• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    蓮藕腐敗病致病菌的鑒定與防治

    2022-11-28 03:01:18唐光美楊馨語張小樂李弘星李蕾郭嘉航官會(huì)林黃晶心
    關(guān)鍵詞:禾谷百菌蓮藕

    唐光美,楊馨語,張小樂,李弘星,李蕾,郭嘉航,官會(huì)林,黃晶心**

    (1.云南師范大學(xué) 高原特色中藥材種植土壤質(zhì)量演變退化與修復(fù)云南省野外科學(xué)觀測(cè)研究站,云南 昆明 650500;2.云南師范大學(xué) 云南省農(nóng)村能源工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,云南 昆明 650500;3.云南開放大學(xué) 公共基礎(chǔ)教學(xué)部,云南 昆明 650500)

    蓮藕是中國的傳統(tǒng)農(nóng)作物,分布極廣,南北各地均有種植,以長江流域、珠江三角洲、洞庭湖、太湖等地為主產(chǎn)區(qū).除水田外,低洼田、池塘和湖蕩也可種植.云南種植蓮藕歷史悠久,主要分布在安寧、呈貢、澄江、玉溪、江川、文山、丘北等地[1-2].蓮藕腐敗病又稱蓮藕枯萎病、蓮瘟,是蓮藕種植區(qū)發(fā)病普遍、危害嚴(yán)重的病害之一.腐敗病發(fā)生時(shí)可導(dǎo)致蓮藕減產(chǎn)20%~60%,甚至絕收,嚴(yán)重影響蓮藕的產(chǎn)量和品質(zhì)[3].據(jù)報(bào)道蓮藕腐敗病由多種真菌引起,主要有尖鐮孢菌蓮?;停‵usarium oxysporumSchl.f.sp.nelumbicola)[4]、喙腐霉(Pythium rostratum)、刺腐霉(Pythium spinosum)[5]、旋柄腐霉(Phytopythium helicoides)[6]、串珠鐮刀菌(Fusarium moniliforme)、腐皮鐮刀(Fusarium poae)和接骨木鐮刀菌(Fusarium sambucinum)[7]等.目前,蓮藕腐敗病的防治方法主要為化學(xué)防治.陰筱等[6]研究發(fā)現(xiàn)代森錳鋅對(duì)蓮藕腐敗病致病菌旋柄腐霉具有較好的抑制作用.梁志懷等[8]研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)硫磺多菌靈和惡霉靈對(duì)蓮藕腐敗病致病菌尖孢鐮刀菌防治效果較好.雖然李文峰等[9]開發(fā)了蓮藕病蟲害智能診治系統(tǒng),但不同區(qū)域蓮藕腐敗病防治效果存在差異,限制了當(dāng)前研究成果的推廣與應(yīng)用.

    本研究的發(fā)病蓮藕取自云南省安寧市,該地蓮藕栽培歷史悠久,蓮藕及其產(chǎn)品的售賣為當(dāng)?shù)剞r(nóng)戶的主要經(jīng)濟(jì)來源.據(jù)當(dāng)?shù)剞r(nóng)戶反映,蓮藕發(fā)病于每年的6—10月,3~7 d 中便會(huì)使水田30%~50%的蓮藕發(fā)病,嚴(yán)重影響了蓮藕的品質(zhì)和產(chǎn)量.據(jù)觀察,發(fā)病蓮藕表面有黑色斑點(diǎn),斑點(diǎn)及周圍有黑水流出,切開蓮藕后發(fā)現(xiàn)通氣組織中有明顯白色菌絲.當(dāng)?shù)剞r(nóng)戶通過換種、藕田翻耕、晾曬土壤、隨機(jī)噴灑藥劑等方式防治,但效果并不理想.為了解決當(dāng)?shù)厣徟焊瘮栴},減輕病害對(duì)當(dāng)?shù)厣徟寒a(chǎn)業(yè)的影響,本研究采集了云南省安寧市的腐敗蓮藕,通過形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法鑒定蓮藕腐敗病病原微生物,并用6 種農(nóng)藥進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn),篩選防治效果較好的藥劑,確定藥劑的最佳施用濃度,為當(dāng)?shù)厣徟翰『Φ姆乐翁峁┛茖W(xué)指引.

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料于2018 年10月,采集云南省安寧市的發(fā)病蓮藕,洗凈后存放于自封袋,立即帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病原菌分離、純化.

    1.2 方法

    1.2.1 病原菌的分離、純化 用組織分離法和直接挑取法分離、純化發(fā)病蓮藕的病原菌.使用滅菌手術(shù)刀切取蓮藕發(fā)病組織與健康組織交界處的樣品,為1~2 cm,用70%乙醇浸泡20~30 s后,使用無菌水漂洗3次,然后將漂洗后的樣品轉(zhuǎn)接于PDA 培養(yǎng)基中,置于28 ℃恒溫中培養(yǎng)7 d,待長出菌落后挑取、純化3~5 次.將純化好的菌株轉(zhuǎn)接于PDA 斜面培養(yǎng)基上,28 ℃培養(yǎng)3 d,于4 ℃保藏備用.

    1.2.2 病原菌的形態(tài)學(xué)鑒定 將分離得到的真菌接種于PDA 培養(yǎng)基平板上,28 ℃培養(yǎng)7 d.使用接種針挑取菌落邊緣的菌絲于載玻片上,滴上1~2 滴無菌水,蓋上蓋玻片后使用顯微鏡進(jìn)行觀察、拍照.參照《真菌鑒定手冊(cè)》[10],根據(jù)菌落特征、菌絲形狀、孢子特征等對(duì)分離得到的真菌進(jìn)行初步鑒定.

    1.2.3 病原菌的分子生物學(xué)鑒定 通過分析真菌ITS 序列對(duì)其進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定.將純化后的真菌接種于PDA 培養(yǎng)基上,28 ℃培養(yǎng)5 d,使用SK8255 kit (Sagan Corporation,Shanghai)試劑盒提取DNA 用于PCR 序列擴(kuò)增.擴(kuò)增ITS 序列所用引物 為ITS4 (5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)和 ITS5(5 ′-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3),具體PCR 擴(kuò)增程序和方法按照參考文獻(xiàn)[11]所述.擴(kuò)增所得片段使用SanPrep 柱式DNA 凝膠回收試劑盒(上海生工,SK8131)進(jìn)行回收,回收后的片段使用pMD?18-T Vector 試劑盒(Takara,D101A)構(gòu)建克隆文庫,送交上海生工進(jìn)行測(cè)序.

    使用Bio Edit (7.0.5.3)軟件對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行整理.使用BLAST(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)進(jìn)行序列搜索,并下載相關(guān)序列.通過Mega 軟件(V7.0.26)進(jìn)行比對(duì),采用N-J 方法構(gòu)建基于真菌ITS 序列的系統(tǒng)發(fā)育樹,采用Bootstrap 方法對(duì)系統(tǒng)發(fā)育樹進(jìn)行評(píng)估.通過系統(tǒng)發(fā)育樹確定真菌種屬信息.

    1.2.4 致病性測(cè)定 采用柯赫氏法則確定蓮藕腐敗病致病菌.具體步驟分3 步.①消毒,取健康蓮藕,用自來水將其表面的泥土沖洗干凈,75%酒精浸泡2 min,無菌水清洗3次,2%次氯酸鈉溶液浸泡2 min,無菌水清洗3 次.②接種,用滅菌后的接種針等量挑取6 種真菌刺入蓮藕,深度約0.5 mm,每塊蓮藕刺8 次.③培養(yǎng)及觀察,將接上真菌的蓮藕在室溫下培養(yǎng)15 d,觀察蓮藕的發(fā)病情況,選擇與田間腐敗蓮藕相似癥狀的蓮藕組織,并從該組織上分離對(duì)應(yīng)真菌,確認(rèn)該菌為蓮藕腐敗病的致病菌.

    1.2.5 化學(xué)防治藥劑的篩選 通過查閱蓮藕腐敗病防治的相關(guān)文獻(xiàn),對(duì)比分析多菌靈、百菌清、腐霉·福美雙、代森錳鋅、唑醚·甲菌靈和噁霉靈6種藥物的抑菌效果.具體方法為:致病菌培養(yǎng)5 d后,采用5 mm 打孔器,取菌落邊緣新生菌絲于PDA 培養(yǎng)基平板中央,在平板垂直方向分別打4個(gè)孔放入無菌濾膜過濾后的農(nóng)藥,置于28 ℃培養(yǎng)5 d,觀察菌落的生長情況,每種農(nóng)藥3 次重復(fù).6 種農(nóng)藥的有效成分、劑型及生產(chǎn)廠家如表1 所示,農(nóng)藥的使用濃度按照廠家說明.根據(jù)公式:

    表1 6 種農(nóng)藥的劑型和廠商建議的使用稀釋倍數(shù)Tab.1 The dosage forms and manufacturer’s recommended dilution ratio of 6 pesticides

    抑菌率(%)=(對(duì)照組菌落直徑-處理組菌落直徑)/對(duì)照組菌落直徑×100%[12]計(jì)算抑菌率,并用平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤差作圖.

    1.2.6 蓮藕腐敗病化學(xué)防治藥劑最佳施用濃度 為驗(yàn)證1.2.5 中篩選出的百菌清對(duì)蓮藕致病菌的抑制效果,確定百菌清的最佳施用濃度.本研究在200 mL PDA 液體培養(yǎng)中添加無菌濾膜過濾后的百菌清.共設(shè)置5 個(gè)濃度處理,分別為稀釋600、1 200、2 400、4 800、9 600倍,以不添加百菌清為對(duì)照(CK),每個(gè)處理重復(fù)3次,每重復(fù)接種等量的致病菌菌餅,在28 ℃,180 r/min 下培養(yǎng)84、96、108、120、132、144 h 取樣,使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)培養(yǎng)液中致病菌的孢子.

    2 結(jié)果

    2.1 真菌的形態(tài)學(xué)鑒定本研究共分離、純化得到6 種真菌,分別記錄為L1、L2、L3、L4、L5、L6(圖1).對(duì)培養(yǎng)了7 d 的菌落進(jìn)行觀察,發(fā)現(xiàn)L1 老化菌絲周圍培養(yǎng)基呈紅色,邊緣及氣生菌絲為白色,初步鑒定為鐮刀菌屬(Fusarium).L2 菌絲呈灰白色,菌絲呈棉絮狀,初步鑒定為毛霉屬(Mucor).L3菌絲生長緩慢,生長7 d 后菌落大小在4.5~7.0 cm,菌落中間為草綠色,周圍呈墨綠色,初步鑒定為青霉屬(Penicillium).L4 菌放射狀生長,菌絲為純白色,致密、平鋪于PDA 培養(yǎng)基上,初步鑒定為地霉屬(Galactomyces).L5 菌落呈斑塊狀生長,每個(gè)斑塊規(guī)則不一,菌落呈灰色,初步鑒定為漢遜酵母屬(Ogataea).L6 氣生菌絲為白色,中間老化菌絲為紅色、金黃色,初步鑒定為鐮刀菌屬(Fusarium).

    圖1 6 種真菌在PDA 培養(yǎng)基上的形態(tài)Fig.1 Morphology of six pathogenic fungi on PDA medium plate

    顯微鏡下(圖2),L1 菌株產(chǎn)生大量的大型孢子,孢子呈鐮刀形或棒球狀,有隔膜2~7個(gè),頂端鈍圓或略微收縮,菌絲中存在孢子座,上部附著生多個(gè)大型孢子.L2 菌株孢子呈球形,黑色或褐色,破裂的孢子囊釋放出大量的短卵形胞囊孢子.L3 真菌分生孢子梗上有大量分生孢子,菌絲多分支,每個(gè)菌絲上均有明顯的隔膜.L4 真菌菌絲末端存在明顯的橢圓形孢子,成熟的孢子與菌絲斷裂,菌絲上有隔膜,多數(shù)菌絲分枝二叉.L5 菌株在顯微鏡下未見明顯的孢子,菌絲有分叉.L6 產(chǎn)生大量的大型分生孢子,孢子多有3 個(gè)橫隔,菌絲中存在隔膜,孢子的大小存在明顯差異.

    圖2 6 種真菌分生孢子的形態(tài)Fig.2 The conidial morphologies of six pathogenic fungi

    2.2 致病菌的分子鑒定對(duì)6 種真菌的ITS 片段進(jìn)行比對(duì)、分析,采用鄰位相連法(Neighbor-Joining法)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(圖3).鑒定結(jié)果顯示L1 菌株為禾谷鐮刀菌(Fusarium graminearum),L2 菌株為卷枝毛霉(Mucor circinelloides),L3 菌株為團(tuán)青霉(Penicillium commune),L4 菌株為白地霉(Galactomyces candidum),L5 菌株為漢遜酵母(Ogataea polymorpha),L6 菌株為三線鐮刀菌(Fusarium tricinctum).

    圖3 基于ITS 序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.3 Phylogenetic tree constructed based on the ITS sequences

    2.3 致病菌的致病性測(cè)定回接蓮藕7 d后,6 種真菌僅有L1 菌株能使蓮藕染病(圖4).L1 回接3 d 后蓮藕表皮產(chǎn)生明顯黑斑,5 d 后蓮藕變黑、腐敗,切開蓮藕后通氣組織孔道中有許多白色菌絲.上述癥狀與在安寧采集的發(fā)病蓮藕癥狀完全相同,菌絲經(jīng)分離純化和L1 完全相同.由此,根據(jù)柯赫氏法則可認(rèn)定L1 菌株為引發(fā)蓮藕腐敗病的致病菌.

    圖4 田間發(fā)病蓮藕(a)和試驗(yàn)室回接發(fā)病蓮藕(b)組織圖片F(xiàn)ig.4 The tissue pictures of the diseased lotus root in the field(a) and the laboratory (b)

    2.4 化學(xué)農(nóng)藥防治的篩選由圖5 可知,6 種農(nóng)藥均能抑制禾谷鐮刀菌生長,且不同農(nóng)藥抑制效果存在顯著差異(P<0.05).百菌清的抑菌效果最好,抑菌率為56.49%,分別是代森錳鋅、噁霉靈、唑醚·甲菌靈的1.88、2.1、2.22 倍.

    2.5 百菌清的最佳施用濃度由圖6 可知,不同濃度百菌清對(duì)禾谷鐮刀菌的產(chǎn)孢抑制程度不同.稀釋600 倍可完全抑制禾谷鐮刀菌產(chǎn)孢,稀釋1 200、2 400、4 800、9 600 倍分別在120、96、96、84 h 內(nèi)抑制禾谷鐮刀菌產(chǎn)孢.這說明百菌清對(duì)禾谷鐮刀菌的產(chǎn)孢抑制效果隨著稀釋倍數(shù)的增加而降低,為完全抑制禾谷鐮刀菌產(chǎn)孢,百菌清的施用濃度需達(dá)到600 倍稀釋液濃度.

    3 討論

    蓮藕腐敗病可由多種真菌引起,但發(fā)病癥狀大致相同,主要為蓮藕地下莖逐漸變褐,通氣組織中充滿白色、絮狀菌絲,地下莖后期呈褐色至紫黑色腐敗[3-4,6],例如串珠鐮孢菌、旋柄腐霉和尖孢鐮刀菌均能引發(fā)蓮藕腐敗病.本研究發(fā)現(xiàn)引發(fā)云南省安寧市蓮藕腐敗病的病原微生物為禾谷鐮刀菌.禾谷鐮刀菌為叢梗孢目,瘤痤孢科,鐮刀菌屬微生物,可引發(fā)禾本科作物發(fā)病,例如玉米穗腐病[13]、小麥莖腐病[14]等.有研究表明禾谷鐮刀菌還能引發(fā)十字花科植物擬南芥病變[15]、茄科植物煙草枯萎[16],豆科植物大豆腐敗[17-18],是一種多宿主致病真菌.禾谷鐮刀菌菌絲能在植物的輸導(dǎo)組織、通氣組織及植物表面快速繁殖、擴(kuò)散,短時(shí)間內(nèi)造成植物枯萎、腐敗等[19-20].禾谷鐮刀菌的分生孢子可通過土壤、空氣、水等傳播,短時(shí)間內(nèi)造成作物大面積染病[21-22],目前關(guān)于禾谷鐮刀菌引發(fā)蓮藕腐敗病的研究尚未見報(bào)道.本研究結(jié)果顯示禾谷鐮刀菌能夠在短期內(nèi)侵染蓮藕,可能是因?yàn)樵摼z侵入蓮藕的通氣組織和輸導(dǎo)組織,該菌分生孢子經(jīng)水傳播至其他區(qū)域,進(jìn)而引發(fā)蓮藕腐敗,造成大面積的損失.

    目前蓮藕腐敗病的防治方法主要為化學(xué)藥劑防治和生物防治.大多數(shù)研究主要報(bào)道了浙江、湖北等地蓮藕腐敗病的防治[4,23-24],關(guān)于西南地區(qū)蓮藕腐敗病防治的報(bào)道還較少.據(jù)本研究區(qū)域調(diào)查反映,塘泥翻曬、噴灑硫酸銅、換種等方法均不能有效防治該地區(qū)蓮藕腐敗.本研究結(jié)果表明,6 種農(nóng)藥中百菌清的抑制效果最好(圖5),且百菌清600倍稀釋液可完全抑制禾谷鐮刀菌產(chǎn)孢(圖6).百菌清的主要成分四氯間苯二甲腈,它可與3-磷酸甘油醛脫氫酶中的半胱氨酸蛋白質(zhì)相結(jié)合,從而破壞磷酸甘油醛脫氫酶活性[25],限制真菌細(xì)胞新陳代謝[18,26].研究表明百菌清對(duì)引發(fā)非洲菊枯萎病的尖孢鐮刀菌[27]具有良好抑菌效果,同時(shí)還能抑制楊樹潰瘍病菌絲生長及生物量[28],對(duì)禾谷鐮刀菌具有較好抑制效果[29-30],這些研究結(jié)果與我們研究結(jié)果相似.因此,百菌清相比于其他藥劑能更好地抑制禾谷鐮刀菌的生長和產(chǎn)孢,可用于安寧市蓮藕腐敗病的防控.

    圖5 6 種農(nóng)藥對(duì)禾谷鐮刀菌的抑制效果Fig.5 Inhibitory effect of six pesticides on Fusarium graminearum

    圖6 不同濃度百菌清對(duì)禾谷鐮刀菌產(chǎn)孢的抑制效果Fig.6 Inhibitory effect of different concentrations of chlorothalonil on sporulation of Fusarium graminearum

    近年來,隨著蓮藕種植面積的逐漸增加,蓮藕腐敗病的發(fā)生日趨嚴(yán)重.蓮藕腐敗影響蓮藕的品質(zhì)和產(chǎn)量,甚至影響蓮藕的觀賞價(jià)值,對(duì)蓮藕種植業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失[4].本研究結(jié)果表明,安寧市蓮藕腐敗病主要是由禾谷鐮刀菌引起,且百菌清600倍稀釋液可有效控制禾谷鐮刀菌產(chǎn)孢,但該結(jié)果推廣應(yīng)用于蓮藕大田種植仍需進(jìn)一步驗(yàn)證.本研究結(jié)果可為云南省蓮藕地下莖腐敗病的防治提供科學(xué)指導(dǎo),為后續(xù)科學(xué)研究提供指引.

    4 結(jié)論

    (1)從安寧市腐敗蓮藕中分離得到6 種真菌,其中禾谷鐮刀菌為引發(fā)蓮藕腐敗病的致病菌.

    (2)在化學(xué)防治藥劑篩選中,百菌清對(duì)禾谷鐮刀菌的抑制效果最好,且稀釋600 倍的百菌清可完全抑制禾谷鐮刀菌產(chǎn)孢.

    猜你喜歡
    禾谷百菌蓮藕
    稻草人言
    遼河(2024年1期)2024-03-04 06:06:13
    百菌生云南
    中國三峽(2021年12期)2021-02-21 13:21:28
    夏季這樣管蓮藕
    歐盟發(fā)布百菌清正式禁用公告
    漢字對(duì)對(duì)碰(四)
    郁南平臺(tái)鎮(zhèn)歡慶禾谷誕
    源流(2018年7期)2018-12-03 13:26:38
    蓮藕
    大灰狼(2018年8期)2018-09-03 18:45:42
    但憶城內(nèi)杏花天
    百菌清污染土壤生物修復(fù)研究進(jìn)展
    藏在泥中的蓮藕
    一本久久精品| 一本一本综合久久| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 久久97久久精品| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产精品熟女久久久久浪| 男女边吃奶边做爰视频| 色哟哟·www| 一级片'在线观看视频| 国产精品欧美亚洲77777| 黄片播放在线免费| 天堂8中文在线网| 91精品伊人久久大香线蕉| av电影中文网址| 成年人午夜在线观看视频| 日韩 亚洲 欧美在线| 五月天丁香电影| 最近的中文字幕免费完整| 一区二区三区乱码不卡18| 免费大片黄手机在线观看| 免费看光身美女| 日韩欧美一区视频在线观看| 亚洲国产欧美在线一区| 日本91视频免费播放| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 男女无遮挡免费网站观看| 色5月婷婷丁香| 在线天堂最新版资源| 人妻 亚洲 视频| 免费少妇av软件| 精品亚洲成国产av| 国产色婷婷99| 精品一区二区三卡| 亚洲欧美色中文字幕在线| 国产精品国产av在线观看| 伦精品一区二区三区| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| av.在线天堂| 日韩av在线免费看完整版不卡| 最黄视频免费看| 桃花免费在线播放| 2018国产大陆天天弄谢| 免费大片18禁| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 成人免费观看视频高清| 国产成人精品无人区| 在线观看免费日韩欧美大片 | 91精品国产国语对白视频| av免费观看日本| av免费观看日本| 亚洲精品国产色婷婷电影| 制服人妻中文乱码| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产精品熟女久久久久浪| 国产精品久久久久久av不卡| 亚洲综合精品二区| 亚洲av免费高清在线观看| 国产 精品1| 熟女人妻精品中文字幕| 91精品国产九色| 国产爽快片一区二区三区| 国产色婷婷99| 国产精品.久久久| 三级国产精品欧美在线观看| 午夜av观看不卡| 国产 一区精品| 亚洲av.av天堂| av天堂久久9| 免费日韩欧美在线观看| 国产午夜精品一二区理论片| 黄片无遮挡物在线观看| 久久 成人 亚洲| 久久久久久久国产电影| 国产av码专区亚洲av| av免费在线看不卡| 高清欧美精品videossex| 新久久久久国产一级毛片| 99精国产麻豆久久婷婷| 高清av免费在线| 国产老妇伦熟女老妇高清| 中文字幕久久专区| 人成视频在线观看免费观看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 亚洲不卡免费看| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产 一区精品| 国国产精品蜜臀av免费| 日本与韩国留学比较| 精品一品国产午夜福利视频| 日韩一区二区视频免费看| 一级爰片在线观看| 嘟嘟电影网在线观看| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 欧美日韩亚洲高清精品| 两个人免费观看高清视频| 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲精品自拍成人| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 18禁在线播放成人免费| 日本欧美国产在线视频| 熟妇人妻不卡中文字幕| 免费看不卡的av| 免费观看在线日韩| 69精品国产乱码久久久| 亚洲欧洲日产国产| 能在线免费看毛片的网站| 欧美亚洲日本最大视频资源| 精品久久久久久久久亚洲| 免费av中文字幕在线| 亚洲精品成人av观看孕妇| 中国美白少妇内射xxxbb| 久久免费观看电影| 久久ye,这里只有精品| 国产精品一二三区在线看| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲精品日韩av片在线观看| 久久 成人 亚洲| 乱码一卡2卡4卡精品| 欧美xxⅹ黑人| 丰满乱子伦码专区| 久久久精品区二区三区| 黄色配什么色好看| 亚洲国产av影院在线观看| 一级毛片我不卡| 一级爰片在线观看| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 黑人欧美特级aaaaaa片| 欧美成人精品欧美一级黄| 性高湖久久久久久久久免费观看| 极品人妻少妇av视频| 午夜福利影视在线免费观看| 久久久久久久大尺度免费视频| 日韩电影二区| 国产日韩欧美在线精品| 国产深夜福利视频在线观看| 国产午夜精品一二区理论片| 你懂的网址亚洲精品在线观看| a级毛片在线看网站| 亚洲精品乱久久久久久| 久久综合国产亚洲精品| 欧美日韩av久久| 亚洲国产毛片av蜜桃av| videosex国产| 成人毛片a级毛片在线播放| 成人国语在线视频| 国内精品宾馆在线| 少妇精品久久久久久久| 国产免费现黄频在线看| 观看av在线不卡| 欧美另类一区| 春色校园在线视频观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 永久免费av网站大全| 精品久久久久久久久av| 插阴视频在线观看视频| 欧美成人精品欧美一级黄| 亚洲国产精品999| 亚洲精品aⅴ在线观看| 日韩大片免费观看网站| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 成人二区视频| 亚洲精品一二三| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 精品久久蜜臀av无| 亚洲精品国产色婷婷电影| 永久网站在线| 视频在线观看一区二区三区| 日韩不卡一区二区三区视频在线| xxxhd国产人妻xxx| 99热这里只有是精品在线观看| 久久这里有精品视频免费| 三级国产精品欧美在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 久久国产亚洲av麻豆专区| 999精品在线视频| 亚洲欧美成人精品一区二区| 这个男人来自地球电影免费观看 | 美女xxoo啪啪120秒动态图| 人妻少妇偷人精品九色| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产免费现黄频在线看| 午夜av观看不卡| 搡老乐熟女国产| 精品一区二区三区视频在线| 亚洲国产精品国产精品| 久久久久久久久久久免费av| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 青春草亚洲视频在线观看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲丝袜综合中文字幕| 欧美精品一区二区免费开放| av国产久精品久网站免费入址| tube8黄色片| 亚洲av国产av综合av卡| 在线观看免费高清a一片| 日本欧美视频一区| 免费人妻精品一区二区三区视频| 中国国产av一级| av在线app专区| 日韩av在线免费看完整版不卡| 91精品伊人久久大香线蕉| 一级毛片aaaaaa免费看小| 亚洲天堂av无毛| 在现免费观看毛片| 国产探花极品一区二区| 777米奇影视久久| 性色av一级| 插逼视频在线观看| 一级二级三级毛片免费看| 亚洲精品一区蜜桃| 久久久亚洲精品成人影院| 中文字幕av电影在线播放| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 欧美性感艳星| av黄色大香蕉| 午夜日本视频在线| 午夜91福利影院| 日韩成人伦理影院| 最新中文字幕久久久久| 国产亚洲欧美精品永久| 黄色一级大片看看| 永久免费av网站大全| 69精品国产乱码久久久| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 97在线人人人人妻| 全区人妻精品视频| 大码成人一级视频| 亚洲精品日本国产第一区| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 久久久精品94久久精品| 亚洲欧美成人综合另类久久久| av在线播放精品| 精品人妻在线不人妻| 国产伦精品一区二区三区视频9| 秋霞在线观看毛片| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产精品女同一区二区软件| 一个人免费看片子| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 一本一本综合久久| 黄色配什么色好看| 国产精品欧美亚洲77777| 97在线人人人人妻| 日本av免费视频播放| 国产片特级美女逼逼视频| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| av一本久久久久| 免费黄频网站在线观看国产| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 精品久久久噜噜| 欧美bdsm另类| 久久人人爽人人片av| 久久人妻熟女aⅴ| 久久99热这里只频精品6学生| 美女中出高潮动态图| 少妇丰满av| 国产免费视频播放在线视频| 中文字幕免费在线视频6| 久久久久久伊人网av| 青春草亚洲视频在线观看| 国产精品熟女久久久久浪| 精品亚洲成a人片在线观看| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 最近手机中文字幕大全| 国产乱来视频区| 在线精品无人区一区二区三| 日本av免费视频播放| 毛片一级片免费看久久久久| 中文字幕免费在线视频6| 高清黄色对白视频在线免费看| 色吧在线观看| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲av.av天堂| 久久99热这里只频精品6学生| 国产一级毛片在线| 一个人看视频在线观看www免费| 视频在线观看一区二区三区| 七月丁香在线播放| 久久国内精品自在自线图片| 99久久精品一区二区三区| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲av国产av综合av卡| 国产精品熟女久久久久浪| 国产精品一区二区在线观看99| 大片电影免费在线观看免费| 免费观看无遮挡的男女| 国产精品一国产av| 久久久久久伊人网av| 日韩成人av中文字幕在线观看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 日本免费在线观看一区| 欧美另类一区| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 99热6这里只有精品| 国产av精品麻豆| 久久99热这里只频精品6学生| 午夜免费男女啪啪视频观看| 国产一区亚洲一区在线观看| 十八禁高潮呻吟视频| 国产一区二区在线观看日韩| 久久精品久久久久久久性| 我的老师免费观看完整版| 好男人视频免费观看在线| 看免费成人av毛片| 在线观看国产h片| 久久这里有精品视频免费| 国产精品人妻久久久影院| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产精品一国产av| 天堂俺去俺来也www色官网| 久久免费观看电影| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 久久国产精品大桥未久av| 最近中文字幕高清免费大全6| 久久亚洲国产成人精品v| 九色成人免费人妻av| 欧美精品高潮呻吟av久久| 一区在线观看完整版| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产免费福利视频在线观看| 精品国产国语对白av| 成年人免费黄色播放视频| 一级二级三级毛片免费看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 在线观看三级黄色| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 亚洲国产av新网站| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产一区二区在线观看日韩| 91精品国产九色| 国产精品偷伦视频观看了| 久久人人爽人人片av| a级毛片在线看网站| 久久久久精品性色| 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲四区av| av.在线天堂| av电影中文网址| 成人亚洲欧美一区二区av| 男男h啪啪无遮挡| 免费看光身美女| 国产成人av激情在线播放 | 一级片'在线观看视频| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 高清在线视频一区二区三区| 精品久久久久久电影网| 免费黄网站久久成人精品| 少妇丰满av| 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲美女黄色视频免费看| 国产亚洲一区二区精品| 国产黄频视频在线观看| 久久精品国产亚洲网站| 18在线观看网站| 下体分泌物呈黄色| 免费av不卡在线播放| 国产精品免费大片| 欧美日韩成人在线一区二区| 午夜久久久在线观看| 99热6这里只有精品| 女性生殖器流出的白浆| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 啦啦啦啦在线视频资源| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 久久久国产精品麻豆| 亚洲国产欧美在线一区| 18禁观看日本| 婷婷色综合大香蕉| 飞空精品影院首页| 26uuu在线亚洲综合色| 香蕉精品网在线| av福利片在线| 亚洲av不卡在线观看| 国产成人午夜福利电影在线观看| 国产片内射在线| 成人午夜精彩视频在线观看| 精品久久国产蜜桃| 赤兔流量卡办理| 欧美另类一区| 在线播放无遮挡| 国产精品女同一区二区软件| 国产探花极品一区二区| 国产高清有码在线观看视频| 人妻一区二区av| 国产精品女同一区二区软件| 免费看光身美女| 国产成人免费无遮挡视频| 久久久国产精品麻豆| 国产免费一区二区三区四区乱码| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 春色校园在线视频观看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 熟女人妻精品中文字幕| 最新的欧美精品一区二区| 一边摸一边做爽爽视频免费| 街头女战士在线观看网站| 91精品国产九色| 久久久久精品久久久久真实原创| 亚洲精品一区蜜桃| 亚州av有码| 日本欧美视频一区| 国产精品欧美亚洲77777| 免费看不卡的av| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 久久鲁丝午夜福利片| 一区二区三区四区激情视频| .国产精品久久| 亚洲成人手机| 全区人妻精品视频| 美女内射精品一级片tv| 国产欧美亚洲国产| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 日韩精品有码人妻一区| 一边亲一边摸免费视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 午夜视频国产福利| 最黄视频免费看| 亚洲精品av麻豆狂野| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 又大又黄又爽视频免费| 国产乱来视频区| 美女大奶头黄色视频| 丝袜美足系列| 高清视频免费观看一区二区| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产一区二区三区综合在线观看 | 亚洲人成网站在线播| 日本wwww免费看| videos熟女内射| 久久久国产一区二区| 国产精品人妻久久久久久| 久久久久久久精品精品| 欧美最新免费一区二区三区| 免费日韩欧美在线观看| 中文天堂在线官网| 久久精品久久久久久久性| 精品国产乱码久久久久久小说| av黄色大香蕉| 九色成人免费人妻av| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲,一卡二卡三卡| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产精品久久久久久精品电影小说| 这个男人来自地球电影免费观看 | 精品久久蜜臀av无| 少妇的逼水好多| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产精品.久久久| 99久久综合免费| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 成人影院久久| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 精品少妇内射三级| 满18在线观看网站| 国产精品一二三区在线看| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 老女人水多毛片| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 少妇的逼水好多| 久久精品久久精品一区二区三区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 水蜜桃什么品种好| 少妇被粗大猛烈的视频| 免费少妇av软件| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 中国国产av一级| 成人免费观看视频高清| 美女国产高潮福利片在线看| 国产精品偷伦视频观看了| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 一本色道久久久久久精品综合| h视频一区二区三区| 欧美性感艳星| 99视频精品全部免费 在线| 午夜激情av网站| av免费观看日本| 午夜福利视频在线观看免费| av天堂久久9| 成人亚洲精品一区在线观看| 人妻少妇偷人精品九色| 五月伊人婷婷丁香| 国产免费又黄又爽又色| 日韩成人av中文字幕在线观看| 九九在线视频观看精品| 麻豆乱淫一区二区| www.色视频.com| 国产av一区二区精品久久| 亚洲,一卡二卡三卡| 制服丝袜香蕉在线| 婷婷色av中文字幕| 99热网站在线观看| 日韩在线高清观看一区二区三区| 久久午夜福利片| 美女大奶头黄色视频| 国产精品蜜桃在线观看| 欧美精品国产亚洲| 日本黄色日本黄色录像| 国产精品嫩草影院av在线观看| 日本与韩国留学比较| 国产日韩欧美亚洲二区| 中国国产av一级| 国产高清不卡午夜福利| 日韩 亚洲 欧美在线| 又大又黄又爽视频免费| 午夜免费观看性视频| 欧美性感艳星| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 久久精品夜色国产| 精品久久久久久电影网| 18+在线观看网站| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 99国产综合亚洲精品| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 国模一区二区三区四区视频| 伦理电影大哥的女人| 国产高清有码在线观看视频| 精品酒店卫生间| 高清不卡的av网站| 大香蕉久久网| 久久午夜福利片| 全区人妻精品视频| 老司机亚洲免费影院| 男的添女的下面高潮视频| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 边亲边吃奶的免费视频| 五月天丁香电影| 男的添女的下面高潮视频| 久久久久久久精品精品| 国产69精品久久久久777片| 久久免费观看电影| 精品一区二区三区视频在线| 久久人妻熟女aⅴ| 色婷婷久久久亚洲欧美| 天天操日日干夜夜撸| 九色亚洲精品在线播放| 18在线观看网站| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 日韩中字成人| 99热这里只有精品一区| 美女国产视频在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲国产成人一精品久久久| 国国产精品蜜臀av免费| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 久久久久国产精品人妻一区二区| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 久久久欧美国产精品| 好男人视频免费观看在线| 国产精品国产三级专区第一集| 精品亚洲成国产av| 日本av手机在线免费观看| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 久久鲁丝午夜福利片| 国产 精品1| 精品一区二区免费观看| 国产毛片在线视频| 大香蕉97超碰在线| 欧美bdsm另类| 免费看不卡的av| 美女cb高潮喷水在线观看| 免费观看a级毛片全部| h视频一区二区三区| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 欧美日韩成人在线一区二区| 午夜影院在线不卡| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲av国产av综合av卡| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产黄片视频在线免费观看| 久久热精品热| 97在线人人人人妻| 天美传媒精品一区二区| 天堂中文最新版在线下载| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲精品国产色婷婷电影| av.在线天堂| 中文字幕制服av| 多毛熟女@视频| 精品国产露脸久久av麻豆| 91精品国产九色| 欧美少妇被猛烈插入视频| 熟女电影av网| 中文字幕制服av| 日韩强制内射视频| 高清午夜精品一区二区三区| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产亚洲最大av| 国产有黄有色有爽视频| 国产精品蜜桃在线观看| 国产视频首页在线观看| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 欧美 日韩 精品 国产| av一本久久久久| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 飞空精品影院首页| 国产片内射在线| 欧美日韩综合久久久久久| 美女视频免费永久观看网站| 欧美另类一区| 天堂中文最新版在线下载| 午夜精品国产一区二区电影| 国产男人的电影天堂91|