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    HPLC法同時測定四粒紅花生衣藥材中原兒茶酸和兒茶素的含量

    2022-12-07 13:32:56馬曉靜王丹彧
    云南中醫(yī)中藥雜志 2022年11期
    關鍵詞:原兒茶酸兒茶素乙腈

    胡 洋,王 燕,馬曉靜,王丹彧△

    (1.第964醫(yī)院第二門診部,吉林 長春 136002;2.四平市食品藥品檢驗所,吉林 四平 136000)

    花生衣為豆科植物落花生AraehishypogaeaL.的成熟種子的種皮,應用于中成藥益血生膠囊(片)、復方紅衣補血口服液和血寧糖漿中。花生衣性平,味甘、微苦、澀,可養(yǎng)血止血,適宜貧血及各種出血性疾病。目前,由于花生衣無國家標準,落花生育種技術的更新,其新品種層出不窮,各省市對其藥材質控差異較大?;ㄉ鳛榧质∷拇蠼洕魑镏唬洫毺氐钠贩N為四粒紅,在網絡平臺及社會上收到消費者的青睞。目前側重于花生衣藥材中化學成分及色素的研究報道較多,如:有報道從花生衣中分離出對羥基苯甲酸、原兒茶酸、原兒茶酸甲酯、兒茶素等化學成分[1-4],而對四粒紅類花生衣的研究報答較少,本研究參考文獻[5-11],建立了四粒紅類花生衣中原兒茶酸和兒茶素的液相色譜測定法,為吉林省特有品種四粒紅類花生深度開發(fā)應用提供基礎,為四粒紅類花生衣質控提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 儀器與試藥 Agilent 1260 高效液相色譜儀(美國安捷倫科技有限公司);BT125D型電子天平(賽多利斯公司)、 原兒茶酸(批號:110809-201906,含量:97.7%)、兒茶素(批號:110877-202005,含量:95.1%)均購于中國食品藥品檢定研究院。乙腈及甲醇為色譜純,水為超純水。藥材來源見表1,均為產地收集,由吉林農業(yè)大學包海鷹教授鑒定。

    1.2 方法

    1.2.1 色譜條件 采用Agilent TC-C18(4.6×250 mm,5 μm)為色譜柱,以乙腈-0.3%磷酸(10∶90)為流動相,流速1.0 mL·min-1,檢測波長270 nm,柱溫30 ℃,進樣量10 μL。

    1.2.2 溶液的制備

    1.2.2.1 混合對照品溶液 取原兒茶酸、兒茶素對照品各約10 mg,精密稱定,分別置20 mL量瓶中,加50%的甲醇稀釋至刻度,分別得到原兒茶酸、兒茶素對照品儲備液。精密量取原兒茶酸對照品儲備液1 mL,兒茶素對照品儲備液5 mL,置于同一50 mL量瓶中,加50%甲醇制成每1 mL含原兒茶酸10 μg,兒茶素50 μg的混合溶液,即得。

    1.2.2.2 供試品溶液 取本品粉末(過三號篩)約2.0 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入50%甲醇25 mL,稱定重量,超聲處理30 min,放冷,再稱定重量,用50%甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。

    1.2.3 系統(tǒng)適用性試驗 分別取混合對照品溶液、樣品溶液,按“2.1”項下色譜條件進行測定。結果供試品色譜中,在與對照品色譜相同保留時間處檢出相同的色譜峰,且與其它組分能達到基線分離,分離度良好,見圖1。

    圖1 高效液相色譜圖

    1.2.4 線性關系考察 分別精密取標準儲備適量,用50%甲醇稀釋制成每1 mL含原兒茶酸4.73 μg、9.46 μg、14.19 μg、18.92 μg、23.65 μg;含兒茶素27.08 μg、54.16 μg、81.24 μg、108.32 μg、135.40 μg的混合標準系列溶液。按照“2.1”項下色譜條件測定,記錄色譜圖,以峰面積(Y)為縱坐標,各對照品濃度(X,μg·mL-1)為橫坐標,進行線性回歸,得原兒茶酸線性方程Y=26.353X+1.15,r=0.999;得兒茶素線性方程Y=5.0299X+1.81,r=0.999;結果表明原兒茶酸在4.73~23.65 μg·mL、兒茶素在27.08~135.40 μg·mL-1的范圍內線性關系良好。

    1.2.5 重復性 取同一花生衣樣品(HSY-1)分別精密稱取6份,按照“2.2.2”項下供試品溶液的制備方法,制備供試品溶液,按照“2.1”項下的色譜條件進行測定,結果原兒茶酸的含量為0.10 mg· g-1,RSD為0.9%;兒茶素的含量為0.74 mg· g-1RSD為0.8%,結果表明該方法重復性良好。

    1.2.6 穩(wěn)定性 取上述重復性試驗項下同一供試品溶液,在“2.1”項下色譜條件下分別在0、2、4、6、8、16 h測定,記錄峰面積考察溶液穩(wěn)定性,結果顯示原兒茶酸的RDS為1.4%,兒茶素的RSD為1.1%,表明該溶液穩(wěn)定性良好。

    1.2.7 回收率試驗 精密稱取已知含量的同一樣品(HSY-1)約2.0 g,共6份,按照1∶1的比例加入對照品溶液,按照2.2.2項下制備供試品溶液,按照“2.1”項下的色譜條件進行測定,結果原兒茶酸的回收率為97.93%,RSD=1.7%;兒茶素的回收率為96.65%,RSD=1.9%。

    2 結果

    2.1 樣品測定 取10批四粒紅花生衣藥材,按照供試品溶液的制備方法制備供試品溶液,按照上述色譜條件進行測定,測定結果見表1。

    表1 紅四粒樣品含量測定結果

    3 討論

    3.1 測定波長的選擇 本研究對原兒茶酸及兒茶素對照品和供試品溶液在200~400 nm的波長處進行掃描,原兒茶酸在260 nm處有最大吸收、兒茶素在278 nm處有最大吸收,同時樣品溶液與對照品溶液吸收光譜相同。綜合樣品中兩個主成分的含量、峰面積及其他物質的影響選擇在270 nm的波長處進行測定。

    3.2 提取條件的篩選 本研究分別比較了不同濃度的甲醇、料液比、超聲時間,以原兒茶酸和兒茶素含量的和為考察指標,最終確定四粒紅類花生衣中原兒茶酸和兒茶素的最佳提取工藝為:樣品2 g加50%甲醇的25 mL超聲處理30 min,不僅操作簡便、方便,又能提取完全。

    3.3 色譜條件的選擇 本研究分別比較了乙腈-水和乙腈-0.3%磷酸為流動相時的色譜行為,研究結果表明,使用乙腈-水為流動相時兒茶素色譜峰能達到較好的基線分離,但是原兒茶酸色譜峰與雜質峰分離效果較差,且原兒茶酸峰有拖尾現象,當改用乙腈-0.3%磷酸為流動相時,兩個色譜峰基線平穩(wěn)且均能到達較好的分離,最終選擇乙腈-0.3%磷酸(10:90)為流動相。

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