模式生物斑馬魚在植物多糖生物活性評價中的應(yīng)用進展

尹娜,陳秋燕,王瑞芳,齊景偉,王園

(1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學動物科學學院,呼和浩特 010018;2.內(nèi)蒙古自治區(qū)草食家畜飼料工程技術(shù)研究中心,呼和浩特010018)

植物多糖(plant polysaccharides,PP)是由相同或者不同的單糖通過α-或者β-糖苷鍵組成的聚合度10 以上的化合物[1]。 隨著分子生物學的發(fā)展,科學界逐漸認識到,多糖與蛋白質(zhì)、核酸并列為3 大生物大分子,在植物體的生長發(fā)育過程中發(fā)揮著重要作用[2]。 同時,因其具有抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、降血脂、降血糖、抗腫瘤等生物功能[3-6],被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、飼料、保健品和化妝品行業(yè)。 我國中草藥資源豐富,越來越多來源于中草藥的植物多糖被應(yīng)用于食品行業(yè),但仍存在如何快捷有效鑒別其生物活性并評價安全性的問題。

國際上公認的植物多糖生物活性評價方法有體內(nèi)、外兩種。 體外試驗可以更經(jīng)濟且更快的得到結(jié)論,但在不能確定植物多糖體內(nèi)吸收、分布、代謝和排泄的規(guī)律時,進行以模式動物開展的體內(nèi)試驗是非常有必要。 斑馬魚具有遺傳同源性高、繁殖力強、發(fā)育快及透明易觀察等特點,繼大鼠和小鼠之后,被美國國家衛(wèi)生研究院(National Institutes of Health,NIH)列為第三大模式動物,已在藥物研發(fā)、藥理毒理學領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。 近年來,植物多糖的研發(fā)和應(yīng)用已成為食品領(lǐng)域研究的重點和熱點,模式生物斑馬魚在植物多糖生物活性評價方面得到了一定程度的應(yīng)用。 因此,本文綜述了斑馬魚模型在植物多糖生物活性評價中的應(yīng)用進展。

1 斑馬魚在植物多糖生物活性評價中的優(yōu)勢

斑馬魚作為一種脊椎動物模型,已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于發(fā)育生物學、藥物開發(fā)、安全藥理學、毒理學及人類疾病模型的構(gòu)建等研究領(lǐng)域[7]。 與其他哺乳類模式動物相比,斑馬魚具有以下獨特的生物學特性:在實驗室條件下斑馬魚可以實現(xiàn)全年產(chǎn)卵,雌性斑馬魚每周可產(chǎn)數(shù)百枚卵,具有很強的繁殖能力;斑馬魚胚胎發(fā)育極快,在受精后13 hpf(hours post tertilization, hpf)頭部形成,24 hpf 尾部形成,在36 hpf時出現(xiàn)所有器官的前體,并且3 個月后成魚就可以達到生殖成熟期[8];斑馬魚與人類的遺傳同源性高達87%[9],并且具有遺傳可操作與再生能力[10],這使得斑馬魚成為近年來研究脊椎動物胚胎發(fā)育及造血分化的動物模型[11];斑馬魚胚胎及幼魚透明便于觀察;給藥方式多樣,最常見的方法是將化合物直接添加到培養(yǎng)斑馬魚胚胎、幼蟲或成魚的培養(yǎng)基或水中[12];此外,還可以將不溶性物質(zhì)納入飼料中,以制備直徑為5 mm 的顆粒飼喂斑馬魚[13];口服灌胃和注射可用于輸送精確劑量的溶液(圖1)[14-15]。

2 斑馬魚及其胚胎在植物多糖功能測定中的應(yīng)用

在過去的20 年里,斑馬魚因其生物學優(yōu)勢,逐漸成為生物和生物醫(yī)學研究的最佳模式動物之一。雖然斑馬魚最初是作為發(fā)育遺傳學的模型而被開發(fā),但是它的用途已迅速擴展到植物多糖的多種生物活性研究中。

2.1 抗氧化活性

斑馬魚作為被廣泛應(yīng)用的抗氧化模型,通常采用偶氮二異丁脒鹽酸鹽(2, 2’-Azobis (2-methylpropionamidine )dihydrchloride, AAPH )、H2O2、百草枯、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)等處理誘導(dǎo)產(chǎn)生氧化應(yīng)激,并產(chǎn)生包括活性氧(reactive oxygen species,ROS)和NO-在內(nèi)的自由基。 ROS 是斑馬魚體內(nèi)代謝的產(chǎn)物,可以被特異性的染料檢測,加上斑馬魚胚胎透明的特點使得檢測結(jié)果更加明顯,用斑馬魚體內(nèi)ROS 檢測模型檢測ROS 水平具有可靠、快速、高效、經(jīng)濟和高通量等優(yōu)點[16]。 植物多糖作為天然存在的有效成分,常被用作食品添加劑。 多糖分子上存在的還原性半醛羥基,可以與超氧陰離子自由基發(fā)生氧化還原反應(yīng),去除脂質(zhì)過氧化反應(yīng)產(chǎn)生的多余ROS。 如圖2 所示,用2’,7’-二 氯 熒 光 黃 雙 乙 酸 ( 2 ’, 7 ’-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)預(yù)處理斑馬魚幼魚在熒光顯微鏡下為綠色,熒光強度弱說明斑馬魚體內(nèi)ROS 產(chǎn)生少。 Wang 等[17]利用柑橘果渣制備其水提物,并研究了其體內(nèi)抗氧化活性,結(jié)果發(fā)現(xiàn),柑橘果渣水提物可顯著提高AAPH 誘導(dǎo)的斑馬魚胚胎存活率并緩解心率,降低斑馬魚胚胎的ROS和細胞死亡水平。 同樣,Kang 等[18]研究發(fā)現(xiàn),與AAPH 誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激模型組相比,蘆薈多糖的預(yù)暴露可顯著降低斑馬魚胚胎的ROS 水平和細胞死亡率,且呈劑量依賴性。 Jayawardena 等[19]利用分離純化后的巖藻多糖(F10)對LPS 處理的斑馬魚模型進行研究,結(jié)果表明F10 有效降低了LPS 誘導(dǎo)產(chǎn)生的斑馬魚胚胎中的NO-、ROS 和細胞死亡水平且呈現(xiàn)劑量依賴性,同時斑馬魚胚胎中的炎性介質(zhì)一氧化氮合酶、誘生型環(huán)氧化酶均被下調(diào)。 對于高離子輻射引起的斑馬魚氧化應(yīng)激而言,植物多糖同樣具有緩解作用。 Lee 等[20]研究發(fā)現(xiàn)鐵釘菜多糖對γ射線誘導(dǎo)斑馬魚產(chǎn)生氧化應(yīng)激的影響,研究顯示鐵釘菜多糖可以增加斑馬魚存活率,減少卵黃囊水腫及尾巴彎曲等畸形,同時也減少了斑馬魚細胞死亡率、ROS 和NO-產(chǎn)生率。

2.2 免疫調(diào)節(jié)活性

研究發(fā)現(xiàn),斑馬魚盡管沒有淋巴結(jié)但是卻有豐富的淋巴和發(fā)達的胸導(dǎo)管,并且斑馬魚與哺乳動物的免疫系統(tǒng)有著極大的相似性[21],同樣具有天然免疫系統(tǒng)和獲得性免疫系統(tǒng)。 在出生后2 周內(nèi)建立和發(fā)育完全透明的斑馬魚胚胎,以及可用免疫細胞熒光標記的轉(zhuǎn)基因斑馬魚系的發(fā)展,使得跟蹤斑馬魚胚胎這一種完整生物體的免疫反應(yīng)成為可能[22]。 據(jù)報道,腫瘤壞死因子-α(TNF-α)是免疫系統(tǒng)中的一個重要媒介,通過激活巨噬細胞,刺激細胞因子的分泌來誘導(dǎo)先天免疫反應(yīng)[23]。先前研究發(fā)現(xiàn),大多數(shù)來自植物、動物和真菌的多糖可與巨噬細胞表面受體結(jié)合,刺激TNF-α 的分泌[24-26]。 Zhang 等[27]利用斑馬魚證實了從芒果中分離出的GMP90-1 按50、100、200 μg/mL 給藥24 h 后發(fā)現(xiàn)TNF-α 的水平以劑量依賴的方式明顯增 加, 分 別 比 對 照 組 高 出 5.6%、 41.7% 和200.1%,其他關(guān)于免疫功能基因白介素-6 和白介素-1β 的水平也成劑量依賴性增加。 Udayangani等[28]將從燕麥中提取的納米級β-葡聚糖可以上調(diào)斑馬魚幼魚的TNF-α、白介素-1、β-防御素、溶菌酶、白介素-10 及白介素-12 等,發(fā)現(xiàn)其可能具有觸發(fā)先天性免疫的能力。 同時還有其他研究證實從大冬青葉[29]、金銀花和山竹中分離出來的多糖同樣也具有提高免疫調(diào)節(jié)的能力[30-31]。

總之,斑馬魚在為評價植物多糖的免疫能力和免疫活性物質(zhì)的相關(guān)應(yīng)用中提供了理想的模型,不僅可以確定植物多糖的適宜濃度,還可以確定添加的形式,因此斑馬魚在驗證植物多糖免疫方面具有很廣闊的開發(fā)前景。

2.3 心臟保護

斑馬魚的心臟是兩腔的,但與人類有共通的基本特性,其心率、收縮力學與動作電位等與人類在生理方面表現(xiàn)出相同的特征[32-34]。 斑馬魚的心臟由心房、心室、動脈球及靜脈竇組成,位于魚體頭段與胸腹段交界處最后一對鰓絲的后下方。 在5 hpf時,心臟祖細胞出現(xiàn),于16 ～ 22 hpf 分化為心室和心房的心肌細胞[35];24 hpf 跳動的線性心臟血管發(fā)育形成;48 hpf 心肌細胞重新排列,心臟的發(fā)育基本完成,心臟通過舒張期實現(xiàn)泵血功能[36]。 同時斑馬魚在早期的發(fā)育階段并不依賴心臟循環(huán)生存。 因此,心臟的發(fā)育紊亂不會立即造成胚胎死亡。 再加上斑馬魚全身透明的特點可以看到心臟,使得斑馬魚成為一個具有吸引力的心臟模型(圖3)。

特非那定,是一種從抗精神病藥物的篩選中發(fā)現(xiàn)用于治療過敏性疾病,和可選擇性阻斷Hl 受體而產(chǎn)生抗組胺作用的藥物,常被用來誘導(dǎo)斑馬魚的心臟損傷[37]。 研究發(fā)現(xiàn)許多植物提取物均可以緩解由特非那定所引起的斑馬魚心臟損傷。 斑馬魚的心率是評價心功能的指標之一,記錄每分鐘的心跳次數(shù)可用來評價植物多糖對心臟毒性的影響。 例如段文娟等[38]研究了不同相對分子質(zhì)量的瓜萎多糖使特非那定誘導(dǎo)的斑馬魚心率上升、解緩了斑馬魚的心率異?；钚?其中100 μg/mL 總樣、1 μg/mL石油醚萃取物和10 μg/mL 石油醚萃取物具有顯著的保護作用,乙酸乙酯萃取物和水層樣品在100 μg/mL 質(zhì)量濃度下表現(xiàn)出一定的改善心臟毒性作用。 鄭秀花等[39]則探究了瓜蔞不同部位的多糖對于特非那定引起的血流的節(jié)間血管數(shù)量和心率下降具有緩解作用,且結(jié)果表明60%醇沉的瓜萎多糖對心臟的保護作用最好。 何俊霖等[40]利用斑馬魚模型研究發(fā)現(xiàn)中低劑量異甘草素具有良好的抗血管生成和減慢心率的作用,高劑量則會隨著作用時間的延長起到抑制發(fā)育的作用。 靜脈竇(SV)是血液進入心房的部位,動脈球(BA)是血液流出心室的部位。 斑馬魚SV-BA 的距離可反應(yīng)心臟環(huán)化程度,心房和心室的位置發(fā)生改變,SV-BA 距離相應(yīng)變化。 通過在顯微鏡下測量SV-BA 間距可判斷植物多糖對斑馬魚心臟的影響[41]。 陳秋燕等[42]研究證明添加不同濃度提純后的麩皮多糖能夠使受損傷后的斑馬魚心臟SV-BA 間距縮小,同時在最優(yōu)濃度時斑馬魚的心臟損傷修復(fù)率可達82.19%(斑馬魚心臟損傷修復(fù)率:心臟損傷修復(fù)率(%)= (給藥治療組斑馬魚心臟SV-BA 間距-特非那定組斑馬魚心臟SV-BA 間距)/ (正常對照組斑馬魚SV-BA 間距-模型組斑馬魚SV-BA 間距)× 100%)。 此外原花青素和西洋參等的多糖提取物同樣具有心臟保護作用[43-44]。 可見,以斑馬魚為模型探討植物多糖對心臟的保護是切實可行的,同時也為各類植物中藥的研發(fā)帶來了新思路。

2.4 脂質(zhì)代謝

斑馬魚的脂質(zhì)分布及代謝與人類的非常相似,并且斑馬魚體內(nèi)主要的載脂蛋白人類的載脂蛋白具有很高的同源性。 迄今為止,關(guān)于高脂血癥模型的大多數(shù)研究都集中在哺乳動物上,包括高脂飲食誘導(dǎo)的高脂血癥的小鼠、大鼠、兔和倉鼠模型。 但是,這些模型通常耗時且昂貴[45-46]。 用細胞模型進行藥物篩選也是可行的,但是由于細胞模型缺乏器官結(jié)構(gòu),難以分析各組織器官中的脂質(zhì)代謝情況。對比而言斑馬魚可以全程觀察并研究其發(fā)育狀況,方便分析飲食中的脂類分子在體內(nèi)代謝的情況,為在斑馬魚幼蟲中大規(guī)模篩選影響脂類代謝的小分子化合物提供了基礎(chǔ)。 例如,Wei 等[47]利用固態(tài)發(fā)酵杏鮑菇產(chǎn)生的多糖(PESF)能夠顯著減少斑馬魚幼體高脂血癥模型中的脂滴數(shù)量。 在濃度為200、400 和600 μg/mL 時,PESF 將脂質(zhì)含量分別降低到(62% ± 20%)、(33% ± 9%)和(67% ± 15%),結(jié)果表明,PESF 在斑馬魚幼體高脂血癥模型中具有抑制脂質(zhì)積累的生物活性。 同時還有研究發(fā)現(xiàn)從菊苣中提取的多糖可以通過降低總膽固醇和甘油三酸酯的含量減少肝脂肪的變性,進而對高膽固醇誘導(dǎo)的斑馬魚幼魚起到降脂作用,還可以減少脂質(zhì)合成相關(guān)基因脂肪酸合成酶基因和固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子重組蛋白1,并增加脂質(zhì)氧化相關(guān)基因的表達[48]。

除此之外,高膽固醇斑馬魚模型已運用于抗動脈粥樣硬化植物化學物質(zhì)的篩選和機理研究中。例如,姜黃和月桂樹的水提物已顯示出可以減輕體重,并能夠降低以高脂肪日糧(HCD)喂養(yǎng)的斑馬魚的總膽固醇和甘油三酯水平[49]。 該小組隨后使用相同的HCD 斑馬魚模型研究出1,8-桉樹腦(姜黃和月桂葉粉的親水提取物的主要成分)可以通過提高抗氧化活性和增強的膽固醇逆向轉(zhuǎn)運發(fā)揮抗炎和降脂作用[50]。 此外,使用高膽固醇斑馬魚模型還揭示了肉桂和丁香的水提物以及葡萄皮[51],枇杷葉和巴西莓的水提取物的抗動脈粥樣硬化活性[52]。

2.5 腸道蠕動

斑馬魚沒有典型結(jié)構(gòu)的胃,但消化管胃段在功能上與人類的胃高度同源。 在細胞學和解剖學角度,斑馬魚的腸道結(jié)構(gòu)與人類的相似,均由上皮細胞、結(jié)締組織、環(huán)狀肌及外縱肌組成[53],并且在功能上也與人類高度同源。 在72 hpf 時斑馬魚胚胎發(fā)育成幼魚,在攝食的情況下,首次出現(xiàn)不穩(wěn)定的腸道自發(fā)性收縮。 當斑馬魚幼魚發(fā)育至120 ～ 144 hpf時,其腸道出現(xiàn)自發(fā)性的蠕動,這時便可以通過觀察植物多糖對斑馬魚腸道蠕動次數(shù)的影響來評價植物多糖對斑馬魚腸道功能的作用。

尼羅紅(9-二乙基氨基-5 H-苯并[α]吩惡嗪-5-酮)是一種無毒,可用于標記活體細胞培養(yǎng)中的巨噬細胞、平滑肌細胞中脂滴的熒光染料[54]。 當用尼羅紅溶液處理斑馬魚卵時,可與含有豐富脂肪的卵黃囊結(jié)合。 當斑馬魚成長到5 ～ 6 d 時,大部分的卵黃囊被吸收,斑馬魚開始依靠自發(fā)的腸蠕動進食,在熒光顯微鏡下可以清晰的觀察到斑馬魚腸道中尼羅紅分布,同時尼羅紅不會被其他組織所吸收[55](圖4)。 當斑馬魚腸道的熒光強度減弱時,說明給予的食品或藥物有助于腸蠕動。研究發(fā)現(xiàn),添加濃度為125、250、500、1000 和2000 μg/mL 益身清(多種植物提取物的產(chǎn)物)時斑馬魚腸道內(nèi)容物的熒光強度顯著低于對照組,且促進腸蠕動的作用也從0%隨著濃度的增加分別上升到25%、45%、49%、62%、66%[56]。 楊勝杰等[57]認為管花肉蓯蓉提取物可以明顯促進斑馬魚腸道蠕動,且呈劑量依賴性,并且在濃度2000 μg/mL,促進率可達23.26%,達到潤腸通便的能力。 低聚果糖是一類重要的功能性低聚糖,廣泛存在于菊苣、菊芋、大蒜、洋蔥及小麥等植物中[58]。 侯海榮等[59]在研究過程中得出了隨著低聚果糖溶液濃度在125 ～ 500 mg/mL 濃度范圍內(nèi)增加時,斑馬魚的腸道蠕動次數(shù)也逐漸增加,并且在500 mg/mL的低聚果糖溶液處理24 h 后,斑馬魚的腸道收縮強度與蠕動也更加明顯。 由上可知斑馬魚的腸道蠕動模型可以為之后植物多糖提取物在藥品中的添加提供實驗依據(jù)。

3 結(jié)語

當前,關(guān)于植物多糖的生物活性研究主要集中于體外試驗,缺乏體內(nèi)試驗研究。 因此本文著重介紹了植物多糖評價中的斑馬魚模型,總結(jié)和討論將斑馬魚作為一種工具,為快速、經(jīng)濟的篩選和評估對人類健康有潛在益處的植物多糖提供了一種可靠且易用的策略。 同時為了使斑馬魚對人類健康更具指導(dǎo)意義,應(yīng)進一步進行特定的基因敲除、過度表達或引入目標基因來探索斑馬魚與人類之間的機制關(guān)系,以及了解植物多糖對斑馬魚的調(diào)節(jié)機制,使植物多糖在未來的開發(fā)中發(fā)揮出精準作用。此外應(yīng)多關(guān)注植物多糖在斑馬魚的添加形式及時間,研究植物多糖在斑馬魚中的生物利用度和生物可及性。 總的來說,斑馬魚模型是評價植物多糖的有效工具,可以在功能食品、營養(yǎng)品和化妝品的開發(fā)中發(fā)揮重要作用。

參 考 文 獻(References)

[ 1] Delattre C, Fenoradosoa TA, Michaud P. Galactans: an overview of their most important sourcing and applications as natural polysaccharides [J]. Braz Arch Biol Technol, 2011, 54(6): 1075-1092.

[ 2] Cosgrove DJ. Growth of the plant cell wall [J]. Nat Rev Mol Cell Biol, 2005, 6(11): 850-861.

[ 3] Jin M, Huang Q, Zhao K, et al. Biological activities and potential health benefit effects of polysaccharides isolated fromLyciumbarbarumL [J]. Int J Biol Macromol, 2013, 54: 16-23.

[ 4] Wasser SP. Medicinal mushrooms as a source of antitumor and immunomodulating polysaccharides[ J ].ApplMicrobiol Biotechnol,2002,60(3):258-274.

[ 5] Xie JH, Liu X, Shen MY, et al. Purification, physicochemical characterisation and anticancer activity of a polysaccharide fromCyclocaryapaliurusleaves [J]. Food Chem, 2013, 136(3-4):1453-1460.

[ 6] Xie JH, Wang ZJ, Shen MY, et al. Sulfated modification,characterization and antioxidant activities of polysaccharide from cyclocaryapaliurus [J]. Food Hydrocolloid, 2016, 53: 7-15.

[ 7] Love DR, Pichler FB, Dodd A, et al. Technology for highthroughput screens: the present and future using zebrafish [J].Curr Opin Biotechnol, 2004, 15(6): 564-571.

[ 8] McGrath P, Li CQ. Zebrafish: a predictive model for assessing drug-induced toxicity [J]. Drug Discov Today, 2008, 13(9-10): 394-401.

[ 9] Woo K, Shih J, Fraser SE. Fate maps of the zebrafish embryo[J]. Curr Opin Genet Dev, 1995, 5(4): 439-443.

[10] Br?nnimann D, Annese T, Gorr TA, et al. Splitting of circulating red blood cells as aninvivomechanism of erythrocyte maturation in developing zebrafish, chick and mouse embryos[J]. J Exp Biol, 2018, 221(15): jeb184564.

[11] de Jong JL, Zon LI. Use of the zebrafish system to study primitive and definitive hematopoiesis [J]. Annu Rev Genet,2005, 39: 481-501.

[12] Caro M, Iturria I, Martinez-Santos M, et al. Zebrafish dives into food research: effectiveness assessment of bioactive compounds[J]. Food Funct, 2016, 7(6): 2615-23.

[13] Dos Santos MM, de Macedo GT, Prestes AS, et al. Modulation of redox and insulin signaling underlie the anti-hyperglycemic and antioxidant effects of diphenyl diselenide in zebrafish [J]. Free Radic Biol Med, 2020, 158: 20-31.

[14] Collymore C, Rasmussen S, Tolwani RJ. Gavaging adult zebrafish [J]. J Vis Exp, 2013, 11(78): 50691.

[15] Yan C, Do D, Yang Q, et al. Single-cell imaging of human cancer xenografts using adult immunodeficient zebrafish [J]. Nat Protoc, 2020, 15(9): 3105-3128.

[16] Casares L, García V, Garrido-Rodríguez M, et al. Cannabidiol induces antioxidant pathways in keratinocytes by targeting BACH1[J]. Redox Biol, 2020, 28(10): 13-21.

[17] Wang L, Lee WW, Yang HW, et al. Protective effect of water extract of citrus pomace against aaph-induced oxidative stressin vitroin vero cells andinvivoin zebrafish [J]. Prev Nutr Food Sci, 2018, 23(4): 301-308.

[18] Kang MC, Kim SY, Kim YT, et al.Invitroandinvivoantioxidant activities of polysaccharide purified fromAloevera(Aloebarbadensis) gel [J]. Carbohydr Polym, 2014, 99: 365-371.

[19] Jayawardena TU, Fernando IPS, Lee WW, et al. Isolation and purification of fucoidan fraction in turbinaria ornata from the maldives; inflammation inhibitory potential under LPS stimulated conditions ininvitroandinvivomodels [J]. Int J Biol Macromol, 2019, 131: 614-623.

[20] Lee WW, Kang N, Kim AE, et al. Radioprotective effects of a polysaccharide purified from lactobacillus plantarum-fermented ishigeokamurae against oxidative stress caused by gamma rayirradiation in zebrafishinvivomodel [J]. J Funct Foods, 2017,28: 83-89.

[21] Pressley ME, Phelan PE 3rd, Witten PE, et al. Pathogenesis and inflammatory response to edwardsiella tarda infection in the zebrafish [J]. Dev Comp Immunol, 2005, 29(6): 501-513.

[22] Zapata A, Diez B, Cejalvo T, et al. Ontogeny of the immune system of fish [J]. Fish Shellfish Immunol, 2006, 20(2): 126-136.

[23] Tang S, Jiang M, Huang C, et al. Characterization of arabinogalactans from larix principis-rupprechtii and their effects on no production by macrophages [J]. Carbohydr Polym, 2018,200: 408-415.

[24] Lee SY, Zaske AM, Novellino T, et al. Probing the mechanical properties of TNF-α stimulated endothelial cell with atomic force microscopy [J]. Int J Nanomedicine, 2011, 6: 179-195.

[25] Feng J, Chang X, Zhang Y, et al. Characterization of a polysaccharide HP-02fromhoneysuckleflowersandits immunoregulatoryandanti-aeromonashydrophilaeffectsinCyprinuscarpioL [J]. Int J Biol Macromol, 2019, 140: 477-483.

[26] Wen Y, Peng D, Li C, et al. A new polysaccharide isolated from morchella importuna fruiting bodies and its immunoregulatory mechanism [J]. Int J Biol Macromol, 2019, 137: 8-19.

[27] Zhang S, Li Z, Wang X, et al. Isolation, structural elucidation,and immunoregulation properties of an arabinofuranan from the rinds of garcinia mangostana[J]. Carbohydr Polym. 2020, 246:116567.

[28] Udayangani RMC, Dananjaya SHS, Fronte B, et al. Feeding of nano scale oats β-glucan enhances the host resistance against edwardsiella tarda and protective immune modulation in zebrafish larvae [J]. Fish Shellfish Immunol, 2017, 60: 72-77.

[29] Prata MNL, Charlie-Silva I, Gomes JMM, et al. Antiinflammatory and immune properties of the peltatoside, isolated from the leaves of annona crassiflora mart., in a new experimental model zebrafish [J]. Fish Shellfish Immunol,2020, 101: 234-243.

[30] Zhang S, An L, Li Z, et al. An active heteropolysaccharide from the rinds of garcinia mangostana linn.: structural characterization and immunomodulation activity evaluation [ J]. Carbohydr Polym, 2020, 235: 115929.

[31] Poss KD. Advances in understanding tissue regenerative capacity and mechanisms in animals [J]. Nat Rev Genet, 2010, 11(10): 710-722.

[32] Arnaout R, Ferrer T, Huisken J, et al. Zebrafish model for human long QT syndrome [J]. Proc Natl Acad Sci U S A,2007, 104(27): 11316-11321.

[33] Leong IU, Skinner JR, Shelling AN, et al. Zebrafish as a model for long QT syndrome: the evidence and the means of manipulating zebrafish gene expression [ J]. Acta Physiol(Oxf), 2010, 199(3): 257-276.

[34] Yu F, Zhao Y, Gu J, et al. Flexible microelectrode arrays to interface epicardial electrical signals with intracardial calcium transients in zebrafish hearts [J]. Biomed Microdevices, 2012,14(2): 357-366.

[35] Tu S, Chi NC. Zebrafish models in cardiac development and congenital heart birth defects [J]. Differentiation, 2012, 84(1): 4-16.

[36] Zakaria ZZ, Benslimane FM, Nasrallah GK, et al. Using zebrafish for investigating the molecular mechanisms of druginducedcardiotoxicity[ J ].BiomedResInt,2018,2018: 1642684.

[37] Vornanen M, Hassinen M. Zebrafish heart as a model for human cardiac electrophysiology [J]. Channels(Austin), 2016, 10(2): 101-110.

[38] 段文娟, 趙偉, 李月, 等. 瓜蔞不同部位對斑馬魚促血管生成及心臟保護作用 [J]. 中成藥, 2017, 39(6): 1261-1264.Duan WJ, Zhao W, Li Y et al. Angiogenic and cardioprotective effects of different parts of trichosantheskirilowii on zebrafish[J]. Chin Tradit Pat Med, 2017, 39(6): 1261-1264.

[39] 鄭秀花, 郝翠, 王曉, 等. 瓜蔞多糖抗氧化及心臟保護活性研究 [J]. 食品科技, 2017, 42(11): 222-226.Zheng XH, Hao C, Wang X,et al. Antioxidant and heart protection activities of polysaccharides from trichosanthes kirilowii maxim [J]. Food Sci Technol, 2017, 42(11): 222-226.

[40] 何俊霖, 于思, 曹治興, 等.異甘草素對斑馬魚胚胎發(fā)育、血管生成和心臟的影響 [J]. 四川動物, 2018, 37(6): 672-677.He JL, Yu S, Cao ZX, et al. Effects of Isoliquiritigenin on embryonic development, angiogenesis and heart in zebrafish embryos [J]. SiChuan J Zool, 2018, 37(6): 672-677.

[41] 張利軍. 斑馬魚心臟毒性評價模型的建立及美托洛爾心臟毒性作用機制研究 [D]. 北京: 中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院; 2012.Zhang LJ. Cardiotoxicity evaluation model of zebrafishand mechanism of metoprolol cardiotoxicity [D]. Beijing: Academy of Military Medical Sciences of the Liberation Army; 2012.

[42] 陳秋燕, 王園, 尹娜, 等. 發(fā)酵麥麩阿魏酰低聚糖的純化工藝及其心臟保護作用研究 [J]. 中國糧油學報, 2021, 36(11): 21-28, 56.Chen QY, Wang Y, Yin N, et al. Study on purification technique of feruloylated oligosaccharides from fermented wheat bran and its heart protection activities [J]. J Chin Cereals Oils Assoc, 2021, 36(11): 21-28, 56.

[43] 李智平, 韓利文, 何秋霞, 等. 原花青素對特非那定誘導(dǎo)的斑馬魚心臟損傷的保護作用 [J]. 中藥藥理與臨床, 2017,33(3): 54-57.Li ZP, Han LW, He QX, et al. Protective effect of procyanidins to terfenadine-induced cardiac injury on zebrafish embryos [J].Chin J Chin Mater Med, 2017, 33(3): 54-57.

[44] 呂婧, 李晨, 楊龍飛, 等. 基于斑馬魚模型的西洋參提取物心臟保護作用研究 [J].中國藥房, 2020, 31(3): 308-313.Lv J, Li C, Yang LF, et al. Study on the heart protective effect of panax quinquefolium extract based on zebra fish modle [J].Chin Pharm, 2020, 31(3): 308-313.

[45] Chen L, Liu L, Li C, et al. A mix of apple pomace polysaccharide improves mitochondrial function and reduces oxidative stress in the liver of high-fat diet-induced obese mice[J]. Mol Nutr Food Res, 2017, 61(3): 1-12.

[46] Li J, Sapper TN, Mah E, et al. Green tea extract provides extensive Nrf2-independent protection against lipid accumulation and NFκB pro- inflammatory responses during nonalcoholic steatohepatitis in mice fed a high-fat diet [J]. Mol Nutr Food Res, 2016, 60(4): 858-870.

[47] Wei H, Yue S, Zhang S, et al. Lipid-lowering effect of the pleurotus eryngii (king oyster mushroom) polysaccharide from solid-state fermentation on both macrophage-derived foam cells and zebrafish models [ J]. Polymers ( Basel), 2018, 10(5): 492.

[48] Li M, Ma J, Ahmad O, et al. Lipid-modulate activity of cichorium glandulosum boiss. ethuetpolysaccharide in nonalcoholic fatty liver disease larval zebrafish model [J]. J Pharmacol Sci, 2018, 138(4): 257-262.

[49] Jin S, Hong JH, Jung SH, et al. Turmeric and laurel aqueous extracts exhibitinvitroanti-atherosclerotic activity andinvivohypolipidemic effects in a zebrafish model [J]. J Med Food,2011, 14(3): 247-256.

[50] Cho KH. 1, 8-cineole protected human lipoproteins from modification by oxidation and glycation and exhibited serum lipidlowering and anti-inflammatory activity in zebrafish [J]. BMB Rep, 2012, 45(10): 565-570.

[51] Kim JY, Hong JH, Jung HK, et al. Grape skin and loquat leaf extracts and acai puree have potent anti-atherosclerotic and antidiabetic activityinvitroandinvivoin hypercholesterolemic zebrafish [J]. Int J Mol Med, 2012, 30(3): 606-614.

[52] Rich A. A new high-content model system for studies of gastrointestinal transit: the zebrafish [J]. Neurogastroenterol Motil, 2009, 21(3): 225-228.

[53] Flores E, Thompson L, Sirisaengtaksin N, et al. Using the protozoan paramecium caudatum as a vehicle for food-borne infections in zebrafish larvae [J]. J Vis Exp, 2019, 143: 10.

[54] 石玉新, 穆迪, 武洪慶, 等. 微藻油脂含量的幾種快速測定方法 [J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學, 2012, 40(21): 11067-11069.Shi YX, Mu Di, Wu HQ, et al. Several methods for rapid determination of lipid from algal culture [J]. Anhui Agric Sci,2012, 40(21): 11067-11069.

[55] 周娟, 郭勝亞, 李春啟. 建立斑馬魚腸蠕動模型及篩選促胃腸動力藥物的方法: CN103301480A [P]. 2019-11-08.Zhou J, Guo SY, Li CQ. Establishment of a zebrafish intestinal motility model and screening of pro-gastrointestinal motility drugs: CN103301480A [P]. 2019-11-08.

[56] 錢星文, 譚轉(zhuǎn)換, 朱晨, 等. 益身清對斑馬魚的腸道蠕動促進作用研究 [J].中醫(yī)藥導(dǎo)報, 2020, 26(15): 22-24.Qian XW, Tan ZH, Zhu C et al. Study on the promoting effect of yishenqing on intestinal peristalsis of zebrafish [J]. Guid J Tradit Chin Med Pharm, 2020, 26(15): 22-24.

[57] 楊勝杰, 劉明川, 楊進平, 等. 管花肉蓯蓉提取物通便作用的實驗研究 [J]. 北方藥學, 2019, 16(8): 128-130.Yang SJ, Liu MC, Yang JP, et al. The effect of cistanche tubulosa extract on intestinal peristalsis of zebrafish [J]. J North Pharm, 2019, 16(8): 128-130.

[58] 丁曉雯, 周才瓊. 保健食品原理 [M]. 重慶: 西南師范大學出版社; 2008.Din XW, Zhou CQ. Principles of health food [M]. Chongqing:Southwest Chin Normal Univer Press; 2008.

[59] 侯海榮, 張姍姍, 孫晨, 等. 低聚果糖和低聚異麥芽糖促進斑馬魚腸道蠕動作用的研究 [J].山東科學, 2016, 29(6):56-61.Hou HR, Zhang SS, Sun C, et al. The effect of fructo oligosaccharides and isomalto-oligosacharide on the intestinal peristalsis of zebrafish [J]. Shandong Sci, 2016, 29(6): 56-61.