圓柱瘤蛋白、白細(xì)胞介素-6、白細(xì)胞介素-8在結(jié)直腸癌及癌前病變中的表達(dá)差異及其與患者臨床病理特征的關(guān)系

朱紹華，何創(chuàng)業(yè)，趙 芯

(空軍軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院消化內(nèi)科，陜西 西安 710032)

結(jié)直腸癌(Colorectal cancer，CRC)是一種嚴(yán)重威脅人類生命的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，相關(guān)統(tǒng)計(jì)顯示，與現(xiàn)階段相比，CRC發(fā)病率在未來十年內(nèi)預(yù)計(jì)將增加60%左右[1-2]。此外，流行病學(xué)調(diào)查顯示，不論是在發(fā)達(dá)的西方國(guó)家，還是處于發(fā)展中的中國(guó)，CRC病死率也呈現(xiàn)出不斷增加的趨勢(shì)[3]。基因突變、飲食習(xí)慣以及環(huán)境等因素均會(huì)導(dǎo)致CRC發(fā)病。結(jié)腸息肉在上述因素的影響下會(huì)發(fā)展成為低級(jí)上皮肉瘤變(Low-grade intraepithelial neoplasia，LGIN)，嚴(yán)重時(shí)會(huì)形成高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變(High-grade intraepithelial neoplasia，HGIN)及CRC，但具體的發(fā)病機(jī)制尚無統(tǒng)一定論[4-5]。目前臨床上主要是通過結(jié)腸鏡檢查來對(duì)患者進(jìn)行診斷，但由于該方式對(duì)患者自身身體狀況要求較高，且費(fèi)用昂貴，限制了其廣泛應(yīng)用，因此如何采取更加精確有效的檢測(cè)指標(biāo)來診療CRC在臨床研究中具有極高的必要性[6]。

圓柱瘤蛋白(Cylindroma protein，CYLD)屬于一種泛素化酶，主要參與機(jī)體炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、惡性細(xì)胞增殖分化等，還能夠抑制癌癥發(fā)展，其異常表達(dá)能夠?qū)C(jī)體是否存在自身免疫性疾病、心血管疾病起到警示作用[7]。白細(xì)胞介素(Interleukin，IL)-6屬于機(jī)體中一種多效應(yīng)細(xì)胞因子，IL-8則來源于免疫細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞，兩者都與多種惡性腫瘤的進(jìn)展及轉(zhuǎn)移存在密切關(guān)聯(lián)[8-9]。本研究主要探究CYLD、IL-6及IL-8在CRC及癌前病變患者中的表達(dá)差異，并分析其與CRC患者臨床特征的關(guān)聯(lián)性，進(jìn)而為患者的臨床診療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020年5月至2022年5月在本院就診并進(jìn)行治療的CRC患者70例、LGIN患者35例和HGIN患者35例，分別納入CRC組、LGIN組和HGIN組，同時(shí)選取體檢健康者70例納入正常組(N組)。四組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，見表1。納入標(biāo)準(zhǔn)：研究所取標(biāo)本均經(jīng)臨床病理學(xué)組織診斷確定符合研究；所有研究對(duì)象均具有完整的臨床資料且對(duì)本研究知情同意；配合度較高。排除標(biāo)準(zhǔn)：研究對(duì)象納入研究前接受過放療、化療、生物療法或其他非手術(shù)治療；合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤；存在其他系統(tǒng)疾病或感染疾??；妊娠期及哺乳期；理解、溝通能力差或意識(shí)障礙；心、肝、腎等臟器嚴(yán)重障礙。本研究所選取實(shí)驗(yàn)標(biāo)本及病理切片均經(jīng)過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批通過。

1.2 研究方法

1.2.1 免疫組化染色檢測(cè)CYLD、IL-6、IL-8表達(dá)情況：使用生理鹽水將取得的病理組織樣本沖洗干凈后，進(jìn)行固定脫水，之后采用石蠟進(jìn)行包埋并于切片機(jī)中切片(厚度保持在4 μm)。對(duì)切片依次進(jìn)行脫蠟、復(fù)水、水化、抗原修復(fù)處理，在得到的組織切片上加入相應(yīng)一抗并置于冰箱中過夜。沖洗后加入相應(yīng)二抗室溫下放置30 min，再次沖洗后加入顯色液室溫下放置5～10 min，沖洗結(jié)束后脫水、封片，并于顯微鏡下分析染色結(jié)果。研究過程中所用的兔抗-CYLD多克隆抗體一抗(批號(hào)：ab137524)、小鼠抗-IL-6單克隆抗體一抗(批號(hào)：ab83053)、小鼠抗-IL-8單克隆抗體(批號(hào)：ab18672)一抗以及抗小鼠/兔IgG過氧化物酶聚合物二抗(批號(hào)：ab6728)均購(gòu)自美國(guó)Abcam公司。測(cè)定過程中的標(biāo)本均由2名工作經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師進(jìn)行獨(dú)立檢閱，并給出評(píng)定結(jié)果。

表1 四組一般資料比較

1.2.2 CRC患者臨床病理資料統(tǒng)計(jì)：主要包括年齡、性別、腫瘤位置、臨床分期、腫瘤浸潤(rùn)深度以及是否存在淋巴轉(zhuǎn)移。

1.3 觀察指標(biāo) 比較各組CYLD、IL-6、IL-8表達(dá)情況，分析CYLD、IL-6、IL-8與CRC患者臨床病理特征的相關(guān)性以及CYLD與IL-6、IL-8表達(dá)的相關(guān)性。

2 結(jié) 果

2.1 四組CYLD、IL-6、IL-8表達(dá)情況比較 見表2。四組CYLD、IL-6、IL-8陽性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。

表2 四組CYLD、IL-6、IL-8表達(dá)情況比較[例(%)]

2.2 CYLD與CRC患者臨床病理特征的關(guān)系 見表3。CYLD表達(dá)在CRC患者性別、年齡及腫瘤位置方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，在臨床分期、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等方面比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。

表3 CYLD與CRC患者臨床病理特征的關(guān)系[例(%)]

2.3 IL-6與CRC患者臨床病理特征的關(guān)系 見表4。IL-6表達(dá)在CRC患者性別、年齡及腫瘤位置方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，在臨床分期、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移等方面比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。

表4 IL-6與CRC患者臨床病理特征的關(guān)系[例(%)]

2.4 IL-8與CRC患者臨床病理特征的關(guān)系 見表5。IL-8表達(dá)在CRC患者性別、年齡及腫瘤位置方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，在臨床分期、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移等方面比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。

表5 IL-8與CRC患者臨床病理特征的關(guān)系[例(%)]

2.5 CRC患者CYLD與IL-6、IL-8表達(dá)的相關(guān)性 Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，CRC患者CYLD與IL-6、IL-8表達(dá)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)(r=-0.765、-0.289，均P<0.05)。

3 討 論

在我國(guó)，CRC不僅在導(dǎo)致癌癥相關(guān)性死亡的原因中占主導(dǎo)位置，其發(fā)病率、病死率在所有惡性腫瘤中也位居前列[10]。研究[11]顯示，約有20%的CRC患者確診時(shí)出現(xiàn)癌癥轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象，且患者經(jīng)臨床治療后預(yù)后轉(zhuǎn)歸仍不理想。CRC的臨床篩查主要分為非侵入性檢查和結(jié)腸鏡檢查。非侵入性檢查具有無創(chuàng)、安全、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，但存在一定的誤診及漏診。結(jié)腸鏡檢查準(zhǔn)確率雖較高，但風(fēng)險(xiǎn)較高。因此，不僅需要探究更有效的治療方案，如何采用更有效的標(biāo)志物來早期評(píng)估患者病情并進(jìn)行積極有效的干預(yù)也尤為重要[12]。

CYLD作為一種腫瘤抑制因子，參與NF-κB、Hippo、Notch、Wnt等多種信號(hào)通路傳導(dǎo)。在不同類型的癌癥患者中，CYLD表達(dá)水平均會(huì)出現(xiàn)不同程度的降低。相關(guān)研究[13-14]證實(shí)，NF-κB信號(hào)通路與CRC患者病情的進(jìn)展存在顯著關(guān)聯(lián)性，NF-κB激活直接參與結(jié)腸炎及CRC的病變過程，當(dāng)機(jī)體CYLD表達(dá)異常時(shí)NF-κB信號(hào)通路得到激活，加速了細(xì)胞的增殖分化，降低了凋亡基因的表達(dá)，從而導(dǎo)致腫瘤形成。研究[15-16]表明，IL-6/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白3(STAT3)信號(hào)通路可能會(huì)導(dǎo)致CRC細(xì)胞的增殖分化。IL-6的受體蛋白能夠與Janus激酶進(jìn)行結(jié)合，通過STAT3來上調(diào)靶基因的表達(dá)，同時(shí)IL-6/STAT3信號(hào)通路還能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分裂，調(diào)整細(xì)胞生長(zhǎng)周期，介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的增殖分化。另一方面，腫瘤的形成過程與機(jī)體的免疫系統(tǒng)環(huán)境密不可分，成纖維細(xì)胞已被證實(shí)是IL-6的重要來源，而腫瘤微免疫環(huán)境與CRC細(xì)胞的生長(zhǎng)均會(huì)受到成纖維細(xì)胞的影響，IL-6表達(dá)上調(diào)會(huì)加速CRC的發(fā)展。IL-8屬于NF-κB信號(hào)通路下游的基因，作為趨化因子的一種，其表達(dá)水平也與腫瘤的增殖、轉(zhuǎn)移存在一定關(guān)聯(lián)[17]。研究[18]顯示，IL-8表達(dá)增加會(huì)刺激CRC細(xì)胞的增殖，同時(shí)腫瘤及周圍區(qū)域的新生血管數(shù)量明顯增加，說明其能夠通過刺激腫瘤細(xì)胞侵襲來參與CRC的發(fā)生；另一方面，CYLD表達(dá)受到抑制時(shí)，NF-κB下游基因IL-8表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而促進(jìn)CRC細(xì)胞增殖。本研究結(jié)果顯示，CYLD在所有組別研究對(duì)象中的陽性表達(dá)率由高到低依次為N組、LGIN組、HGIN組、CRC組，IL-6、IL-8陽性表達(dá)率由高到低依次為CRC組、HGIN組、LGIN組、N組，提示隨著機(jī)體病變程度的加深，CYLD的表達(dá)下調(diào)，IL-6、IL-8表達(dá)上調(diào)，說明CYLD、IL-6、IL-8表達(dá)可能與機(jī)體結(jié)直腸發(fā)生病變存在顯著關(guān)聯(lián)，它們可能直接或間接參與了癌前病變到CRC的發(fā)展過程，能夠?qū)RC患者病情起到警示作用。

通過分析CRC患者CYLD、IL-6、IL-8表達(dá)與其臨床病理特征之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)CYLD、IL-6、IL-8表達(dá)均與CRC患者臨床分期、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在顯著關(guān)聯(lián)，說明它們參與了結(jié)直腸腫瘤的增殖、侵襲以及轉(zhuǎn)移過程，與其在CRC及癌前病變中的表達(dá)呈現(xiàn)一致性[19]。進(jìn)一步分析CRC患者CYLD與IL-6、IL-8表達(dá)的相關(guān)性，得知CYLD與IL-6、IL-8表達(dá)均呈現(xiàn)顯著負(fù)相關(guān)，推測(cè)在CRC進(jìn)程中，NF-κB與IL-6/STAT3信號(hào)通路存在共同的作用途徑，后續(xù)可將上述信號(hào)通路聯(lián)系起來對(duì)CYLD、IL-6、IL-8在CRC患者中的臨床意義進(jìn)行更深層次的探究[20]。

綜上所述，隨著結(jié)直腸病變程度的加深，CYLD的表達(dá)呈現(xiàn)下調(diào)趨勢(shì)，IL-6、IL-8的表達(dá)均呈上調(diào)趨勢(shì)；同時(shí)在CRC患者組織標(biāo)本中，CYLD、IL-6、IL-8的表達(dá)均與臨床分期、腫瘤浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在顯著關(guān)聯(lián)，且CYLD與IL-6、IL-8表達(dá)呈現(xiàn)顯著負(fù)相關(guān)，提示CYLD的表達(dá)受到抑制可能會(huì)上調(diào)IL-6、IL-8的表達(dá)，從而加速CRC病情的發(fā)展，具有一定的臨床診療價(jià)值。