藤茶的化學(xué)成分及藥理活性研究進展

郭海姣， 劉 云， 劉進寶， 農(nóng)桂龍， 劉 雯*

(1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，廣西 南寧 530001；2.徐州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇 徐州 221002；3.廣西國際壯醫(yī)醫(yī)院，廣西 南寧 530200)

藤茶Ampelopsisgrossedentata(Hand-Mazz)W.T.Wang為葡萄科蛇葡萄屬木質(zhì)藤本植物，廣泛分布于我國廣東、廣西、湖南、湖北等長江以南地區(qū)，我國瑤族、壯族等少數(shù)民族將其嫩葉經(jīng)加工炮制后泡茶服用，習(xí)稱藤茶，又稱霉茶、甜茶藤、山甜茶、白茶、白毛猴、甘露茶，已有數(shù)百年的飲用歷史，收載于《中草藥匯編》《廣西藥用植物名錄》《廣東藥用植物手冊》等多部著作[1-2]。藤茶葉甘淡，性涼，具有清熱解毒、平肝降壓、活血通絡(luò)的功效，主要用于治療黃疸型肝炎、風熱感冒、咽喉腫痛等癥[3]?，F(xiàn)代研究表明，藤茶具有抗炎鎮(zhèn)痛、抑菌、抗氧化、抗腫瘤、保肝、降血脂、降血糖、增強免疫力等作用。本文對藤茶的化學(xué)成分以及近十年有關(guān)藤茶的藥理作用研究和質(zhì)量控制研究進行綜述，以期為壯瑤藥藤茶的產(chǎn)品開發(fā)、質(zhì)量控制、臨床應(yīng)用等提供依據(jù)。

1 化學(xué)成分

1.1 黃酮類 黃酮類是藤茶中含量最高的化合物，高達43%以上[4]，也是藤茶已分離鑒定出種類最多的化合物。目前，在藤茶中分離鑒定出的黃酮類化合物共有31個，包括4個黃酮醇類、5個二氫黃酮醇類、4個異黃酮類、2個二氫黃酮類、2個異黃烷類、13個普通黃酮類、1個類黃酮類，其中二氫黃酮醇類的二氫楊梅素是黃酮類成分中含量最高的化合物，見圖1、表1。

圖1 藤茶中黃酮類化合物結(jié)構(gòu)類型

表1 藤茶中黃酮類化合物

1.2 酚類 酚類是藤茶的藥效相關(guān)成分。目前，在藤茶中分離鑒定的酚類成分有4種，包括沒食子酸(32)[17]、沒食子酸甲酯(33)[10]、沒食子酸乙酯(34)、沒食子酰-β-D-葡萄糖(35)[18]，見表2、圖2。

表2 藤茶中酚類化合物

1.3 甾體和萜類 從藤茶中分離得到3個甾體類化合物和1個萜類化合物。甾體類化合物包括豆甾醇(36)、β-谷甾醇(37)[17]、齊墩果酸(38)[6]，萜類化合物是龍涎香醇(39)[15]，見表3、圖3。

表3 藤茶中甾體和萜類化合物

圖2 藤茶中酚類化合物化學(xué)結(jié)構(gòu)式

圖3 藤茶中分離得到的甾體和萜類化合物結(jié)構(gòu)式

1.4 揮發(fā)性成分 經(jīng)GC-MS分析，葉綠醇(40)、正十六酸(41)、雪松醇(42)為藤茶揮發(fā)油中主要成分[19]。除此之外，含量較高的有β-崖柏酮(43)[20]、β-環(huán)檸檬醛(44)[21]、(反)-2-乙烯醛(45)、乙酸乙烯酯(46)、三甲基吡嗪(47)、苯乙醛(48)、α-萜品醇(49)、水楊酸甲酯(50)、香葉醇(51)、β-紫羅酮(，52)、順-茉莉酮(53)、6,10,14-三甲基-2-十五烷酮(54)、橙花叔醇(55)等[22]，見表4、圖4。

表4 藤茶中揮發(fā)性成分及其他化合物

圖4 藤茶中揮發(fā)性成分及其他化合物結(jié)構(gòu)式

1.5 其他化學(xué)成分 王定勇等[10]在藤茶乙酸乙酯部位提取分離得到棕櫚酸(56)、蒽醌類成分大黃素(57)，見表4、圖4。此外，藤茶中富含多糖，采用水提醇沉法提取率最高可達11.26%[23]，將藤茶多糖進一步分離得到4種蛋白結(jié)合多糖，分別為AGP-3、AGP-4、ALPS和ASPS[24-25]。

2 藥理作用

藤茶的傳統(tǒng)功效是清熱解毒、平肝降壓、活血通絡(luò)?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，藤茶具有抗炎鎮(zhèn)痛、抑菌、抗氧化、抗腫瘤、保肝、降血脂、降血糖、增強免疫力等作用。藤茶在臨床上用于治療黃疸型肝炎、風熱感冒、咽喉腫痛、過敏性皮膚病等[3]。

2.1 抗炎、鎮(zhèn)痛 林建峰等[26]通過小鼠耳廓水腫、大鼠足跎腫脹、腹腔毛細血管通透性、棉球肉芽腫增生以及切除腎上腺的大鼠足跎腫脹實驗，發(fā)現(xiàn)藤茶水提物對急性、亞急性炎癥的滲出和慢性增殖性炎癥都有抑制作用，且抗炎作用不完全依賴垂體-腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)。此外，藤茶具有較好的鎮(zhèn)痛作用，在小鼠扭體反應(yīng)和熱板反應(yīng)實驗中，藤茶水提物可以提高小鼠痛閥[26]。祁佳等[27]通過大鼠足趾腫脹實驗表明，藤茶的水提取物和醇提取物都具有抗炎活性，其中藤茶水提取物具有更強的抗炎活性，其對足趾腫脹的抑制率和陽性對照組相當，是潛在的抗炎候選原料。藤茶中分離得到的單體楊梅素(1)、楊梅苷(20)也具有很好的抗炎活性，在LPS誘導(dǎo)的小鼠急性炎癥模型中，這2個化合物都有抑制作用[28]。從藤茶中分離得到的二氫楊梅素(7)具有抗炎活性，在角叉菜膠致大鼠足跖腫脹、急性炎癥模型實驗中，其抗炎效果接近陽性藥吲哚美辛、地塞米松和甲氨蝶呤[29]；體外實驗也同樣驗證二氫楊梅素對炎癥有抑制作用。藤茶的抗炎鎮(zhèn)痛作用具有濃度依賴性，高、中劑量效果顯著，低劑量抗炎鎮(zhèn)痛效果不明顯[30]。

2.2 抑菌 藤茶中分離得到的二氫楊梅素(7)對金黃色葡萄球菌、副傷寒鏈球菌、銅綠假單胞菌、大腸桿菌和枯草桿菌均具有抗菌活性，最低抑菌濃度和最低殺菌濃度分別為0.312 5～2.5 mg/mL和2.5～10 mg/mL，其中對革蘭陰性菌的抗菌活性強于陽性藥鹽酸小檗堿，且不易產(chǎn)生耐藥性，推測二氫楊梅素抗菌機制可能是誘導(dǎo)細菌的皺縮、聚集和粘附[31]。藤茶中分離得到的楊梅素(1)、山柰酚(2)和槲皮素(3)在1×10-8mg/L質(zhì)量濃度以上對大腸桿菌有抑制作用，抑制作用由強到弱依次為楊梅素>槲皮素>山柰酚，對枯草桿菌的抑菌作用比較微弱，對黑曲霉基本無抑菌作用[32]。此外，藤茶中單體二氫槲皮素(6)、阿福豆素(26)、楊梅苷(20)對耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌有抑制作用[33]。藤茶中多酚類成分和甾體類成分也具有抗菌活性[34]。由藤茶和芒果葉等制成的復(fù)方藤茶對金黃色葡葡球菌、白色葡萄球菌、奈氏菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌、綠膿桿菌都有較好的抗菌效果[35]。藤茶與β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物聯(lián)合使用，可使抗菌藥物的最低抑菌濃度降低，表現(xiàn)出協(xié)同或相加作用[36]。

2.3 抗氧化 黃酮類化合物和酚類化合物被稱為天然抗氧化劑，可以作為自由基清除劑、氫供體、還原劑和金屬離子螯合劑等[37]。藤茶抗氧化活性極強，推測與藤茶中二氫楊梅素(7)、楊梅素(1)、槲皮素(3)、蘆丁(21)等黃酮類成分以及沒食子酸(32)、沒食子酰葡萄糖(35)等多酚類有關(guān)[38]。體外抗氧化實驗發(fā)現(xiàn)，藤茶不同提取物有不同程度的體外抗氧化效果，楊梅素對DPPH的清除作用最強，二氫楊梅素對·O2-的清除作用最強，對·OH的清除效果由強到弱依次為楊梅素>二氫楊梅素>藤茶總黃酮[39]。關(guān)于藤茶抗氧化作用機制研究主要集中在含量較高的二氫楊梅素(7)上，通過DPPH法和ORAC法發(fā)現(xiàn)，二氫楊梅素具有很強的抗氧化能力，可作為用于人體生物學(xué)的抗氧化劑，推測其抗氧化作用可能是通過激活細胞Nrf2/Keap1途徑[40]。藤茶總黃酮在0.5～10 mg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)具有較強的體外抗氧化活性，對脂肪氧合酶和H2O2誘導(dǎo)的小鼠紅細胞溶血具有抑制作用，還可減少小鼠肝線粒體及肝勻漿丙二醛的生成[41]。此外，藤茶多糖也具有抗氧化作用，羅祖友等[42]在體內(nèi)外抗氧化活性實驗中證實，藤茶多糖在一定范圍內(nèi)具有抗氧化作用。在藤茶莖葉中分離得到的蛋白結(jié)合多糖ALPS和ASPS對α-葡萄糖苷酶具有抗氧化活性和抑制作用，其中ASPS作用效果更強[25]。藤茶乙酸乙酯部位分離得到的蛋白結(jié)合多糖AGP-3也具有體外抗氧化作用，采用試劑盒方法和分光光度法測定發(fā)現(xiàn)，AGP-3在化學(xué)模擬體系具有一定的還原能力和清除活性氧能力[43]。

2.4 抗腫瘤 藤茶中楊梅素(1)可抑制肉瘤細胞、肝癌細胞、白血病細胞增殖，也可抑制肉瘤細胞、肝癌細胞誘發(fā)的移植性腫瘤，其抑制率均可達30%[44]。經(jīng)二氫楊梅素(7)處理后的胎盤絨毛癌細胞JAR粘附和侵襲轉(zhuǎn)移能力降低，推測可能是通過PI3K/Akt信號通路抑制JAR細胞中MMP-2活性，進而抑制絨癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移[45]。在體外實驗中，藤茶總黃酮對乳腺癌細胞和前列腺癌細胞具有抑制作用，推測可能與異黃酮類植物雌激素有關(guān)[46]。羅祖友等[47]提取藤茶多糖并通過體內(nèi)實驗研究其抗癌和免疫增強活性，發(fā)現(xiàn)藤茶多糖具有體內(nèi)抑制S180小鼠腫瘤生長的作用，其機理可能是通過增強荷瘤小鼠免疫力和抗氧化能力。

2.5 保肝 藤茶總黃酮和二氫楊梅素(7)對CCl4所致的大鼠肝纖維化有保護作用，初步推測其保肝機制可能是與總黃酮和二氫楊梅素在肝纖維化形成中具有抗脂質(zhì)過氧化和清除氧自由基的作用有關(guān)[48]。進一步研究發(fā)現(xiàn)，二氫楊梅素對肝纖維化和肝星狀細胞活化的抑制作用是通過降低肝膠原沉積和細胞外基質(zhì)沉積，降低α平滑肌肌動蛋白、α-SMA、TIMPs、轉(zhuǎn)化生長因子-β1、磷酸化Smad3的表達，增加MMPs和Sirt1的表達，阻斷肝星狀細胞的活化來實現(xiàn)的[49]。另有研究發(fā)現(xiàn)，二氫楊梅素可阻止高脂誘導(dǎo)的小鼠體質(zhì)量增加，降低肝臟脂質(zhì)沉積、血清甘油三酯和總膽固醇水平和歸一化內(nèi)源性代謝物濃度，推測二氫楊梅素的保肝活性可能與高脂血癥對多種代謝途徑的有害作用有關(guān)[50]。在高脂飲食NAFLD小鼠實驗中，灌胃給予藤茶水提物(300 mg/kg)，連續(xù)42 d，結(jié)果顯示，NAFLD小鼠的肝指數(shù)，血清TC、TG、ALT、AST水平，肝臟TC、TG水平均較模型組降低，提示藤茶對非酒精性脂肪性肝病有治療作用，其機制可能與藤茶抗炎抗氧化、保護肝臟、減輕肝臟脂質(zhì)沉積有關(guān)[51]。

2.6 降血脂、降血糖 藤茶中二氫楊梅素(7)可以改善高脂飲食喂養(yǎng)大鼠的葡萄糖相關(guān)代謝，同時降低脂質(zhì)水平，提示藤茶可能是治療2型糖尿病的有效藥物[52]。一系列的研究顯示，二氫楊梅素對血糖控制作用的機制可能是通過改善葡萄糖攝取和胰島素抵抗來實現(xiàn)的。Liu等[53]發(fā)現(xiàn)，二氫楊梅素通過抑制ERK誘導(dǎo)的PPARc在絲氨酸273處的磷酸化而改善脂肪細胞的葡萄糖攝??；在棕櫚酸酯誘導(dǎo)的L6肌管胰島素抵抗實驗?zāi)Ｐ椭校錀蠲匪乜梢陨吡姿峄葝u素受體底物-1和蛋白激酶B，并提高相應(yīng)的葡萄糖攝取能力，通過分子對接和熒光素酶報告實驗觀察到，二氫楊梅素可以與PPARγ的催化結(jié)構(gòu)域?qū)?，并呈劑量依賴性地升高PPARγ的活性，推測二氫楊梅素可能是PPARγ的潛在激動劑，通過激活PPARγ進而調(diào)節(jié)FGF21-AMPK信號通路促進胰島素增敏[54-55]。

2.7 增強免疫力及其他 藤茶中楊梅素(1)可以促進免疫力低下小鼠體內(nèi)溶血素的生成，提高單核巨噬細胞的吞噬能力，說明楊梅素對非特異性免疫和體液免疫均具有增強作用[56]。采用同位素測定小鼠淋巴細胞增殖反應(yīng)強度的方法，發(fā)現(xiàn)二氫楊梅素(7)可增強Con A誘導(dǎo)的小鼠淋巴細胞增殖[57]。此外，藤茶還具有抗病毒、抗?jié)?、降血壓、祛黑色素等多種藥理活性。

2.8 毒性與安全性研究 采用小鼠急性經(jīng)口毒性試驗、Ames試驗、小鼠骨髓細胞微核試驗、小鼠精子畸形試驗檢測藤茶提取物的毒性，結(jié)果顯示，藤茶急性經(jīng)口毒性試驗LD50>21.5 g/kg，Ames試驗等均為陰性，屬于無毒級[58]。在大鼠長期毒性模型中，藤茶總黃酮各劑量組對動物的外觀行為、體質(zhì)量、臟器系數(shù)、血液學(xué)和生化學(xué)指標與空白對照組比較無明顯差異，病理檢查未見與藥物毒性相關(guān)的明顯病變，停藥后也未見藥物延遲性毒性反應(yīng)[59]。

3 質(zhì)量控制

藤茶被湖南等地方標準收錄，僅有性狀以及鑒別(顯微鑒別，薄層鑒別)項，無法有效控制藤茶的質(zhì)量。范莉等[60]建立藤茶HPLC指紋圖譜共有模式，提取了24個共有峰，并指認了3個色譜峰，分別為二氫楊梅素、楊梅素和楊梅苷。常敬芳等[61]分別對藤茶中二氫楊梅素、楊梅素、楊梅苷、蘆丁、香橙素進行含量測定。上述研究為藤茶的質(zhì)量控制提供了科學(xué)依據(jù)，但是仍有不足。藤茶中化學(xué)成分復(fù)雜，現(xiàn)有的測定指標較少，主要集中在二氫楊梅素、楊梅素、楊梅苷3種組分上，專屬性不強[62]。中藥質(zhì)量標志物跟中藥的功效相關(guān)，可以克服現(xiàn)有質(zhì)量標準多種不足，提高質(zhì)量一致性、可控性和溯源性，有利于中藥產(chǎn)品生產(chǎn)過程控制和質(zhì)量監(jiān)管[63]。目前藤茶質(zhì)量標志物相關(guān)研究鮮有報道，有待加強研究。藤茶的指紋圖譜大部分色譜峰尚未歸屬，有待進一步研究。

4 結(jié)語與展望

藤茶主要分布在湖北、湖南、廣西、貴州等地，野生資源豐富，隨著市場需求的增多，栽培產(chǎn)業(yè)也日漸發(fā)展壯大[64]。現(xiàn)代研究表明，藤茶中主要含有黃酮類、酚類、甾體和萜類、揮發(fā)性成分等化合物，并含有氨基酸、礦物質(zhì)元素、維生素等多種營養(yǎng)成分[65]，具有抗炎鎮(zhèn)痛、抑菌、抗氧化、抗腫瘤、保肝、降血脂、降血糖、增強免疫力等生物活性，且安全無毒副作用。目前，藤茶的主要活性成分二氫楊梅素被研制成用于治療呼吸道感染、酒精中毒的中成藥制劑[66]，劑型包括片劑、膠囊劑、固體分散體、磷脂復(fù)合物納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體、胃漂浮緩釋片等。另外，藤茶因具有減少肝損傷、醒酒等多種保健功效，被廣泛使用并開發(fā)成不同劑型的保健產(chǎn)品[67]；因其具有抗氧化能力被用作食品添加劑[68]。藤茶在藥品、保健品以及食品添加劑領(lǐng)域具有較大的開發(fā)應(yīng)用前景。

從藤茶中已分離鑒定得到57個化合物，近期關(guān)于藤茶的化學(xué)成分研究較少，近五年僅有2篇文獻報道，近十年僅有6篇文獻報道。藤茶的藥理作用近幾年研究較多，但大多圍繞著含量較高的2個活性成分(二氫楊梅素和楊梅素)，尚缺乏全面系統(tǒng)的藥效組分篩選研究。另外，藤茶的作用機制研究還不夠全面深入，尚需要進一步研究。藤茶尚未有完善的質(zhì)量控制標準，文獻報道的含量測定方法指標單一，指紋圖譜大部分色譜峰尚未歸屬，有待進一步研究。

因此，亟待對藤茶的化學(xué)成分、藥理活性以及質(zhì)量控制方法進行系統(tǒng)研究，進一步闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機制，并建立全面的質(zhì)量控制方法，為藤茶的臨床應(yīng)用、質(zhì)量控制、資源利用、產(chǎn)品開發(fā)等提供重要的科學(xué)依據(jù)。