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    CD71與E-cadherin在丙酸睪酮誘導(dǎo)的前列腺組織中的表達(dá)

    2022-11-26 04:46:11楊曉亮楊曉波師宏斌趙瑞寧
    寧夏醫(yī)學(xué)雜志 2022年4期
    關(guān)鍵詞:丙酸睪酮孵育

    張 強(qiáng) ,楊曉亮,楊曉波,師宏斌,趙瑞寧,張 超

    隨著老齡化社會(huì)的不斷進(jìn)展,在男性人群中前列腺增生的發(fā)病率不斷增高,越來(lái)越多的中老年男性正遭受著前列腺增生癥狀所致的痛苦,也越來(lái)越受到臨床工作者及研究者的重視和關(guān)注[1]。目前,對(duì)于前列腺增生的治療主要包括藥物治療和手術(shù)治療,隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,手術(shù)治療的方式也呈現(xiàn)出多樣性[2]。然而,對(duì)于前列腺增生的治療缺乏特別安全有效的治療手段。因此,對(duì)于前列腺增生發(fā)病機(jī)制的研究顯得越來(lái)越重要。前列腺增生的病理生理特點(diǎn)有前列腺上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞非惡性增生[3]。研究發(fā)現(xiàn),細(xì)胞的增殖和凋亡紊亂會(huì)致使上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞的持續(xù)增殖,而轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(CD71)和鈣黏附蛋白E(E-cadherin)與細(xì)胞的增殖和凋亡密切相關(guān)[4-6]。但目前關(guān)于這兩種蛋白在前列腺增生機(jī)制中的作用鮮見(jiàn)報(bào)道。因此,本研究擬探討CD71與E-cadherin在丙酸睪酮誘導(dǎo)的前列腺組織中的表達(dá)。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料:6周齡12只昆明SD大鼠,雄雌各半,隨機(jī)分為模型組(n=6)和對(duì)照組(n=6)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由寧夏醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心(SPF級(jí))提供,許可證號(hào):SCXK(寧)2019-0001。

    1.2 主要試劑和儀器:丙酸睪酮購(gòu)自上海通用藥業(yè)股份有限公司,兔來(lái)源的一抗CD71與E-cadherin抗體、山羊來(lái)源的二抗等購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司,免疫組化試劑盒等購(gòu)自博士德生物有限公司,蛋白提取試劑盒購(gòu)自凱基生物有限公司。

    1.3 模型建立及標(biāo)本制備:模型組大鼠皮下注射丙酸睪酮1 mL(2.5 mg/kg·d)[7],對(duì)照組給予相同劑量生理鹽水皮下注射,連續(xù)4周,末次注射后,在無(wú)菌低溫下剖腹取前列腺,左側(cè)前列腺置于-80 ℃保存,右側(cè)前列腺用4%的多聚甲醛固定。

    1.4 免疫組織化學(xué)檢測(cè):石蠟包埋前列腺組織進(jìn)行4 μm切片,60 ℃烤箱烤片4 h,二甲苯梯度脫蠟,無(wú)水乙醇梯度脫水,抗原修復(fù),CD71和E-cadherin一抗孵育、二抗孵育、DAB顯色。蘇木精復(fù)染,脫水、透明,中性樹(shù)膠封片,顯微鏡下觀察陽(yáng)性表達(dá)情況。

    1.5 蛋白印跡檢測(cè):蛋白提取、煮沸5 min,-80 ℃保存。SDS-PAGE電泳,一抗孵育:將抗β-actin按1∶10 000比例稀釋?zhuān)豢笴D71與E-cadherin均按1∶2 000比例稀釋?zhuān)覝負(fù)u床孵育;二抗孵育:山羊抗兔二抗按1∶10 000稀釋?zhuān)覝負(fù)u床孵育;滴加超敏ECL化學(xué)發(fā)光底物、暗室曝光,用Image J軟件進(jìn)行灰度值分析。

    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件,計(jì)量資料采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 大鼠前列腺組織免疫組織化學(xué)染色檢測(cè):CD71與E-cadherin蛋白在前列腺上皮細(xì)胞細(xì)胞中的細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)中均有陽(yáng)性表達(dá),見(jiàn)圖1至圖2(封三)。

    2.2 大鼠前列腺組織蛋白印跡檢測(cè):模型組CD71與E-cadherin蛋白表達(dá)量均顯著高于對(duì)照組(P<0.05),見(jiàn)表1與圖3至圖4(封三)。

    3 討論

    良性前列腺增生(BPH)是中老年男性患者常見(jiàn)的一種疾病,嚴(yán)重影響著中老年男性的身體健康及生活質(zhì)量,目前治療手段主要是藥物治療和手術(shù)治療,但手術(shù)治療后仍有一定的復(fù)發(fā)率。因此,對(duì)于BPH的發(fā)病機(jī)制研究越來(lái)越受到相關(guān)學(xué)者的重視。有研究發(fā)現(xiàn),其發(fā)生可能與細(xì)胞增殖與凋亡失衡、氧化應(yīng)激以及激素異常分泌等有關(guān),具體發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚[3,8]。本實(shí)驗(yàn)室采用不去勢(shì)、皮下注射丙酸睪酮誘導(dǎo)大鼠前列腺模型更貼合中老年BPH患者的生理特點(diǎn)[7]。

    CD71是轉(zhuǎn)鐵蛋白受體,在人體多種細(xì)胞中表達(dá),其能介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)鐵的攝取,并可調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖和凋亡,其與轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合后主要表達(dá)于增殖細(xì)胞的細(xì)胞膜,從而調(diào)控細(xì)胞對(duì)鐵的吸收,從而促進(jìn)DNA的合成,增進(jìn)細(xì)胞的增殖[9-11]。研究發(fā)現(xiàn),增殖活躍的非腫瘤細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中,CD71的表達(dá)明顯增高,CD71在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)情況可間接反映腫瘤的增殖狀況[12-13]。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),在前列腺增生模型組,CD71表達(dá)明顯高于對(duì)照組,可間接看出前列腺上皮細(xì)胞中CD71的高表達(dá)對(duì)于上皮細(xì)胞的增生起到了重要作用。

    E-cadherin是表皮-鈣黏附素,具有上皮細(xì)胞親和性的分子,是維持上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性和極性的跨膜糖蛋白[14]。研究發(fā)現(xiàn),其對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖具有重要作用。隨著對(duì)E-cadherin研究的不斷深入,發(fā)現(xiàn)其可影響Wnt信號(hào)通路的傳導(dǎo),Wnt信號(hào)通路在細(xì)胞的增殖分化中起到了關(guān)鍵性的作用,同時(shí),E-cadherin與β-catenin通路是相互融合的,而β-catenin在Wnt信號(hào)通路中又發(fā)揮著重要作用[15]。因此,E-cadherin與Wnt信號(hào)通路能協(xié)同調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖分化。本實(shí)驗(yàn)中,模型組前列腺上皮細(xì)胞E-cadherin表達(dá)明顯高于對(duì)照組,說(shuō)明前列腺上皮細(xì)胞E-cadherin高表達(dá),致使細(xì)胞增殖分化能力增強(qiáng),增加了前列腺上皮細(xì)胞的增殖能力,與前列腺增大有關(guān)。

    丙酸睪酮誘導(dǎo)的前列腺組織中CD71與E-cadherin高表達(dá),其高表達(dá)可增加前列腺上皮細(xì)胞的增殖以及分化,使得前列腺不斷增大,從而導(dǎo)致前列腺增生疾病的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)為前列腺增生的發(fā)病機(jī)制提供了新的科學(xué)依據(jù),但疾病的發(fā)生是受多方面因素的影響,其具體機(jī)制仍需進(jìn)一步探討。

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