見血青的研究進(jìn)展

陳吉裕

（重慶三峽職業(yè)學(xué)院，重慶萬州 404155）

見血青又名矮胖兒、羊耳蒜等，為蘭科（Orchideae）羊耳蒜屬（）植物脈羊耳蘭的全草。見血青是具有止血凝血、鎮(zhèn)痛、抑菌抗炎、強(qiáng)抗氧化、降血糖、抗腫瘤等多種功效的重要藥用植物，藥用價(jià)值高。其春季生長，全年采收（主要夏秋季節(jié)），可鮮用或曬干。野生見血青數(shù)量稀少，已被收入《國家重點(diǎn)保護(hù)野生植物名錄》第二批名單，被定為國家二級保護(hù)植物。見血青為常用藥材，使用量大，具有廣闊的開發(fā)利用前景。

1 生物資源

1.1 生物學(xué)特性

見血青為株高2～10cm 的草本植物，莖圓柱狀肉質(zhì)帶節(jié)，直徑為5～7cm，有膜質(zhì)葉鞘包被在莖外部[1]。葉常為3～5 枚，卵形至橢圓形，葉長5～14cm、寬3～7cm，葉緣全緣或淺波紋，基部為鞘狀柄抱莖?？偁罨ㄐ?，自莖頂端發(fā)出，花序軸直立，長10～20cm；花10～30 枚，唇瓣花，長約6mm。蒴果倒卵狀，長約1.5cm，寬6mm[2-3]。果實(shí)成熟后自行破裂，種子細(xì)如粉塵狀，數(shù)量多，乳白色[4]。

1.2 生長習(xí)性

喜陰，喜濕潤，喜落葉腐化蓬松的酸性土壤。常見于海拔850～1000m 的山坡闊葉林下遮光濕潤地域，易在降水量充沛且排水好、通風(fēng)的杉木林和混交林下松軟腐土中生長。已有資料表明，見血青常見于長江以南地區(qū)，特別是西南地區(qū)為主產(chǎn)區(qū)，常見于四川、重慶、貴州、湖北、湖南、廣東、廣西、浙江等地的林下、草叢及溪谷旁，近幾年在陜西地區(qū)也有發(fā)現(xiàn)[3]。

2 化學(xué)成分

2.1 生物堿類

張楊等[5]用超聲波輔助從見血青中提取了總生物堿。劉小波等[6]從見血青總生物堿中共檢測出101 種成分，已鑒定出77 種化合物，主要是脂類、多種生物堿，以及少量酮、醛類物質(zhì)。趙穎等[7]采用大孔樹脂、硅膠、MCI Gel、ODS 以及Sephadex LH-20 等柱色譜方法對見血青成分進(jìn)行分離和純化，分離得到9 個(gè)化合物，其中一種為生物堿。

2.2 苯丙素類

Liu 等[8]從見血青全草中分離得到11 種苯丙素類化合物。

2.3 皂苷類

曾春菡等[9]采用超聲波輔助從見血青干燥全草提取到總皂苷；鐘德馨[10]通過萃取分離鑒定得到見血青苷D。

2.4 菲類

Liu 等[8]采用生物活性導(dǎo)向分離方法，從見血青中發(fā)現(xiàn)了6 種菲類化合物。王星[11]從見血青植物中共分離得到鑒定了24 個(gè)化合物，其中菲及二氫菲類7 個(gè)。鐘德馨[10]分離得到2 個(gè)二氫菲類化合物。

2.5 蛋白類

Jiang 等[12]通過DEAE-Sepharose 離子交換層析、Mannose-Sepharose 4B 親和層析、聚丙烯酰胺葡聚糖S-100 凝膠過濾層析等方法從見血青根莖中純化出一種甘露糖結(jié)合凝集素，是一種單體蛋白。

3 藥理作用

3.1 止血凝血作用

宋芹等[13]通過毛細(xì)玻管法及載玻片法觀察發(fā)現(xiàn)，見血青醇提取物不同劑量均能顯著縮短小鼠的凝血時(shí)間和出血時(shí)間，說明其醇提成分具有明顯的止血功效。趙穎等[14]研究發(fā)現(xiàn)，見血青提取物可顯著縮短小鼠止血時(shí)間、凝血時(shí)間和活化部分凝血活酶時(shí)間，還可以顯著增加纖維蛋白原含量，說明其止血作用可能與收縮血管、抑制纖溶酶活性、增加纖維蛋白原含量有關(guān)。宋芹等[15]發(fā)現(xiàn)見血青可激活內(nèi)源性和外源性凝血系統(tǒng)，可升高血漿v WF 和PAI-1 含量和降低血漿t-PA、TFPI 活性，使機(jī)體處于高凝狀態(tài)，促進(jìn)血小板的聚集和粘附，有利于血栓的形成，從而發(fā)揮止血、凝血作用。張楊等[16]利用提取的見血青的總生物堿明顯縮短了老鼠出血時(shí)間、凝血時(shí)間和出血量，其效果與云南白藥無明顯差異。

3.2 鎮(zhèn)痛作用

徐新等[17]觀察發(fā)現(xiàn)，見血青能明顯或部分減輕福爾馬林誘導(dǎo)小鼠的Ⅰ相和Ⅱ相反應(yīng)，延長醋酸扭體反應(yīng)潛伏期，減少扭體次數(shù)，并延長痛閾值。何曉磊[18]通過小鼠扭體實(shí)驗(yàn)、福爾馬林實(shí)驗(yàn)II 相反應(yīng)和中樞鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，見血青有較好的外周鎮(zhèn)痛作用。

3.3 抑菌抗炎作用

殷啟蒙等[19]從見血青中分離得到的丁香醛和多種吡咯里西啶類生物堿均具有顯著的抗炎作用。徐新等[17]和何曉磊[18]均研究發(fā)現(xiàn)，見血清醇提物能有效抑制小鼠足腫脹和瓊脂致肉芽腫，能明顯降低炎癥因子TNF-α 及IL-1β 的含量，具有顯著抗炎作用。江泓[20]研究發(fā)現(xiàn)，見血青提取物對革蘭氏陽性菌金黃色葡萄球菌具有明顯抑制作用。Jiang N 等[12]通過體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，從見血青中純化得到的一種甘露糖結(jié)合凝集素對稻瘟病菌、玉蜀黍離蠕孢、禾谷鐮刀菌和齊整小核菌都具有明顯抗真菌活性，是一種新的抗真菌藥物。因此，見血青提取物對細(xì)菌、真菌都有抑制作用。

3.4 強(qiáng)抗氧化作用

Liu 等[8]也發(fā)現(xiàn)從見血青中提取得到的2 個(gè)化合物具有較強(qiáng)的體外抗氧化活性。曾春菡等[9]研究發(fā)現(xiàn)，見血青的總皂苷對DPPH 自由基、羥自由基、超氧陰離子自由基均有明顯的清除作用，董艷芳等[21]測定見血青多糖對超氧陰離子和羥自由基的清除率發(fā)現(xiàn)其值均較高，且對羥自由基的清除能力相當(dāng)于同等濃度維生素C 的60.6%，具有強(qiáng)抗氧化性。

3.5 降血糖作用

Liu 等[8]從見血青全草中分離得到的一種苯丙素類化合物為7S、7'S、8R、8'R-淫羊藿醇A2(9)，發(fā)現(xiàn)其具有較強(qiáng)的α-葡萄糖苷酶抑制活性，其IC50 值遠(yuǎn)低于阿卡波糖，具有極強(qiáng)的開發(fā)降糖藥物潛力。

3.6 抗腫瘤作用

多項(xiàng)研究表明，見血青的多種成分對抗腫瘤有很好的效果。殷啟蒙等[19]從見血清中分離得到的莽草酸能有效抑制小鼠體內(nèi)癌細(xì)胞的擴(kuò)散，而分離得到的胡蘿卜苷能有效抑制HepG2 腫瘤細(xì)胞的增殖，且在體外試驗(yàn)中能顯著抑制人乳腺癌細(xì)胞的生長并誘導(dǎo)其凋亡；分離得到的吡咯里西啶類生物堿能誘導(dǎo)HCT116腫瘤細(xì)胞凋亡；分離得到的二聚體菲類化合物對腫瘤細(xì)胞具有顯著的細(xì)胞毒活性。Jiang N 等[12]從見血青中純化出一種甘露糖結(jié)合凝集素可通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，是一種潛在的抗腫瘤治療候選藥物。Liu 等[8]從見血青中提取得到的6 個(gè)雙酚類化合物在體外檢測中對胃和結(jié)腸癌細(xì)胞系均表現(xiàn)出強(qiáng)大的細(xì)胞毒性作用，可作為一種新抗癌藥物使用。

4 人工培養(yǎng)技術(shù)

到目前為止，關(guān)于見血青的人工種植未有深入研究，而組織培養(yǎng)快繁研究已有3 例報(bào)道。

4.1 莖段組織培養(yǎng)

通過莖段培養(yǎng)誘導(dǎo)側(cè)芽萌發(fā)，再進(jìn)行增殖快繁，何官榕等[22]已建立完整的該快繁體系，芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.0mg/L+KT 0.5mg/L+NAA 0.3mg/L+ZE 0.5mg/L+花寶1 號1g/L+活性炭1.5g/L+香蕉20g/L+土豆30g/L，增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 3.0mg/L+KT 0.5mg/L+NAA 0.5mg/L+ZE 1.0 mg/L+花寶1 號2g/L+活性炭1.5g/L+香蕉20g/L+土豆30g/L，生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 1.0mg/L+NAA0.1mg/L+花寶2 號1g/L+活性炭1.5g/L。沈?qū)殱齕23]通過莖段在MS+6-BA 1.5mg/L+S-3307 1.0mg/L+NAA 1.0mg/L 上無菌扦插獲得再生植株。

4.2 種子途徑生產(chǎn)種苗

通過種子萌發(fā)小苗進(jìn)行生產(chǎn)，何俊等[24]利用對野生見血青種子無菌培養(yǎng)萌發(fā)產(chǎn)生叢生芽，叢生芽增殖培養(yǎng)基為含大量元素、微量元素和鐵鹽的MS+B5 有機(jī)物+IAA 0.5mg/L+KT 0.5mg/L+肌醇100mg/L，離體保存培養(yǎng)基為1/2MS+PPP333 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L。但見血青種子萌發(fā)率低，通過預(yù)處理可提高種子萌發(fā)率，對見血青直接通過種子栽培或種子原球莖誘導(dǎo)途徑進(jìn)行擴(kuò)繁均有一定意義。沈?qū)殱齕23]用2mg/L 蝸牛酶處理見血青種子40min，種子萌發(fā)率為71.03%；用NaOH 2mol/L 處理種子5min，種子萌發(fā)率為56.54%，獲得無菌苗。

4.3 內(nèi)生真菌

已有研究表明，蘭科植物根部本身攜帶眾多內(nèi)生真菌[23,25]，其與種子萌發(fā)、植株生長有很大關(guān)系。內(nèi)生真菌的存在是影響組培擴(kuò)繁的一個(gè)重要因素。沈?qū)殱齕23]采用0.13%NaClO2消毒3.0 min 后在PDA 培養(yǎng)基置于28℃恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行暗培養(yǎng)，分離45 種根段內(nèi)生菌真菌。研究發(fā)現(xiàn)，出菌率受季節(jié)的影響，由于季節(jié)不同，與根共生的真菌種類不同，共生時(shí)間不同有較大差異。

5 總結(jié)與展望

見血青在四川、貴州等地民間常用藥材目錄中均有記載，民間藥用歷史悠久，既可內(nèi)服又可外敷，藥用價(jià)值較高，近幾年在藥材市場比較走俏，干品價(jià)格可達(dá)400 元/kg，甚至有時(shí)野生藥材按株收購。目前市場上見血青主要源自野生資源，隨著需求量的與日俱增，野生資源難以滿足市場需求，加上人為過度采挖，野生資源遭破壞日益嚴(yán)重，已經(jīng)面臨枯竭。野生見血青以種子繁殖為主，但因其種子發(fā)育不全，沒有胚乳，自然環(huán)境下需真菌與之共生才能萌發(fā)，故種子發(fā)芽率極低，且生根難、生長速度慢等，自然繁殖或利用種子人工栽培滿足不了市場需求和資源保護(hù)。采用組培技術(shù)快速繁殖大量優(yōu)質(zhì)見血清種苗，是解決資源匱乏、保護(hù)野生資源的有效手段。