免疫系統(tǒng)人源化小鼠模型構(gòu)建技術(shù)探討

范蓓，王園園，趙云霞，江魁，王斌

1.華蘭生物工程股份有限公司，河南 新鄉(xiāng) 453000；

2.河南晟明生物技術(shù)研究院有限公司，河南 新鄉(xiāng) 453600；

3.華蘭基因工程有限公司，河南 新鄉(xiāng) 453600

腫瘤免疫療法的出現(xiàn)代表腫瘤治療手段的革命性進(jìn)步，也成為抗腫瘤藥物研發(fā)的熱點(diǎn)。雖然免疫療法在不同適應(yīng)癥中表現(xiàn)出可觀的長期生存率，但只在一小部分患者和腫瘤類型中獲得成功，仍然無法使很多患者從中受益［1］，因此，亟需臨床前動(dòng)物模型來推動(dòng)能夠延長或改變患者臨床反應(yīng)的新免疫療法或免疫組合療法的開發(fā)，提高臨床試驗(yàn)的成功率。目前，用于評價(jià)免疫療法的小鼠模型有同源小鼠模型、化學(xué)誘導(dǎo)小鼠模型、基因編輯人源化小鼠模型和免疫系統(tǒng)人源化小鼠模型，其中前三種模型應(yīng)用比較廣泛，它們依賴于小鼠免疫系統(tǒng)，但小鼠的免疫反應(yīng)并不能完整復(fù)制人的免疫反應(yīng)［2］。免疫系統(tǒng)人源化小鼠模型是將人的免疫細(xì)胞移植到重度免疫缺陷的小鼠體內(nèi)，構(gòu)建出具有功能性人免疫系統(tǒng)的小鼠模型，更接近于人體免疫系統(tǒng)，能夠更好地模擬藥物進(jìn)入人體后免疫系統(tǒng)的反應(yīng)，因此越來越受到科研工作者的關(guān)注和青睞。雖然免疫系統(tǒng)人源化小鼠模型構(gòu)建技術(shù)已非常成熟，但是人源化免疫系統(tǒng)重建的影響因素很多，不同單位和機(jī)構(gòu)的水平參差不齊，對模型構(gòu)建成功率及應(yīng)用轉(zhuǎn)化方面的影響也不同。本研究從構(gòu)建方法、免疫缺陷小鼠品系、性別及飼養(yǎng)、免疫細(xì)胞的供體、數(shù)量和細(xì)胞狀態(tài)等方面對免疫系統(tǒng)人源化小鼠模型構(gòu)建進(jìn)行了技術(shù)探討，以期為腫瘤免疫療法提供更有利的藥物研發(fā)工具。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物31只6～8周齡重度免疫缺陷雌性小鼠NCG（NOD CRISPR Prkdc Il2r gamma），品系名稱為NOD/ShiLtJGpt-Prkdcem26Cd52 Il2rgem26Cd22/Gpt，SPF級(jí)，購于江蘇集萃藥康科技股份有限公司，小鼠在華蘭基因工程有限公司動(dòng)物中心屏障動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施進(jìn)行飼養(yǎng)。與本研究相關(guān)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)獲得了華蘭集團(tuán)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)批準(zhǔn)（申請受理編號(hào)：ER-HLGE-RD-2021005-02，ER

HLGE-RD-2021005-03，ER-HLGE-RD-2021005-09），整個(gè)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過程遵循實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理福利3R原則，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理和使用符合法規(guī)要求。

1.1.2 細(xì)胞Human normal PB-MNC（HuPB-MNC）購于上海澳能生物技術(shù)有限公司，包括四種供體：供體1（批號(hào)：LP200730，Donor ID：Z006）、供體2（批號(hào)：LP200907A，Donor ID：Y1292）、供體3（批號(hào)：PCH20210200017，Donor ID：Z0115）、供體4（批號(hào)：PCH20210400013，Donor ID：Z0144），液氮保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.3 主要試劑1×FBS和1×PBS（pH 7.4）均購自美國Gibco公司；RPMI-1640購自ATCC；DNaseⅠ購自美國Worthington公司；鹽酸購自洛陽昊華化學(xué)試劑有限公司；無水乙醇購自天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；肝素鈉、BSA購自北京索萊寶科技有限公司；0.9%氯化鈉注射液購自河南科倫藥業(yè)有限公司；1×RBC裂解緩沖液購自美國eBioscience公司；FITC anti-human CD45抗體、PerCP/Cyanine5.5 anti-mouse CD45抗體購自美國BioLegend公司。

1.1.4 主要儀器小鼠飼養(yǎng)IVC系統(tǒng)（蘇州馮氏，ZJ-5）；層流傳遞窗（中科圣杰）；生物安全柜（蘇凈泰安，BSC-1604ⅡA2）；紫外線消毒車（申光儀器，豪華型）；電子天平（河南宏程，T500）；二氧化碳培養(yǎng)箱（上海力申，HF90）；電熱恒溫水箱（上海錫為科學(xué)，HWS-28）；生物安全柜（蘇州安泰，BSC-1304ⅡB2）；脈動(dòng)真空滅菌器（山東新華醫(yī)療器械，XG1.DTF-1.5）；高精密度電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器，GL224l-1SCN）；渦旋混勻器（精騏，HYQ-3110）；離心機(jī)（Dragon，D3024R）；流式細(xì)胞儀（BD，C6）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 重度免疫缺陷小鼠NCG的飼養(yǎng)與檢疫小鼠飼養(yǎng)于IVC系統(tǒng)中，環(huán)境條件控制在20～26℃，相對濕度40%～70%，小鼠照度15～20 lx，工作照度200 lx以上，光照12 h明暗交替，噪音低于60 dB；與小鼠有關(guān)的所有操作，如更換籠具墊料、加水加料、實(shí)驗(yàn)操作等均在生物安全柜中進(jìn)行；給予合格的小鼠生長繁殖飼料，自由攝食；經(jīng)高壓滅菌的玉米芯材質(zhì)作為實(shí)驗(yàn)專用墊料，應(yīng)保證無異味、無結(jié)塊、無霉變、無蟲蛀、無異物污染等；飲用水采用酸化水（用HCl調(diào)節(jié)pH至2.5～3.0），經(jīng)高壓滅菌后使用飲水瓶供應(yīng)，自由攝水；所有動(dòng)物購入后，由獸醫(yī)負(fù)責(zé)檢疫，動(dòng)物檢疫期1～3 d，檢疫期最后期限由獸醫(yī)決定。

1.2.2 HuPB-MNC細(xì)胞復(fù)蘇從液氮中取出供體1、供體2、供體3和供體4 HuPB-MNC細(xì)胞，快速將其置入37℃水浴中解凍，直到管中只剩下最后一片結(jié)晶；在生物安全柜中，用75%乙醇擦拭細(xì)胞凍存管外壁；打開細(xì)胞凍存管，用1 mL移液槍輕輕混勻細(xì)胞后，將細(xì)胞移至含有300μg DNaseⅠ的50 mL無菌離心管中，用1 mL完全培養(yǎng)液沖洗凍存管，并將其轉(zhuǎn)移到50 mL離心管中，邊滴加邊搖勻；之后逐滴加入18 mL 37℃預(yù)熱的完全培養(yǎng)基（含10%FBS的RPMI-1640），邊滴加邊搖勻；細(xì)胞懸液室溫條件下200 r·min-1離心15 min；去除上清后加適量體積1×PBS，輕輕混勻細(xì)胞，取少量細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)，確定復(fù)蘇后細(xì)胞活率及細(xì)胞數(shù)；用PBS調(diào)整到需要的細(xì)胞濃度，備用。

1.2.3 免疫系統(tǒng)人源化小鼠模型的建立選取檢疫合格的6～8周齡NCG重度免疫缺陷雌性小鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周左右；注射前將復(fù)蘇后的HuPB-MNC細(xì)胞置于冰上保存；分別取1.0E+6 cells和1.0E+7 cells的HuPB-MNC細(xì)胞，使用1 mL無菌注射器吸取200μL HuPB-MNC細(xì)胞懸液，以尾靜脈注射方式注射NCG小鼠；對照組NCG小鼠不作任何處理；每周觀察小鼠2次，并記錄小鼠體重及死亡情況；實(shí)驗(yàn)第7、14、21、28和35天眼眶靜脈叢試血，流式檢測小鼠外周血中huCD45+T細(xì)胞和mCD45+T細(xì)胞，huCD45%計(jì)算方法如公式（1）。

1.2.4 流式細(xì)胞術(shù)監(jiān)測NCG小鼠外周血中人CD45+T細(xì)胞的重建水平采用流式細(xì)胞術(shù)監(jiān)測小鼠外周血中人CD45+T細(xì)胞的重建水平，具體操作如下：①采血：小鼠眼眶靜脈叢試血，加入1%肝素鈉生理鹽水溶液抗凝（4μL抗凝劑：200μL血），混勻后室溫放置，1 h內(nèi)染色。②抗體Mix配制：以一個(gè)樣品為例，取1.25μL FITC anti-human CD45抗 體 和0.3125μL PerCP/Cyanine5.5 anti-mouse CD45抗體，加入3.4375μL 1%BSA-PBS染色緩沖液渦旋混勻，4℃避光待用。③熒光標(biāo)記：50μL抗凝血，每管加入5μL FITC anti-human CD45和PerCP/Cyanine5.5 anti-mouse CD45抗體Mix，充分混勻，4℃避光孵育20 min。另設(shè)置不加抗體處理作為陰性對照。④裂紅：加入紅細(xì)胞裂解液（全血：紅細(xì)胞裂解液體積比為1∶10），輕搖混勻，室溫反應(yīng)5 min，加入1×PBS終止裂紅反應(yīng)（PBS：紅細(xì)胞裂解液體積比為2∶1），500 r·min-1離心5 min，棄上清（觀察裂紅效果，是否需要重復(fù)1次）。⑤洗滌：加入1 mL 1×PBS，500 r·min-1離心5 min，棄上清。⑥檢測：細(xì)胞沉淀加入300μL 1×PBS，300目尼龍網(wǎng)過濾后上機(jī)檢測。

1.2.5 數(shù)據(jù)采集及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)采集的原始數(shù)據(jù)采用Graphpad Prism 7.0軟件進(jìn)行分析；流式細(xì)胞儀檢測數(shù)據(jù)采用BD AccuriTMC6軟件進(jìn)行分析，流式監(jiān)測結(jié)果圖采用FlowJo V10軟件進(jìn)行繪制。

2 結(jié)果與分析

2.1 免疫細(xì)胞移植數(shù)量的選擇

分別取1.0E+6 cells和1.0E+7 cells的供體1 HuPB-MNC細(xì)胞以尾靜脈注射方式移植入NCG小鼠體內(nèi)，實(shí)驗(yàn)第7、14、21、28和35 d眼眶靜脈叢試血，流式檢測小鼠外周血中huCD45+T細(xì)胞和mCD45+T細(xì)胞，計(jì)算huCD45%。結(jié)果顯示（圖1），HuPB-MNC細(xì)胞移植數(shù)量為1.0E+7 cells時(shí)重建效果較好。

圖1 不同免疫細(xì)胞移植數(shù)量對免疫重建效果的影響Fig.1 Effect of different number of transplanted immune cells on immune reconstitution

2.2 免疫細(xì)胞供體的選擇

2.2.1 免疫細(xì)胞不同供體重建后體重及生存率的變化分別取1.0E+7 cells數(shù)量的供體2、供體3和供體4 HuPB-MNC細(xì)胞以尾靜脈注射方式移植入NCG小鼠體內(nèi)，對照組小鼠不作任何處理。免疫細(xì)胞移植后NCG小鼠體重變化結(jié)果顯示（圖2），與對照組相比，供體2組和供體4組在HuPBMNC細(xì)胞移植21 d后體重開始下降，供體3組在HuPB-MNC細(xì)胞移植0 d后體重未見明顯增長，平均體重始終低于對照組。NCG小鼠生存率變化結(jié)果顯示（圖3），供體3組在HuPB-MNC細(xì)胞移植35 d時(shí)的生存率下降至80%，供體2組和供體4組在HuPB-MNC細(xì)胞移植35 d時(shí)生存率均為100%。由以上結(jié)果可知，供體2組和供體4組在HuPBMNC細(xì)胞移植21 d后開始出現(xiàn)GVHD移植物抗宿主反應(yīng)，供體3組在HuPB-MNC細(xì)胞移植0 d后即表現(xiàn)出GVHD移植物抗宿主反應(yīng)。以上結(jié)果表明，生存率在NCG小鼠不同供體的重建速度和水平存在明顯差異。

圖2 免疫細(xì)胞不同供體重建后體重的變化Fig.2 Effect of different donors of transplanted immune cells on body weight

圖3 免疫細(xì)胞不同供體重建后生存率的變化Fig.3 Effect of different donors of transplanted immune cells on survival rate

2.2.2 免疫細(xì)胞不同供體重建后NCG小鼠外周血中人CD45+T細(xì)胞的重建水平的變化分別取1.0E+6 cells數(shù)量的供體2、供體3和供體4 HuPBMNC細(xì)胞以尾靜脈注射方式移植入NCG小鼠體內(nèi)，實(shí)驗(yàn)第7、14、21、28和35天眼眶靜脈叢試血，流式檢測小鼠外周血中huCD45+T細(xì)胞和mCD45+T細(xì)胞，計(jì)算huCD45%。NCG小鼠外周血中人CD45+T細(xì)胞的重建水平的變化結(jié)果顯示（圖4），供體3組和供體4組在HuPB-MNC細(xì)胞移植21 d時(shí)NCG小鼠外周血中人CD45+T細(xì)胞的重建水平大于25%，供體2組在HuPB-MNC細(xì)胞移植28 d時(shí)NCG小鼠外周血中人CD45+T細(xì)胞的重建水平大于25%，標(biāo)志著免疫系統(tǒng)人源化小鼠模型建立成功。每周采集NCG小鼠外周血進(jìn)行流式動(dòng)態(tài)監(jiān)測結(jié)果顯示（圖5），NCG小鼠外周血中人CD45+T細(xì)胞重建水平隨時(shí)間推移逐步上升，在重建35 d時(shí)供體2組、供體3組和供體4組huCD45%平 均 值 分 別 達(dá)34.77%、26.24%和56.10%。

圖4 NCG小鼠外周血中人CD45+T細(xì)胞的重建水平的變化Fig.4 Effect of different donors of transplanted immune cells on reconstruction level of NCG mice peripheral blood

圖5 每周采集NCG小鼠外周血進(jìn)行流式動(dòng)態(tài)監(jiān)測Fig.5 The results of weekly flow dynamic monitoring of NCG mice peripheral blood

3 討論

在腫瘤免疫治療藥物的研發(fā)中，藥物篩選及藥效研究需要大量的模型動(dòng)物，而重度免疫缺陷小鼠的價(jià)格較貴，通過提高模型構(gòu)建成功率及應(yīng)用轉(zhuǎn)化率可以大大節(jié)約成本。但是影響免疫系統(tǒng)人源化小鼠模型構(gòu)建成功的因素很多，如構(gòu)建方法、免疫缺陷小鼠品系、性別及飼養(yǎng)、免疫細(xì)胞的供體、數(shù)量和細(xì)胞狀態(tài)等，本研究通過實(shí)驗(yàn)，總結(jié)出一些經(jīng)驗(yàn)，現(xiàn)從以下幾個(gè)方面進(jìn)行討論。

3.1 免疫系統(tǒng)人源化小鼠模型構(gòu)建方法的選擇

目前用于人源化免疫系統(tǒng)重建的免疫細(xì)胞主要有人CD34+造血干細(xì)胞（Hu-CD34+HSC）和人外周單個(gè)核細(xì)胞（Hu-PBMC），根據(jù)免疫系統(tǒng)人源化小鼠模型免疫細(xì)胞來源和構(gòu)建方法的不同，可以分為Hu-CD34+模型、Hu-BLT模型和Hu-PBL模型［3］。

Hu-CD34+模型是將來源于人外周血、骨髓、胎兒肝臟和臍帶血等CD34+造血干細(xì)胞注射入經(jīng)輻照處理的新生和成年免疫缺陷小鼠，以實(shí)現(xiàn)T細(xì)胞、B細(xì)胞、髓系及NK細(xì)胞的發(fā)育。該模型的免疫細(xì)胞和造血系統(tǒng)是由小鼠體內(nèi)發(fā)育而來，對其宿主具有免疫耐受性，通常不會(huì)發(fā)生GVHD反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)窗口期最長可達(dá)45周［4］，適用于長期研究。但是該模型重建周期較長，通常需要8～12周，且T細(xì)胞數(shù)量較少、活性較低、髓系細(xì)胞發(fā)育受限［5-6］。

Hu-BLT模型是將胎兒肝臟和胸腺組織移植入經(jīng)輻照處理的成年免疫缺陷小鼠腎包膜下，再將來源于同一個(gè)體胎兒肝臟或骨髓的造血干細(xì)胞靜脈注射入該小鼠體內(nèi)，該模型提供了人的胸腺微環(huán)境，使得人T細(xì)胞的發(fā)育和對人MHC分子成為可能［3］。Hu-BLT小鼠具有完整的免疫系統(tǒng)并且能產(chǎn)生人源性的適應(yīng)性免疫應(yīng)答，是模擬人免疫系統(tǒng)最完善的小鼠模型，但是存在胎兒肝臟和胸腺來源受限、構(gòu)建難度極大、可誘發(fā)GVHD反應(yīng)等缺點(diǎn)，使其研究和應(yīng)用受到極大的限制［2，5］。

Hu-PBL模型通過將人PBMCs以靜脈或腹腔注射的方式移植入成年免疫缺陷小鼠，以實(shí)現(xiàn)外周血和脾臟中人CD45+T細(xì)胞的植入和增殖。PBMC移植后人T細(xì)胞增殖速度快，重建水平高且穩(wěn)定，通常2～3周時(shí)檢測外周血中人CD45+T細(xì)胞可超過25%，該模型構(gòu)建方法簡單、耗時(shí)短、成本相對其他模型較低，是免疫治療短期研究的理想非臨床動(dòng)物模型，被廣泛應(yīng)用于腫瘤免疫治療研究中［7-10］。Lin等［11］研 究表明Hu-PBL模型評估PD-L1/PD-1靶向免疫治療不僅耗時(shí)短且更準(zhǔn)確，是研究PD-L1/PD-1靶向抗腫瘤療效的寶貴工具。

3.2 免疫缺陷小鼠的選擇

小鼠的異種移植成功與否與受體的免疫屏障狀態(tài)關(guān)系密切，受體免疫缺陷程度越高，供體細(xì)胞發(fā)生免疫排斥的幾率越低，移植成功率越高。目前應(yīng)用較廣泛的免疫缺陷小鼠品系包括NOG/MNSG/NPG/NCG（NOD-SCID IL2rg-/-）、NRG（NODRag1-/-IL2rg-/-）、BRG（BALB/cA-Rag2-/-IL2rg-/-）和NPG-B2M。

在選擇免疫缺陷小鼠品系時(shí)首先要考慮遺傳背景，如白細(xì)胞介素2受體γ鏈具有重要免疫功能的細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的共同受體亞基，該基因敲除后小鼠機(jī)體免疫功能嚴(yán)重受損，通過多種受體阻斷細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)，導(dǎo)致功能性NK細(xì)胞缺陷。重組激活基因Rag1和Rag2在免疫球蛋白（Ig）基因和T細(xì)胞受體（TCR）基因的重排和重組過程中發(fā)揮重要作用，是B細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞成熟過程的必需階段，任意一個(gè)缺失都會(huì)導(dǎo)致T、B淋巴細(xì)胞發(fā)育中斷，表現(xiàn)為嚴(yán)重的T/B細(xì)胞早期發(fā)育阻滯，進(jìn)而不能產(chǎn)生成熟的T、B淋巴細(xì)胞。B2M基因編碼的β2微球蛋白是MHCⅠ類分子的亞基，MHCⅠ類分子介導(dǎo)的T細(xì)胞反應(yīng)在異種排斥反應(yīng)中起重要作用，B2M基因敲除后，小鼠細(xì)胞表面不再表達(dá)MHCⅠ類分子，GVHD顯著減弱［12］。遺傳基因的改變會(huì)直接影響免疫系統(tǒng)的組成成分、免疫細(xì)胞泄露程度、壽命、輻照敏感度及繁殖能力。因此，在選擇免疫缺陷小鼠品系時(shí)應(yīng)綜合考慮各種因素。

其次，免疫缺陷小鼠的性別也是影響免疫系統(tǒng)重建的重要因素之一。Faiyaz等［13］研究結(jié)果表明，受體性別在人造血干細(xì)胞移植和增殖過程中起著關(guān)鍵性作用，雌性NSG小鼠比雄性NSG小鼠人CD45+造血細(xì)胞的重建效果更好。Volk等［14-15］研究表明，在造血干細(xì)胞移植后0～12周雌性小鼠比雄性小鼠初始T細(xì)胞水平高，16周左右雄性小鼠成熟T細(xì)胞表現(xiàn)出更高的發(fā)育水平，20周以后外周血中人CD45+細(xì)胞、初始T細(xì)胞和記憶T細(xì)胞在不同性別之間達(dá)到平衡?？傮w來說，雌性小鼠在免疫細(xì)胞發(fā)育和成熟方面比雄性小鼠更有優(yōu)勢，表現(xiàn)出更高水平的重建效率［16-17］。

3.3 免疫細(xì)胞的選擇

免疫細(xì)胞的供體、數(shù)量和細(xì)胞狀態(tài)也是影響人源化免疫系統(tǒng)重建的重要因素。有研究發(fā)現(xiàn)，不同供體的免疫細(xì)胞在同一小鼠品系的重建速度、重建水平及移植后免疫細(xì)胞發(fā)育和成熟的情況不同，不同供體構(gòu)建的免疫系統(tǒng)人源化小鼠模型對同一免疫檢查點(diǎn)抑制劑反應(yīng)也不同［18-19］。

人源化免疫系統(tǒng)的重建需要合適數(shù)量的免疫細(xì)胞，過多或過少均會(huì)影響重建效果。CD34+HSC細(xì)胞移植數(shù)量過多可能會(huì)導(dǎo)致貧血，PBMC細(xì)胞移植過多可能會(huì)加速GVHD反應(yīng)，而移植數(shù)量過少可能會(huì)降低重建率甚至?xí)斐芍亟ㄊ?。一般情況下，CD34+HSC細(xì)胞移植數(shù)量為1.0E+4 cells～2.0E+5 cells，PBMC細(xì)胞移植數(shù)量為5.0E+6 cells～2.0E+7 cells［16］。

選擇新鮮采集還是超低溫保存的免疫細(xì)胞，對于人源化免疫系統(tǒng)重建沒有明顯影響［4］，但是免疫細(xì)胞的存活率及結(jié)塊率卻是影響重建效率的關(guān)鍵因素。因此，將預(yù)先篩選好的供體先超低溫保存，重建時(shí)再進(jìn)行復(fù)蘇，可以提高重建成功率。

綜上所述，在構(gòu)建免疫系統(tǒng)人源化小鼠模型時(shí)，應(yīng)該從構(gòu)建方法、免疫缺陷小鼠品系、性別和飼養(yǎng)、免疫細(xì)胞的供體、數(shù)量和細(xì)胞狀態(tài)等各個(gè)方面進(jìn)行考慮，通過采用多種供體克服差異性，優(yōu)化腫瘤模型和免疫細(xì)胞供體聯(lián)合接種方案最大化利用窗口期［20］等策略提高模型構(gòu)建成功率及應(yīng)用轉(zhuǎn)化率，使實(shí)驗(yàn)室免疫系統(tǒng)人源化小鼠模型構(gòu)建方法進(jìn)一步完善。近年來，免疫系統(tǒng)人源化小鼠模型被廣泛應(yīng)用于免疫檢查點(diǎn)抑制劑的臨床前研究中，除了已應(yīng)用于臨床的PD-1/PD-L1和CTLA-4，也發(fā)現(xiàn)不少新的免疫檢查點(diǎn)，這些新的免疫檢查點(diǎn)很大程度上會(huì)選擇免疫系統(tǒng)人源化小鼠模型進(jìn)行臨床前研究，未來本實(shí)驗(yàn)室會(huì)進(jìn)一步研究腫瘤模型和免疫細(xì)胞供體聯(lián)合方案，開發(fā)出更多的免疫系統(tǒng)人源化腫瘤模型，以期為腫瘤免疫療法提供更有利的藥物研發(fā)工具。