中藥復方基于PI3K/Akt信號通路治療乳腺癌的研究進展＊

趙玉榮 吳如孟 馬雪曼

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率分別位列我國女性惡性腫瘤的第1位和第4位。中醫(yī)關(guān)于乳腺癌的病名首次記載于宋代《婦人大全良方》，陳自明指出：“肝脾郁怒，氣血虧損，名曰乳巖?！蹦[瘤的發(fā)生與飲食不節(jié)、情志拂郁、邪毒熾盛、年老體虛、素有舊疾等致病因素密不可分，致病因素作用于機體，致使臟腑功能失調(diào)、氣血津液輸布運行失常，產(chǎn)生氣滯、血瘀、痰凝、濕濁、熱毒等病理產(chǎn)物，日久漸積而成的一類惡性疾??；正如《諸病源候論·積聚病諸候》云：“諸臟受邪，初未能成積聚，留滯不去，乃成積聚[1]?！苯陙恚槍θ橄侔┑闹嗅t(yī)治療層出不窮，不僅治療效果良好、毒副作用小、耐藥的發(fā)生率明顯降低，還能提高患者的依從性、延長患者生存周期、改善西醫(yī)常規(guī)治療的副反應。越來越多的中藥研究能夠聯(lián)合西醫(yī)的內(nèi)分泌治療、靶向治療、化療等藥物，或采取純中醫(yī)治療等方式，貫穿乳腺癌治療的全過程，發(fā)揮出中醫(yī)藥治療乳腺癌的最大優(yōu)勢[2-4]。

1 中藥復方聯(lián)合化療、內(nèi)分泌、靶向等治療藥物增強細胞對藥物敏感性

1.1 中藥復方聯(lián)合化療藥物發(fā)揮協(xié)同作用

化療藥物在消滅癌細胞的同時正常的細胞也會被損害，使得患者出現(xiàn)疲乏無力、精神不振、惡心嘔吐、免疫力低下等一系列癥狀，脾胃功能失調(diào)，脾虛則水濕不運而停聚，痰濕癥狀加重而大寒大熱癥狀隱匿。腫瘤作為有形實邪侵襲機體時恰逢正氣虛弱，邪盛而正虛，機體無力抗邪。阿霉素和表阿霉素是蒽環(huán)類抗生素中的重要代表藥物，其嵌入DNA抑制核酸的合成，阻礙腫瘤細胞的分裂是蒽環(huán)類抗生素治療乳腺癌的作用機制；阿霉素作為乳腺癌化療的一線藥物，療效可觀，但極易產(chǎn)生耐藥，且與其他藥物合用時會增加毒副反應；而解決這些問題的突破點在于中藥復方聯(lián)合蒽環(huán)類抗生素，不僅能明顯提高對乳腺癌耐藥細胞的敏感性，還可以改善化療藥物帶來的毒副反應。有研究發(fā)現(xiàn)，中藥復方聯(lián)合阿霉素、表阿霉素能夠提高化療藥物敏感性，發(fā)揮協(xié)同作用。實驗研究表明解毒膠囊干預阿霉素耐藥的機制是其藥單體成分能夠抑制PI3K/Akt信號通路相關(guān)蛋白PI3K、p-Akt的表達，明顯減弱了乳腺癌MCF-7細胞對阿霉素的化療敏感性，從而促進細胞凋亡[5]。在此基礎(chǔ)上有研究發(fā)現(xiàn)乳痛方聯(lián)合表阿霉素能夠更加有效地抑制乳腺癌MCF-7細胞增殖、誘導細胞凋亡，證實了中藥復方與化療藥物聯(lián)用具有良好的減毒增效作用[6]。

1.2 中藥復方逆轉(zhuǎn)內(nèi)分泌藥物耐藥

內(nèi)分泌治療在早期乳腺癌輔助治療中有著特別重要的地位，能夠與雌二醇競爭雌激素受體，阻止雌激素促進腫瘤細胞的生長和增殖；內(nèi)分泌治療能夠避免化療藥物對正常細胞的殺傷，且毒副作用相較于化療藥物明顯減少，目前在臨床上應用廣泛，但約40%的患者對他莫昔芬產(chǎn)生耐藥。中醫(yī)認為，他莫昔芬的使用勢必損傷人體正氣，正氣虧虛而無法抵御癌毒的侵襲，而他莫昔芬耐藥進一步加重了乳腺癌細胞對人體正氣的損耗，患者出現(xiàn)發(fā)熱、嘔吐、面色潮紅、陰道出血、渾身乏力、頭暈、皮疹等不良反應，不少中藥復方具有補虛扶正、清熱解毒的作用。他莫昔芬與中藥復方聯(lián)合使用，在增強人體正氣的同時能夠提高耐藥細胞對他莫昔芬的敏感性。三黃煎劑聯(lián)合他莫昔芬處理后，他莫昔芬耐藥的乳腺癌細胞（MCF-7/TAM）耐藥指數(shù)為單純他莫昔芬處理后MCF-7/TAM的（13.19±2.35）倍，三黃煎劑通過調(diào)控PI3K/Akt信號通路，進而抑制乳腺癌耐藥細胞（MCF-7/TAM）增殖、遷移、侵襲及血管新生的能力[7]。低、中、高濃度益氣小復方處理乳腺癌他莫昔芬耐藥細胞（MCF-7/TAM）48 h后，細胞凋亡率明顯上升，與PI3K/Akt信號通路相關(guān)蛋白p-PI3K、p-Akt的表達顯著降低，認為益氣小復方逆轉(zhuǎn)他莫昔芬耐藥的作用機制與其調(diào)控PI3K/Akt信號通路密切相關(guān)[8]。有研究證明，解毒祛瘀方聯(lián)合他莫昔芬處理后乳腺癌細胞MCF-7C增值抑制率和凋亡率明顯升高，同時Western Blot檢測顯示p-PI3K、p-Akt表達顯著降低[9]；因此，解毒祛瘀方可以通過PI3K/Akt信號通路逆轉(zhuǎn)MCF-7C細胞對他莫昔芬耐的敏感性，進而逆轉(zhuǎn)耐藥。

1.3 中藥復方輔助靶向藥物治療乳腺癌

靶向藥物與傳統(tǒng)的細胞毒性藥物相比而言，其能夠精準的作用于腫瘤細胞，不影響正常細胞的功能，這與中醫(yī)之引經(jīng)藥發(fā)揮的作用不謀而合。靶向藥的使用明顯延長了患者的無病生存期，降低腫瘤復發(fā)率和轉(zhuǎn)移率。但由于其作用靶點單一，在精準用藥的同時極易產(chǎn)生耐藥；且不良反應皮疹和腹瀉嚴重影響了患者的依從性及生活質(zhì)量[10-11]。由于毒邪被遏肌表，或由于氣虛、陰虛所致，此類皮疹歸屬于中醫(yī)“藥毒”范疇。腹瀉病位在腸，病機當屬脾虛。中藥復方聯(lián)合靶向藥物不僅能夠穩(wěn)定病灶、緩解癥狀、提高機體抗病能力及生活質(zhì)量，還能緩解針對靶點單一引起的耐藥。

1.3.1 中藥復方聯(lián)合曲妥珠單抗 曲妥珠單抗作為唯一對Her2陽性乳腺癌產(chǎn)生深遠影響的分子靶向治療藥物，大量臨床試驗結(jié)果證實使用曲妥珠單抗輔助治療可以降低50%左右的復發(fā)率，據(jù)不完全統(tǒng)計曲妥珠單抗一線單藥治療臨床有效率約38%，但臨床用藥1年左右便可產(chǎn)生耐藥，且具有價格昂貴、副作用明顯等局限性[12]。通過與中藥聯(lián)合使用的方法，一方面能夠緩解耐藥，另一方面能明顯提升臨床治療效果。有研究證明陽和化巖湯腸吸收液聯(lián)合曲妥珠單抗可以提高乳腺癌細胞株SK-BR-3對曲妥珠單抗的敏感性，其機制與調(diào)控PI3K/Akt信號通路的活化密切相關(guān)[13]。在此研究的基礎(chǔ)上，通過陽和化巖湯聯(lián)合曲妥珠單抗治療乳腺癌的作用機制時發(fā)現(xiàn)，陽和化巖湯聯(lián)合曲妥珠單抗對PI3K、P-Akt及VEGFC的抑制率效果最好，表明陽和化巖湯聯(lián)合曲妥珠單抗能夠通過干預PI3K/Akt信號通路有效的抑制微淋巴管的形成，從而達到減毒增效的目的[14-15]。

1.3.2 中藥復方聯(lián)合木利替尼 木利替尼針對曲妥珠單抗耐藥的Her2陽性乳腺癌具有良好的效果，能夠抑制Her2強表達中Her2磷酸化及下游蛋白Akt和MAPK。雖臨床療效較好，但耐藥問題不可避免，如何解決耐藥問題、如何抑制乳腺癌耐藥細胞增殖，是治療乳腺癌過程中急需攻克的難題；而中藥復方憑借其多成分、多靶點的優(yōu)勢，通過與木利替尼聯(lián)合使用可以很好地緩解乳腺癌細胞耐藥的進程、抑制耐藥細胞的增殖。乳寧Ⅱ號方聯(lián)合木利替可以降低PI3K的磷酸化水平，進而干預人乳腺癌細胞株MDA-MB-453的增值、分化及凋亡率，發(fā)揮抗癌作用[16]。解毒化濁方聯(lián)合木利替尼處理HER-2陽性乳腺癌小鼠后檢測到PI3K、Akt蛋白表達水平均顯著下降，進而抑制了PI3K/Akt信號通路的活化[17]。另外，解毒化濁方聯(lián)合木利替尼能夠誘導HER-2陽性乳腺癌SK-BR-3細胞凋亡[18]。證明解毒化濁放聯(lián)合木利替尼治療乳腺癌的其中一個靶點是PI3K/Akt信號通路。

2 中藥復方聯(lián)合PI3K抑制劑誘導乳腺癌細胞凋亡

LY294002是應用最早、范圍最廣的PI3K激酶選擇性抑制劑，通過競爭性抑制PI3K的ATP結(jié)合位點，對Akt磷酸化過程進行抑制，并誘導乳腺癌細胞凋亡，但LY294002的細胞毒性和耐藥問題限制了其臨床應用，中藥有著相對安全有效的使用價值，中藥復方與PI3K抑制劑聯(lián)用在增強療效、降低毒性等方面有著絕對的優(yōu)勢。消痰解郁方聯(lián)合LY294002處理后乳腺癌的癌前病變MCF-10A細胞PI3K/Akt信號通路相關(guān)蛋白表達降低，細胞增殖抑制率顯著升高[19]。有研究表明，陽和化巖湯聯(lián)合LY294002對乳腺癌細胞株SK-BR-3產(chǎn)生明顯的增值抑制作用，以此為研究基礎(chǔ)，發(fā)現(xiàn)陽和化巖湯聯(lián)合LY294002處理后小鼠腋窩淋巴結(jié)數(shù)量也明顯少于其他對照組，證實了陽和化巖湯聯(lián)合LY294002能夠協(xié)同發(fā)揮減毒增效的抗癌作用[15]。另有研究表明，大戟大棗湯聯(lián)合LY294002促進腺癌細胞MCF-7凋亡的主要機制是抑制PI3K/Akt信號通路的活化[20]。

3 中藥復方誘導乳腺癌細胞凋亡

中藥復方誘導細胞凋亡從中醫(yī)整體觀念出發(fā)，將疾病和患病機體看作一個整體，通過誘導乳腺癌細胞凋亡而達到細胞增殖和凋亡的平衡，減緩乳腺癌發(fā)展的進程。有研究表明，乳康飲對三陰性乳腺癌細胞MDA-MB-231的增值抑制率與細胞凋亡率均高于乳康飲各拆方組[21]；隨后在此研究的基礎(chǔ)上，進一步探討乳康飲及其拆方對乳腺癌PI3K/Akt信號通路相關(guān)蛋白表達的影響及治療乳腺癌的作用機制，測得乳康飲組p-PI3K、p-Akt的表達明顯低于乳康飲各拆方組，進而證明了乳康飲對PI3K/Akt信號通路相關(guān)因子表達的作用優(yōu)于各拆方組[22]。消癌解毒方不僅提高了乳腺癌細胞MDA-MB-231的增殖抑制率，而且與該方的濃度、時間成正比關(guān)系，這種抑制細胞增殖的機制與消癌解毒方有效成分參與了PI3K/Akt信號通路的活化密不可分[23]。陽和湯的其中一個靶點是PI3K/Akt信號通路，而高濃度陽和湯提取物作用于乳腺癌細胞MDA-MB-231時，該細胞增殖抑制率、細胞凋亡率均明顯上升[24]。之后有實驗證明了陽和湯能夠降低乳腺癌細胞MCF-7的蛋白磷酸化水平，例如PI3K、Akt等蛋白，進而抑制MCF-7細胞的增殖抑制率及凋亡率[25]。有研究采用網(wǎng)絡藥理學方法分析了乳積方，發(fā)現(xiàn)乳積方治療三陰性乳腺癌的有效成分86個、相關(guān)靶點196個、關(guān)鍵靶點80個、主要富集通路6個；乳積方中槲皮素能誘導雌激素受體陽性的乳腺癌細胞等細胞凋亡，有效成分β-谷甾醇可通過調(diào)節(jié)PI3K/Akt信號通路參與抗癌[26]，因此PI3K/Akt信號通路是乳積方治療三陰性乳腺癌的主要通路。

4 小結(jié)

轉(zhuǎn)移和增殖是腫瘤細胞的重要特征，也是導致治療失敗和患者死亡的重要原因，因此，有效干預腫瘤細胞的增殖和轉(zhuǎn)移是減緩疾病進程的一個重要環(huán)節(jié)；有很多中藥的藥理研究發(fā)現(xiàn)中藥中的某些成分可以干預乳腺癌細胞的增殖和轉(zhuǎn)移[27]，如生姜中的有效成分姜黃素、白頭翁有效成分白頭翁皂苷D、桑葚有效成分桑葚花青素、蒲公英有效成分蒲公英萜醇、黃芪有效成分黃芪甲苷，以及柴胡有效成分槲皮素均可以抑制乳腺癌細胞增殖[28-30]。PI3K是脂質(zhì)激酶家族的成員，能特異性的使磷酸肌醇上的3-羥基磷酸化，Akt是信號轉(zhuǎn)導通路中重要的蛋白激酶，是PI3K下游的靶蛋白。Akt異常激活意味著腫瘤細胞對于凋亡誘導的耐受、細胞生長、增殖和代謝的改變。阻斷PI3K活性及其下游靶點Akt在惡性腫瘤中起重要作用。PI3K/Akt信號通路是與細胞凋亡密切相關(guān)的通路之一，PI3K蛋白激活，促使二磷酸磷脂酰肌醇轉(zhuǎn)化為三磷酸磷脂酰肌醇，并與Akt結(jié)合，通過招募PDK2促使Akt活化，進一步磷酸化下游mTOR蛋白，從而影響凋亡蛋白和促凋亡蛋白的表達，使細胞增殖失活及凋亡活化被抑制，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。

PI3K/Akt信號通路作為乳腺癌治療的其中一個作用靶點，本綜述以此靶點作為切入點，通過查找相關(guān)通路文獻，探討了中藥復方針對乳腺癌細胞耐藥、抑制乳腺癌細胞增殖和誘導乳腺癌細胞凋亡的研究進展，發(fā)現(xiàn)中藥復方針對乳腺癌細胞耐藥、細胞增殖和細胞凋亡具有積極作用，與化療、內(nèi)分泌治療、靶向治療、PI3K抑制劑聯(lián)用具有良好的減毒增效作用。目前中醫(yī)藥對乳腺癌的研究仍處于初期階段，仍有許多問題有待解決，其機制體系尚未建立，需要廣大學者更深入的研究，以期掌握新的乳腺癌作用靶點、闡釋中醫(yī)治療乳腺癌機制、建立一套完整的中醫(yī)藥治療乳腺癌體系，發(fā)揮更優(yōu)的療效，為罹患乳腺癌者提供更有效的治療方案。希望此文能夠為中醫(yī)治療乳腺癌提供臨床證據(jù)，同時為后續(xù)的臨床和基礎(chǔ)實驗研究奠定基礎(chǔ)。