中西醫(yī)結(jié)合治療對(duì)慢性阻塞性肺疾病痰熱證急性加重-穩(wěn)定期大鼠免疫因子的影響研究

李曉俊 ，李亞 ，3，卞晴晴 ，軒銀霜 ，沈婷婷 ，李素云 ，3*

慢性阻塞性肺疾病（COPD）急性加重期（AECOPD）是COPD管理中的重要事件，嚴(yán)重影響患者的健康狀況、疾病進(jìn)展和住院/再入院率［1］。COPD患者氣道表面普遍存在分泌型免疫球蛋白A（sIgA）缺損［2］，與氣流阻塞的嚴(yán)重程度相關(guān)［3-4］。sIgA介導(dǎo)宿主保護(hù)和病原體中和［5］，位于免疫系統(tǒng)抵御病原體的第一道防線。人體胃腸道與呼吸道具有典型的黏膜結(jié)構(gòu)，均能分泌大量sIgA，并通過(guò)歸巢遷移及共同免疫系統(tǒng)相聯(lián)系，成為肺與大腸相關(guān)性的重要基礎(chǔ)［6］。COPD患者肺間質(zhì)及實(shí)質(zhì)等組織活檢［7］發(fā)現(xiàn)大量T淋巴細(xì)胞聚集現(xiàn)象，表現(xiàn)為CD8+細(xì)胞數(shù)量增加，CD3+和CD4+細(xì)胞數(shù)量基本不變或稍降，CD4+/CD8+下降，導(dǎo)致免疫失衡［8］，是COPD發(fā)生和發(fā)展的關(guān)鍵因素［9-10］。中西醫(yī)結(jié)合治療COPD可以顯著改善患者癥狀、減少并發(fā)癥、改善肺通氣功能、降低致殘率等［11-12］，但中西醫(yī)結(jié)合治療COPD痰熱證急性加重-穩(wěn)定期對(duì)肺組織和腸組織的sIgA、CD3+及CD4+的影響缺乏相關(guān)證據(jù)。本研究通過(guò)觀察中西醫(yī)結(jié)合治療對(duì)COPD痰熱證急性加重-穩(wěn)定期大鼠的用力肺活量（FVC）、第0.3秒用力呼氣容積（FEV0.3）、FEV0.3/FVC以及肺、腸組織的sIgA、CD3+和CD4+水平產(chǎn)生的影響，明確中西醫(yī)結(jié)合治療對(duì)肺組織和腸組織的免疫屏障功能的修復(fù)作用，以期為COPD的中醫(yī)藥診治提供新思路。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 2019年9月至2020年12月選取SPF級(jí)SD大鼠60只，雌雄各半，體質(zhì)量（200±20）g，購(gòu)于濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育中心〔許可證號(hào)：SCXK（魯）2019-0003〕。

1.2 香煙 紅旗渠牌過(guò)濾嘴香煙，硬金紅，烤煙型，焦油量10 mg，煙堿量1 mg，煙氣一氧化碳含量12 mg，河南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)。

1.3 藥物 脂多糖（LPS，100 mg，Sigma，USA，使用前用0.9%氯化鈉溶液溶解為1 mg/ml）。0.9%氯化鈉溶液（500 ml/瓶，河南竹林眾生制藥股份有限公司）。通塞顆粒（TSG，藥物組成為葶藶子15 g、地龍15 g、赤芍12 g、川貝母10 g、生曬參10 g、麥冬15 g、炙麻黃9 g、制大黃6 g、石菖蒲10 g，由河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥制劑實(shí)驗(yàn)室鑒定提供，專利號(hào)：ZL201010183177.1）。補(bǔ)肺益腎方（BYG，藥物組成為黃芪15 g、黨參9 g、枸杞子12 g、浙貝母9 g、山茱萸12 g等，制成流浸膏備用，含生藥量1.848 g/ml，由河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥制劑實(shí)驗(yàn)室鑒定提供，專利號(hào)：ZL201110117578.1）。鹽酸莫西沙星片（MXF，0.4 g×3 s，拜復(fù)樂(lè)，拜爾醫(yī)藥保健有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字J20150015）。硫酸沙丁胺醇片（STL，2 mg×100 s，金壇，江蘇亞邦愛(ài)普森藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H32024535）。

1.4 試劑和儀器 大鼠酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）試劑盒和大鼠sIgA（E-EL-R0875c）購(gòu)于武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，蘇木素伊紅（HE）染色試劑盒購(gòu)于北京索萊寶科技有限公司，石蠟塊、二甲苯溶液、無(wú)水乙醇和中性樹(shù)脂購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)，兔抗大鼠多克隆抗體CD3（E-AB-40132）購(gòu)于武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，兔抗大鼠多克隆抗體CD4（K006374P）購(gòu)于北京索萊寶科技有限公司，鏈霉親和素-堿性磷酸酶（SABC-AP）免疫組化染色試劑盒（SA1055）購(gòu)于武漢博士德生物工程有限公司。WBP無(wú)束縛小動(dòng)物全身體積描記儀和Fine PointeTM series PFT檢測(cè)系統(tǒng)購(gòu)于美國(guó)諦思藹貿(mào)易有限公司，烘箱購(gòu)于上海新苗醫(yī)療設(shè)備有限公司，BS210S電子天平購(gòu)于德國(guó)賽多利斯集團(tuán)，LDZ5-2離心機(jī)購(gòu)于美國(guó)賽默飛世爾科技有限公司，RM2145自動(dòng)切片機(jī)購(gòu)于德國(guó)徠卡顯微系統(tǒng)貿(mào)易有限公司，YT-7F8生物組織攤烤片機(jī)和YB-6LF生物組織石蠟包埋機(jī)購(gòu)于湖北省孝感市亞光醫(yī)用電子技術(shù)有限公司，PM-10AD光學(xué)顯微鏡及圖像采集系統(tǒng)購(gòu)于日本奧林巴斯銷售服務(wù)有限公司，IVC-Ⅱ動(dòng)物飼養(yǎng)籠具購(gòu)于江蘇省蘇州市馮氏實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)備有限公司。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d，室溫（25±1）℃，濕度（50%±10%），換氣量（15±5）次/h，氨濃度≤14 mg/m3，噪聲≤60 db。12 h晝夜交替照明，自由飲純水、飼料。采用EXCEL RAND函數(shù)法將60只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、COPD穩(wěn)定期（COPD）組、AECOPD組、西藥組、中西醫(yī)結(jié)合組。每日觀察并記錄大鼠一般情況，包括皮毛色澤，活動(dòng)度，靈敏度，進(jìn)食、進(jìn)水量等。本實(shí)驗(yàn)已通過(guò)河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)審批（批號(hào)：YFYDW2018015）。

1.6 模型制備

1.6.1 預(yù)實(shí)驗(yàn) 采用梯度濃度LPS溶液鼻腔內(nèi)滴注聯(lián)合香煙煙霧暴露法制備COPD穩(wěn)定期-急性加重期模型，熱暴露法模擬痰熱證。80只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、LPS 0.5 mg組、LPS 1.0 mg組、LPS 2.0 mg組，每組20只。第0周、第4周、第8周、第12周和模擬急性加重前，檢測(cè)肺功能并分析數(shù)據(jù)；第8周、第12周結(jié)束時(shí)，分批取材觀察肺組織病理。除對(duì)照組、COPD組外，第13周第1天起，半數(shù)模型大鼠進(jìn)行熱暴露并持續(xù)9 d，模擬痰熱證。第13周第6天，將熱暴露的大鼠鼻腔內(nèi)一次性滴注濃度加倍的LPS模擬急性加重期。第13周第5天起，每日檢測(cè)所有大鼠肛溫，隔日尾靜脈采血，檢測(cè)血常規(guī)各指標(biāo)，血清C反應(yīng)蛋白（CRP）和血清淀粉樣蛋白A（SAA）表達(dá)水平至炎性指標(biāo)恢復(fù)至接近COPD穩(wěn)定期水平。

綜合肺組織病理、肛溫、CRP和SAA，LPS 1.0 mg組大鼠于第8周末已成功建立COPD穩(wěn)定期大鼠模型，LPS溶液濃度適宜，大鼠死亡率低。確定COPD穩(wěn)定期大鼠模型的建立周期為8周，LPS鼻腔內(nèi)滴注的最佳濃度為1 mg/kg體質(zhì)量，COPD痰熱證急性加重期的LPS最佳濃度為2 mg/kg體質(zhì)量，急性加重持續(xù)時(shí)間為6～8 d。該模型的炎癥特點(diǎn)、肺功能、肺形態(tài)學(xué)具有穩(wěn)定性，適宜用于后續(xù)研究。

1.6.2 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?COPD穩(wěn)定期模型：除對(duì)照組外，其余組別給予LPS溶液以1 mg/kg體質(zhì)量經(jīng)鼻腔滴入，2次/周，持續(xù)8周［13］；對(duì)照組大鼠滴入等體積0.9%氯化鈉溶液。除對(duì)照組外，其余組別均進(jìn)行香煙煙霧暴露，采用有機(jī)玻璃熏煙箱，體積189 L，煙霧濃度（3 000±500）ppm，30 min/次，2次/d，間隔≥3 h，持續(xù)8周；對(duì)照組大鼠置于通風(fēng)良好的室內(nèi)。經(jīng)鼻腔滴入LPS溶液當(dāng)天，不進(jìn)行香煙煙霧暴露。模型成功標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)及文獻(xiàn)［14］。

COPD痰熱證急性加重期模型：除對(duì)照組、COPD組外，于造模第9周第1天起，將半數(shù)模型大鼠置于烘箱進(jìn)行熱暴露，溫度（38±1）℃，濕度50%，風(fēng)速1 m/s，30 min/次，2次/d，間隔≥3 h，持續(xù)9 d模擬痰熱證［14］。實(shí)驗(yàn)第9周第6天給予熱暴露的大鼠鼻腔滴入LPS溶液2 mg/kg體質(zhì)量模擬急性加重期。急性加重當(dāng)天，不進(jìn)行熱暴露。

1.7 藥物干預(yù) 西藥組、中西醫(yī)結(jié)合組于造模第9周第7天分別灌胃相應(yīng)藥物，急性加重期灌胃持續(xù)8 d、穩(wěn)定期灌胃持續(xù)14 d［14］，對(duì)照組、COPD組及AECOPD組全程灌胃0.9%氯化鈉溶液，各組藥物干預(yù)計(jì)劃見(jiàn)表1。藥物劑量采用等效劑量系數(shù)換算公式計(jì)算。D大鼠=D人×（HI大鼠/HI人）×（W人/W大鼠）2/3。注：D為劑量，HI為體型系數(shù)，W為體質(zhì)量。各藥物灌胃劑量：通塞顆粒為 7.2 g·kg-1·d-1，補(bǔ)肺益腎方為 4.42 g·kg-1·d-1，鹽酸莫西沙星片為0.027 g·kg-1·d-1，硫酸沙丁胺醇片為0.41 mg·kg-1·d-1；每周稱量一次大鼠體質(zhì)量，以調(diào)整灌胃用量。

表1 各組藥物干預(yù)計(jì)劃Table 1 Intervention plans of five groups of rats

1.8 取材與指標(biāo)檢測(cè) 藥物干預(yù)結(jié)束后取材，取材前大鼠禁食12 h，自由飲水。采用3%戊巴比妥鈉（2.5 ml/kg）腹腔麻醉，氣管插管，檢測(cè)肺功能，隨后腹主動(dòng)脈采血并取材。

1.8.1 體質(zhì)量 每周稱量大鼠體質(zhì)量（g）。

觀察組無(wú)效4例,有效19例,顯效9例,,總有效率87.5%,對(duì)照組無(wú)效14例,有效17例,顯效5例,總有效率56.25%,兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=2.52,p<0.05)。

1.8.2 肺功能造模 第0、1、4、8周和急性加重前分別使用WBP無(wú)束縛小動(dòng)物全身體積描記儀檢測(cè)潮氣量（TV）、呼氣峰流速（PEF）、50%潮氣量呼氣流量（EF50）；取材前使用Fine PointeTM series PFT檢測(cè)FVC、FEV0.3，計(jì)算 FEV0.3/FVC。

1.8.3 肺、腸組織CD3+和CD4+表達(dá)水平 取左肺經(jīng)左主支氣管恒壓灌注10%中性甲醛溶液2 h，然后置于新鮮配制的10%中性甲醛固定液中固定72 h。從肛門(mén)向上截取5 cm腸組織，清除其內(nèi)容物，0.9%氯化鈉溶液洗2次，置于新鮮配制的10%中性甲醛固定液中固定72 h。分別切取3 mm組織，石蠟包埋，4 μm切片，常規(guī)HE染色。采用免疫組化試劑盒檢測(cè)CD3+和CD4+表達(dá)。

1.8.4 肺、腸組織sIgA表達(dá)水平 分別取右肺下葉100 mg組織和100 mg腸組織，用無(wú)菌剪剪碎，按1∶9比例加入0.9%氯化鈉溶液，放置于組織破碎機(jī)10 min進(jìn)行充分勻漿，3 000 rpm離心10 min（r=5 cm），收集上清液。ELISA試劑盒檢測(cè)sIgA表達(dá)水平。

1.8.5 顯微鏡觀察 每張切片取6個(gè)視野（200×），采用Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件（USA），以棕黃色區(qū)域光密度值（IOD）的平均值統(tǒng)計(jì)陽(yáng)性結(jié)果。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用GraphPad Prism 7.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)并作圖。計(jì)量資料以（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，方差齊時(shí)采用Tukey's法進(jìn)行多重檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 對(duì)照組大鼠皮毛光滑，活動(dòng)度正常，反應(yīng)靈敏，進(jìn)食量、進(jìn)水量如常，糞便呈顆粒狀；其余組別大鼠皮毛光澤度下降，皮毛色澤偏黃，活動(dòng)明顯減少、敏捷度下降、出現(xiàn)蜷縮現(xiàn)象，進(jìn)食量、進(jìn)水量減少，糞便稀溏不成形。藥物治療后的大鼠進(jìn)食量、進(jìn)水量增加，中西醫(yī)結(jié)合組大鼠的糞便逐漸形成顆粒狀。對(duì)照組、COPD組無(wú)大鼠死亡，其他組均出現(xiàn)2～3只大鼠死亡，尸檢可見(jiàn)死亡大鼠胸腔出現(xiàn)不同程度的肺淤血、肺體積增大，腹腔出現(xiàn)不同程度的粘連、血性積液。

2.2 體質(zhì)量 各組大鼠體質(zhì)量隨周齡增長(zhǎng)，其他組別體質(zhì)量全程低于對(duì)照組。第9周急性加重后，AECOPD組持續(xù)低增長(zhǎng)，見(jiàn)圖1A。干預(yù)結(jié)束后，五組體質(zhì)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=88.74，P＜0.05）。COPD組體質(zhì)量低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=16.320，P＜0.05）；AECOPD組體質(zhì)量低于COPD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=8.925，P＜0.05）；西藥組、中西醫(yī)結(jié)合組體質(zhì)量高于AECOPD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q西藥組=9.026，q中西醫(yī)結(jié)合組=10.430，P＜0.05）；西藥組、中西醫(yī)結(jié)合組體質(zhì)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=1.912，P＞0.05），見(jiàn)圖 1B。

圖1 各組大鼠體質(zhì)量變化Figure 1 Body weight change of rats in each group

2.3 肺功能 第0～8周，對(duì)照組大鼠的TV、PEF、EF50隨時(shí)間增長(zhǎng)，其他組別TV、PEF、EF50全程低于對(duì)照組，見(jiàn)圖2A～C。第8周結(jié)束時(shí)，COPD組、AECOPD組、西藥組、中西醫(yī)結(jié)合組的TV、PEF、EF50低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（FTV=17.00，F(xiàn)PEF=43.69，F(xiàn)EF50=13.54，P＜0.05）；COPD組、AECOPD組、西藥組、中西醫(yī)結(jié)合組TV、PEF、EF50比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)圖2D～F。

藥物干預(yù)結(jié)束時(shí)，五組大鼠的FEV0.3比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=155.70，P＜0.05）。COPD組FEV0.3低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=20.070，P＜0.05）；AECOPD組FEV0.3低于COPD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=11.310，P＜0.05）；西藥組、中西醫(yī)結(jié)合組FEV0.3高于AECOPD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q西藥組=16.750，q中西醫(yī)結(jié)合組=24.890，P＜0.05）；中西醫(yī)結(jié)合組 FEV0.3高于西藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=9.272，P＜0.05），見(jiàn)圖2G。

圖2 各組大鼠肺功能變化比較Figure 2 Changes of lung function of rats in each group

藥物干預(yù)結(jié)束時(shí)五組大鼠FVC比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=83.73，P＜0.05）。COPD組FVC低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=16.190，P＜0.05）；AECOPD組FVC低于COPD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=7.336，P＜0.05）；西藥組、中西醫(yī)結(jié)合組FVC高于AECOPD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q西藥組=13.040，q中西醫(yī)結(jié)合組=17.640，P＜0.05）；中西醫(yī)結(jié)合組FVC高于西藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=5.597，P＜0.05），見(jiàn)圖2H。

藥物干預(yù)結(jié)束時(shí)五組大鼠FEV0.3/FVC比較，差異 有 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 意 義（F=123.00，P＜0.05）。COPD組FEV0.3/FVC低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=10.560，P＜0.05）；AECOPD組FEV0.3/FVC低于COPD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=16.630，P＜0.05）；西藥組、中西醫(yī)結(jié)合組FEV0.3/FVC高于AECOPD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q西藥組=17.400，q中西醫(yī)結(jié)合組=25.500，P＜0.05）；中西醫(yī)結(jié)合組FEV0.3/FVC高于西藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=9.275，P＜0.05），見(jiàn)圖 2I。

2.4 肺組織和腸組織sIgA表達(dá)水平 五組大鼠的肺組織sIgA表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=700.20，P＜0.05）。COPD組大鼠肺組織sIgA表達(dá)水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=50.030，P＜0.05）；AECOPD組肺組織sIgA表達(dá)水平低于COPD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=19.260，P＜0.05）；西藥組、中西醫(yī)結(jié)合組肺組織sIgA表達(dá)水平高于AECOPD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q西藥組=10.580，q中西醫(yī)結(jié)合組=16.000，P＜0.05）；中西醫(yī)結(jié)合組肺組織sIgA表達(dá)水平高于西藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=5.072，P＜0.05），見(jiàn)圖3A。

五組大鼠的腸組織sIgA表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=1 113.00，P＜0.05）。COPD組大鼠腸組織sIgA表達(dá)水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=43.460，P＜0.05）；AECOPD組腸組織sIgA表達(dá)水平低于COPD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=49.970，P＜0.05）；西藥組、中西醫(yī)結(jié)合組腸組織sIgA表達(dá)水平高于AECOPD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q西藥組=26.470，q中西醫(yī)結(jié)合組=34.530，P＜0.05）；中西醫(yī)結(jié)合組腸組織sIgA表達(dá)水平高于西藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=9.359，P＜0.05），見(jiàn)圖 3B。

圖3 各組大鼠sIgA表達(dá)水平比較Figure 3 Expression of sIgA in rats of each group

2.5 肺組織CD3+和CD4+表達(dá)水平 五組大鼠的肺組織CD3+表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=96.39，P＜0.05）。COPD組大鼠肺組織CD3+表達(dá)水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=15.700，P＜0.05）；AECOPD組肺組織CD3+表達(dá)水平低于COPD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=12.980，P＜0.05）；西藥組、中西醫(yī)結(jié)合組肺組織CD3+表達(dá)水平高于AECOPD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q西藥組=12.690，q中西醫(yī)結(jié)合組=16.120，P＜0.05）；中西醫(yī)結(jié)合組肺組織CD3+表達(dá)水平高于西藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=5.654，P＜0.05），見(jiàn)圖4A，圖4C～G。

圖4 各組大鼠肺組織CD3+和CD4+表達(dá)水平比較Figure 4 Expression of CD3+ and CD4+ in lung tissue of rats in each group

五組大鼠的肺組織CD4+表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=418.80，P＜0.05）。COPD組大鼠肺組織CD4+表達(dá)水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=34.140，P＜0.05）；AECOPD組肺組織表達(dá)水平低于COPD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=23.150，P＜0.05）；西藥組、中西醫(yī)結(jié)合組肺組織CD4+表達(dá)水平高于AECOPD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q西藥組=12.760，q中西醫(yī)結(jié)合組=16.160，P＜0.05）；西藥組、中西醫(yī)結(jié)合組肺組織CD4+表達(dá)水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=3.776，P＞0.05），見(jiàn)圖4B，圖4H～L。

2.6 腸組織CD3+和CD4+表達(dá)水平 五組大鼠的腸組織CD3+表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=174.10，P＜0.05）。COPD組大鼠腸組織CD3+表達(dá)水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=23.510，P＜0.05）；AECOPD組腸組織CD3+表達(dá)水平低于COPD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=13.910，P＜0.05）；西藥組、中西醫(yī)結(jié)合組腸組織CD3+表達(dá)水平高于AECOPD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q西藥組=8.498，q中西醫(yī)結(jié)合組=11.460，P＜0.05）；西藥組、中西醫(yī)結(jié)合組腸組織CD3+表達(dá)水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=3.288，P＞0.05），見(jiàn)圖5A，圖5C～G。

五組大鼠的腸組織CD4+表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=90.66，P＜0.05）。COPD組大鼠腸組織CD4+表達(dá)水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=18.800，P＜0.05）；AECOPD組腸組織CD4+表達(dá)水平低于COPD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=11.320，P＜0.05）；西藥組、中西醫(yī)結(jié)合組腸組織CD4+表達(dá)水平高于AECOPD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q西藥組=10.430，q中西醫(yī)結(jié)合組=13.240，P＜0.05）；西藥組、中西醫(yī)結(jié)合組腸組織CD4+表達(dá)水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=3.348，P＞0.05），見(jiàn)圖5B，圖5H～L。

圖5 各組大鼠腸組織CD3+和CD4+表達(dá)水平比較Figure 5 Expression of CD3+ and CD4+ in intestinal tissue of rats in each group

3 討論

本實(shí)驗(yàn)的模型組大鼠皮毛光澤度下降，皮毛色澤偏黃，表現(xiàn)出活動(dòng)明顯減少、敏捷度下降、蜷縮現(xiàn)象，進(jìn)食量、進(jìn)水量減少，體質(zhì)量增長(zhǎng)速度緩慢，糞便稀溏不成形。藥物治療后的大鼠進(jìn)食量、進(jìn)水量增加，體質(zhì)量較AECOPD組大鼠顯著增長(zhǎng)，糞便逐漸形成顆粒狀。臨床重度和極重度COPD的常見(jiàn)癥狀包括腹脹便溏、形體消瘦、倦怠無(wú)力等［15-16］，對(duì)判斷預(yù)后具有重要價(jià)值［17］。肌肉量降低的COPD患者，在院內(nèi)死亡率、住院天數(shù)、住院費(fèi)用方面顯著高于非肌肉量降低的患者［18］。以上研究結(jié)果提示，中西醫(yī)結(jié)合治療COPD痰熱證急性加重-穩(wěn)定期大鼠，能夠通過(guò)提高大鼠的進(jìn)食、進(jìn)水量，促進(jìn)大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)，通過(guò)改善糞便狀態(tài)，緩解大鼠腹瀉表現(xiàn)，從而改善大鼠的生存質(zhì)量。

本實(shí)驗(yàn)于第8周結(jié)束后，模型組大鼠的TV、PEF、EF50顯著低于對(duì)照組；取材前，AECOPD組大鼠的FVC、FEV0.3和FEV0.3/FVC顯著低于西藥組和中西醫(yī)結(jié)合組，且中西醫(yī)結(jié)合組療效更顯著。COPD的特點(diǎn)是持續(xù)的呼吸道癥狀和氣流受限，臨床中的肺功能檢測(cè)是對(duì)氣流限制最具重復(fù)性和客觀性的測(cè)量方法［1］。本實(shí)驗(yàn)中，模型大鼠的肺功能相關(guān)指標(biāo)降低與臨床研究肺功能的變化一致，提示中西醫(yī)結(jié)合治療COPD痰熱證急性加重-穩(wěn)定期，能夠通過(guò)提高肺功能從而改善大鼠的呼吸功能。

本實(shí)驗(yàn)中，AECOPD組大鼠肺組織和腸組織中的sIgA表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組，藥物治療可使肺組織和腸組織中sIgA表達(dá)水平升高，中西醫(yī)結(jié)合治療組的sIgA表達(dá)水平升高更顯著。COPD患者氣道表面普遍存在sIgA表達(dá)缺損［2］，與慢性細(xì)菌侵襲、中性粒細(xì)胞炎癥及COPD氣流阻塞的嚴(yán)重程度相關(guān)［3-4］。當(dāng)呼吸道感染時(shí)，病原微生物入侵并黏附于上皮，刺激黏膜局部產(chǎn)生免疫應(yīng)答，并通過(guò)黏膜免疫歸巢遷移的途徑影響傳變到腸道，使肺和腸道的sIgA的合成與分泌減少，黏膜局部抗感染能力較弱，又增加肺部病變。慢性炎癥與免疫機(jī)制相互交織，相互促進(jìn)，形成惡性循環(huán)［19］。中西醫(yī)結(jié)合治療COPD痰熱證急性加重-穩(wěn)定期大鼠，能夠顯著升高大鼠肺組織和腸組織中的sIgA表達(dá)水平，從而改善肺組織和腸組織的免疫屏障功能。

作者貢獻(xiàn)：李曉俊、李亞進(jìn)行研究設(shè)計(jì)與實(shí)施、資料收集整理、撰寫(xiě)論文并對(duì)文章負(fù)責(zé)；卞晴晴、軒銀霜、沈婷婷參與動(dòng)物飼養(yǎng)、干預(yù)、取材、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄；李素云進(jìn)行質(zhì)量控制。

本文無(wú)利益沖突。