草果化學(xué)成分的研究

金新宇， 王曉霞， 柳 航， 韓 悅， 張子默， 莊鵬宇*

(1.華北理工大學(xué)藥學(xué)院，河北 唐山 063202；2.南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院藥學(xué)部，江蘇 南京 210008)

草果AmomumtsaokoCrevostet Lemarie為姜科豆蔻屬植物，別名草果子、草果仁，分布在廣西、云南等地，其性辛、味辣，具有調(diào)節(jié)腸胃、潤(rùn)腸通便、抗癌、抗氧化、降糖減脂、抑菌抗炎作用[1-3]，目前研究表明，除揮發(fā)油外，該植物中還發(fā)現(xiàn)簡(jiǎn)單酚類、黃酮、二苯庚烷類、雙環(huán)壬烷、甾醇[4-6]。本研究對(duì)草果95%乙醇提取部位進(jìn)行分離純化，得到11個(gè)化合物，其中化合物1～6為首次從該植物中發(fā)現(xiàn)，化合物3～6為首次從豆蔻屬植物中發(fā)現(xiàn)。

1 材料

SX-600核磁共振儀(德國(guó)Bruker公司)；制備液相色譜儀(北京慧德易科技有限責(zé)任公司)；柱層析、薄層析硅膠(煙臺(tái)新諾化工有限公司)；薄層色譜硅膠預(yù)制板(煙臺(tái)維啟化工產(chǎn)品有限公司)；Sephadex LH-20(廣州安西亞科技有限公司)；ODS制備色譜柱(北京慧德易科技有限責(zé)任公司)。草果于2017年6月采自云南曲靖，經(jīng)南京鼓樓醫(yī)院張海霞副主任鑒定為姜科豆蔻屬植物草果AmomumtsaokoCrevost et Lemarie的干燥成熟果實(shí)。5%硫酸乙醇溶液、甲醇(天津匯杭化工科技有限公司)。

2 提取與分離

20 kg草果以95%乙醇提取，濃縮液用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，分別得到萃取物102.4 g(石油醚層)、280.6 g(乙酸乙酯層)、117.3 g(正丁醇層)[7]。正丁醇層用乙醇-水(0∶100、30∶70、60∶40、95∶5)經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂洗脫，得到4個(gè)部位Fr.A～Fr.D。Fr.B經(jīng)二氯甲烷-甲醇(80∶1～1∶1)硅膠柱洗脫，得到流分Fr.B1～Fr.B20，F(xiàn)r.B4經(jīng)甲醇-水(30∶70)凝膠柱洗脫，得化合物2(3 mg)、3(3 mg)；Fr.B9在230 nm波長(zhǎng)處經(jīng)制備HPLC(乙腈-水，20∶80)洗脫，得化合物1(3 mg)、4(4 mg)，保留時(shí)間分別為24、36 min。Fr.C經(jīng)石油醚-乙酸乙酯(100∶1～1∶2)硅膠柱洗脫，得流分Fr.C1～Fr.C15，F(xiàn)r.C4在210 nm波長(zhǎng)處經(jīng)制備HPLC(乙腈-水，25∶75)洗脫，得化合物5(3 mg)、10(3 mg)，保留時(shí)間分別為25、70 min；Fr.C1經(jīng)甲醇-水(30∶70)凝膠柱洗脫，得流分Fr.C1A～Fr.C1H，F(xiàn)r.C1D、Fr.C1F、Fr.C1G在210、254 nm波長(zhǎng)處經(jīng)制備HPLC(乙腈-水，20∶80)洗脫，得化合物6(2 mg)、7(2.5 mg)、8(3 mg)、9(3 mg)，保留時(shí)間分別為30、51、62、70 min；Fr.C1H有明顯結(jié)晶，用二氯甲烷和甲醇反復(fù)溶解并重結(jié)晶，得化合物11(8 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末，ESI-MSm/z：223.1[M+H]+。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.85(1H, d,J=9.4 Hz, H-4)，6.93(1H, s, H-5)，6.22(1H, d,J=9.5 Hz, H-3)，3.97(3H, s, 8-OCH3)，3.92(3H, s, 6-OCH3)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：160.5(C-2)，145.2(C-6)，144.5(C-4)，144.0(C-7)，142.7(C-9)，134.4(C-8)，111.0(C-10)，110.3(C-3)，103.2(C-5)，59.8(8-OCH3)，55.0(6-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道一致，鑒定為異嗪皮啶。

化合物2：白色粉末，ESI-MSm/z：146.9[M-H]-。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.78(1H, d,J=16.0 Hz，H-β)，6.45(1H, d,J=16.0 Hz, H-α)，7.56(2H, m, H-2，6)，7.41(3H, m, H-3, 4, 5)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：172.6(C-9)，147.0(C-7)，133.9(C-1)，130.7(C-4)，128.9(C-2, 6)，128.3(C-3, 5)，117.3(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道一致，鑒定為反式肉桂酸。

化合物3：無(wú)色油狀物，ESI-MSm/z：167.2[M-H]-。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.72(1H, s, H-2)，4.31(1H, d,J=9.6 Hz, H-7)，2.39(1H, dd,J=16.0, 3.6 Hz, H-5b)，2.18(1H, m, H-4, 5a)，1.91(1H, m, H-6)，1.73(3H, s, 3-CH3)，0.98(3H, d,J=6.8 Hz, 6-CH3)，0.92(3H, d,J=6.8 Hz, 4-CH3)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：202.4(C-1)，151.9(C-3)，135.4(C-2)，69.1(C-7)，52.0(C-6)，37.3(C-5)，27.3(C-4)，20.9(6-CH3)，16.8(4-CH3)，15.4(3-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道一致，鑒定為subamone。

化合物4：黃色結(jié)晶，ESI-MSm/z：285.1[M+H]+。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：8.06(2H, m, H-2′, 6′)，7.62(3H, m, H-3′, 4′, 5′)，6.86(1H, s, H-3)，6.31(1H, s, H-6)，3.87(3H, s, -OCH3)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：182.2(C-4)，164.4(C-2)，157.1(C-7)，156.6(C-5)，151.0(C-9)，132.4(C-4′)，130.1(C-2′, 6′)，129.9(C-1′)，126.7(C-8)，126.5(C-3′, 5′)，105.1(C-3)，104.8(C-10)，98.9(C-6)，61.2(-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致，鑒定為漢黃芩素。

化合物5：淡黃色油狀物，ESI-MSm/z：356.8[M-H]-。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：6.90(2H, d,J=1.2 Hz, H-2, 2′)，6.88(2H, d,J=8.0 Hz, H-5, 5′)，6.81(2H, dd,J=8.0, 1.2 Hz, H-6, 6′)，4.73(2H, d,J=3.6 Hz, H-7, 7′)，3.11(2H, m, H-8, 8′)，3.86(2H, dd,J=8.8, 2.8 Hz, H-9a, 9′a)，4.25(2H, dd,J=8.8, 6.8 Hz, H-9b, 9′b)，3.91(6H, s, 3, 3′-OCH3)，5.60(2H, brs, 4, 4′-OH)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：146.6(C-3, 3′)，145.2(C-4, 4′)，132.8(C-1, 1′)，118.9(C-6, 6′)，114.1(C-5, 5′)，108.4(C-2, 2′)，85.6(C-7, 7′)，71.5(C-9, 9′)，55.7(3, 3′-OCH3)，54.1(C-8, 8′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道一致，鑒定為(+)-松脂醇。

化合物6：白色結(jié)晶粉末，ESI-MSm/z：360.1[M+H]+。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：4.78(1H, d,J=7.0 Hz, H-7′)，3.97(1H, dd,J=6.6, 8.4 Hz, H-9′)，3.71(1H, dd,J=6.1, 8.3 Hz, H-9′)，3.83(1H, dd, overlap, H-9)，3.62(1H, dd,J=6.5, 11.2 Hz, H-9)，2.91(1H, dd,J=4.9, 13.5 Hz, H-7)，2.50(1H, dd,J=11.2, 13.5 Hz, H-7)，2.71(1H, m, H-8)，2.34(1H, m, H-8′)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：149.0(C-3, 3′)，147.1(C-4′)，145.9(C-4)，135.8(C-1′)，133.6(C-1)，122.2(C-6′)，119.9(C-6)，116.3(C-5′)，116.1(C-5)，113.6(C-2′)，110.9(C-2)，84.1(C-7′)，73.6(C-9)，60.6(C-9′)，56.5(-OCH3)，54.0(C-8′)，43.8(C-8)，33.7(C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道一致，鑒定為落葉松脂醇。

化合物7：無(wú)色油狀物，ESI-MSm/z：166.8[M+H]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：9.37(1H, s, H-10)，6.75(1H, ddd,J=5.6, 2.8, 1.2 Hz, H-3)，3.95(1H, dt,J=9.2, 5.0 Hz, H-5)，2.94(1H, m, H-1)，2.48(1H, dddt,J=18.8, 5.6, 5.0, 1.4 Hz, Hβ-4)，2.42(1H, m, H-6)，2.38(1H, ddt,J=18.8, 9.2, 2.8 Hz, Hα-4)，2.02(1H, m, Hβ-9)，1.72(1H, m, H-7a)，1.55(1H, m, H-7b)，1.50(2H, m, H-8)，1.41(1H, m, Hα-9)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：196.0(C-10)，149.5(C-3)，146.0(C-2)，68.9(C-5)，44.1(C-6)，38.6(C-1)，33.2(C-9)，31.5(C-4)，26.2(C-7)，25.5(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道一致，鑒定為tsaokin。

化合物8：白色結(jié)晶，ESI-MSm/z：166.9[M+H]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.55(1H, d,J=8.0 Hz, H-6)，7.53(1H, s, H-2)，6.95(1H, d,J=8.0 Hz, H-5)，3.97(3H, s, H-9)，2.60(3H, s, H-8)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：196.7(C-7)，150.4(C-4)，146.4(C-3)，130.2(C-1)，123.8(C-6)，113.4(C-5)，109.7(C-2)，56.1(C-9)，25.6(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道一致，鑒定為香草乙酮。

化合物9：無(wú)色油狀物，ESI-MSm/z：168.2[M+H]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.43(1H, d,J=8.7 Hz, H-6)，7.40(1H, s, H-2)，6.83(1H, d,J=8.7 Hz, H-5)，3.73(3H, s, -OCH3)；13C-NMR(150 MHz，CD3Cl)δ：167.3(-COOH)，151.1(C-4)，147.1(C-3)，123.5(C-6)，115.1(C-2)，112.7(C-5)，55.3(3-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道一致，鑒定為香草酸。

化合物10：淡綠色油狀物，ESI-MSm/z：278.8[M+H]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：4.30(4H, t, H-1, 1″)，1.72(4H, m, H-2, 2′)，1.46(4H, m, H-3, 3′)，1.17(6H, td, H-4, 4′)，7.55(2H, m, H-3″, 6″)，7.75(2H, m, H-4″, 5″)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：167.7(C-7″, 8″)，132.4(C-4″, 5″)，130.9(C-1″, 2″)，128.8(C-3″, 6″)，65.5(C-1, 1′)，30.6(C-2, 2′)，19.1(C-3, 3′)，13.7(C-4, 4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道一致，鑒定為鄰苯二甲酸二丁酯。

化合物11：白色結(jié)晶，將其與β-谷甾醇通過(guò)TLC檢識(shí)，發(fā)現(xiàn)兩者在同一展開(kāi)體系下有相同Rf值，并且混合熔點(diǎn)不降低，鑒定為β-谷甾醇。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)從草果中分離得到11個(gè)化合物，其中化合物3～5均有抗腫瘤作用[17-19]。草果化學(xué)成分復(fù)雜，需要深入研究以發(fā)現(xiàn)更多的新穎結(jié)構(gòu)，以期為其藥效基礎(chǔ)及其他豆蔻屬植物藥理活性研究提供參考。