外泌體中環(huán)狀RNA在癌癥早期診斷中的研究進(jìn)展

汪潔,蘇麗清,黃淑鈴,林曉婧,鄭燕寧,李玉荷,伊雪

(廈門醫(yī)學(xué)院 a.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部，b.機(jī)能與臨床轉(zhuǎn)化福建省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，c.呼吸疾病研究所，福建 廈門 361023)

外泌體是一類由細(xì)胞釋放的、具有脂質(zhì)雙層膜性結(jié)構(gòu)的細(xì)胞外囊泡。其以細(xì)胞外分泌小泡的形式存在，該分泌形式可保護(hù)核酸類物質(zhì)在血液中不被降解，增強(qiáng)了腫瘤細(xì)胞的治療抵抗，為腫瘤細(xì)胞的信號(hào)傳遞提供載體和途徑。環(huán)狀RNA(circular RNA,circRNA)是一類不具有5′端帽子和3′端Poly(A)尾巴，以共價(jià)鍵形成的單鏈環(huán)狀結(jié)構(gòu)的非編碼RNA，幾乎存在于所有的物種中，且含量豐富。因其3′,5′-磷酸二酯鍵首尾相連，可耐受核酸外切酶降解，其比傳統(tǒng)的線性RNA更具有穩(wěn)定性[1]。circRNA多存在于血液、唾液、尿液等體液中，定位于細(xì)胞質(zhì)或儲(chǔ)存于外泌體，且在外泌體中與線性RNA的比例是細(xì)胞中的6倍[2]。表明外泌體circRNA有作為癌癥早期診斷與篩查指標(biāo)的潛能。現(xiàn)主要闡述外泌體circRNA的生物學(xué)功能及在癌癥發(fā)生發(fā)展中的作用，探討外泌體circRNA作為癌癥早期診斷生物標(biāo)志物的臨床應(yīng)用前景。

1 外泌體概述

外泌體是一類具有脂質(zhì)雙層膜性結(jié)構(gòu)的細(xì)胞外囊泡，直徑多為30～150 nm，密度為1.13～1.19 g/ml。最初被認(rèn)為是細(xì)胞中的廢物，以囊泡的形式排出體外，隨著進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)外泌體能夠攜帶蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)和糖等生物活性分子，并在細(xì)胞間傳遞重要信息[3]。外泌體體積微小、性質(zhì)穩(wěn)定，可自由穿過細(xì)胞外基質(zhì)、血管壁等，廣泛分布于血液、尿液、乳汁、唾液、腦脊液等體液中[4]。外泌體表面含有四跨膜蛋白家族中的CD9、CD63和CD81、膜聯(lián)蛋白、上皮細(xì)胞黏附分子等特殊的膜蛋白，可作為檢測(cè)外泌體的特異性標(biāo)志物。在透射電子顯微鏡下外泌體的形態(tài)為杯托狀或圓盤狀[5]。

目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)外泌體在腫瘤的發(fā)生、生長、轉(zhuǎn)移和耐藥中起著重要作用[6]。腫瘤細(xì)胞分泌的外泌體可使正常細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化，例如前列腺癌來源的外泌體能誘導(dǎo)脂肪干細(xì)胞發(fā)生致瘤性轉(zhuǎn)化[7]，乳腺癌來源的外泌體可導(dǎo)致正常細(xì)胞中相關(guān)信使RNA(messenger RNA，mRNA)沉默,促進(jìn)腫瘤的形成[8]；這些均與外泌體轉(zhuǎn)運(yùn)致癌蛋白、mRNA和微RNA(microRNA，miRNA/miR)相關(guān)。且不同來源的外泌體能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，Zhou等[9]研究發(fā)現(xiàn)，外泌體來源的miR-224-5p的過表達(dá)可通過抑制雄激素受體和介導(dǎo)上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial mesenchymal transformation，EMT)促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌的生長，誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌的增殖。Lin等[10]發(fā)現(xiàn),肝癌細(xì)胞分泌的外泌體中高表達(dá)的miR-210可轉(zhuǎn)移到內(nèi)皮細(xì)胞中,抑制內(nèi)皮細(xì)胞Sma和Mad相關(guān)蛋白4、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子6的表達(dá),促進(jìn)新生血管生成,提高腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的能力。

2 circRNA的生物學(xué)功能及在癌癥中的作用

2.1circRNA的生物學(xué)功能 circRNA是一類具有特殊環(huán)狀結(jié)構(gòu)且耐受核酸外切酶降解的非編碼RNA，廣泛存在于各種體液中。circRNA可以分為外顯子環(huán)化形成的circRNA、內(nèi)含子環(huán)化形成的circRNA及外顯子-內(nèi)含子circRNA[11]。目前已發(fā)現(xiàn)的circRNA大部分為外顯子circRNA，主要定位于細(xì)胞質(zhì)，而內(nèi)含子circRNA和外顯子-內(nèi)含子circRNA主要定位于細(xì)胞核。

circRNA主要有4種生物學(xué)功能。①miRNA海綿作用：circRNA含有大量miRNA的結(jié)合位點(diǎn)，可作為miRNA分子海綿與miRNA結(jié)合，阻礙miRNA與mRNA靶點(diǎn)結(jié)合，降低miRNA的活性、抑制miRNA的功能，從而上調(diào)miRNA靶基因的表達(dá)，在疾病調(diào)控中發(fā)揮重要作用[12]。②調(diào)控蛋白結(jié)合：多種RNA結(jié)合蛋白(RNA binding protein，RBP)參與RNA的剪切、穩(wěn)定性調(diào)控以及mRNA的翻譯。在沒有circRNA時(shí)，RBP與mRNA結(jié)合，翻譯大量蛋白質(zhì)。由于circRNA分子序列上包含了特定的RBP結(jié)合位點(diǎn)，circRNA與RBP結(jié)合形成RNA蛋白復(fù)合物，從而抑制特定的RBP功能及親本基因轉(zhuǎn)錄[13]。③翻譯蛋白質(zhì)：circRNA雖然屬于非編碼RNA，但也有部分circRNA可被核糖體翻譯，并編碼多肽，進(jìn)而行使調(diào)控功能[14]。④調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄：circRNA能夠以RNA-RNA相互作用的方式與U1小核糖核蛋白結(jié)合，其中U1與RNA聚合酶Ⅱ形成復(fù)合物結(jié)合到轉(zhuǎn)錄因子IIH基因上[11]。circRNA通過調(diào)控RNA聚合酶Ⅱ的活性促進(jìn)親本基因的表達(dá)。已經(jīng)有越來越多的circRNA在生物體中被發(fā)現(xiàn)，它們廣泛地、多樣地、保守地、穩(wěn)定地存在于真核生物中，具有組織特異性、時(shí)序特異性和疾病特異性等特征，這些顯著特征是其成為人類疾病生物標(biāo)志物的前提。

2.2circRNA在癌癥中的作用 circRNA是非編碼RNA網(wǎng)絡(luò)的一顆新星，隨著對(duì)circRNA研究的不斷深入，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)許多circRNA參與了腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲和凋亡[15-17]。Han等[18]發(fā)現(xiàn)hsa_circRNA_0007874、hsa_circRNA_104135可通過海綿作用與促癌基因miR-9結(jié)合,促進(jìn)p21的表達(dá)，抑制肝癌進(jìn)展。Chen等[19]研究表明，circRNA NOP2/Sun RNA甲基轉(zhuǎn)移酶家族成員2基因可通過與胰島素樣生長因子2 mRNA結(jié)合蛋白2、高遷移率族蛋白A2 RNA形成蛋白質(zhì)三元復(fù)合物，穩(wěn)定高遷移率族蛋白A2 mRNA的穩(wěn)定性，促進(jìn)結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的進(jìn)程。Van Der Steen等[20]通過對(duì)60例肺癌和非轉(zhuǎn)化細(xì)胞系的研究制作了非小細(xì)胞肺癌的circRNA圖譜，發(fā)現(xiàn)大量circRNA亞群與細(xì)胞增殖相關(guān)。Shangguan等[21]的研究發(fā)現(xiàn)，外顯子circRNA circSLC25A16可以通過與miR-488-3p/缺氧誘導(dǎo)因子-1α結(jié)合，激活乳酸脫氫酶A，加速糖酵解與非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖。Liu等[22]發(fā)現(xiàn)hsa_circ_001783的高表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生和進(jìn)展呈正相關(guān)，敲除hsa_circ_001783抑制了乳腺癌細(xì)胞的進(jìn)展，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)hsa_circ_001783通過海綿作用與miR-200c-3p結(jié)合，調(diào)控乳腺癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。circRNA的顯著特征和它的生物學(xué)功能使其具有成為疾病早期診斷及治療靶點(diǎn)的潛能。

3 外泌體circRNA在癌癥早期診斷的價(jià)值及相關(guān)機(jī)制

3.1外泌體circRNA在癌癥早期診斷中的價(jià)值 Li等[2]已證實(shí)人血清外泌體中已鑒定出1 215個(gè)完整且穩(wěn)定的circRNA，超過90%由外顯子環(huán)化而來。目前對(duì)癌癥的早期篩查主要通過影像學(xué)檢查、腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)及手術(shù)穿刺活檢等方法。然而，影像學(xué)檢查存在假陽性高及輻射暴露的缺點(diǎn)；腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)具有較低的靈敏度和特異度；通過內(nèi)鏡等手術(shù)或穿刺方法進(jìn)行組織病理學(xué)檢查的準(zhǔn)確率高，但其為有創(chuàng)檢查，易對(duì)患者心理和生理造成創(chuàng)傷。外泌體circRNA能否作為一種靈敏、特異、創(chuàng)傷性小、不良反應(yīng)少的癌癥篩查手段是目前研究的重點(diǎn)方向。

外泌體形成過程中circRNA富集的機(jī)制尚不清楚。一種可能是circRNA在細(xì)胞質(zhì)中豐富并且在其形成期間被動(dòng)地包含在外泌體中，另一種可能是circRNA從細(xì)胞質(zhì)中主動(dòng)轉(zhuǎn)移到外泌體。circRNA可通過外泌體轉(zhuǎn)移到供體細(xì)胞和受體細(xì)胞之間作為信使來介導(dǎo)多種信號(hào)通路。腫瘤患者與正常健康人群體內(nèi)外泌體circRNA存在差異性表達(dá)[23-24]，進(jìn)一步表明腫瘤細(xì)胞來源的差異性外泌體circRNA有作為癌癥檢測(cè)生物標(biāo)志物的潛能。

許多分子生物學(xué)技術(shù)已廣泛應(yīng)用于外泌體circRNA的檢測(cè)，包括高通量測(cè)序、基因芯片、定量聚合酶鏈反應(yīng)等[25-28]?；蛐酒饕糜跈z測(cè)全基因組circRNA，其檢出率非常高。高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)于circRNA的檢測(cè)主要是通過反向可變剪切接頭序列，而這些測(cè)序片段只占轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)所有測(cè)序片段中很少部分，常規(guī)測(cè)序深度使許多豐度的circRNA被損失掉，因此高通量測(cè)序技術(shù)檢出率較基因芯片技術(shù)低。而定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)circRNA表達(dá)與差異分析是對(duì)高通量測(cè)序、芯片結(jié)果的有效補(bǔ)充和驗(yàn)證，能有效與線性RNA區(qū)分開來，可檢測(cè)包括細(xì)胞、組織、血液和外泌體等多種樣本中circRNA差異表達(dá)情況。

在消化道腫瘤中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一些異常表達(dá)的外泌體circRNA，如結(jié)腸癌患者血漿外泌體hsa_circ_0004071[24]及血清外泌體circRNA同源域相互作用蛋白激酶3基因[29]與正常人相比有明顯的差異性表達(dá)，且對(duì)結(jié)腸癌的診斷特異度及靈敏度均較高；早期胃癌患者血漿外泌體circ0065149較健康者明顯降低，且其對(duì)早期胃癌的診斷特異度及靈敏度均高于傳統(tǒng)的腫瘤標(biāo)志物，如癌胚抗原、糖類抗原199、糖類抗原125[30]；在胰腺導(dǎo)管癌患者血漿外泌體中發(fā)現(xiàn)circRNA異亮氨酰轉(zhuǎn)移RNA合成酶(isoleucyl-tRNA synthetase，IARS)基因明顯上調(diào)，且circ-IARS可通過外泌體進(jìn)入人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)并促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移[28]；circ-0000284在膽管癌細(xì)胞系、腫瘤組織和血漿外泌體中明顯升高，并且circ-0000284的高表達(dá)增強(qiáng)膽管癌細(xì)胞在體內(nèi)、體外的遷移、侵襲和增殖能力[31]，提示這些外泌體circRNA可作為消化道腫瘤早期診斷和轉(zhuǎn)移的潛在生物學(xué)標(biāo)志物。在泌尿生殖系統(tǒng)腫瘤的外泌體中也發(fā)現(xiàn)了具有差異性表達(dá)的circRNA。如circRNA蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶5在膀胱癌患者血清和尿液外泌體中的水平與臨床分期、生存率及腫瘤轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，提示circRNA蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶5基因可作為膀胱癌早期診斷及預(yù)后的生物標(biāo)志物[27]。Xu等[32]從Ⅲ期子宮內(nèi)膜腺癌患者中鑒定出275個(gè)差異性表達(dá)的circRNA，提示這些差異性表達(dá)的外泌體circRNA可能對(duì)子宮內(nèi)膜癌的診療具有指導(dǎo)意義。在呼吸系統(tǒng)腫瘤方面，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)肺腺癌患者血漿外泌體中hsa_circ_0001492和hsa_circ_0001346在肺腺癌早期即出現(xiàn)明顯上調(diào)[33]；這些結(jié)果均提示外泌體circRNA有作為癌癥早期診斷候選標(biāo)志物的潛能。

3.2外泌體circRNA促進(jìn)癌癥發(fā)生發(fā)展的機(jī)制

3.2.1調(diào)控EMT EMT是指上皮細(xì)胞通過特定程序轉(zhuǎn)化為具有間充質(zhì)表型細(xì)胞的生物學(xué)過程，具體表現(xiàn)為上皮細(xì)胞極性消失，失去與基底膜的連接，黏附能力下降，喪失上皮相關(guān)表型，同時(shí)獲得了間充質(zhì)細(xì)胞特性與表型的能力，如遷移、侵襲、抗凋亡和降解細(xì)胞外基質(zhì)的能力?？沙霈F(xiàn)細(xì)胞骨架及相關(guān)基因的改變，如上皮標(biāo)志物上皮鈣黏素的減少及間質(zhì)標(biāo)志物神經(jīng)鈣黏素和波形蛋白的表達(dá)增加，導(dǎo)致癌細(xì)胞間黏附性減弱，易于脫落和轉(zhuǎn)移，增加腫瘤的侵襲和遷移[34]。Zhang等[35]發(fā)現(xiàn)，胃癌外泌體circRNA核受體相互作用蛋白1可作為miR-149-5p的海綿，通過蛋白激酶B1/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白通路促進(jìn)EMT，增加腫瘤的轉(zhuǎn)移。Joseph等[36]研究顯示，肝細(xì)胞生長因子受體MET途徑可調(diào)節(jié)小泛素樣調(diào)節(jié)劑活化酶E2和circRNA卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域66的表達(dá)，誘導(dǎo)表皮生長因子受體耐藥，增加肺腺癌細(xì)胞的EMT和轉(zhuǎn)移潛能。

3.2.2調(diào)控血管生成和內(nèi)皮細(xì)胞通透性 腫瘤新生血管的形成提供了腫瘤細(xì)胞代謝和生長所需的氧氣及營養(yǎng)物質(zhì)，是腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的重要原因。腫瘤外泌體circRNA可增加血管內(nèi)皮細(xì)胞的形成，誘導(dǎo)新生血管腔的形成，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。Huang等[37]發(fā)現(xiàn)肝癌外泌體circRNA-100338可與miR-141-3p相互作用，并通過哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白信號(hào)通路，促進(jìn)HUVECs血管形成能力和肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。Li等[28]發(fā)現(xiàn)，胰腺癌組織和其轉(zhuǎn)移性疾病患者的血漿外泌體中circ-IARS基因表達(dá)明顯上調(diào)。在胰腺癌中，circ-IARS通過胰腺癌細(xì)胞外泌體進(jìn)入HUVECs，調(diào)控miR-122的表達(dá)，增加大鼠肉瘤病同源家族成員癌基因的活性，上調(diào)纖維狀肌動(dòng)蛋白的水平，降低了胞質(zhì)緊密連接-1表達(dá)，增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞通透性和局灶性黏附，促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的能力。敲低circ-IARS后，大鼠肉瘤病同源家族成員癌基因活性降低和纖維狀肌動(dòng)蛋白表達(dá)量減少，HUVECs的通透性減弱，癌細(xì)胞侵襲能力減弱。

3.2.3調(diào)控腫瘤微環(huán)境 腫瘤微環(huán)境指腫瘤細(xì)胞生長的細(xì)胞環(huán)境，包含多種成分，如腫瘤細(xì)胞、生長因子、細(xì)胞外基質(zhì)、蛋白酶等。研究發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞在轉(zhuǎn)移前會(huì)首先釋放外泌體，外泌體被相應(yīng)器官的受體細(xì)胞攝取后，可使原器官細(xì)胞的狀態(tài)發(fā)生改變，營造一個(gè)適宜腫瘤生長的微環(huán)境，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移[38-39]。馬維東等[40]發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌細(xì)胞中的circ_0044366能夠通過外泌體轉(zhuǎn)運(yùn)至腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞中，吸附miR-29b上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)2的表達(dá)水平。MMP2可分解層粘連蛋白-5產(chǎn)生具有催化作用的可溶性片段，參與腫瘤的免疫過程，促進(jìn)癌細(xì)胞的遷襲和轉(zhuǎn)移。李豪等[41]發(fā)現(xiàn)黑色素瘤外泌體可通過誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞MMP2、MMP9的表達(dá),促進(jìn)成纖維細(xì)胞侵襲能力。黑色素瘤釋放的外泌體還能夠刺激基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生膠原蛋白18、層粘連蛋白-5,并活化促分裂原活化的蛋白激酶、尿激酶,通過重構(gòu)腫瘤微環(huán)境支持轉(zhuǎn)移細(xì)胞的生長[42]。

3.2.4促進(jìn)腫瘤細(xì)胞免疫逃逸 機(jī)體的免疫系統(tǒng)雖然有產(chǎn)生抗腫瘤免疫應(yīng)答的能力，但是許多腫瘤仍能在機(jī)體內(nèi)生長和增殖，說明腫瘤具有逃避宿主免疫系統(tǒng)的識(shí)別和攻擊，使機(jī)體不能產(chǎn)生有效的抗腫瘤免疫應(yīng)答的能力，即腫瘤免疫逃逸。鄭乃盛等[43]體外用M2型巨噬細(xì)胞模擬腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞，提取其外泌體與胃癌細(xì)胞共培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)攝取了基質(zhì)蛋白2胞外域的胃癌細(xì)胞可減弱CD8陽性T細(xì)胞的殺傷作用，并可激活干擾素通路，增加胃癌細(xì)胞程序性死亡受體-配體1的表達(dá)，促進(jìn)胃癌細(xì)胞的免疫逃逸。Wang等[44]發(fā)現(xiàn)circRNA-002178在患者的肺腺癌組織、癌細(xì)胞和外泌體以及血清中顯著上調(diào)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，circRNA-002178可以作為miR-34的海綿，通過外泌體進(jìn)入CD8陽性T細(xì)胞中，增強(qiáng)癌細(xì)胞內(nèi)程序性死亡受體1的表達(dá)，誘導(dǎo)T細(xì)胞衰竭。

3.2.5調(diào)控腫瘤化療耐藥 腫瘤耐藥性是指化療過程中，腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物逐漸產(chǎn)生耐受性的現(xiàn)象?；熌退幨怯绊懩[瘤治療的主要障礙之一。腫瘤細(xì)胞耐藥的主要機(jī)制包括：①發(fā)生于細(xì)胞膜水平的耐藥，如藥物攝取減少和細(xì)胞表面蛋白(P糖蛋白或多藥耐藥相關(guān)蛋白等)外排增多，引起細(xì)胞內(nèi)藥物的絕對(duì)濃度降低。②抗腫瘤藥物進(jìn)入細(xì)胞后，在亞細(xì)胞水平發(fā)生再次分布引起的耐藥，如進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)中的藥物被轉(zhuǎn)運(yùn)至外泌體囊泡中，從而隔絕藥物作用，并以胞吐的方式排出細(xì)胞外。③發(fā)生在藥物細(xì)胞內(nèi)代謝過程的耐藥，如藥物降解加速，積蓄減少等；腫瘤通常依靠有氧糖酵解產(chǎn)生ATP來快速生長和化療耐藥。M2型丙酮酸激酶在催化糖酵解過程中起關(guān)鍵作用。Wang等[45]研究表明，外泌體ciRS-122通過競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miR-122，上調(diào)M2型丙酮酸激酶促進(jìn)糖酵解，并與化療耐藥性呈正相關(guān)。④發(fā)生在細(xì)胞核水平的耐藥，如藥物靶點(diǎn)的改變、凋亡途徑的阻滯、腫瘤干細(xì)胞或腫瘤微環(huán)境的改變等。Yao等[46]研究發(fā)現(xiàn)，在順鉑耐藥的胃癌血清和細(xì)胞中，外泌體circRNA漿細(xì)胞瘤變異體易位1上調(diào)。抑制circRNA漿細(xì)胞瘤變異體易位1的表達(dá)，可提高胃癌對(duì)順鉑的敏感性。

4 小 結(jié)

盡管外泌體circRNA在癌癥早期診斷中取得一定進(jìn)展，但仍存在多方面的挑戰(zhàn)和困難。雖然外泌體與體液有高親和力，可通過攜帶circRNA將生物信息和物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)到目標(biāo)細(xì)胞，保護(hù)circRNA免受破壞；但是細(xì)胞通過外排外泌體小泡也增加了circRNA的清除，減少了circRNA的聚積，最終導(dǎo)致外泌體中circRNA豐度較低。其次，圓形構(gòu)象和序列與線性mRNA對(duì)應(yīng)物重疊，使得對(duì)circRNA表達(dá)和功能的精確評(píng)估具有挑戰(zhàn)性。隨著檢測(cè)手段的不斷改進(jìn)，實(shí)驗(yàn)方法的改良和生物信息學(xué)算法的不斷優(yōu)化，相信外泌體circRNA將作為一種高靈敏度、高特異度、高穩(wěn)定性、創(chuàng)傷小、不良反應(yīng)少的新型生物標(biāo)志物，在癌癥早期診斷中發(fā)揮舉足輕重的作用。