一例疑似飼喂霉變玉米引發(fā)豬中毒的暴發(fā)調(diào)查

張 熠，李曉林，陳堯貴

（1.六盤水市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州六盤水 553000；2.六盤水市鐘山區(qū)畜牧業(yè)發(fā)展中心，貴州六盤水 553000）

霉菌毒素是由絲狀真菌產(chǎn)生的小分子次生代謝產(chǎn)物，污染廣、毒性大，嚴(yán)重危害人類和動(dòng)物健康[1-2]。研究[3]表明，飼料及谷物原料中的霉菌毒素污染非常普遍，而且廣泛存在多種霉菌毒素共污染現(xiàn)象。小麥、玉米、大麥等農(nóng)作物是飼料生產(chǎn)的主要原材料，最容易受到霉菌毒素污染[4]。當(dāng)前在我國污染最普遍且毒性危害嚴(yán)重的毒素主要有黃曲霉毒素B1（aflatoxin B1，AFB1）、伏馬毒素B1（fumonisin B1，F(xiàn)B1）、玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEN）及脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（deoxynivalenol，DON）[5]。ZEN 主要引起與畜禽不育有關(guān)的疾病。暴露于ZEN 的豬極易發(fā)生陰道、直腸脫垂以及流產(chǎn)[6]。豬日糧中含有過量的ZEN，會(huì)引起豬的高雌激素癥、妊娠率降低等。

2021 年1 月26 日，六盤水市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心（以下簡稱市中心）接到報(bào)告稱，轄區(qū)內(nèi)某生豬養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)的35 頭豬近期連續(xù)死亡。市中心接到報(bào)告后立刻成立專家調(diào)查組趕赴現(xiàn)場開展流行病學(xué)調(diào)查等工作。在現(xiàn)場，對病死豬進(jìn)行了剖檢，及時(shí)采集病料并對場內(nèi)飼料做好留樣，一并送往實(shí)驗(yàn)室檢測。根據(jù)現(xiàn)場流行病學(xué)調(diào)查和實(shí)驗(yàn)室診斷檢測結(jié)果，建立了病因假設(shè)，通過解剖檢驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)室檢測等進(jìn)行了驗(yàn)證，及時(shí)提出了針對性防控建議。

1 材料與方法

1.1 調(diào)查目的

分析并找出豬群死亡原因，控制暴發(fā)，防止病情擴(kuò)散，并針對原因提出相應(yīng)防控措施。

1.2 病例定義

2021 年1 月1—26 日，在養(yǎng)殖戶本村及周邊接壤鄉(xiāng)鎮(zhèn)，出現(xiàn)急性異常死亡的生豬判為陽性個(gè)體，1 d 內(nèi)出現(xiàn)3 頭以上陽性個(gè)體的豬場為陽性場。

1.3 調(diào)查方法

1.3.1 病例搜索 按照病例定義，在劃定的范圍內(nèi)開展病例搜索并核實(shí)病例。

1.3.2 現(xiàn)場調(diào)查和數(shù)據(jù)收集 現(xiàn)場查看并與養(yǎng)豬戶座談，了解豬只養(yǎng)殖情況、飼養(yǎng)方式、生物安全條件、發(fā)病情況、臨床癥狀、豬只引種和出售情況、免疫情況、治療情況、人員流動(dòng)及發(fā)病情況等；與病情養(yǎng)殖戶所在鎮(zhèn)的畜牧獸醫(yī)站人員交流，了解該鎮(zhèn)及周邊地區(qū)豬只養(yǎng)殖狀況；實(shí)地勘察了解該養(yǎng)豬戶的棚舍布局、周邊環(huán)境、地理信息、畜間分布信息等；問卷調(diào)查收集與豬場發(fā)病相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)因素信息。

1.3.3 數(shù)據(jù)分析 對陽性個(gè)體采集心、肝、脾、腎等組織樣品進(jìn)行非洲豬瘟等重大動(dòng)物疫病病原檢測；采集陽性場飼喂的飼料樣品檢測AFB1、ZEN等毒素。

2 結(jié)果

2.1 病例搜索

按照病例定義進(jìn)行搜索，在劃定的范圍內(nèi)開展病例搜索，除該養(yǎng)殖場戶外，未在其他場戶發(fā)現(xiàn)陽性病例。

2.2 現(xiàn)場調(diào)查

2.2.1 藥物治療 該戶豬群發(fā)病后，使用磺胺間甲氧嘧啶、雙黃連、磺胺嘧啶鈉、頭孢噻呋鈉、鹽酸大觀霉素、銀黃提取物、地塞米松磷酸鈉等藥物對病豬進(jìn)行治療，但未見療效。

2.2.2 免疫 豬群發(fā)病前均免疫過豬瘟、口蹄疫、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征、豬鏈球菌病疫苗。

2.2.3 引種和出售 該戶飼養(yǎng)的35 頭生豬，是分2 批購進(jìn)的仔豬：第一批是2020 年9 月17 日購入的12 頭斷奶仔豬，第二批是2020 年9 月21 日購入的23 頭斷奶仔豬。至發(fā)病時(shí)，購入仔豬已飼養(yǎng)近4 個(gè)月，其間整個(gè)豬群長勢良好，該養(yǎng)殖戶也沒有購入和出售過生豬。

2.2.4 飼養(yǎng)水平和飼養(yǎng)方式 該戶飼養(yǎng)方式為圈養(yǎng)，棚舍防疫設(shè)施簡陋，飼養(yǎng)區(qū)門口無消毒池，圈舍環(huán)境較差，通風(fēng)不良，舍內(nèi)光線陰暗，未見養(yǎng)殖檔案，飼養(yǎng)水平較低。從飼料情況分析，從2021年1 月2 日以來，飼喂生豬的飼料是購買的育肥豬濃縮料添加粉碎后的玉米粉，飼料煮熟后飼喂。現(xiàn)場調(diào)查發(fā)現(xiàn)，堆放在該養(yǎng)殖戶家中現(xiàn)存的3 袋半育肥豬濃縮料和11 袋玉米（玉米直接堆放于地面），眼觀濃縮料顆粒和顏色正常，而11 袋玉米都有不同程度的霉變，玉米粒光澤度較暗（圖1）。

圖1 養(yǎng)殖場戶堆放的已發(fā)生霉變的玉米

2.2.5 人員流動(dòng) 該戶豬群主要由場主一人負(fù)責(zé)飼養(yǎng)，但其女兒經(jīng)常到豬場幫忙，發(fā)病后每天到豬場幫忙治療，近期無外來人員進(jìn)入。

2.2.6 臨床癥狀

2.2.6.1 急性病例 豬嘔吐、食欲減退、體溫升高（40～42 ℃），后軀衰弱，走路不穩(wěn)，糞便干燥，興奮不安，出現(xiàn)病狀后當(dāng)天死亡。

2.2.6.2 慢性病例 黏膜蒼白，走路僵硬，病豬拱背、卷腹，出現(xiàn)昏迷、抽搐等癥狀，糞便干燥，表面附有灰白色黏膜，部分病豬便血、脫肛、陰戶外翻，約3 d 內(nèi)死亡。

2.3 剖解及實(shí)驗(yàn)室檢測情況

2.3.1 病理剖解 會(huì)厭軟骨出血（圖2-A）；肝腫大（圖2-B），肝臟鄰近漿膜部分有瘀斑狀出血、質(zhì)脆；膽囊腫大（圖2-C），膽汁較濃呈黑色；脾臟呈出血性梗死（圖2-D），大小無明顯充化；腸系膜淋巴結(jié)出血、腫大，呈暗黑色，大腸和小腸表面顏色變暗，腸管內(nèi)壁有彌漫性出血斑點(diǎn)；胃壁出血（圖2-E），呈暗紅色；膀胱壁收縮變厚，僅有少量尿液（圖2-F），膀胱內(nèi)壁有出血帶。

圖2 部分病理剖檢結(jié)果

2.3.2 實(shí)驗(yàn)室檢測 對所采組織樣本進(jìn)行非洲豬瘟、豬瘟、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征等相關(guān)疫病病原的實(shí)驗(yàn)室檢測，結(jié)果均為陰性；將飼喂的玉米送至第三方實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行AFB1、ZEN、赭曲霉毒素A（OTA）、DON 等毒素檢測，結(jié)果ZEN 嚴(yán)重超標(biāo)（表1）。

表1 飼料（玉米）檢測項(xiàng)目及檢測結(jié)果匯總 單位：μg/kg

2.4 三間分布情況

2.4.1 空間分布 本次豬群死亡呈單點(diǎn)暴發(fā)。出現(xiàn)豬群死亡的養(yǎng)殖戶（以下稱陳某養(yǎng)殖戶）位于六盤水市六枝特區(qū)某鎮(zhèn)某村7 組，地理坐標(biāo)為經(jīng)度105.437 015、緯度23.349 930（圖3）；周邊100 m范圍內(nèi)有豬散養(yǎng)戶2 家，共飼養(yǎng)生豬5 頭，約600 m處有一養(yǎng)豬場，存欄生豬85 頭，所有豬群均健康。經(jīng)排查詢問，除陳某養(yǎng)殖戶外，近期本村及周邊村農(nóng)戶飼養(yǎng)的生豬沒有發(fā)生異常死亡現(xiàn)象。

圖3 陳某養(yǎng)殖戶位置及周邊環(huán)境

2.4.2 時(shí)間分布 陳某養(yǎng)殖戶2021 年1 月2 日開始更換飼料，1 月15 日場內(nèi)生豬突然發(fā)病死亡，此后不斷死亡。以3 d 為時(shí)間間隔繪制流行曲線，發(fā)現(xiàn)病情具有點(diǎn)源暴發(fā)特點(diǎn)（圖4）。

圖4 豬只死亡數(shù)量及疫情處置時(shí)間線

2.4.3 群間分布 據(jù)陳某養(yǎng)殖戶回憶，吃食多、體格強(qiáng)壯的豬先發(fā)病，吃食少、體格弱的豬后發(fā)病。經(jīng)問詢及采集數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，體質(zhì)量100 kg 以上生豬有7 頭，100 kg 以下的有28 頭。選取1 月15—22日發(fā)病初期數(shù)據(jù)，分析比較不同體質(zhì)量生豬的存活天數(shù)。結(jié)果（表2）顯示：兩組生豬存活天數(shù)經(jīng)SW 檢驗(yàn)，兩組數(shù)據(jù)均服從正態(tài)性分布，100 kg 以上生豬p=0.107，100 kg 以下生豬p=0.087；采用t檢驗(yàn)方法，得到1 月15—22 日體質(zhì)量100 kg以上生豬存活時(shí)間為（3.570±1.512）d，100 kg 以下為（5.250±1.357）d，兩組總體存活天數(shù)存在統(tǒng)計(jì)差異（t=2.497，P=0.023）。這與養(yǎng)殖戶所回憶的“吃食多、體格強(qiáng)壯的豬先發(fā)病，吃食少、體格弱的豬后發(fā)病”的信息相符。

表2 1 月15—22 日死亡生豬體質(zhì)量分組t 檢驗(yàn)結(jié)果

3 死亡原因分析

根據(jù)病例定義搜索并未發(fā)現(xiàn)其他場戶有異常死亡生豬，對豬群免疫情況進(jìn)行調(diào)查發(fā)現(xiàn)，注射的疫苗均在保護(hù)期內(nèi)，因此初步排除疫病因素。從引種情況來看，引種后飼養(yǎng)生豬長勢良好，因而排除豬源問題；從人員進(jìn)出看，平時(shí)飼喂為場主及其女兒，沒有外來人員進(jìn)入，豬圈較為封閉，因此排除人為投毒情況。結(jié)合飼喂史，在飼喂玉米后2 周，陸續(xù)發(fā)現(xiàn)豬死亡，從死亡曲線可看出，病程較長。按照臨床癥狀和解剖癥狀分析，病豬消化系統(tǒng)受損嚴(yán)重，與中毒癥狀較為吻合。結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果，分析死亡原因可能為該養(yǎng)戶飼喂了發(fā)霉玉米造成豬群發(fā)生ZEN 蓄積性中毒。

由于本案例病程較長，部分生豬已被場主自行處理，所以未能對場內(nèi)全部生豬發(fā)病死亡情況進(jìn)行分析，不能排除存在病原的繼發(fā)感染；第三方實(shí)驗(yàn)室只對飼喂玉米進(jìn)行了AFB1、ZEN、OTA、DON 等4 種霉菌毒素檢測，但據(jù)相關(guān)研究，霉變玉米可能存在的真菌共有12 種，可能產(chǎn)生的毒素高達(dá)16 種，不排除存在其他毒素中毒的可能。

4 討論

六盤水市冬季平均氣溫較低，且以陰雨天為主，空氣較為潮濕，養(yǎng)殖戶將飼料直接推放于地面，極易導(dǎo)致飼料發(fā)霉。玉米是畜禽飼料的主要原料之一，在畜禽飼料中所占比例非常高，通常可以達(dá)50%～70%。玉米儲(chǔ)存或保存不當(dāng)很容易發(fā)生霉變。通常來說，玉米存儲(chǔ)質(zhì)量和溫度、清潔及濕度等直接相關(guān)，一旦有連陰雨天氣出現(xiàn)，或者在收獲以后沒有及時(shí)晾曬，都可能使其受到霉菌污染，進(jìn)而大量繁殖，產(chǎn)生大量有毒物質(zhì)[7]。當(dāng)前世界各地都制定了嚴(yán)格的法律法規(guī)去控制霉菌毒素污染。然而受現(xiàn)有認(rèn)知水平和技術(shù)的局限，霉菌毒素污染飼料現(xiàn)象仍然較普遍，而且值得注意的是，即使霉菌毒素未超標(biāo)，其污染的飼料也可導(dǎo)致動(dòng)物慢性中毒[8]。為防止此類中毒事件發(fā)生，在下一步工作中，有關(guān)部門應(yīng)加大對飼料正確保存的宣傳培訓(xùn)，讓養(yǎng)殖戶了解正確的飼料保存方式，杜絕使用霉變飼料飼喂動(dòng)物，如果飼養(yǎng)動(dòng)物出現(xiàn)疑似霉菌毒素中毒癥狀，應(yīng)立即停止飼喂霉變飼料，及時(shí)更換優(yōu)質(zhì)飼料，并給予清潔飲水，補(bǔ)充維生素等；對于中毒嚴(yán)重的豬只，治療意義不大，應(yīng)盡早淘汰并依法依規(guī)處理。同時(shí)，監(jiān)管部門應(yīng)加大對飼料經(jīng)營門店的抽查監(jiān)管，把好源頭質(zhì)量關(guān)。