杜仲葉提取物對湘黃土雞蛋品質(zhì)、營養(yǎng)成分及血清抗氧化能力的影響

龔衛(wèi)華， 彭 歡， 賀建武，3*， 胡美忠， 胡 娟， 藍(lán)道英

（1.吉首大學(xué)杜仲綜合利用技術(shù)國家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室，湖南 吉首 416000；2.湘西州農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測中心，湖南 吉首 416000；3.吉首大學(xué)生物資源與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，湖南 吉首 416000；4.銅仁職業(yè)學(xué)院，貴州 銅仁 554300；5.張家界瀟湘農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司，湖南 慈利 427200）

隨著生活水平和健康理念的提高，人們更加注重飲食的營養(yǎng)均衡，安全、天然和無公害食品需求日益旺盛。散養(yǎng)土雞蛋因其營養(yǎng)豐富，口感好深受人們的喜愛。但散養(yǎng)土雞蛋因其規(guī)模小，生產(chǎn)效率低，不能滿足市場的要求。因此，開發(fā)新型綠色添加劑，在確保蛋雞品質(zhì)的前提下，實(shí)現(xiàn)規(guī)模養(yǎng)殖，能有效緩解市場供不應(yīng)求的狀況。

杜仲葉來源廣泛，營養(yǎng)豐富，富含綠原酸、桃葉珊瑚苷、黃酮和京尼平苷等多種天然活性成分，具有抗菌、抗氧化、促進(jìn)動物生長和增強(qiáng)機(jī)體免疫力等多種功效，已被國家列入飼料添加劑目錄（毛亞芳等，2021；王娟娟，2017；劉云龍，2015；呂武興等，2007）。劉青翠等（2018）研究發(fā)現(xiàn)，添加300g/t杜仲葉提取物可增加蛋殼厚度，降低蛋黃膽固醇含量，增加血清多種抗氧化酶活性。而且杜仲提取能作為飼料添加劑提高奶牛的生產(chǎn)性能和乳品質(zhì)（孔韜，2020）。因此，杜仲葉提取物作為飼料添加劑是確實(shí)可行的。但杜仲葉提取物對湘黃土雞的蛋品質(zhì)和營養(yǎng)成分研究鮮見相關(guān)報(bào)道。因此，本試驗(yàn)研究以杜仲提取物為主添加少量其他中草藥提取物復(fù)配飼料添加劑對籠養(yǎng)湘黃土雞蛋品質(zhì)、營養(yǎng)成分及血清抗氧化指標(biāo)的影響，并與散養(yǎng)湘黃土雞的相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行比較，以期為高品質(zhì)雞蛋的生產(chǎn)提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)材料與設(shè)計(jì) 杜仲葉提取物購于張家界恒興生物科技有限公司，復(fù)配少量的黃芪多糖和大蒜素，購于汝州濟(jì)生康生物技術(shù)有限公司。試驗(yàn)選取體重和產(chǎn)蛋率接近的8月齡湘黃土雞240只，隨機(jī)等分為3組，每組設(shè)5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)16只。I組為對照組，飼喂基礎(chǔ)日糧（籠養(yǎng)），II組為杜仲組，在基礎(chǔ)日糧中添加0.5%復(fù)配的飼料添加劑（籠養(yǎng)），III組為杜仲林下散養(yǎng)組，飼喂基礎(chǔ)日糧。I組和II組采用上下兩層階梯籠養(yǎng)。全期自由采食，自由飲水，按常規(guī)方法進(jìn)行飼養(yǎng)管理。設(shè)預(yù)試期2周，試驗(yàn)期10周。

1.2樣品的收集 試驗(yàn)結(jié)束前，禁食12 h，每個(gè)重復(fù)選取6只雞，翅下靜脈采血，靜置，3000 r/min離心10 min，分離的血清于-20℃保存。試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天每個(gè)重復(fù)分別取30枚雞蛋，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3指標(biāo)測定

1.3.1 蛋品質(zhì)的檢測 用上海佑科YP20001（0.1~2000 g）電子天平稱量蛋重；蛋型指數(shù)測定計(jì)（Tenovo Food NFN385）測量其長短徑，計(jì)算蛋形指數(shù)；用蛋殼厚度測量器（Tenovo Food TQ-1A）測量蛋殼厚度；蛋白高度測定儀（Tenovo Food EQ-1A）測量蛋白的高度，利用蛋質(zhì)計(jì)算尺（Tenovo Food MQ-1A）計(jì)算哈氏單位；用蛋殼強(qiáng)度計(jì)（KQ-1A）計(jì)算蛋殼強(qiáng)度；用羅氏蛋黃比色扇測定蛋黃色澤。

1.3.2 雞蛋中營養(yǎng)成分測定 全蛋中氨基酸參照《食品中氨基酸的測定（GB/T5009.124-2003）》的方法進(jìn)行檢測；蛋黃中膽固醇參照《食品中膽固醇的測定（GB/T 22220-2008）》方法檢測；粗蛋白質(zhì)測定參照《GB 5009.5-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中蛋白質(zhì)的測定》中的凱氏定氮法；粗脂肪測定參考《GB 5009.6-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脂肪的測定》中的索氏抽提法；灰分測定方法參照《GB 5009.4-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中灰分的測定》；水分測定參照《GB 5009.3-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中水分的測定》。

1.3.3 血清抗氧化能力測定 血清中過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量嚴(yán)格按照南京建成生物工程研究所試劑盒中的說明書進(jìn)行操作。

1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 原始數(shù)據(jù)采用Excel 2010進(jìn)行初步處理，采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，用Duncan’s法進(jìn)行多重比較，以P<0.05為差異顯著判斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1杜仲葉提取物對蛋品質(zhì)的影響 由表1可知，添加飼料添加劑和不同飼養(yǎng)方式對蛋殼厚度、蛋形指數(shù)和哈夫單位無顯著影響，三組雞蛋的哈夫單位在60~72，為A級雞蛋，蛋殼厚度在0.27~0.40 mm，說明湘黃土雞的雞蛋較新鮮，蛋殼質(zhì)量好（劉忠偉等，2015）。但杜仲組和散養(yǎng)組蛋殼強(qiáng)度及蛋黃顏色要顯著好于對照組，而杜仲組和散養(yǎng)組之間無明顯差異。

表1 杜仲提取物對蛋品質(zhì)的影響

2.2杜仲葉提取物對雞蛋常規(guī)營養(yǎng)成分的影響對雞蛋常規(guī)營養(yǎng)成分測定的結(jié)果見表2。三組試驗(yàn)雞蛋的蛋白質(zhì)、脂肪、灰分和水分含量之間無顯著差異。但在蛋黃膽固醇的含量上，杜仲提取物和散養(yǎng)試驗(yàn)組要顯著低于對照組。

表2 杜仲提取物對雞蛋常規(guī)營養(yǎng)成分的影響

2.3杜仲葉提取物對湘黃土雞蛋氨基酸組成和含量的影響 三組湘黃土雞蛋氨基酸組成及含量見表3。三組土雞蛋中均含有17種氨基酸和7種人體必需氨基酸。以谷氨酸含量最高，其次是天門冬氨酸。其中對照組和杜仲組雞蛋與散養(yǎng)組大多數(shù)氨基酸含量存在顯著差異。而對照組和杜仲組之間只有脯氨酸、亮氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸和半胱氨酸含量有顯著差異。散養(yǎng)組雞蛋在總氨基酸和總必需氨基酸含量上最高，其次為杜仲組，最少的是對照組。除對照組必需氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)（38.33%）以外，杜仲組和散養(yǎng)組EAA/TAA（40.32%、40.60%）及對照組、杜仲組和散養(yǎng)組的必需氨基酸與非必需氨基酸的比值（EAA/NEAA）（62.17%、67.55%和68.35%）均高于WHO/FAO理想蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)定的40%和60%（王延云等，2020）。

表3 杜仲提取物對湘黃土雞蛋氨基酸組成及含量的影響

2.4必需氨基酸與WHO/FAO氨基酸模式譜比較1973年，世界衛(wèi)生組織（WHO）和聯(lián)合國糧農(nóng)組織（FAO）提出了氨基酸模式譜理論，并以此為指導(dǎo)對各類食品中的氨基酸進(jìn)行評價(jià)（范佳英等，2018；Para，1979）。由表4可知，三組湘黃土雞蛋其必需氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)都超過WHO/FAO模式譜中的參考值，其必需氨基酸組成模式基本符合人體理想蛋白質(zhì)的要求。

表4 湘黃土雞蛋中必需氨基酸占總氨基酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)與氨基酸模式譜比較

2.5氨基酸比值系數(shù)法評價(jià)雞蛋營養(yǎng)價(jià)值 為了更好說明湘黃土雞蛋在不同飼喂條件下蛋白質(zhì)的營養(yǎng)價(jià)值，利用氨基酸比值系數(shù)法來綜合評價(jià)。該方法通過計(jì)算氨基酸比值（RAA）、氨基酸比值系數(shù)（RC）和氨基酸比值系數(shù)分（SRC）共同綜合評價(jià)雞蛋的蛋白質(zhì)營養(yǎng)價(jià)值（宋超等，2016）。RAA和RC值越接近1，SRC值越接近100，蛋白質(zhì)中的必需氨基酸組成與氨基酸模式譜越一致，說明蛋白質(zhì)的營養(yǎng)價(jià)值越高（王延云等，2020）。由表5可知，對照組雞蛋中異亮氨酸的RC值最分散，對氨基酸生理平衡的負(fù)貢獻(xiàn)最大，是對照組雞蛋中的第一限制性氨基酸，而杜仲組和散養(yǎng)組雞蛋中的第一限制氨基酸均為蛋氨酸和半胱氨酸。對照組、杜仲組和散養(yǎng)組湘黃土雞蛋的SRC平均值為87.67，各組SRC值分別為86.44、87.45和89.12，其中散養(yǎng)組SRC值最高，說明杜仲林下散養(yǎng)的土雞蛋營養(yǎng)價(jià)值最高，而杜仲組的SRC值也要高于對照組。

表5 湘黃土雞蛋中各種必需氨基酸的RAA、RC及SRC

2.6杜仲葉提取對湘黃土雞血清抗氧化能力的影響 由表6可知，對照組雞血清中的丙二醛含量要顯著高于杜仲組和散養(yǎng)組，其中散養(yǎng)組值為最低，對于谷胱甘肽過氧化物酶和過氧化氫酶活性，杜仲組和散養(yǎng)組要顯著高于對照組，杜仲組和散養(yǎng)組之間差異不明顯。3組湘黃土雞血清的超氧化物歧化酶活性值差異不明顯。

表6 杜仲提取物對雞血清抗氧化性能的影響

3 討論

3.1杜仲葉提取物對蛋品質(zhì)的影響 蛋殼厚度、蛋殼強(qiáng)度、蛋形指數(shù)和哈氏單位是衡量蛋品質(zhì)的重要指標(biāo)。毛亞芳等（2021）研究表明，在飼料中添加杜仲葉粉對蛋殼厚度、蛋殼強(qiáng)度、蛋形指數(shù)和哈氏單位無顯著影響，與本試驗(yàn)中的蛋殼厚度、蛋形指數(shù)和哈氏單位的結(jié)果一致。而劉青翠等（2018）在蛋雞飼糧中添加杜仲葉提取物飼喂28 d，能提高雞蛋的哈氏單位，在飼喂56天時(shí)，蛋殼的厚度和強(qiáng)度顯著增加，本試驗(yàn)蛋殼強(qiáng)度顯著增加的結(jié)果與其一致，可能是因?yàn)槎胖偃~提取物影響蛋雞輸卵管和子宮中鈣結(jié)合蛋白（CaBP）表達(dá)量，從而影響蛋殼鈣沉積，最終影響蛋殼質(zhì)量（劉青翠等，2018；俞路等，2008）。蛋黃顏色的深淺主要取決飼養(yǎng)方法（放養(yǎng)）及家禽日糧中攝入的葉黃素及類胡蘿卜素的種類和數(shù)量（劉靜霖，2021），其影響著消費(fèi)者的購買決策。本試驗(yàn)杜仲組和放養(yǎng)組蛋黃顏色在均有顯著高于對照組，說明杜仲提取物添加和散養(yǎng)的方式能夠在一定程度上增強(qiáng)雞蛋中葉黃素、胡蘿卜素的沉積（張琳杰等，2013）。

3.2杜仲葉提取物對雞蛋常規(guī)營養(yǎng)成分的影響雞蛋中膽固醇含量直接限制了雞蛋食用量，所以雞蛋膽固醇的含量是衡量雞蛋品質(zhì)的一個(gè)重要指標(biāo)（段明房等，2017）。劉青翠等（2018）研究表明，在蛋雞飼料中添加杜仲葉提取物能顯著降低蛋黃中膽固醇含量，段明房等（2017）發(fā)現(xiàn)，添加發(fā)酵杜仲葉粉也能顯著降低膽固醇含量，本試驗(yàn)結(jié)果與上述結(jié)果一致。可能是因?yàn)槎胖偃~提取物中綠原酸可降低血清3-羥基-3甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶（HMGR）活性，該酶為膽固醇合成代謝的關(guān)鍵限速酶，其活性高低與膽固醇合成成正相關(guān)，抑制其活性可減少體內(nèi)膽固醇合成，使膽固醇分解為膽汁酸，進(jìn)而降低蛋黃中膽固醇的含量（李文娜等，2012；張瑞仙，2012）。

3.3杜仲葉提取物對湘黃土雞蛋氨基酸組成和含量的影響 氨基酸的組成和含量是評價(jià)雞蛋營養(yǎng)價(jià)值的重要指標(biāo)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，3組湘黃土雞蛋中均含有17種氨基酸和7種人體必需的氨基酸。對照組和杜仲組之間只有脯氨酸、亮氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸和半胱氨酸含量有顯著差異，其他氨基酸含量差異不顯著。徐峰（2010）在羅曼蛋雞中添加杜仲葉粉，研究發(fā)現(xiàn)絲氨酸和酪氨酸顯著高于對照組，而張瑞仙（2012）試驗(yàn)中丙氨酸、纈氨酸和脯氨酸顯著提高，其結(jié)果不同可能是由試驗(yàn)蛋雞品種和添加杜仲物形式不一樣所致。而散養(yǎng)組氨基酸總量和必需氨基酸總量均高于對照組和杜仲組，與胡小芳等（2019）研究結(jié)果一致，說明不同飼養(yǎng)方式會對雞蛋氨基酸組成和含量造成影響。杜仲組和散養(yǎng)組的EAA/TAA（40.32%、40.60%）高于WHO/FAO理想蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)定的40%，而對照組為38.34%低于40%，而在必需氨基酸和鮮味氨基酸總量上，杜仲組均高于對照組，說明飼糧中添加杜仲提取物在一定程度上提高了雞蛋營養(yǎng)價(jià)值和鮮味。

3.4氨基酸模式譜及比值系數(shù)法評價(jià)雞蛋營養(yǎng)價(jià)值 氨基酸組成比例不合適會影響蛋白質(zhì)的營養(yǎng)價(jià)值，甚至影響人類的身體健康，因此WHO/FAO提出氨基酸平衡理論，采用氨基酸比值系數(shù)法綜合評價(jià)蛋白質(zhì)營養(yǎng)價(jià)值。對照組、杜仲組和散養(yǎng)組3組湘黃土雞蛋其必需氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)都超過WHO/FAO模式譜中的參考值，其必需氨基酸組成模式基本符合人體理想蛋白質(zhì)的要求。3組湘黃土雞蛋的SRC平均值為87.67，高于胡小芳等（2019）舊院黑雞SRC值（85.94）和王延云等（2020）七彩山雞SRC值（85.56），說明湘黃土雞全蛋必需氨基酸組成合理，雞蛋的營養(yǎng)價(jià)值高。散養(yǎng)組的SRC值最高，其次為杜仲組，進(jìn)一步說明通過添加杜仲提取物，提高了雞蛋的營養(yǎng)價(jià)值。

3.5杜仲葉提取對湘黃土雞血清抗氧化能力的影響 杜仲葉提取物中富含綠原酸、黃酮類化合物，使其具有抗氧化活性。而血清中的超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶和過氧化氫酶是機(jī)體細(xì)胞內(nèi)清除自由基的抗氧化酶，丙二醛是脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，其含量越低說明機(jī)體清除活性氧的能力越強(qiáng)（丁浩軒等，2020）。本研究表明，杜仲組血清中谷胱甘肽過氧化物酶和過氧化氫酶顯著高于對照組，而丙二醛的含量顯著低于對照組，表明提高了機(jī)體抗氧化活性，與劉青翠等（2018）研究結(jié)果一致。研究發(fā)現(xiàn)杜仲葉提取物能顯著提高黃羽肉雞的血清和肝臟中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶的活性，顯著降低丙二醛的含量，提高機(jī)體的抗氧化能力（丁浩軒等，2020）。這在小鼠和斷奶仔豬中進(jìn)一步得到證實(shí)（王鑫等，2019；Choi等，2008）。杜仲葉提取物能提高機(jī)體抗氧化能力可能是因?yàn)樘崛∥镏芯G原酸和黃酮類物質(zhì)對活性氧自由基的抵御清除能力，可阻止其對正常細(xì)胞的侵害，提高機(jī)體自身多種抗氧化物酶的活性，從而提高機(jī)體的抗氧化能力。

4 結(jié)論

飼糧中添加0.5%杜仲葉提取物為主復(fù)配的飼料添加劑，可改善雞蛋的蛋殼強(qiáng)度和蛋黃色澤，降低蛋黃中膽固醇含量，提高湘黃土雞蛋蛋白質(zhì)的營養(yǎng)價(jià)值，顯著提高血清谷胱甘肽過氧化物酶和過氧化氫酶活性，降低丙二醛的含量，提高機(jī)體抗氧化活性。