng)用最成功的是由REN等[19-20]進(jìn)行的，他們首先優(yōu)化了以甘油為碳源的ε-PL生產(chǎn)的培養(yǎng)基，基于該介質(zhì)進(jìn)行了一系列改進(jìn)。最終，在5 L生物反應(yīng)器中ε-PL的生產(chǎn)從最初的2.27 g/L提高到62.36 g/L。在另一項(xiàng)研究中，XIA等[31]嘗試使用甘蔗糖蜜水解生產(chǎn)ε-PL，優(yōu)化初始總糖濃度后，在1 t發(fā)酵罐中獲得20.6 g/L的ε-PL。在這種情況下，制糖業(yè)的副產(chǎn)品可以被成功轉(zhuǎn)化為ε-PL。培養(yǎng)基的價(jià)格占ε-PL工業(yè)發(fā)酵中運(yùn)營(yíng)成本的很大一部分，因此，低成本的工農(nóng)業(yè)廢物作為ε-PL發(fā)酵的替代碳源具有很大的前景。

3.2 pH控制策略

pH沖擊策略能有效提高細(xì)胞的抗氧化能力，減少細(xì)胞的氧化損傷，這可能是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)在應(yīng)對(duì)pH沖擊中所起的重要作用，并導(dǎo)致代謝活力和細(xì)胞內(nèi)氧化還原穩(wěn)態(tài)的增強(qiáng)[32]。生產(chǎn)ε-PL最經(jīng)典的發(fā)酵策略是兩階段pH控制法，據(jù)此方法報(bào)道的S.albulusS410的ε-PL的生產(chǎn)量為48.3 g/L[33]。直到最近，在提升ε-PL產(chǎn)率上才取得突破，并通過(guò)pH沖擊策略超過(guò)了KAHAR的相關(guān)研究結(jié)果[29]。

在ε-PL的深層發(fā)酵中，研究人員發(fā)現(xiàn)如果不控制酸堿度，ε-PL發(fā)酵液的pH會(huì)自然從初始值約6.5～7.0連續(xù)降低至約3.0，同時(shí)有較低ε-PL的積累。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)表明，積累ε-PL的最佳pH為4.0，細(xì)胞生長(zhǎng)的最佳pH為6.0。因此，pH控制策略通過(guò)自動(dòng)進(jìn)料堿溶液(即NaOH或NH4OH)是確保ε-PL高生物量充分積累的有效方法。在此基礎(chǔ)上，KAHAR等[33]使用2個(gè)不同的pH階段將S.albulusS410生產(chǎn)ε-PL的整體產(chǎn)量從5.7 g/L提高到40.3 g/L；在第一階段中，將發(fā)酵液的pH值保持在5.0以上以促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)，而在第二階段中，ε-PL積累時(shí)的pH值則保持在4.0。REN等[29]通過(guò)將其與酸性pH沖擊相結(jié)合，改進(jìn)了這種經(jīng)典的pH控制策略。改良的發(fā)酵過(guò)程可分為3個(gè)階段，即在pH 5.0下的預(yù)酸沖擊適應(yīng)階段，在pH 3.0時(shí)進(jìn)行酸性pH沖擊以及pH恢復(fù)至4.0階段生產(chǎn)ε-PL。最終，發(fā)酵液中ε-PL最大產(chǎn)量達(dá)到54.70 g/L。與KAHAR等[33]的經(jīng)典兩段pH控制策略相比，生產(chǎn)菌株的代謝活性在pH沖擊期受到嚴(yán)重抑制，從而導(dǎo)致調(diào)節(jié)基因、生物合成基因和應(yīng)激反應(yīng)基因的過(guò)量產(chǎn)生。因此，當(dāng)pH值回到4.0時(shí)，細(xì)胞的生長(zhǎng)和ε-PL的產(chǎn)量顯著增強(qiáng)。綜上所述，pH是ε-PL生物合成的關(guān)鍵參數(shù)。無(wú)論采用哪種策略，pH 4.0最適合ε-PL的形成，而較高的pH(大于4.5)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)更好。

3.3 溶解氧控制策略

發(fā)酵液中的溶解氧(dissoved oxygen,DO)水平也是ε-PL生產(chǎn)中的另一個(gè)關(guān)鍵參數(shù)。ε-PL的生物合成和細(xì)胞生長(zhǎng)都需要大量的ATP，這主要是通過(guò)有氧呼吸產(chǎn)生。這表明發(fā)酵液中的高溶解氧水平將有利于細(xì)胞生長(zhǎng)和ε-PL的生物合成。然而，由于高耗氧量和細(xì)胞密度，ε-PL發(fā)酵液中的氧氣供應(yīng)通常受到限制。

在這方面，BANKAR等[34]通過(guò)研究不同的曝氣攪拌條件，建立了適合生產(chǎn)S.nourseiNRRL 5126發(fā)酵動(dòng)力學(xué)的兩階段DO控制策略。在此條件下，恒定的DO水平(細(xì)胞生長(zhǎng)期為40%，ε-PL生產(chǎn)階段為20%)有效地提高了ε-PL的產(chǎn)量和生物量，分別達(dá)到1.99 g/L和20.73 g/L。由于菌絲相互纏繞，細(xì)胞密度大和ε-PL的分子質(zhì)量高，使得發(fā)酵液變得黏稠，并且氧轉(zhuǎn)移效率低。因此，僅通過(guò)改善發(fā)酵過(guò)程中的攪拌和曝氣來(lái)提高DO水平是困難的。此外，由于伴隨著高剪切應(yīng)力，攪拌轉(zhuǎn)速的增加還可能導(dǎo)致對(duì)菌絲體形態(tài)、產(chǎn)物形成和ε-PL產(chǎn)量有不良影響。在這種情況下，XU等[35]嘗試使用2種策略來(lái)改善S.albulusPD-1的氧氣限制問(wèn)題。第一種是將氧氣載體添加到發(fā)酵液中，在發(fā)酵液中添加0.5%的正十二烷可以有效地使DO含量保持大于 32%的飽和度，在氧氣升高的條件下，ε-PL產(chǎn)量從23.4 g/L提高至30.8 g/L。第二種是通過(guò)將透明顫菌血紅蛋白基因引入S.albulusPD-1染色體，將氧氣輸送到末端呼吸氧化酶來(lái)幫助增強(qiáng)呼吸和氧化磷酸化增強(qiáng)其結(jié)合氧的能力，使得ε-PL的產(chǎn)量從22.7 g/L增加到34.2 g/L。細(xì)胞內(nèi)ATP含量的測(cè)定表明，在供氧充足時(shí)S.albulusPD-1中產(chǎn)生了更多的ATP，這可能與更強(qiáng)的碳和能量代謝有關(guān)[36]。

3.4 生物反應(yīng)器

優(yōu)化生物反應(yīng)器也可以提高發(fā)酵整體工藝效率。ε-PL生產(chǎn)中最常用的生物反應(yīng)器是具有機(jī)械攪拌和常規(guī)通氣的反應(yīng)器。然而，研究人員并沒(méi)有放棄設(shè)計(jì)用于ε-PL生產(chǎn)的新型生物反應(yīng)器。早在2002年，KAHAR等[37]就對(duì)氣升式生物反應(yīng)器(airlift bioreactor，ABR)的ε-PL生產(chǎn)進(jìn)行了評(píng)估，減少攪拌意味著細(xì)胞內(nèi)核酸等物質(zhì)的泄漏量減少，所以該反應(yīng)器生產(chǎn)成本、能源消耗和下游加工成本都很低。因?yàn)棣?PL是天然陽(yáng)離子聚合物，所以應(yīng)用陰離子樹(shù)脂吸附累積的ε-PL，原位產(chǎn)物去除(insituproduct removal，ISPR)通過(guò)克服積累的ε-PL反饋抑制作用和毒性效應(yīng)極大地提高了ε-PL的最終產(chǎn)量[38]。細(xì)胞固定化是ε-PL生產(chǎn)的另一新策略，ZHANG等[39]將絲瓜絡(luò)用作ε-PL生產(chǎn)的綠色固定材料，將ISPR與細(xì)胞固定技術(shù)相結(jié)合，最終ε-PL的產(chǎn)量和菌體量分別達(dá)到34.1和26.5 g/L。在這種條件下，固定化的細(xì)胞最多能使用5次，而且除第一批外幾乎沒(méi)有觀察到滯后相，這大大縮短了發(fā)酵周期。這種新型的固定裝置已經(jīng)在新光生物科技公司中得到了應(yīng)用。此外，目前報(bào)道的所有ε-PL生產(chǎn)都是通過(guò)深層發(fā)酵進(jìn)行的，細(xì)胞固定化研究中使用的絲瓜絡(luò)類似于固態(tài)發(fā)酵中的固態(tài)底物[40]。這些結(jié)果表明，固態(tài)發(fā)酵有希望在不久的將來(lái)應(yīng)用于生產(chǎn)ε-PL。

3.5 其他生產(chǎn)工藝

表1 微生物生產(chǎn)ε-PL主要方法和篩選策略比較Table 1 Comparison of main methods and screening strategies for microbial production ε-PL

續(xù)表1

4 結(jié)論與展望

鑒于ε-PL天然和高效的陽(yáng)離子特性，ε-PL及其衍生物在食品、生物醫(yī)學(xué)和生物材料工業(yè)中具有獨(dú)特的應(yīng)用，例如用作膳食添加劑、藥物載體、生物芯片等。為了滿足ε-PL迅速增長(zhǎng)的需求，其商業(yè)化生產(chǎn)必不可少。自從篩選出第1株生產(chǎn)ε-PL的菌株以來(lái)，研究人員一直在尋求多種發(fā)酵策略以提高ε-PL的生產(chǎn)率，每種方法都有其自身的優(yōu)勢(shì)，可以補(bǔ)充完善ε-PL的生產(chǎn)信息。當(dāng)然，許多問(wèn)題，如復(fù)雜代謝網(wǎng)絡(luò)的調(diào)節(jié)，ε-PL生物合成的低生產(chǎn)率和轉(zhuǎn)化率，阻礙了其廣泛的商業(yè)應(yīng)用[49]。

對(duì)于今后的研究探索有3點(diǎn)展望：(1)高產(chǎn)菌株的選育。鏈霉菌生長(zhǎng)周期較長(zhǎng)，傳統(tǒng)的搖瓶方法篩選ε-PL正突變菌株耗時(shí)耗力，需要經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期多輪誘變以積累穩(wěn)定的優(yōu)良性狀，才能獲得高產(chǎn)菌株。因此，可以結(jié)合高通量篩選建立一種快速、準(zhǔn)確的選育方法。(2)生物合成機(jī)理的深入研究。闡明ε-PL生物合成及其在轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白組學(xué)和代謝組學(xué)上的抗菌活性機(jī)制，可以深層次、全方位解析某種ε-PL高產(chǎn)菌株高產(chǎn)機(jī)制及其代謝途徑，并將為進(jìn)一步提高ε-PL的產(chǎn)量提供理論依據(jù)。(3)發(fā)酵生產(chǎn)工藝的優(yōu)化。ε-PL工藝優(yōu)化是今后的發(fā)展趨勢(shì)之一，制定合適的工業(yè)副產(chǎn)物綜合利用策略既降低成本又廢物利用。另一方面也可以減少發(fā)酵過(guò)程中有機(jī)試劑的加入從而獲得環(huán)境友好型產(chǎn)物。希望本文，可以為解決和研究與微生物ε-PL相關(guān)的目前存在的問(wèn)題提供借鑒，從而實(shí)現(xiàn)高效率、低成本ε-PL發(fā)酵生產(chǎn)。