胰腺癌小鼠模型研究進(jìn)展

苗晉鑫,張鐘允,王崢,宋韶鶴

(1.河南中醫(yī)藥大學(xué) 中醫(yī)藥科學(xué)院,鄭州 450000;2.河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院 藥學(xué)部,鄭州 450000)

胰腺癌是最致命的人類惡性腫瘤之一,發(fā)病率在全球范圍內(nèi)各不相同,但總體卻逐年上升。 胰腺導(dǎo)管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)占所有胰腺惡性腫瘤的85%以上,預(yù)計(jì)到2030 年成為癌癥相關(guān)死亡的第二大原因[1]。 盡管手術(shù)技術(shù)和輔助治療取得了進(jìn)步,但是胰腺癌5 年生存率仍約為9%[2]。 需要開發(fā)早期檢測(cè)方法和有效治療方法來改善胰腺癌患者預(yù)后。 研究胰腺癌發(fā)病機(jī)制、轉(zhuǎn)移及藥物評(píng)價(jià)對(duì)改善胰腺癌患者預(yù)后至關(guān)重要。胰腺癌小鼠模型是研究人類胰腺癌發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移、藥物開發(fā)和治療方式的常用體內(nèi)模型。 胰腺癌小鼠模型主要分為誘導(dǎo)模型、移植瘤模型、基因工程模型。 我們?cè)凇吨袊?guó)比較醫(yī)學(xué)雜志》和《中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)》發(fā)表結(jié)直腸癌、黑色素瘤、食管癌一系列腫瘤小鼠模型的分類[3-5]。 這些類型的腫瘤小鼠模型是研究人員經(jīng)常選擇的動(dòng)物模型,但是沒有一種模型能概況胰腺癌發(fā)生發(fā)展及評(píng)價(jià)藥物與治療方法,需要根據(jù)特定研究目的選擇適宜的胰腺癌小鼠模型。 本文旨在介紹常用胰腺癌小鼠模型方法、特征及用途等方面,比較優(yōu)缺點(diǎn),為胰腺癌研究提供理論依據(jù)。

1 誘導(dǎo)性胰腺癌模型

誘導(dǎo)性胰腺癌小鼠模型多為致癌因素對(duì)小鼠的胰腺直接或間接接觸,使胰腺發(fā)生癌變形成胰腺癌小鼠模型。 化學(xué)藥物誘導(dǎo)小鼠模型是通過化學(xué)致癌物使小鼠胰腺細(xì)胞發(fā)生惡變引起胰腺癌。 亞硝胺類致癌物是胰腺癌誘發(fā)致癌物,我們?cè)谑彻馨┪恼轮幸呀?jīng)說明亞硝胺類化學(xué)物不在用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。 因此,N-亞硝基-2-氧基丙胺不再闡述,本文介紹二甲基苯并蒽(dimethyl benz anthracene,DMBA)、重氮乙酰絲氨酸(o-diazoacetyl-L-serine,AZA)在小鼠中的應(yīng)用。

Osvaldt 等[6]將1 mg 的DMBA 注射到雄性CF-1小鼠的近端胰腺,建立原位胰腺癌小鼠模型。 該模型組織病理顯示,17%的小鼠具有反應(yīng)性增生和腺癌, 67% 具有胰腺腺管內(nèi)上皮瘤( pancreatic intraepithelial neoplasia,PanIN)病變。 另外研究人員利用AZA 每天1 次的灌胃或腹腔注射C57BL/6 小鼠3 周建立PanIN 小鼠模型用于研究高脂肪飲食改變了腸道微生物群的組成,并參與AZA 致癌物誘導(dǎo)的胰腺癌進(jìn)展[7]。 研究發(fā)現(xiàn)DMBA 或AZA 誘導(dǎo)的胰腺癌小鼠模型可產(chǎn)生PanIN 病變和導(dǎo)管腺癌,其組織學(xué)與人類胰腺癌相似[6-7]。 但是,誘導(dǎo)的周期長(zhǎng)、死亡率高、不能全部成瘤,并可引起其他部位腫瘤且誘導(dǎo)時(shí)間長(zhǎng)短與病灶發(fā)展關(guān)系不明確,限制了該模型的應(yīng)用。

2 移植性胰腺癌模型

移植性胰腺癌模型是用胰腺癌細(xì)胞系或胰腺癌組織(人或動(dòng)物)移植到小鼠體內(nèi)形成的移植性胰腺癌模型。 根據(jù)移植位置,可分為異位移植和原位移植;根據(jù)移植物供體與受體間的關(guān)系,可分為同種移植和異位移植。 我們根據(jù)移植位置和移植物來源進(jìn)行動(dòng)物模型總結(jié)分析。

2.1 胰腺癌的異位移植模型

異位移植模型是將體外培養(yǎng)的胰腺癌細(xì)胞或胰腺癌組織接種到同原發(fā)部位不相關(guān)的動(dòng)物皮下[8]。 異位(皮下瘤)模型操作簡(jiǎn)單、接種成活率高,監(jiān)測(cè)腫瘤方便且模型重復(fù)性好,是臨床前常用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蚚9]。 然而,皮下瘤在形態(tài)、血管密度、免疫細(xì)胞浸潤(rùn)和腫瘤微環(huán)境與內(nèi)臟腫瘤不同,同時(shí)皮下瘤極少發(fā)生轉(zhuǎn)移,與人類腫瘤生物學(xué)特性有差異[10]。

2.1.1 同種移植皮下模型

將小鼠胰腺癌細(xì)胞植入相同品系小鼠皮下制備同種移植皮下模型。 同種移植腫瘤細(xì)胞,腫瘤具有較短潛伏期和可靠的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué),同時(shí)該模型具有免疫系統(tǒng)的完整性,是研究免疫治療和靶點(diǎn)治療的很好模型。 研究人員將1 × 106cells/100 μL Panc02 小鼠胰腺癌細(xì)胞注射C57BL/6 小鼠皮下,成功建立有完全免疫能力的胰腺癌小鼠模型,評(píng)估PD-1 抗體和OX40 抗體聯(lián)合PancVAX 疫苗可有效抗胰腺癌[11]。 Hy15549 和Han4.13 小鼠胰腺癌細(xì)胞系來自Ptf1-Cre;LSL-KRAS-G12D;p53Lox/+小鼠原發(fā)性胰腺腫瘤,分別與C57BL/6 和FVB 小鼠品系同源。 Erstad 等[12]將1×104cells/100 μL Hy15549和Han4.13 小鼠胰腺癌細(xì)胞分別注射C57BL/6 小鼠和FVB 小鼠腹側(cè)皮下和胰腺原位。 同種原位比皮下腫瘤生長(zhǎng)得更快、更大,同時(shí)利用兩種小鼠模型評(píng)估FOLFIRINOX 治療效果。 MPC-83 小鼠胰腺癌細(xì)胞是我國(guó)建立的第一株小鼠可移植性胰腺腺泡細(xì)胞癌株,其瘤源來自昆明種小鼠[13]。 研究者通過MPC-83 建立皮下移植瘤發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞介素-6 明顯促進(jìn)胰腺腫瘤細(xì)胞的增殖生長(zhǎng)作用[14]。

2.1.2 異種移植皮下模型

將人胰腺癌細(xì)胞或組織植入免疫缺陷小鼠皮下制備異種移植皮下模型。 此類模型常選用免疫缺陷小鼠如裸鼠、NOD-SCID 和NSG 小鼠。 人源細(xì)胞異種移植(cell line derived xenograft,CDX)模型和患者腫瘤組織異種移植(patient derived xenograft,PDX) 模型在腫瘤模型研究中廣泛應(yīng)用。 Conti等[15]將4×106cells/100 μL PaCa44 人胰腺癌細(xì)胞皮下注射CD1 裸鼠腹部右側(cè),成功構(gòu)建胰腺癌CDX模型,用于評(píng)估HFt-MP-PASE-MIT 納米制劑的療效和副作用。 將患者來源的原代胰腺癌細(xì)胞注射或胰腺癌組織塊植入到免疫低下的小鼠體內(nèi),建立胰腺癌異種移植模型。 研究者將患者胰腺癌組織塊皮下植入6 周的NOD-SCID 小鼠,成功建立胰腺癌PDX 小鼠模型[16]。 使用這種腫瘤塊植入的方法能更多的保留人類腫瘤基質(zhì)成分(10 代以內(nèi)),而原代細(xì)胞移植則沒有此特征。 基于此胰腺癌PDX 模型開發(fā)了核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)顯微鏡跟蹤放射性標(biāo)記的丙酮酸在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為乳酸鹽的過程的生物標(biāo)志物,以確定可用于臨床的胰腺腫瘤侵襲性。 商品化和患者原代胰腺癌細(xì)胞系生成的CDX 模型缺乏原發(fā)性胰腺腫瘤的腫瘤細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞異質(zhì)性,PDX 模型解決了CDX 模型的局限性,且應(yīng)用于臨床前藥物評(píng)價(jià)(表1)。

表1 PDX 模型評(píng)估PDAC 藥物療效的臨床前研究Table 1 Preclinical study of PDX model to evaluate the efficacy of PDAC drugs

類器官作為一種新型體外研究系統(tǒng),可高度模擬體內(nèi)組織、器官生物學(xué)特性,可用于不同組織和器官生理、病理及藥物作用的過程研究[23]。 常用方法是首先將獲得患者胰腺癌組織切碎,然后利用消化液將胰腺細(xì)胞消化分散,并與含有生長(zhǎng)因子和調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基一起置于基質(zhì)(膠原蛋白或基質(zhì)膠)中培養(yǎng),細(xì)胞在2 d 內(nèi)形成器官樣結(jié)構(gòu)[24]。 Seino等[25]利用CRISPR/Cas9 系統(tǒng)對(duì)導(dǎo)管類器官進(jìn)行了PDAC 驅(qū)動(dòng)基因(Kras、Cdkn2a、Smad4 和Tp53)編輯,編輯后的導(dǎo)管類器官種移植于BALB/c 裸鼠皮下,建立同人類基因的PDAC 小鼠模型。 結(jié)果發(fā)現(xiàn),編輯后4 個(gè)基因類器官形成的腫瘤細(xì)示核異型性和腫瘤出芽,這與PDAC 組織學(xué)相似。

2.2 胰腺癌的原位植入模型

原位胰腺癌模型是通過胰腺原位注射細(xì)胞懸液或胰腺腫瘤細(xì)胞植入建立的動(dòng)物模型。 其優(yōu)勢(shì)包括可利用相關(guān)位點(diǎn)進(jìn)行腫瘤-宿主相互作用,腫瘤轉(zhuǎn)移的發(fā)展,治療的部位特異性和依賴性,基因的器官特異性表達(dá)等研究以及可復(fù)制臨床情況。但此建模方法技術(shù)難度大,價(jià)格昂貴,實(shí)驗(yàn)周期較長(zhǎng)[26]。

2.2.1 同種原位移植模型

Adjuto-Saccone 等[27]采用5×105cells/100 μL PK4A 小鼠胰腺腫瘤細(xì)胞原位注射Ink4a/Arffl/fl;LSL-KrasG12D轉(zhuǎn)基因小鼠胰腺,證明TNF-α 誘導(dǎo)小鼠胰腺腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞( cancer-associated fibroblasts,CAFs)增加,揭示了胰腺癌發(fā)展的內(nèi)皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化機(jī)制。 另一項(xiàng)研究,將1 × 106cells/100 μL DT6606 小鼠胰腺癌原位注射C57BL/6 小鼠胰腺尾,建立全免疫能力的胰腺癌小鼠模型評(píng)估VVL-21 痘苗溶瘤病毒協(xié)同PD-1 抗體增強(qiáng)抗腫瘤作用[28]。 同時(shí)該研究還利用胰腺皮下小鼠模型和胰腺原位敘利亞倉(cāng)鼠模型評(píng)價(jià)VVL-21 的抗腫瘤作用[28]。 Hwang 等[29]將PAN02 小鼠胰腺癌細(xì)胞皮下注射到裸鼠側(cè)腹制備腫瘤塊,該腫瘤塊原位植入C57BL/6 的胰尾并切除脾,建立脾切除原位同源小鼠胰腺癌模型。 結(jié)果發(fā)現(xiàn),脾切除后增強(qiáng)原位同源小鼠胰腺癌小鼠模型中腫瘤生長(zhǎng)和腹膜播散。 為提高異種移植成功率提供一種手術(shù)方法。

2.2.2 異種原位移植模型

由于胰腺是內(nèi)臟組織,將胰腺癌細(xì)胞系攜帶綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)、紅色熒光蛋白(red fluorescent protein,RFP)熒光基因或是熒光素酶等,對(duì)于原位監(jiān)測(cè)非常方便。 Moreno等[30]將50 μL 的3 × 106/mL PANC-1-GFP 細(xì)胞懸液原位注射BALB/c 裸鼠胰腺,成功建立異種原位胰腺癌小鼠模型。 熒光活體成像結(jié)果顯示,腫瘤體積隨著時(shí)間增加顯著增大,且出現(xiàn)脾、肝和胃腸道多組織轉(zhuǎn)移。 2020 年,冷泉港實(shí)驗(yàn)室的研究人員分別將5 × 104～5 × 105的人患者來源的類器官單細(xì)胞懸液注射小鼠胰腺導(dǎo)管內(nèi)和5 × 105的人患者來源的類器官單細(xì)胞懸液注射小鼠胰腺尾內(nèi),成功建立胰腺導(dǎo)管內(nèi)移植類器官(intraductal transplantation of organoids,IGO)胰腺癌小鼠模型和胰腺尾內(nèi)移植類器官胰腺癌小鼠模型[31]。 IGO 模型是將類器官單細(xì)胞懸液注射到免疫缺陷小鼠主胰腺導(dǎo)管中,該模型更好概括從導(dǎo)管系統(tǒng)內(nèi)侵襲前細(xì)胞到組織侵襲性導(dǎo)管外腫瘤伴周圍發(fā)育不全的進(jìn)展。 上述胰腺癌原位類器官移植小鼠模型模擬人類胰腺癌更相似。

3 基因工程小鼠胰腺癌模型

人類胰腺癌中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多種遺傳基因、表觀遺傳基因異常。 抑癌基因和致癌基因的異常突變導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[32]。 通過引入特定的致癌基因突變、滅活抑癌基因?qū)π∈筮M(jìn)行基因修飾建立胰腺癌基因工程小鼠模型。 基因工程小鼠對(duì)胰腺癌基因組分析確定分子亞型評(píng)估對(duì)胰腺癌的生物學(xué)和病理學(xué)影響。 此外,基因工程小鼠模型為臨床前靶向治療和新型免疫療法提供可靠的評(píng)價(jià)工具。多種此類基因工程小鼠模型用于研究胰腺上皮內(nèi)皮瘤變和胰腺癌[33]。 由于Kras 突變不足以誘導(dǎo)進(jìn)展到胰腺腺癌的侵襲期,因此多基因的轉(zhuǎn)基因小鼠PDAC 和轉(zhuǎn)移性疾病的組合模型開發(fā)并用于臨床前研究。 常見基因工程小鼠模型基于Kras 突變和其他基因缺失或突變修飾,本文主要介紹目前常用的幾種小鼠模型。

3.1 PDX-1-Cre,LSL-KrasG12D,LSL-Trp53R172H/-轉(zhuǎn)基因小鼠

Hingorani 等[34]建立靶向PDX-1-Cre 小鼠胰腺同時(shí)表達(dá)KrasG12D和Trp53R172H的轉(zhuǎn)基因小鼠。 8 ～10 周 齡PDX-1-Cre、LSL-KrasG12D、LSL-Trp53R172H/-(KPC)小鼠呈現(xiàn)早期PanIN 病變,10 周齡以后小鼠發(fā)生胰腺癌,同時(shí)顯示出與人類疾病相似的臨床特征(惡病質(zhì)、腸和膽道阻塞、出血性腹水),且在12個(gè)月前死亡。 組織病理學(xué)顯示與人類相似,免疫組化表達(dá)CK19,肝和肺的轉(zhuǎn)移與胰腺原發(fā)灶相似。 研究人員利用KPC 小鼠研究PDAC 的發(fā)展進(jìn)程和評(píng)價(jià)免疫治療藥物[35]。 KPC 模型是研究PDAC 最多的基因工程小鼠模型之一。

3.2 PDX1-Cre,KrasG12D,Ink4a/Arfflox/flox 轉(zhuǎn)基因小鼠

患者胰腺腫瘤經(jīng)常INK4A 缺失,但是Ink4a/Arf (Cdkn2a)基因座的兩個(gè)或任何一個(gè)組成部分缺失的小鼠不會(huì)自發(fā)性胰腺癌[36]。 Aguirre 等[37]首先使用Cre 介導(dǎo)的突變 Kras (KrasG12D)激活和條件性Ink4/Arf 腫瘤抑制等位基因缺失建立3 基因的轉(zhuǎn)基因小鼠。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)小鼠在7 ～ 11 周齡時(shí)出現(xiàn)體重減輕、腹水、黃疸、腹部出現(xiàn)腫塊以及垂死等癥狀。組織病理結(jié)果顯示,初期可檢測(cè)到PanIN-1 病變,12周則出現(xiàn)導(dǎo)管病變,腫瘤小鼠腺體形態(tài)與人胰腺導(dǎo)管腺癌相似。 此模型概括了多種惡行腫瘤及胰腺癌經(jīng)典特征,可用于開發(fā)抑制腫瘤惡性生長(zhǎng)的分子靶向治療。

3.3 其他

胰腺癌有超過30 種不同的轉(zhuǎn)基因小鼠模型且具有不同的表型[38]。 基于Kras 突變的轉(zhuǎn)基因小鼠已通過p53、Mist、Smad4、TGFβ基因的缺失或突變進(jìn)行修飾獲得胰腺癌轉(zhuǎn)基因小鼠模型[39-41]。 另外一些遺傳性胰腺癌綜合征小鼠模型是一個(gè)或多個(gè)基因突變,如Brca2 突變小鼠在胰腺癌轉(zhuǎn)基因的背景下表型差異很大[42]。

4 胰腺癌小鼠模型的優(yōu)缺點(diǎn)

胰腺癌小鼠模型在胰腺癌發(fā)生、發(fā)展、分子機(jī)制和治療研究中起著至關(guān)重要的作用。 3 種不同類型胰腺癌小鼠模型有各自模擬人類胰腺癌特征(表2)。 誘導(dǎo)性小鼠模型常用于研究PanIN 病變過程和導(dǎo)管腺癌。 皮下移植的胰腺癌小鼠模型成瘤重復(fù)性好和測(cè)量方便,用于評(píng)估瘤生長(zhǎng)及藥物療效,但極少發(fā)生轉(zhuǎn)移,且測(cè)試藥物反應(yīng)時(shí)與人原腫瘤部位可能不一致。 原位植入的胰腺癌小鼠模型概括了胰腺癌原位發(fā)生及轉(zhuǎn)移特征,尤其是類器官原位移植小鼠模型,多用于評(píng)估抗腫瘤及轉(zhuǎn)移藥物。 同種移植胰腺癌小鼠模型由于有全免疫,多用于免疫治療。 基因工程小鼠可用于探究胰腺癌相關(guān)基因在疾病中的機(jī)制作用及用于研究新療法(新型免疫療法)并評(píng)估預(yù)防癌癥策略,但靶向胚胎的胰腺基因激活或失活以啟動(dòng)腫瘤發(fā)生,這與人類胰腺腫瘤的發(fā)展仍有區(qū)別。 不同胰腺癌小鼠模型的特征可用于不同實(shí)驗(yàn)研究,選擇合適的小鼠模型很重要。由于小鼠代謝與人類相差較大,提示我們可構(gòu)建人源化小鼠用于胰腺癌的研究。 總之,胰腺癌小鼠模型為胰腺癌的研究提供理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。

表2 胰腺癌小鼠模型的優(yōu)缺點(diǎn)Table 2 Advantages and disadvantages of pancreatic cancer mouse models

參 考 文 獻(xiàn)(References)

[ 1] Park W, Chawla A, O’Reilly EM. Pancreatic cancer: a review[J]. JAMA, 2021, 326(9): 851-862.

[ 2] Alhobayb T, Peravali R, Ashkar M. The relationship between acute and chronic pancreatitis with pancreatic adenocarcinoma:review [J]. Diseases, 2021, 9(4):93.

[ 3] 宋韶鶴, 苗晉鑫, 王崢, 等. 食管癌小鼠模型研究進(jìn)展 [J].中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志, 2021, 31(7): 140-146.Song SH, Miao JX, Wang Z, et al. Advances in mouse of esophageal cancer [J]. Clin J Comp Med, 2021, 31(7): 140-146.

[ 4] 王崢, 苗晉鑫. 黑色素瘤小鼠模型研究進(jìn)展 [J]. 中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志, 2021, 31(2): 120-127.Wang Z, Miao JX. [J]. The current state of mouse modeling in melanoma research [J]. Clin J Comp Med, 2021, 31(2): 120-127.

[ 5] 苗晉鑫, 宋韶鶴, 李秀敏. 結(jié)直腸癌小鼠模型研究進(jìn)展 [J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào), 2020, 28(2): 267-272.Miao JX, Song SH, Li XM. Advances in mouse models of colorectal cancer [J]. Acta Lab Anim Sci Sin, 2020, 28(2):267-272.

[ 6] Osvaldt AB, Wendt LR, Bersch VP, et al. Pancreatic intraepithelial neoplasia and ductal adenocarcinoma induced by dmba in mice [J]. Surgery, 2006, 140(5): 803-809.

[ 7] Liu B, Wang F, Chen L, et al. Effects of high-fat diet on carcinogen-induced pancreatic cancer and intestinal microbiota in C57BL/6 wild-type mice [J]. Pancreas, 2021, 50(4):564-570.

[ 8] Garcia PL, Miller AL, Yoon KJ. Patient-derived xenograft models of pancreatic cancer: overview and comparison with other types of models [J]. Cancers(Basel), 2020, 12(5): 1327.

[ 9] Kong K, Guo M, Liu Y, et al. Progress in animal models of pancreatic ductal adenocarcinoma [J]. J Cancer, 2020, 11(6):1555-1567.

[10] Bisht S, Feldmann G. Animal models for modeling pancreatic cancer and novel drug discovery [J]. Expert Opin Drug Discov,2019, 14(2): 127-142.

[11] Kinkead HL, Hopkins A, Lutz E, et al. Combining sting-based neoantigen-targeted vaccine with checkpoint modulators enhances antitumor immunity in murine pancreatic cancer [ J]. JCI Insight, 2018, 3(20): e122857.

[12] Erstad DJ, Sojoodi M, Taylor MS, et al. Orthotopic and heterotopic murine models of pancreatic cancer and their different responses to folfirinox chemotherapy [J]. Dis Model Mech,2018, 11(7): dmm034793.

[13] 胡美英, 梁明達(dá), 賈偉, 等. 小鼠可移植性胰腺腺泡細(xì)胞癌株(MPC-83)的建立及其特性研究 [J]. 中華腫瘤雜志,1986, 8(1): 1-3.Hu MY, Liang MD, Jia W, et al. Establishment and characteristics of a mouse transplantable pancreatic acinar cell carcinoma line (MPC-83) [J]. Chin J Oncol, 1986, 8(1):1-3.

[14] 馬永超, 杜曉鵑, 李海龍, 等. 白細(xì)胞介素-6 對(duì)胰腺癌荷瘤小鼠移植瘤生長(zhǎng)及Caspase-3/Bax/Bcl-2 信號(hào)通路的影響[J].解剖學(xué)報(bào), 2020, 51(2): 216-219.Ma YC, Du XJ, Li HL, et al. Tumorigenic effect of interleukin-6 on mice with pancreatic carcinoma via regulating the Caspase-3/Bax/Bcl-2 signaling pathway [J]. Acta Anat Sin, 2020, 51(2): 216-219.

[15] Conti G, Pitea M, Ossanna R, et al. Mitoxantrone-loaded nanoferritin slows tumor growth and improves the overall survival rate in a subcutaneous pancreatic cancer mouse model [J].Biomedicines, 2021, 9(11): 1622.

[16] Dutta P, Perez MR, Lee J, et al. Combining hyperpolarized real-time metabolic imaging and nmr spectroscopy to identify metabolic biomarkers in pancreatic cancer [J]. J Proteome Res,2019, 18(7): 2826-2834.

[17] Jimeno A, Rubio-Viqueira B, Rajeshkumar NV, et al. A fineneedle aspirate-based vulnerability assay identifies polo-like kinase 1 as a mediator of gemcitabine resistance in pancreatic cancer [J]. Mol Cancer Ther, 2010, 9(2): 311-318.

[18] Venkatesha VA, Parsels LA, Parsels JD, et al. Sensitization of pancreatic cancer stem cells to gemcitabine by CHK1 inhibition[J]. Neoplasia, 2012, 14(6): 519-525.

[19] Gao H, Korn JM, Ferretti S, et al. High-throughput screening using patient-derived tumor xenografts to predict clinical trial drug response [J]. Nat Med, 2015, 21(11): 1318-1325.

[20] Garcia PL, Miller AL, Kreitzburg KM, et al. The BET bromodomain inhibitor jq1 suppresses growth of pancreatic ductal adenocarcinoma in patient-derived xenograft models [ J].Oncogene, 2016, 35(7): 833-845.

[21] Lohse I, Mason J, Cao PM, et al. Activity of the novel polo-like kinase 4 inhibitor CFI-400945 in pancreatic cancer patientderived xenografts [J]. Oncotarget, 2017, 8(2): 3064-3071.

[22] Miller AL, Fehling SC, Garcia PL, et al. The bet inhibitor jq1 attenuates double-strand break repair and sensitizes models of pancreatic ductal adenocarcinoma to parp inhibitors [ J].EBioMedicine, 2019, 44: 419-430.

[23] Fujii M, Clevers H, Sato T. Modeling human digestive diseases with CRISPR-CAS9-modified organoids [J]. Gastroenterology,2019, 156(3): 562-576.

[24] Tiriac H, Bucobo JC, Tzimas D, et al. Successful creation of pancreatic cancer organoids by means of eus-guided fine-needle biopsy sampling for personalized cancer treatment [ J ].Gastrointest Endosc, 2018, 87(6): 1474-1480.

[25] Seino T, Kawasaki S, Shimokawa M, et al. Human pancreatic tumor organoids reveal loss of stem cell niche factor dependence during disease progression [J]. Cell stem cell, 2018, 22(3):454-467.

[26] Boj SF, Hwang CI, Baker LA, et al. Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer [J]. Cell, 2015, 160(1-2): 324-338.

[27] Adjuto-Saccone M, Soubeyran P, Garcia J, et al. TNF-α induces endothelial-mesenchymal transition promoting stromal development of pancreatic adenocarcinoma [J]. Cell Death Dis,2021, 12(7): 649.

[28] Marelli G, Chard Dunmall LS, Yuan M, et al. A systemically deliverable vaccinia virus with increased capacity for intertumoral and intratumoral spread effectively treats pancreatic cancer [J].J Immunother Cancer, 2021, 9(1): e001624.

[29] Hwang HK, Murakami T, Kiyuna T, et al. Splenectomy is associated with an aggressive tumor growth pattern and altered host immunity in an orthotopic syngeneic murine pancreatic cancer model [J]. Oncotarget, 2017, 8(51): 88827-88834.

[30] Moreno JA, Sanchez A, Hoffman RM, et al. Fluorescent orthotopic mouse model of pancreatic cancer [J]. J Vis Exp,2016, 9(115): 54337.

[31] Miyabayashi K, Baker LA, Deschênes A, et al. Intraductal transplantationmodelsofhumanpancreaticductal adenocarcinoma revealprogressivetransition ofmolecular subtypes[J].CancerDiscov,2020,10(10):1566-1589.

[32] Orth M, Metzger P, Gerum S, et al. Pancreatic ductal adenocarcinoma: biological hallmarks, current status, and future perspectives of combined modality treatment approaches [J].Radiat Oncol, 2019, 14(1): 141.

[33] Herreros-Villanueva M, Hijona E, Cosme A, et al. Mouse models of pancreatic cancer [J]. World J Gastroenterol, 2012,18(12): 1286-1294.

[34] Hingorani SR, Wang L, Multani AS, et al. Trp53r172h and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice [J].Cancer Cell, 2005, 7(5): 469-483.

[35] Principe DR, Narbutis M, Kumar S, et al. Long-term gemcitabinetreatmentreshapesthepancreatictumor microenvironment and sensitizes murine carcinoma to combination immunotherapy [J]. Cancer Res, 2020, 80(15): 3101-3115.

[36] Sharpless NE, Bardeesy N, Lee KH, et al. Loss of p16InK4a with retention of p19ArF predisposes mice to tumorigenesis [J].Nature, 2001, 413(6851): 86-91.

[37] Aguirre AJ, Bardeesy N, Sinha M, et al. Activated kras and InK4A/ArF deficiency cooperate to produce metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma [J]. Genes Dev, 2003, 17(24): 3112-3126.

[38] Weidenhofer J, Colvin EK, Bond DR, et al. Animal models of pancreatic cancer and their application in clinical research [J].Gastro Cancer Tar Ther, 2016, 6: 31-39.

[39] Tuveson DA, Zhu L, Gopinathan A, et al. Mist1-KrasG12D knock-in mice develop mixed differentiation metastatic exocrine pancreatic carcinoma and hepatocellular carcinoma [J]. Cancer Res, 2006, 66(1): 242-247.

[40] Kojima K, Vickers SM, Adsay NV, et al. Iinactivation of Smad4 accelerates Kras(G12D)-mediated pancreatic neoplasia [J].Cancer Res, 2007, 67(17): 8121-8130.

[41] Ijichi H, Chytil A, Gorska AE, et al. Aggressive pancreatic ductal adenocarcinoma in mice caused by pancreas-specific blockade of transforming growth factor-β signaling in cooperation with active Kras expression [J]. Genes Dev, 2006, 20(22):3147-3160.

[42] Cassidy LD, Liau SS, Venkitaraman AR. Chromosome instability and carcinogenesis: insights from murine models of human pancreatic cancer associated with BRCA2 inactivation [J]. Mol Oncol, 2014, 8(2): 161-168.