結(jié)直腸癌錯(cuò)配修復(fù)蛋白與臨床病理特征的關(guān)系

崔珂珂

（襄城縣人民醫(yī)院病理科，河南 許昌 461700）

結(jié)直腸癌（Colorectal cancer，CRC）多發(fā)于40歲以上中老年人群，其病理類(lèi)型以腺癌最為常見(jiàn)，發(fā)病原因多與家族遺傳、消化道疾病、長(zhǎng)期低纖維飲食等有關(guān)?，F(xiàn)如今，我國(guó)CRC發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，對(duì)人類(lèi)生命安全造成了極大威脅。據(jù)報(bào)道，早期CRC患者在經(jīng)過(guò)手術(shù)、放化療等綜合治療后，其5年生存率可達(dá)到90%，但僅有39%的患者可在早期確診[1]。

相關(guān)研究指出，CRC發(fā)生的分子途徑包括微衛(wèi)星不穩(wěn)定性、染色體不穩(wěn)定性和CpG島甲基化3種，其中微衛(wèi)星不穩(wěn)定主要由錯(cuò)配修復(fù)（Mismatch Repair，MMR）蛋白失活、造成基因突變產(chǎn)生。MMR系統(tǒng)能夠精準(zhǔn)識(shí)別DNA復(fù)制過(guò)程中出現(xiàn)的堿基錯(cuò)配，維持人類(lèi)基因庫(kù)完整與穩(wěn)定。MMR功能缺陷，將導(dǎo)致細(xì)胞自發(fā)突變率增加，加速CRC發(fā)生、發(fā)展過(guò)程[5]。

因此，分析MMR蛋白在CRC患者中的表達(dá)情況，探討MMR蛋白與病理特征的關(guān)系，對(duì)臨床評(píng)估CRC患者病情進(jìn)展，制定針對(duì)性診療措施具有至關(guān)重要的意義。因此，本研究欲通過(guò)檢測(cè)CRC患者M(jìn)utL同源物1（MutL homolog 1，MLH1）、減數(shù)分裂后分離蛋白2（Post-meiotic segregation 2，PMS2）、MutL同源物2（MutS protein homolog 2，MSH2）、MutL同源物6（MutS homolog 6，MSH6）4種MMR蛋白缺失情況，探討其與臨床病理特征的關(guān)系，從而為提高臨床CRC的診斷效率提供一定指導(dǎo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。選取2018年10月~2021年10月于本院接受根治術(shù)治療的116例CRC患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合中CRC的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]；術(shù)前未接受放化療治療；精神正常；患者家屬簽訂知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：非原發(fā)性CRC者；復(fù)發(fā)性CRC者；合并林奇綜合征者；存在家族性腺瘤性息肉病史者。所有患者中男74例，女42例；年齡46~75歲，平均62.74±5.66歲；腫瘤TNM分期[4]：Ⅰ期12例，Ⅱ期28例，Ⅲ期32例，Ⅳ期44例；分化程度：高分化48例，中分化36例，低分化32例。

1.2 方法

于CRC根治術(shù)中獲取患者腫瘤組織和癌旁組織標(biāo)本，檢測(cè)MMR蛋白表達(dá)情況和CRC組織的臨床病理特征后，分析MMR蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 MMR蛋白表達(dá)情況

選取腫瘤與正常組織同時(shí)存在的蠟塊制成4 μm厚度切片，采用Evision法行免疫組化，一抗為MLH1、PMS2、MSH2、MSH6，抗體及免疫組化試劑均由上?？泼羯锟萍加邢薰咎峁z測(cè)結(jié)果判讀：MMR蛋白在細(xì)胞核明確著色為陽(yáng)性表達(dá)，不著色為缺失。 將4種蛋白全部陽(yáng)性判斷為錯(cuò)配修復(fù)修復(fù)完整（Proficient mismatch repair，pMMR），4種MMR蛋白中任意一種及1種以上蛋白表達(dá)陰性判定為錯(cuò)配修復(fù)缺陷（Deficient mismatch repair，dMMR）。

1.3.2 CRC臨床病理特征

用4%甲醛溶液固定腫瘤組織標(biāo)本，石蠟包埋，蘇木精-伊紅（Hematoxylin-eosin，HE）染色，光鏡觀察病理特征。磷酸緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照為已知陽(yáng)性片；每例均有HE切片做對(duì)照觀察。

1.3.3 MMR蛋白表達(dá)與CRC臨床病理特征的相關(guān)性分析

應(yīng)用χ2檢驗(yàn)Phi和Cramer's ν系數(shù)分析MMR蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料經(jīng)Shapiro-Wilk正態(tài)性檢驗(yàn)后以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MMR蛋白表達(dá)情況

所有患者中，MMR蛋白表達(dá)陽(yáng)性者94例（81.03%），MMR蛋白表達(dá)缺失者22例（18.97%）；其中MLH1、PMS2、MSH2、MSH6蛋白表達(dá)缺失者分別為9例、11例、6例、6例，MLH1和PMS2蛋白共同缺失者4例，MSH2和MSH6蛋白共同缺失者6例，未見(jiàn)4種蛋白共同缺失患者。

2.2 MMR蛋白表達(dá)與CRC臨床病理特征的關(guān)系

不同腫瘤部位、腫瘤TNM分期、分化程度、腫瘤直徑患者的MMR蛋白表達(dá)缺失具有明顯差異（P＜0.05）；不同CRC家族史、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)類(lèi)型、肉眼分型患者的MMR蛋白表達(dá)缺失無(wú)明顯差異（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 MMR蛋白表達(dá)與CRC臨床病理特征的關(guān)系 （例（%））

2.3 MMR蛋白表達(dá)與CRC臨床病理特征的關(guān)系分析

經(jīng)χ2檢驗(yàn)Phi和Cramer's ν系數(shù)分析顯示，MM蛋白表達(dá)與腫瘤部位、腫瘤TNM分期、分化程度、腫瘤直徑呈正相關(guān)（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 MMR蛋白表達(dá)與CRC臨床病理特征的關(guān)系分析

3 討論

MMR系統(tǒng)能夠精準(zhǔn)識(shí)別DNA復(fù)制過(guò)程中出現(xiàn)的堿基錯(cuò)配，維持人類(lèi)基因庫(kù)完整與穩(wěn)定；MMR系統(tǒng)由一系列修復(fù)DNA堿基錯(cuò)配的酶分子組成，其中包括MLH1、PMS2、MSH2、MSH6，但MLH1、PMS2、MSH2、MSH6中任意一種蛋白缺失均會(huì)引起MMR功能缺陷，導(dǎo)致細(xì)胞自發(fā)突變率增加，加速CRC發(fā)生、發(fā)展過(guò)程[2]。因此，分析MMR蛋白在CRC患者中的表達(dá)情況，探討MMR蛋白與病理特征的關(guān)系，對(duì)臨床評(píng)估CRC患者病情進(jìn)展具有至關(guān)重要的意義。

本研究發(fā)現(xiàn)，不同腫瘤部位、腫瘤TNM分期、分化程度、腫瘤直徑患者M(jìn)MR蛋白表達(dá)缺失比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；且進(jìn)一步經(jīng)χ2檢驗(yàn)Phi和Cramer's ν系數(shù)分析顯示，CRC患者M(jìn)M蛋白表達(dá)與腫瘤部位、腫瘤TNM分期、分化程度、腫瘤呈正相關(guān)。

其原因可能是：①腫瘤部位：MMR蛋白失活是引起微衛(wèi)星不穩(wěn)定的重要原因，而右半結(jié)腸CRC主要由微衛(wèi)星路徑引起腫瘤相關(guān)基因突變，左半結(jié)腸CRC則是通過(guò)染色體不穩(wěn)定路徑引起抑癌基因突變引起，因此腫瘤部位與MMR蛋白表達(dá)缺失有關(guān)[5]。晉龍[6]等研究結(jié)果指出，CRC患者M(jìn)MR蛋白缺失與腫瘤部位相關(guān)，位于右半結(jié)腸的CRC患者M(jìn)MR蛋白缺失率明顯高于左半結(jié)腸患者。本研究結(jié)果與之相似。②腫瘤TNM分期：MMR蛋白表達(dá)缺失，可引起腫瘤細(xì)胞過(guò)度增長(zhǎng)，腫瘤往往浸潤(rùn)程度深，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率及遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移率高[7]。因此，CRC患者M(jìn)MR蛋白表達(dá)與TNM分期密切相關(guān)。③分化程度：MMR蛋白缺失可引起MMR系統(tǒng)功能缺陷，誘發(fā)細(xì)胞基因突變，且MMR蛋白缺失越多，腫瘤惡性程度越高，分化越差[8]。李宇陽(yáng)[9]等研究結(jié)果指出，腫瘤分化程度影響CRC中MLH1、PMS2、MSH2蛋白的表達(dá)，且分化程度低的腫瘤，MLH1、PMS2蛋白表達(dá)缺失更為常見(jiàn)。本研究與上述結(jié)論相一致。④腫瘤直徑：MMR蛋白表達(dá)缺失可引起腫瘤細(xì)胞惡性增長(zhǎng)，誘發(fā)腫瘤直徑增大，侵犯其他臟器或穿破臟層腹膜，向遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移，與宋蒨[10]等研究結(jié)論一致。

此外，本研究還存在以下幾點(diǎn)局限：①本研究納入CRC患者樣本量偏小，可能會(huì)與其他研究存在一定偏差；②樣本人群不同環(huán)境因素可對(duì)會(huì)對(duì)研究結(jié)果產(chǎn)生一定影響；③本研究以4種MMR蛋白中任意1種及1種以上蛋白陰性定義為dMMR，但并未對(duì)每種蛋白缺失情況與病理特征間的關(guān)系進(jìn)行分析；④目前研究為觀察性研究，只能證明CRC患者M(jìn)MR蛋白表達(dá)與病理特征相關(guān)，但關(guān)于MMR蛋白缺失與腫瘤TNM分期、分化程度等特征之間的具體機(jī)制尚未明確。

綜上所述，CRC患者M(jìn)MR蛋白缺失與腫瘤部位、分化程度、腫瘤直徑、腫瘤TNM分期呈正相關(guān)，檢測(cè)MMR蛋白缺失情況能夠?yàn)榕R床選擇治療方案提供方向。