• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    益腎通絡(luò)方對雌性小鼠卵子修復(fù)精子DNA能力的影響

    2022-11-24 01:07:18趙莉娜門波陳建設(shè)孫自學(xué)張宸銘
    中醫(yī)藥信息 2022年11期
    關(guān)鍵詞:雄鼠雌鼠卵子

    趙莉娜,門波,陳建設(shè),孫自學(xué),張宸銘

    (1. 河南省中醫(yī)院,河南 鄭州 450002;2. 河南中醫(yī)藥大學(xué),河南 鄭州 450046)

    精子在生成、形成和成熟過程中,由于主要細胞器的脫落失去了DNA 損傷修復(fù)系統(tǒng)。因此,精子在成熟后不具備自我修復(fù)的能力,成熟的精子必須依靠卵母細胞中的修復(fù)系統(tǒng)來修復(fù)DNA損傷[1]。而卵母細胞的修復(fù)能力根據(jù)個體、年齡的不同呈現(xiàn)較大差異[2]。尤其是高齡女性會出現(xiàn)妊娠率低、流產(chǎn)率高等情況,這可能與卵子DNA修復(fù)功能密切相關(guān)[3]。

    益腎通絡(luò)方是本課題組前期臨床使用近二十年的經(jīng)驗方,對于該方在改善精子質(zhì)量方面,尤其是改善精子DNA 完整性方面的作用,做了大量的基礎(chǔ)研究工作[4-7],發(fā)現(xiàn)該方能夠有效降低患者精子DNA 的碎片率,且安全性較高[8-9]。近年來,隨著二胎、三胎政策的放開,高齡患者的就診量明顯上升。課題組根據(jù)中醫(yī)“異病同治”理論,將該方應(yīng)用于高齡女性患者,發(fā)現(xiàn)其可明顯增加患者妊娠率、活產(chǎn)率,但具體機制不明。本研究通過復(fù)制苯并(a)芘(BaP)致雄鼠精子DNA 損傷模型,使正常雄鼠及BaP 染毒雄鼠分別與灌胃益腎通絡(luò)方水煎液及灌胃生理鹽水的雌鼠合籠,對比各組雌鼠的妊娠結(jié)局,探討益腎通絡(luò)方改善雌鼠卵子質(zhì)量的作用機制。

    1 方法

    1.1 實驗動物

    20 只雄性、30 只雌性SPF ICR(CD1)小鼠(10 周齡,體質(zhì)量30~40 g),購買于河南斯克貝斯生物技術(shù)有限公司,許可證號:SCXK(豫)2020-0005。對小鼠進行編號,然后依據(jù)隨機數(shù)字表進行隨機分組。所有動物實驗和操作均已得到河南省中醫(yī)院倫理委員會的批準(zhǔn)。動物飼養(yǎng)在河南省中醫(yī)院中心實驗室的獨立通風(fēng)籠(IVC)系統(tǒng)中,許可證號:SYXK(豫)2011-0002。IVC 系統(tǒng)中,溫度21~25 ℃,濕度38%~60%,通風(fēng)量為22 次/h,光照/黑暗周期為12 h。小鼠可以自由進食標(biāo)準(zhǔn)動物飼料和過濾水。在正式實驗之前,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。

    1.2 實驗材料

    益腎通絡(luò)方組成:菟絲子20 g,淫羊藿20 g,黃芪20 g,丹參30 g,熟地黃10 g,牛膝10 g 和水蛭6 g,飲片購自河南省中醫(yī)院中藥房,所有藥材均經(jīng)河南省中醫(yī)院制劑中心黃小敏主任藥師鑒定。制備為3 g/mL的藥材水煎液,保存在4 ℃的冰箱中備用。苯并(a)芘(BaP,分析純,純度≥96%)(批號:C11287800,北京德晟嘉行科技有限公司);精子核完整性染色試劑盒(批號:201101,浙江星博生物科技股份有限公司)。

    1.3 實驗設(shè)計

    20 只雄性小鼠隨機分為兩組,每組10 只,分別為A組和B組。A組小鼠(A1~A10)作為雄性空白對照組,灌胃與B組等量的生理鹽水。B組小鼠(B1~B10)參照文獻[10]進行BaP 染毒,染毒劑量為100 mg/(kg·d),共60 d,復(fù)制精子DNA損傷模型作為雄性造模組。同時,30 只雌性小鼠隨機分為3 組,每組10 只,分別為C 組(C1~C10)、D 組(D1~D10)和E 組(E1~E10)。C、D 組小鼠作為雌性空白對照,灌胃與E 組等量的生理鹽水,E 組小鼠按23.78 g/kg 劑量(按照體表面積法[11]計算的等效劑量)灌胃益腎通絡(luò)方水煎液,共60 d。

    灌胃結(jié)束后,采用角化細胞計數(shù)法[12]觀察雌鼠動情周期。在雌鼠動情期時,將A 組每只雄鼠與編號相同的C 組雌鼠按照1∶1 比例合籠,一籠2 只,即A1 + C1、A2 + C2……A10 + C10。將B 組每只雄鼠與相同編號的D 組和E 組雌鼠按照1∶2 比例合籠,一籠3 只,即B1 + D1 + E1、B2 + D2 + E2……B10 +D10 + E10。合籠次日觀察雌鼠陰栓情況[13],發(fā)現(xiàn)陰栓則記為妊娠0 d,將雌鼠單獨飼養(yǎng)直至F1 代出生,F(xiàn)1 代出生后統(tǒng)計每只雌鼠活產(chǎn)數(shù)。具體實驗步驟見圖1。

    圖1 技術(shù)路線圖

    1.4 SCSA法檢測精子DNA碎片指數(shù)(DFI)

    合籠成功后,采用戊巴比妥鈉麻醉雄鼠,解剖后取附睪尾制成精子懸液,采用改良的精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)檢測(SCSA)法[14]檢測精子DFI。將精子懸液轉(zhuǎn)移到800 μL的冷TNE緩沖液中,通過100 μm尼龍過濾器。將過濾后的精子懸浮液用相同的緩沖液稀釋到(2 × 106~3×106)/mL 的濃度,然后用酸性洗滌劑溶液將100 μL的精子懸液稀釋到200 μL,置于FACS 管中。加入600 μL 吖啶橙染色液,染色30 s。每個樣本都用BD Accuri?C5流式細胞儀(BD Pharmingen,San Diego,CA,USA)對5 000 個精子進行門控分析。使用BD Accuri?C6 plus 軟件(BD Pharmingen)計算DFI,并根據(jù)單鏈(紅色)和雙鏈(綠色)熒光比例計算精子DNA 碎片指數(shù)(sperm DNA fragmentation index,DFI)。

    1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

    采用SPSS 26.0 統(tǒng)計軟件進行分析,計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布且方差齊,則兩組比較采用獨立樣本t檢驗;對于非正態(tài)分布或方差不齊的資料則采用t'檢驗。三組比較則采用單因素方差分析(ANOVA),并應(yīng)用LSD 法進行各組間進行兩兩比較;對于非正態(tài)分布或方差不齊資料則采用秩和檢驗。P<0.05代表差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 一般情況觀察

    各組小鼠毛發(fā)光澤,活動正常,雌鼠動情周期規(guī)律。雄鼠造模后未出現(xiàn)明顯的外觀變化。

    2.2 兩組雄鼠DFI情況比較

    合籠成功后,處死所有雄鼠并取材檢測DFI。兩組雄鼠DFI 相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P= 0.000 <0.01),表明造模成功。見表1。

    表1 兩組雄鼠DFI比較(±s)

    表1 兩組雄鼠DFI比較(±s)

    注:與A組比較,*P <0.01。

    組別雄性空白對照組(A組)雄性造模組(B組)t值P值DFI(%)4.69±1.48 18.95±4.12**-10.308 0.000 n 10 10

    2.3 雌鼠合籠情況比較

    與C 組比較,D 組小鼠產(chǎn)仔數(shù)(P= 0.000)及活胎數(shù)(P= 0.000)均顯著降低,死胎率明顯增高(P=0.002);與D 組比較,E 組產(chǎn)仔數(shù)(P=0.014)及活胎數(shù)(P=0.000)顯著增加。但兩組死胎數(shù)比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表2。

    表2 各組小鼠合籠情況比較(±s)

    表2 各組小鼠合籠情況比較(±s)

    注:與C 組比較,*P <0.05,**P <0.01;與D 組比較,△P <0.05,△△P <0.01。

    死胎數(shù)0 1.75±1.39**1.00±1.12*組別C組D組E組n989產(chǎn)仔數(shù)9.89±1.90 5.13±2.10**7.56±1.67*△活胎數(shù)9.89±1.90 3.38±0.92**6.56±1.13**△△

    3 討論

    精子DNA 對于妊娠而言至關(guān)重要,雖然許多不育患者的精液分析報告顯示精子活力和濃度正常,但是他們中有近一半患者的精子DNA 碎片率增高[15]。因此,精子DNA 更能夠反映男性生殖能力,預(yù)測妊娠結(jié)局。臨床治療中也發(fā)現(xiàn),與無相關(guān)病史的男性相比,有反復(fù)自然流產(chǎn)史夫婦中的男性,精子的活動率明顯較差,DFI增高[16-18]。當(dāng)精子DFI小于27%時,受精后卵母細胞能夠修復(fù)受損的精子DNA,但如果DFI超過這一數(shù)值,就超過了卵母細胞的修復(fù)能力,可能會出現(xiàn)不孕或自然流產(chǎn)[19]。

    女性的孕育能力和其后代的健康在很大程度上依賴于源源不斷的優(yōu)質(zhì)卵母細胞。與體細胞相似,當(dāng)卵母細胞受到各種內(nèi)外因素,如輻射、污染、炎癥、氧化損傷等影響,出現(xiàn)DNA 損傷后,會啟動DNA 損傷修復(fù)通路,DNA 修復(fù)可能是確保女性生育能力以及將高質(zhì)量的遺傳物質(zhì)傳遞給后代的重要機制[20]。卵子在形成時,會經(jīng)歷染色體解螺旋、復(fù)制、分離等過程,在這一時期染色體更容易受到外界因素的影響出現(xiàn)DNA 損傷。而且,隨著年齡的增大[21]、復(fù)制次數(shù)的增加以及外界不明原因的影響,會導(dǎo)致染色體出現(xiàn)復(fù)制錯誤、斷裂、基因片段丟失等情況,最終導(dǎo)致形成的卵子功能不全,甚至出現(xiàn)過早凋亡,在這期間卵母細胞的DNA 修復(fù)機制起著至關(guān)重要的作用[22]。然而,這種能力是有限的,可能隨著年齡的增長而下降[23]。

    目前已經(jīng)有許多關(guān)于中藥修復(fù)精子DNA 的報道[24],但未見中藥修復(fù)卵子DNA 的相關(guān)報道。關(guān)于中藥提高卵子質(zhì)量方面的報道更為常見,中藥能夠明顯提高卵子的質(zhì)量,減少促排卵時促性腺激素的使用,提高妊娠率、活產(chǎn)率,改善妊娠結(jié)局[25]。在輔助生育技術(shù)中,中醫(yī)藥同樣也發(fā)揮著重要作用,補腎類中藥能夠改善卵子質(zhì)量、提高受精率、降低不良反應(yīng)及流產(chǎn)率,總體提高輔助生育的成功率[26-27]。目前認為卵細胞中線粒體功能與卵子質(zhì)量密切相關(guān)[28],經(jīng)典補腎填精中藥方劑毓麟珠可通過改善卵巢功能不全模型小鼠的線粒體功能提高卵子質(zhì)量[29]。也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)采用自擬經(jīng)后增殖方(組成:黨參、白術(shù)、茯苓、甘草、熟地黃、白芍、當(dāng)歸、川芎、菟絲子和鹿角霜等)能夠提高超促排卵大鼠卵母細胞質(zhì)量,具體機制可能與提高GDF9、BMP15 和FGF10(分泌因子)的表達有關(guān)[30]。

    通過臨床觀察并結(jié)合文獻發(fā)現(xiàn),許多不孕癥女性患者常見的臨床證型為腎虛血瘀型,尤其是卵巢功能低下及卵巢早衰患者[31]。眾多醫(yī)家也主要通過補腎活血法改善患者卵巢功能[32-33]。因此,近年來課題組將原本改善男性生殖細胞質(zhì)量的益腎通絡(luò)方應(yīng)用于女性患者,尤其是高齡女性患者,取得了較好的療效。但中醫(yī)藥是如何通過提高卵母細胞DNA 修復(fù)能力從而提高妊娠率的機制尚不明確,本研究為中醫(yī)藥提高卵母細胞DNA 修復(fù)能力提供初步證據(jù),但仍需進一步探討其確切機制。

    綜上所述,BaP 染毒可造成雄鼠DFI 升高,降低合籠雌鼠妊娠率。益腎通絡(luò)方提前干預(yù)雌鼠可改善其與高DFI雄鼠合籠的妊娠結(jié)局。具體機制推測可能與益腎通絡(luò)方改善卵子的DNA修復(fù)能力有關(guān)。

    猜你喜歡
    雄鼠雌鼠卵子
    變性的雄鼠
    組蛋白乙酰化對衰老雌鼠胚胎發(fā)育影響的研究
    經(jīng)期短未必老得更快
    抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆粕對雄鼠運動機能的影響
    千言萬語,盡在一“尿”
    月經(jīng)期短的女人老的更快嗎
    卵子不是你想凍就能凍
    冷凍卵子有風(fēng)險
    千言萬語,盡在一尿
    性周期篩選合籠與非篩選合籠制備大鼠妊娠模型的比較
    精品无人区乱码1区二区| 搞女人的毛片| 国产高潮美女av| 日本 av在线| 精品久久久久久久毛片微露脸| 久久午夜亚洲精品久久| 午夜精品一区二区三区免费看| 岛国在线观看网站| 国产一区在线观看成人免费| 久久久精品欧美日韩精品| 麻豆国产av国片精品| 国产精品永久免费网站| 少妇熟女aⅴ在线视频| 嫩草影视91久久| 十八禁网站免费在线| 十八禁人妻一区二区| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲一区二区三区不卡视频| 午夜免费成人在线视频| 国产黄色小视频在线观看| x7x7x7水蜜桃| 免费一级毛片在线播放高清视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 变态另类丝袜制服| 在线观看日韩欧美| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 日本一二三区视频观看| 国产 一区 欧美 日韩| 久久国产精品影院| 在线免费观看的www视频| 亚洲精华国产精华精| 老司机午夜福利在线观看视频| 在线播放无遮挡| 日韩人妻高清精品专区| 舔av片在线| 一进一出抽搐动态| 国产熟女xx| 97碰自拍视频| 免费观看人在逋| 99热6这里只有精品| a级一级毛片免费在线观看| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产精品日韩av在线免费观看| 麻豆国产av国片精品| 国产成人av激情在线播放| 在线天堂最新版资源| 国产精品久久久久久精品电影| 丝袜美腿在线中文| 在线播放国产精品三级| 精品福利观看| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲精品久久国产高清桃花| 亚洲在线观看片| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲成av人片免费观看| 99久久精品一区二区三区| ponron亚洲| 黄色女人牲交| 国产亚洲精品久久久com| 日本一本二区三区精品| 午夜福利高清视频| 舔av片在线| 成年免费大片在线观看| 亚洲国产精品合色在线| 国产欧美日韩一区二区三| 日韩亚洲欧美综合| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 天天一区二区日本电影三级| 99久久精品热视频| 久9热在线精品视频| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 老汉色∧v一级毛片| 国产高清视频在线观看网站| 亚洲国产色片| 搡老熟女国产l中国老女人| 人人妻人人澡欧美一区二区| 69av精品久久久久久| 91麻豆av在线| 国产乱人伦免费视频| 国产主播在线观看一区二区| 桃红色精品国产亚洲av| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 欧美一区二区精品小视频在线| 床上黄色一级片| 亚洲成人久久爱视频| 在线国产一区二区在线| 啦啦啦免费观看视频1| 69人妻影院| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产高清激情床上av| 中国美女看黄片| 国产精品一区二区免费欧美| 波多野结衣高清无吗| 亚洲av电影在线进入| e午夜精品久久久久久久| 国产伦在线观看视频一区| 日韩欧美精品v在线| 搡老妇女老女人老熟妇| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美 | 高清毛片免费观看视频网站| 可以在线观看毛片的网站| 一进一出抽搐gif免费好疼| 国产亚洲欧美在线一区二区| 国产69精品久久久久777片| 欧美+日韩+精品| av国产免费在线观看| 久久久久久久精品吃奶| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 大型黄色视频在线免费观看| 超碰av人人做人人爽久久 | 在线观看av片永久免费下载| 天美传媒精品一区二区| 级片在线观看| 久久精品人妻少妇| 狠狠狠狠99中文字幕| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产一区二区三区视频了| 99在线人妻在线中文字幕| 免费在线观看亚洲国产| 亚洲国产精品合色在线| 久久精品影院6| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 搡老熟女国产l中国老女人| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 亚洲精华国产精华精| 亚洲av成人精品一区久久| 中文字幕av成人在线电影| 一个人免费在线观看的高清视频| 亚洲男人的天堂狠狠| 日本成人三级电影网站| 天堂√8在线中文| 午夜激情欧美在线| 一个人看的www免费观看视频| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 午夜免费激情av| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 91字幕亚洲| 欧美一区二区亚洲| 制服人妻中文乱码| 国产野战对白在线观看| 99riav亚洲国产免费| 国产探花在线观看一区二区| 午夜福利欧美成人| 午夜福利视频1000在线观看| 成人永久免费在线观看视频| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲一区高清亚洲精品| 小说图片视频综合网站| 国产三级黄色录像| 精品久久久久久成人av| 国产三级中文精品| 两个人视频免费观看高清| 高清在线国产一区| 日韩中文字幕欧美一区二区| 免费av毛片视频| 日韩亚洲欧美综合| 最近最新中文字幕大全电影3| 亚洲专区国产一区二区| 综合色av麻豆| 精品久久久久久久久久久久久| 不卡一级毛片| 免费大片18禁| 亚洲av成人精品一区久久| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 久久6这里有精品| 午夜久久久久精精品| 国产高清视频在线播放一区| 国产精品 国内视频| 99精品在免费线老司机午夜| 91av网一区二区| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 午夜精品一区二区三区免费看| 人人妻人人澡欧美一区二区| 午夜精品在线福利| 99久久九九国产精品国产免费| 在线免费观看的www视频| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 欧美不卡视频在线免费观看| 久久精品综合一区二区三区| 国产精品 欧美亚洲| 午夜福利高清视频| 国产成人影院久久av| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 一进一出好大好爽视频| www国产在线视频色| 国产视频一区二区在线看| 国产一区二区激情短视频| 狂野欧美激情性xxxx| 国产老妇女一区| 国产精品日韩av在线免费观看| 亚洲av电影不卡..在线观看| 色哟哟哟哟哟哟| 偷拍熟女少妇极品色| 国产精品永久免费网站| 成人三级黄色视频| 久久久色成人| 在线a可以看的网站| 国产精品日韩av在线免费观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 不卡一级毛片| а√天堂www在线а√下载| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 我要搜黄色片| 啦啦啦韩国在线观看视频| 成人三级黄色视频| 国产中年淑女户外野战色| 国产精品99久久99久久久不卡| 床上黄色一级片| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 人妻夜夜爽99麻豆av| 狠狠狠狠99中文字幕| aaaaa片日本免费| 网址你懂的国产日韩在线| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产极品精品免费视频能看的| 国产精品女同一区二区软件 | 老司机福利观看| av在线蜜桃| 免费观看人在逋| 日韩欧美国产在线观看| 国产不卡一卡二| 国产真实乱freesex| 岛国在线观看网站| 极品教师在线免费播放| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产精品久久久久久精品电影| 在线看三级毛片| 在线观看舔阴道视频| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 日韩欧美三级三区| 一个人免费在线观看的高清视频| 久久亚洲真实| 亚洲欧美精品综合久久99| 搞女人的毛片| eeuss影院久久| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲人成网站在线播| 欧美日韩精品网址| 99久久精品热视频| 久久久久九九精品影院| 亚洲人成网站高清观看| 国内精品美女久久久久久| 男女床上黄色一级片免费看| 给我免费播放毛片高清在线观看| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 成人国产一区最新在线观看| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 可以在线观看毛片的网站| 国产精品久久久人人做人人爽| 免费在线观看亚洲国产| 12—13女人毛片做爰片一| 午夜福利在线观看吧| 波多野结衣巨乳人妻| 精品国产美女av久久久久小说| 久久久久性生活片| 在线观看av片永久免费下载| 亚洲成av人片免费观看| 亚洲成人免费电影在线观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 韩国av一区二区三区四区| 一二三四社区在线视频社区8| 99热这里只有精品一区| 欧美+亚洲+日韩+国产| 亚洲五月婷婷丁香| 国产精品99久久99久久久不卡| 欧美性感艳星| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲,欧美精品.| 99久久综合精品五月天人人| 97碰自拍视频| 女警被强在线播放| 国产高清视频在线播放一区| 亚洲欧美日韩高清专用| 亚洲中文字幕日韩| 午夜福利在线观看吧| 国产探花极品一区二区| 欧美一区二区亚洲| 中文资源天堂在线| 成人特级av手机在线观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 精华霜和精华液先用哪个| 亚洲成人久久爱视频| 亚洲电影在线观看av| 男女视频在线观看网站免费| 日本熟妇午夜| 成人特级av手机在线观看| 亚洲在线观看片| 亚洲美女视频黄频| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 婷婷精品国产亚洲av在线| 1024手机看黄色片| 欧美三级亚洲精品| 成人无遮挡网站| 久久精品国产综合久久久| www.999成人在线观看| 黄色丝袜av网址大全| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 亚洲成人久久爱视频| 国产午夜福利久久久久久| 中亚洲国语对白在线视频| 亚洲欧美日韩东京热| 露出奶头的视频| 天堂网av新在线| 久久久久久久久大av| 成年女人毛片免费观看观看9| 大型黄色视频在线免费观看| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲电影在线观看av| 中亚洲国语对白在线视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| 日本免费a在线| 中文字幕av在线有码专区| 色吧在线观看| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美 | 亚洲在线自拍视频| 日本精品一区二区三区蜜桃| 两个人看的免费小视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 成人亚洲精品av一区二区| 亚洲美女黄片视频| aaaaa片日本免费| 亚洲 国产 在线| 99精品久久久久人妻精品| 国产99白浆流出| 一区二区三区免费毛片| 在线观看免费视频日本深夜| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲国产精品成人综合色| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 搡老妇女老女人老熟妇| 搞女人的毛片| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 亚洲无线观看免费| or卡值多少钱| 9191精品国产免费久久| 偷拍熟女少妇极品色| 日韩欧美在线乱码| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 一区二区三区国产精品乱码| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 成人欧美大片| 有码 亚洲区| 99热这里只有是精品50| 欧美黑人欧美精品刺激| 脱女人内裤的视频| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 成人欧美大片| 淫秽高清视频在线观看| 搡老熟女国产l中国老女人| 中文字幕熟女人妻在线| 看黄色毛片网站| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 美女被艹到高潮喷水动态| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 九色成人免费人妻av| 欧美一级a爱片免费观看看| 美女黄网站色视频| 一级毛片女人18水好多| 床上黄色一级片| 美女被艹到高潮喷水动态| 国产一区二区在线av高清观看| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 亚洲在线观看片| 十八禁网站免费在线| 免费在线观看日本一区| 国产一区二区激情短视频| a级一级毛片免费在线观看| 国产精品三级大全| 久久久久久久久中文| 舔av片在线| 国产一区二区在线av高清观看| 怎么达到女性高潮| 成年女人永久免费观看视频| 色综合婷婷激情| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| netflix在线观看网站| 亚洲av电影在线进入| 国产熟女xx| 午夜亚洲福利在线播放| 白带黄色成豆腐渣| 嫁个100分男人电影在线观看| 动漫黄色视频在线观看| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲精品在线观看二区| 首页视频小说图片口味搜索| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲久久久久久中文字幕| 久久久成人免费电影| 99久久成人亚洲精品观看| 免费av毛片视频| 真实男女啪啪啪动态图| 国产精品一区二区三区四区久久| 看片在线看免费视频| 淫秽高清视频在线观看| 免费看光身美女| 狠狠狠狠99中文字幕| 成年版毛片免费区| 国产成人影院久久av| 在线a可以看的网站| 国产精华一区二区三区| 精品电影一区二区在线| 首页视频小说图片口味搜索| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 午夜福利欧美成人| 国产综合懂色| 有码 亚洲区| 在线播放无遮挡| 51午夜福利影视在线观看| 手机成人av网站| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 国产精品久久久久久久电影 | 亚洲国产精品999在线| 91麻豆av在线| 色吧在线观看| 看片在线看免费视频| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 免费看光身美女| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 99视频精品全部免费 在线| 日本一二三区视频观看| 欧美+亚洲+日韩+国产| 首页视频小说图片口味搜索| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| xxx96com| 露出奶头的视频| 伊人久久精品亚洲午夜| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产午夜福利久久久久久| 日韩有码中文字幕| 成人三级黄色视频| 国产在视频线在精品| 波多野结衣高清作品| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 亚洲性夜色夜夜综合| 国内精品一区二区在线观看| 国模一区二区三区四区视频| 国产爱豆传媒在线观看| 成年女人毛片免费观看观看9| 草草在线视频免费看| 国产精品一区二区免费欧美| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 激情在线观看视频在线高清| 亚洲最大成人手机在线| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 色精品久久人妻99蜜桃| 麻豆久久精品国产亚洲av| 熟女人妻精品中文字幕| 免费看a级黄色片| 亚洲avbb在线观看| 一二三四社区在线视频社区8| 9191精品国产免费久久| 欧美成人a在线观看| 亚洲一区二区三区色噜噜| 亚洲人与动物交配视频| 91av网一区二区| 天堂影院成人在线观看| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 伊人久久精品亚洲午夜| 禁无遮挡网站| 亚洲精品一区av在线观看| 欧美一级毛片孕妇| 欧美黄色片欧美黄色片| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 国产成人福利小说| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 精品免费久久久久久久清纯| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 熟女人妻精品中文字幕| 欧美在线黄色| 黑人欧美特级aaaaaa片| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产黄片美女视频| 在线观看免费午夜福利视频| 五月伊人婷婷丁香| 欧美一级a爱片免费观看看| 乱人视频在线观看| 亚洲专区国产一区二区| 无人区码免费观看不卡| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 怎么达到女性高潮| 51午夜福利影视在线观看| 日韩中文字幕欧美一区二区| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 男人舔女人下体高潮全视频| 免费在线观看日本一区| а√天堂www在线а√下载| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 成年免费大片在线观看| 免费电影在线观看免费观看| 中文字幕av在线有码专区| 色播亚洲综合网| 免费在线观看影片大全网站| 又爽又黄无遮挡网站| 免费电影在线观看免费观看| 中文字幕久久专区| 观看美女的网站| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产日本99.免费观看| 久久久成人免费电影| 九色国产91popny在线| 久久久久久大精品| 在线观看66精品国产| 国产美女午夜福利| 国产高清激情床上av| 国产伦精品一区二区三区四那| 99国产精品一区二区蜜桃av| 身体一侧抽搐| 女人被狂操c到高潮| 午夜免费观看网址| 久久久久免费精品人妻一区二区| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 日韩精品青青久久久久久| 午夜福利成人在线免费观看| 变态另类丝袜制服| 老司机在亚洲福利影院| 成人性生交大片免费视频hd| av欧美777| 国产激情欧美一区二区| 啪啪无遮挡十八禁网站| 91久久精品电影网| 亚洲avbb在线观看| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 网址你懂的国产日韩在线| 日韩有码中文字幕| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 可以在线观看毛片的网站| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国产精品久久久久久久久免 | 观看美女的网站| 999久久久精品免费观看国产| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国产精品一及| 欧美乱色亚洲激情| 真人一进一出gif抽搐免费| 欧美av亚洲av综合av国产av| 一级毛片女人18水好多| 色播亚洲综合网| 91字幕亚洲| 高清在线国产一区| 99国产综合亚洲精品| 国产精品亚洲一级av第二区| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 丰满人妻一区二区三区视频av | 丰满乱子伦码专区| 黄色成人免费大全| av片东京热男人的天堂| 亚洲精品色激情综合| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产淫片久久久久久久久 | 国产精品一区二区三区四区久久| 757午夜福利合集在线观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 一区福利在线观看| 成人精品一区二区免费| 国产精品久久视频播放| 久久欧美精品欧美久久欧美| 九色国产91popny在线| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 日本三级黄在线观看| 90打野战视频偷拍视频| 欧美日韩综合久久久久久 | 51午夜福利影视在线观看| 91久久精品电影网| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| av在线天堂中文字幕| 国产午夜福利久久久久久| 午夜福利成人在线免费观看| 久久久久久大精品| 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲av不卡在线观看| 久久久久久久午夜电影| 全区人妻精品视频| 少妇的丰满在线观看| 长腿黑丝高跟| 精品福利观看| 桃色一区二区三区在线观看| 老汉色av国产亚洲站长工具| 欧美不卡视频在线免费观看| 国产日本99.免费观看| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 精品福利观看| 色视频www国产| 亚洲18禁久久av| 成人国产综合亚洲| 亚洲欧美激情综合另类| 在线免费观看的www视频| 欧美激情久久久久久爽电影| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 黄片小视频在线播放| 日本熟妇午夜| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 在线免费观看的www视频| 婷婷亚洲欧美| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 亚洲av成人av| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频|