甲狀腺乳頭狀癌術(shù)后血清缺氧誘導(dǎo)因子2α和可溶性白介素-2受體的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系研究

魏 坦

惠州仲愷高新區(qū)人民醫(yī)院，廣東 惠州 516000

甲狀腺是人體最大的內(nèi)分泌腺體，也是身體代謝的主 要調(diào)控器官。甲狀腺癌是臨床常見(jiàn)的甲狀腺惡性腫瘤，占全身惡性腫瘤的1%，其發(fā)病率與地區(qū)、種族、性別有關(guān)，其中女性發(fā)病率較高［1］。甲狀腺癌分型復(fù)雜，且不同分型甲狀腺癌病理發(fā)展規(guī)律不同，部分臨床癥狀較為隱匿，且生長(zhǎng)緩慢，已引起學(xué)者的廣泛關(guān)注［2］。國(guó)家癌癥中心研究［3］表明，近年來(lái)，我國(guó)甲狀腺癌發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，且乳頭狀腺癌在甲狀腺癌發(fā)病率的構(gòu)成比重逐年升高。甲狀腺乳頭狀癌病情進(jìn)展緩慢，外科手術(shù)治療的預(yù)后尚可。甲狀腺乳頭狀癌術(shù)后的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者死亡的主要原因。有研究［4］發(fā)現(xiàn)，缺氧誘導(dǎo)因子2α（HIF-2α）在腫瘤細(xì)胞中發(fā)揮著重要作用，其表達(dá)水平與患者的預(yù)后密切相關(guān)。慢性炎癥反應(yīng)參與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，其中可溶性白介素-2受體（SIL-2R）是白細(xì)胞介素家族較重要的細(xì)胞因子，其與肺癌、喉癌、消化系統(tǒng)腫瘤等多種惡性腫瘤有關(guān)［5］。本研究旨在探討甲狀腺乳頭狀癌術(shù)后血清HIF-2α、SIL-2R的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取惠州仲愷高新區(qū)人民醫(yī)院2018年1月―2020年10月收治的60例甲狀腺乳頭狀癌患者及60例術(shù)后病理證實(shí)的良性甲狀腺結(jié)節(jié)患者作為研究對(duì)象，分別為乳頭狀癌組和良性組。其中乳頭狀癌組男20例，女40例；年齡30～55歲，平均年齡（45.22±4.12）歲；身體質(zhì)量指數(shù)（BMI）16～26 kg/m2，平均BMI（22.35±2.25）kg/m2；病程1個(gè)月～4年，平均病程（1.93±0.35）年。良性組男22例，女38例；年齡31～55歲，平均年齡（45.34±4.10）歲；BMI 17～25 kg/m2，平均BMI（22.22±2.20）kg/m2；病程1個(gè)月～4年，平均病程（2.01±0.30）年。兩組患者一般資料具有可比性（P＞0.05）。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò)。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)內(nèi)分泌學(xué)分會(huì)制定的《甲狀腺結(jié)節(jié)和分化型甲狀腺癌診治指南》［6］中關(guān)于甲狀腺乳頭狀癌和良性甲狀腺結(jié)節(jié)診斷標(biāo)準(zhǔn)。（2）臨床資料齊全。（3）外科手術(shù)治療適應(yīng)證。（4）患者及家屬均知情同意本項(xiàng)研究等。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）妊娠期、哺乳期女性。（2）合并其他原發(fā)腫瘤。（3）全身感染性疾病。（4）嚴(yán)重凝血功能障礙。（5）既往有頸部手術(shù)史。（6）入組前甲狀腺乳頭狀癌患者接受過(guò)放化療。（7）甲狀腺乳頭狀癌已出現(xiàn)遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移。（8）酒精及藥物濫用史。

1.2 方法

1.2.1 收集臨床資料 收集甲狀腺乳頭狀癌患者的吸煙史、飲酒史、臨床分期、分化程度、隨訪復(fù)發(fā)等一般資料?；颊叱鲈汉?，每3個(gè)月采用門(mén)診復(fù)查、電話訪問(wèn)等多種方式的隨訪，隨訪時(shí)間1年，隨訪日期截至2021年10月，隨訪率為100%。

1.2.2 血清HIF-2α水平測(cè)定 以磷酸鹽緩沖溶液（PBS）作空白對(duì)照，切片脫蠟，滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物，PBS沖洗，加入HIF-2α一抗，4℃過(guò)夜，第2天PBS沖洗，蘇木素復(fù)染，碳酸鋰返藍(lán)，二甲苯透明，樹(shù)膠封片。結(jié)果判讀：深黃色3分，棕黃色2分，淡黃色1分，無(wú)色0分，細(xì)胞陽(yáng)性率在50%以上為3分，25%～50%為2分，5%～25%為1分，5%以下為0分。兩項(xiàng)得分相乘在3分及以上為陽(yáng)性。

1.2.3 血清SIL-2R水平測(cè)定 抽取患者清晨空腹外周靜脈血5 mL，緩慢注入含乙二胺四乙酸二鈉的干燥食管，3 000 r/min離心10 min，置于低溫環(huán)境保存?zhèn)溆?，采用全自?dòng)酶標(biāo)儀（美國(guó)BIO-RAD，型號(hào)680），使用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清SIL-2R水平。所有標(biāo)本經(jīng)10%甲醇固定，HE染色及免疫組化染色，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)呈棕黃色顆粒為陽(yáng)性，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在20%及以上為陽(yáng)性，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在20%以下為陰性。

1.3 觀察指標(biāo)

比較乳頭狀癌組和良性組患者血清HIF-2α、SIL-2R水平陽(yáng)性率，比較乳頭狀癌組患者血清HIF-2α和SIL-2R水平與臨床病理特征的關(guān)系及乳頭狀癌組患者預(yù)后復(fù)發(fā)情況與血清HIF-2α、SIL-2R水平陽(yáng)性表達(dá)的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。Pearson相關(guān)系數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析，多因素分析采用logistic回歸分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者血清HIF-2α、SIL-2R水平陽(yáng)性情況

乳頭狀癌組血清HIF-2α、SIL-2R水平陽(yáng)性率高于良性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組患者血清HIF-2α、SIL-2R水平陽(yáng)性情況 例（%）

2.2 乳頭狀癌組血清HIF-2α水平與臨床病理特征的關(guān)系

乳頭狀癌分化程度低、復(fù)發(fā)患者血清HIF-2α陽(yáng)性表達(dá)率高于分化程度高、無(wú)復(fù)發(fā)者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），血清HIF-2α陽(yáng)性表達(dá)率在其他病理特征間的比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 乳頭狀癌組血清HIF-2α水平與臨床病理特征的關(guān)系 例（%）

2.3 乳頭狀癌組血清SIL-2R水平與臨床病理特征的關(guān)系

乳頭狀癌分化程度低、復(fù)發(fā)患者血清SIL-2R陽(yáng)性表達(dá)率高于分化程度高、無(wú)復(fù)發(fā)者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），血清SIL-2R陽(yáng)性表達(dá)率在其他病理特征間的比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表3。

表3 乳頭狀癌組血清SIL-2R水平與臨床病理特征的關(guān)系 例（%）

2.4 乳頭狀癌組預(yù)后復(fù)發(fā)情況與血清HIF-2α、SIL-2R水平陽(yáng)性表達(dá)的關(guān)系

乳頭狀癌組患者預(yù)后復(fù)發(fā)與血清HIF-2α、SIL-2R水平均呈正相關(guān)（P＜0.05），見(jiàn)表4。

表4 乳頭狀癌組預(yù)后復(fù)發(fā)情況與血清HIF-2α、SIL-2R水平陽(yáng)性表達(dá)的關(guān)系

2.5 血清HIF-2α、SIL-2R水平表達(dá)與患者病理特征的多因素分析

logistic多因素分析結(jié)果顯示，甲狀腺乳頭狀癌組織中血清HIF-2α、SIL-2R陽(yáng)性表達(dá)是影響分化程度和復(fù)發(fā)情況的獨(dú)立因素（P＜0.05），見(jiàn)表5。

表5 血清HIF-2α、SIL-2R水平表達(dá)與患者病理特征的多因素分析

3 討論

甲狀腺癌的病因主要有缺碘、相關(guān)激素及放射線的慢性刺激、家族遺傳等，可發(fā)生在任何年齡段［7］。甲狀腺癌的早期特征不明顯，甲狀腺內(nèi)可觸及的表面不平的腫塊是主要臨床表現(xiàn)，給臨床診治造成一定的難度，容易耽誤治療，影響預(yù)后［8］。該疾病多見(jiàn)于女性，且以青中年人為主，由于女性甲狀腺癌常合并其他疾病，缺乏質(zhì)硬或固定等表現(xiàn)，導(dǎo)致臨床缺乏對(duì)年輕女性甲狀腺癌的重視程度，通常確診時(shí)已到中晚期［9］。近年來(lái)，甲狀腺癌的發(fā)病率不斷增高，其病理類型占比也有顯著變化，乳頭狀癌仍占最高比重，其發(fā)病率顯著升高，其他病理類型占比有所下降，相比于男性甲狀腺癌，女性甲狀腺癌發(fā)病率和惡性程度更高，預(yù)后也更差［10］。因此，分析甲狀腺癌的生物學(xué)機(jī)制，選擇合適的分子標(biāo)志物，對(duì)協(xié)助患者治療和判斷預(yù)后具有重要意義。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)和免疫學(xué)的不斷發(fā)展，甲狀腺乳頭狀癌的研究逐漸受到臨床關(guān)注，顯現(xiàn)出較高的應(yīng)用價(jià)值，但對(duì)于甲狀腺乳頭狀癌的分子生物學(xué)機(jī)制尚處于探索階段［11］。

缺氧誘導(dǎo)因子是人體普遍存在的一類轉(zhuǎn)錄因子，包括HIF-1α和HIF-2α，兩種生物學(xué)作用不同，目前，臨床關(guān)于HIF-1α的研究較多，而HIF-2α的研究相對(duì)較少［12］。缺氧是腫瘤惡性增殖過(guò)程中的普遍現(xiàn)象，腫瘤細(xì)胞能夠通過(guò)活化缺氧誘導(dǎo)因子對(duì)缺氧產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)［13］。缺氧誘導(dǎo)因子對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖機(jī)制涉及細(xì)胞分化、細(xì)胞代謝等生物過(guò)程［14］。缺氧狀態(tài)改下α和β亞基在細(xì)胞核內(nèi)形成活性狀態(tài)的HIF-2，其可激活血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子發(fā)揮作用。在甲狀腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中，有多種分子共同參與使腫瘤增殖，進(jìn)而發(fā)生遷移。SIL-2R是一種復(fù)合性黏蛋白，其能夠特異性的與IL-2結(jié)合，抑制機(jī)體的免疫反應(yīng)，減弱機(jī)體的內(nèi)分泌效應(yīng)，抑制已活化的T細(xì)胞的克隆化擴(kuò)增［15］。因此，血清HIF-2α和SIL-2R均參與了甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程［16］。本研究結(jié)果顯示，與良性組比較，乳頭狀癌組血清HIF-2α、SIL-2R水平陽(yáng)性率升高，提示血清HIF-2α、SIL-2R水平的表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，乳頭狀癌分化程度低、復(fù)發(fā)患者血清HIF-2α陽(yáng)性表達(dá)率和SIL-2R陽(yáng)性表達(dá)率高于分化程度高、無(wú)復(fù)發(fā)者，初步說(shuō)明了甲狀腺乳頭狀癌患者血清HIF-2α、SIL-2R水平與分化程度和復(fù)發(fā)有著密切關(guān)系。進(jìn)一步Pearson相關(guān)系數(shù)分析提示，乳頭狀癌組患者預(yù)后復(fù)發(fā)與血清HIF-2α、SIL-2R水平均呈正相關(guān)，甲狀腺乳頭狀癌組織中血清HIF-2α、SIL-2R陽(yáng)性表達(dá)是影響分化程度和復(fù)發(fā)情況的獨(dú)立因素，表明血清HIF-2α、SIL-2R在甲狀腺乳頭狀癌中的過(guò)度表達(dá)與分化程度和復(fù)發(fā)情況有關(guān)，術(shù)后嚴(yán)密監(jiān)測(cè)血清HIF-2α、SIL-2R表達(dá)情況有利于治療方案的制定，在預(yù)后中有一定臨床價(jià)值［17］。HIF-2α可參與甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，其水平越高，提示腫瘤的惡性程度越高，這可能與腫瘤內(nèi)部缺氧導(dǎo)致實(shí)體瘤快速生長(zhǎng)出現(xiàn)的轉(zhuǎn)移有關(guān)［18］。多數(shù)患者認(rèn)為SIL-2R是某種酶進(jìn)入血液形成的，而不是死亡細(xì)胞釋放，機(jī)體中的SIL-2R抑制了腫瘤患者的細(xì)胞免疫反應(yīng)，因此，可認(rèn)為SIL-2R可作為惡性腫瘤的活性標(biāo)志［19］。以往的研究［20-21］也證實(shí)，腫瘤惡性程度越高的患者預(yù)后越差，因此，血清HIF-2α、SIL-2R與甲狀腺乳頭狀癌患者的預(yù)后密切相關(guān)。但本研究存在以下不足之處：（1）未進(jìn)行大樣本研究。（2）本研究所選樣本人員均經(jīng)過(guò)家屬同意才可以進(jìn)行，具有一定的局限性。（3）本研究所納入的研究時(shí)間間隔較短，未進(jìn)行多時(shí)間段的實(shí)驗(yàn)研究，故需要后續(xù)學(xué)者進(jìn)行多中心、大樣本及較長(zhǎng)的時(shí)間跨度或者多時(shí)間段的進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，血清HIF-2α、SIL-2R在甲狀腺乳頭狀癌中的過(guò)度表達(dá)與分化程度和復(fù)發(fā)情況有關(guān)，術(shù)后嚴(yán)密監(jiān)測(cè)血清HIF-2α、SIL-2R表達(dá)情況有利于治療方案的制定。