一起豬輪狀病毒病的確診和防治

陳長福

（龍巖市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，福建龍巖 364000）

病毒性腹瀉是仔豬死亡的重要原因之一。常見的豬致瀉性病毒主要有豬流行性腹瀉病毒（porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）、豬傳染性胃腸炎病毒（transmissible gastroenteritis virus，TGEV）、豬輪狀病毒（porcine rotavirus，PoRV）和豬德爾塔冠狀病毒（porcine delta corona virus，PDCoV）[1]。PoRV 在電鏡下形態(tài)似車輪，因此被命名為輪狀病毒。PoRV 基因組長約18 500 bp，編碼6 種結(jié)構(gòu)蛋白（VP1～4、VP6 和VP7）和5 種非結(jié)構(gòu)蛋白（NSP1～5）[2]。其中VP1～3 位于病毒核心，外層由VP7（37 kDa）形成光滑層，VP4（88 kDa）形成顆粒表面延伸的尖峰，VP6 位于中間層，對病毒有保護(hù)作用，參與病毒轉(zhuǎn)錄。基于VP6 的抗原特征，PoRV 分為A 到J 9 種，其中A 是最常見的，致病性強(qiáng)，遺傳變異性高，其次是C 和B。

近年來，PoRV 受到養(yǎng)殖戶的廣泛關(guān)注。豬只感染后胃內(nèi)有凝乳塊，內(nèi)容物呈灰黃色或灰黑色，腸道中的絨毛腸細(xì)胞變鈍變短，微絨毛不規(guī)則，引發(fā)電解質(zhì)失衡、腸道吸收不良、腹瀉、脫水等癥狀，嚴(yán)重的可能死亡[3]。新生仔豬和斷奶仔豬由于缺乏保護(hù)性免疫最容易被PoRV 感染，成年豬感染一般無臨床癥狀。仔豬的易感性和成年豬的無癥狀感染特性使該病的防控工作更加復(fù)雜化[4-5]。本研究采集了一腹瀉豬場不同階段豬群的糞便、口腔拭子和環(huán)境、人員外表等樣本，利用熒光PCR 方法對病毒載量進(jìn)行了檢測，證實(shí)引起該場腹瀉病的病原為PoRV。而后針對PoRV 感染提出了有效防治措施，以期為PoRV 感染防控提供參考。

1 豬場發(fā)病情況及臨床表現(xiàn)

福建省某規(guī)?；B(yǎng)豬場地處山區(qū)，豬場外圍生物安全措施嚴(yán)格?？偞鏅谀肛i1 000 頭左右，采用自繁自養(yǎng)的連棟養(yǎng)豬模式。

2021 年3 月15 日，該豬場B 棟豬舍定位欄母豬和產(chǎn)房仔豬出現(xiàn)腹瀉病例，經(jīng)熒光PCR 檢測為PoRV 陽性，PEDV、TGEV 陰性；3 月20 日，A 棟產(chǎn)房仔豬暴發(fā)腹瀉，24 h 內(nèi)發(fā)病率極高，7 日齡以下仔豬病死率高達(dá)100%，經(jīng)再次檢測，確認(rèn)為PoRV 強(qiáng)陽性，PEDV、TGEV 陰性；之后該病全場傳播，發(fā)病豬群涵蓋仔豬到成年豬的各年齡段；最后傳播至保育豬、育肥豬和公豬群。產(chǎn)房7 日齡仔豬主要癥狀為嘔吐加水樣腹瀉，體重減輕，治療無效后脫水死亡，死亡率接近100%，10 日齡以上仔豬死亡率為50%，個(gè)別個(gè)體耐過后恢復(fù)，但大部分成為僵豬。

該場共飼養(yǎng)豬2 000 頭，發(fā)生腹瀉的約有300頭。曾免疫PEDV、TGEV 和PoRV 三聯(lián)弱毒苗，免疫程序?yàn)楫a(chǎn)前40 d、產(chǎn)前20 d 各免疫1 次，后備母豬基礎(chǔ)免疫3 次。該場3 年內(nèi)未發(fā)生過腹瀉病。腹瀉發(fā)生后，對患病豬群使用“利克太?！?、阿莫西林、硫酸黏菌素進(jìn)行治療，但是效果不明顯。

2 臨床剖檢癥狀

對瀕死仔豬進(jìn)行剖檢發(fā)現(xiàn)，胃和小腸內(nèi)有大量凝乳塊或淡黃色胃內(nèi)容物，腸壁變薄，腸道鼓氣，部分腸壁伴有彌漫性出血點(diǎn)，腸系膜淋巴結(jié)腫大，腸內(nèi)容物散發(fā)腥臭味。

3 實(shí)驗(yàn)室檢測

分別采集配懷母豬、產(chǎn)房母豬、產(chǎn)房仔豬、保育豬、育肥豬、公豬等豬群的糞便、口腔拭子及人員外表、環(huán)境樣本，使用核酸提取儀提取樣本核酸（購自南京諾唯贊生物科技公司），使用PoRV-A 熒光PCR 檢測試劑盒（購自廣州維伯鑫生物科技公司）對所有樣本進(jìn)行病原檢測。Ct ＞40判定為PoRV 陰性，否則判定為陽性。參考10 個(gè)相同規(guī)模豬場的不同PoRV 載量陽性率（表1），即病毒載量＞104的病豬發(fā)生PoRV 感染陽性率＞90%，因此本研究以病毒載量＞104為界限，評(píng)估感染情況。

表1 10 個(gè)豬場不同PoRV 病毒載量的陽性率 單位：%

4 結(jié)果與分析

4.1 配懷母豬

結(jié)果（表2）顯示，配懷母豬唾液樣品的陽性檢出率為96.58%，顯著高于糞便檢出率（P＜0.05）。由于唾液比糞便更早排毒，說明該階段豬群有可能處于感染早期。糞便樣本中病毒載量高于104比例有15.56%，說明配懷母豬群感染PoRV 后，腹瀉比例較低。

表2 配懷母豬不同PoRV 病毒載量陽性率 單位：%

4.2 產(chǎn)房母豬

結(jié)果（表3）顯示，產(chǎn)房母豬糞便樣品的陽性檢出率為83.27%，顯著高于唾液檢出率（P＜0.05），表明該階段豬群處于感染中后期。產(chǎn)房母豬糞便樣品的病毒載量較低，但是有22.44%的病毒載量高于104，提示產(chǎn)房母豬感染PoRV（潛伏帶毒）后可能不會(huì)出現(xiàn)腹瀉癥狀，但是產(chǎn)房仔豬由于免疫系統(tǒng)不完善，可能被感染，需做好糞便管理。

表3 產(chǎn)房母豬不同PoRV 病毒載量陽性率 單位：%

4.3 產(chǎn)房仔豬

結(jié)果（表4）顯示，產(chǎn)房仔豬糞便樣品的陽性檢出率為82.50%，說明大部分產(chǎn)房仔豬被感染。產(chǎn)房仔豬糞便樣本病毒載量高于104的比例有22.50%，并且超高病毒載量（＞105）的比例有7.50%，說明此時(shí)產(chǎn)房仔豬有兩種情況，一種屬于感染中期，疫病即將大規(guī)模暴發(fā)，另一種可能屬于發(fā)病后康復(fù)期。

表4 產(chǎn)房仔豬不同PoRV 病毒載量陽性率 單位：%

4.4 保育豬

結(jié)果（表5）顯示，保育豬糞便樣品的陽性檢出率為41.67%，說明接近一半的保育豬群被感染。結(jié)合有33.34%比例的糞便樣品病毒載量高于104，并且超高病毒載量（＞105）的比例為25.00%，說明此時(shí)部分保育豬處于暴發(fā)期，出現(xiàn)腹瀉癥狀，而另外一部分保育豬還未被感染或者已康復(fù)，需做好已發(fā)病保育舍的隔離消毒工作。

表5 保育豬不同PoRV 病毒載量陽性率 單位：%

4.5 育肥豬

結(jié)果（表6）顯示，育肥豬糞便樣品的陽性檢出率為90.00%，說明大部分豬群被感染。結(jié)合有80.00%比例的糞便樣本病毒載量高于104，并且超高病毒載量（＞105）的比例為50.00%，說明此時(shí)育肥豬處于腹瀉暴發(fā)期，需要及時(shí)介入處理。

表6 育肥豬不同PoRV 病毒載量陽性率 單位：%

4.6 公豬

結(jié)果（表7）顯示，公豬的唾液樣品陽性檢出率（100%）高于糞便（64.70%），說明公豬幾乎都被感染。結(jié)合有11.76%比例的糞便樣本病毒載量高于104，推測公豬群很可能處于感染前中期，此時(shí)公豬腹瀉的比例雖然不高，但需及時(shí)干預(yù)，防止疫病進(jìn)一步暴發(fā)。

表7 公豬不同PoRV 病毒載量陽性率 單位：%

4.7 產(chǎn)房人員和環(huán)境

結(jié)果（表8）顯示，產(chǎn)房人員外表的陽性檢出率顯著高于生產(chǎn)環(huán)境（P＜0.05），說明該場存在較大人員機(jī)械傳播風(fēng)險(xiǎn)，發(fā)病期更需要對進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)的工作人員實(shí)施嚴(yán)格的消毒管理措施。

表8 產(chǎn)房人員外表和環(huán)境中不同PoRV 病毒載量陽性率 單位：%

5 防控措施

確認(rèn)病原為PoRV 后，場內(nèi)第一時(shí)間對所有母豬緊急補(bǔ)免了PEDV、TGEV、PoRV 三聯(lián)弱毒苗，并嚴(yán)格按照母豬產(chǎn)前洗澡消毒、做好產(chǎn)房糞便管理、仔豬靜默生產(chǎn)、7 日齡內(nèi)發(fā)病仔豬無害化處理等生產(chǎn)流程進(jìn)行管理。實(shí)施以上防控措施1 個(gè)月后，至4 月中旬，全場病情趨于穩(wěn)定，新生仔豬未再出現(xiàn)腹瀉；定位欄中個(gè)別母豬食欲較低，但未發(fā)生腹瀉；保育豬、后備豬和公豬均沒有出現(xiàn)腹瀉，給食正常，精神狀態(tài)良好。

6 討論

生豬養(yǎng)殖是我國畜牧業(yè)的重要組成部分，是居民主要的肉食品來源。隨著養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大，豬腹瀉疫病防控形勢趨于復(fù)雜。腹瀉病毒在豬群中傳播，導(dǎo)致料肉比升高，并且引發(fā)的仔豬高發(fā)病率和死亡率，嚴(yán)重威脅著豬群健康，給養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失[6]。近年來，PoRV 在我國的檢出率呈上升趨勢，已受到養(yǎng)殖場和相關(guān)從業(yè)人員的廣泛重視。而PoRV 感染與其他腹瀉病毒感染在臨床上的表現(xiàn)往往很相似，從臨床剖檢或臨床癥狀上很難進(jìn)行診斷，需要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測確診[7-8]。

疫苗免疫是預(yù)防PoRV 感染的措施之一。目前，PoRV 商業(yè)疫苗（滅活苗和弱毒苗）已被證實(shí)可以有效預(yù)防PoRV 感染。此外，還需制定科學(xué)有效的針對性防控管理措施。第一，進(jìn)入秋冬季后，PoRV 感染呈高發(fā)態(tài)勢，需在提前對配懷母豬的唾液及糞便中的PoRV 載量進(jìn)行測定，做到提前預(yù)警，及早發(fā)現(xiàn)潛在發(fā)病豬群，如發(fā)現(xiàn)排毒量大的豬群，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行疫苗補(bǔ)免。第二，對進(jìn)入產(chǎn)房前的懷孕母豬應(yīng)洗澡消毒，確保清除母豬體表的PoRV，以免仔豬出生后通過接觸感染。第三，加強(qiáng)產(chǎn)房的消毒與管理，人員進(jìn)入產(chǎn)房前應(yīng)對衣物和鞋子進(jìn)行徹底消毒，防止通過人員機(jī)械傳播病毒；產(chǎn)房應(yīng)有兩套清潔工具，一套用于產(chǎn)房清潔，另一套用于走道清潔，避免交叉，降低病毒傳播風(fēng)險(xiǎn)；第四，產(chǎn)房如出現(xiàn)發(fā)病豬只，則實(shí)行靜默生產(chǎn)，并及時(shí)對發(fā)病豬只進(jìn)行無害化處理。