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    馬鈴薯脫毒種薯快繁技術(shù)研究

    2022-11-17 03:08:26王蔚杰趙娜尚登翔王發(fā)東趙世霞李蔚
    關(guān)鍵詞:組織培養(yǎng)馬鈴薯

    王蔚杰 趙娜 尚登翔 王發(fā)東 趙世霞 李蔚

    摘要:【目的】為了探索河西地區(qū)馬鈴薯種薯高效優(yōu)質(zhì)繁育方法,解決馬鈴薯種薯退化嚴(yán)重的問題,本文在金昌進(jìn)行了馬鈴薯脫毒種薯快繁技術(shù)試驗(yàn)?!痉椒ā客ㄟ^對(duì)金昌主栽品種“希森6號(hào)”開展不同馬鈴薯莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)、快繁培養(yǎng)的培養(yǎng)基配比篩選和脫毒種薯栽培基質(zhì)的篩選,研究最佳的快繁技術(shù)。【結(jié)果】結(jié)果表明,以MS+蔗糖+瓊脂為對(duì)照,27個(gè)不同莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)基處理的分生組織成苗率均高于對(duì)照CK,其中處理14最高;以MS+蔗糖+瓊脂為對(duì)照,16個(gè)不同快繁培養(yǎng)基處理的組培苗生根率、株高、莖粗、葉片數(shù)及莖葉鮮干重均大于對(duì)照,其中處理5的生長表現(xiàn)最強(qiáng);以泥炭土為對(duì)照,6個(gè)不同栽培基質(zhì)處理的種薯性狀均好于對(duì)照CK,其中表現(xiàn)最好的是D1處理?!窘Y(jié)論】因此,將馬鈴薯在MS+蔗糖+瓊脂+6-BA 2mg/L+GA3 0.2mg/L+NAA 0.2mg/L的培養(yǎng)基上進(jìn)行莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)、在MS+卡拉膠2.5g/L+蔗糖30g/L的培養(yǎng)基上進(jìn)行快速繁殖、煉苗后,將組培苗移栽于蛭石里繁殖種薯效果最佳,我們初步制定了適合該地區(qū)馬鈴薯脫毒種薯快繁的技術(shù)要點(diǎn)。

    關(guān)鍵詞:馬鈴薯;快繁;脫毒種薯;組織培養(yǎng)

    基金項(xiàng)目:金昌市青年人才基金項(xiàng)目(2021CZYFGO)

    作者簡介:王蔚杰,碩士研究生,農(nóng)藝師,主要從事設(shè)施蔬菜與作物育種研究。Email:1139420117@qq.com

    通訊作者:王發(fā)東,林業(yè)工程師,主要從事設(shè)施蔬菜與果樹栽培研究。Email:370921749@qq.com

    引言

    隨著馬鈴薯主糧化戰(zhàn)略的推進(jìn),馬鈴薯種植面積日益增加。然而,在馬鈴薯生產(chǎn)中,病毒病的普遍發(fā)生導(dǎo)致馬鈴薯產(chǎn)量降低和商品性狀退化,這種狀況隨著種植年限的增加逐年加重,嚴(yán)重制約著馬鈴薯產(chǎn)業(yè)的持續(xù)、健康發(fā)展。馬鈴薯脫毒種薯的繁育和推廣可以從根本上抑制病毒病的發(fā)生和蔓延,是馬鈴薯產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要保障。脫毒試管苗的擴(kuò)繁是脫毒種薯繁育的一個(gè)重要環(huán)節(jié),培養(yǎng)基是脫毒試管苗生產(chǎn)的基礎(chǔ)[1-5]。脫毒馬鈴薯原原種也叫微型薯,是脫毒試管苗在隔離條件下生產(chǎn)的種子,雖然個(gè)頭小,但是純度高,是繁育優(yōu)良馬鈴薯的種子,其繁育應(yīng)用廣泛的栽培方式是無土基質(zhì)栽培。研究發(fā)現(xiàn)蛭石、珍珠巖、草炭等混合配制的基質(zhì)栽培可使馬鈴薯原原種總產(chǎn)量、商品薯產(chǎn)量較純土壤種植均顯著提高[6-9]。雖然國內(nèi)外學(xué)者對(duì)馬鈴薯脫毒或快繁技術(shù)進(jìn)行了大量研究,但對(duì)河西區(qū)域馬鈴薯脫毒種薯快繁技術(shù)優(yōu)化研究較少,尚需進(jìn)一步研究。因此,本研究通過比較不同培養(yǎng)基配比,篩選出最佳誘導(dǎo)和快繁培養(yǎng)基;通過比較不同基質(zhì)配比,篩選出最佳栽培基質(zhì),為馬鈴薯脫毒種薯快繁提供技術(shù)支撐,同時(shí)促進(jìn)本地區(qū)馬鈴薯產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    將馬鈴薯品種“希森6號(hào)”置于室溫催芽,待芽長至約3cm時(shí),切取長約1cm的莖芽用作外植體材料。

    1.2 試驗(yàn)方法

    試驗(yàn)于2021年1月開始在金昌植物園組繁中心植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室、玻璃連棟溫室、日光溫室中進(jìn)行。試驗(yàn)地位于北緯30°04′-31°58′、東經(jīng)101°13′-102°19′,屬于大陸性溫帶干旱氣候,年均氣溫9.2℃,最高溫23.7℃,最低溫-6.2℃,年均日照2981.6h,無霜期141d,年均降水量139.8mm。

    1.2.1 消毒處理

    使用0.1%升汞對(duì)用作外植體材料的馬鈴薯莖芽浸泡8 min進(jìn)行消毒,再用75%乙醇消毒30s 后,用無菌水沖洗6次。然后在解剖鏡下剝離帶1-2個(gè)葉原基約0.3mm長的莖尖用作外植體。

    1.2.2 莖尖誘導(dǎo)

    將消毒后的馬鈴薯外植體接種在誘導(dǎo)分化的培養(yǎng)基上進(jìn)行莖尖分化培養(yǎng)。培養(yǎng)基pH值5.5-5.8,培養(yǎng)溫度為(22±1)℃,光照度2500Lx,光照時(shí)間每天16小時(shí)。以不加激素的MS培養(yǎng)基(MS+蔗糖

    (30g/L)+瓊脂(7g/L))為對(duì)照(CK),分別設(shè)置6-BA三個(gè)濃度(1.0mg/L,2.0mg/L,3.0mg/L),GA3三個(gè)濃度(0.1mg/L,0.2mg/L,0.5mg/L),NAA三個(gè)濃度(0.05mg/L,0.2mg/L,0.5mg/L)等27個(gè)不同莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)基處理,見表1。

    1.2.3 組培苗快繁

    將誘導(dǎo)獲得的脫毒小苗剪成帶單個(gè)腋芽的莖段,接種在擴(kuò)繁生根培養(yǎng)基上進(jìn)行快繁。培養(yǎng)基pH值5.5-5.8,培養(yǎng)溫度為(22±1)℃,光照度2500Lx,光照時(shí)間每天16小時(shí)。以不加激素的MS培養(yǎng)基(MS+蔗糖(30g/L)+瓊脂(7g/L))為對(duì)照(CK),分別設(shè)置MS和1/2MS,瓊脂(7g/L)和卡拉膠(2.5g/L),NAA四個(gè)濃度(0.0mg/L,0.5mg/L,1.0mg/L,1.5mg/L),蔗糖(30g/L)不改變等16個(gè)不同快繁培養(yǎng)基處理,見表2。

    1.2.4 組培苗煉苗移栽

    在組培室中半開瓶蓋煉苗1天,從組培室取出來,在夜間最低溫度不能低于6℃的環(huán)境下,打開瓶蓋,煉苗1-2天。煉苗后移栽時(shí),需要把苗子上的培養(yǎng)基洗干凈(最好用溫水洗培養(yǎng)基,動(dòng)作輕柔避免傷根,盡可能把培養(yǎng)基洗凈,洗不干凈容易滋生細(xì)菌)。然后用多菌靈(800倍液)進(jìn)行殺菌,生根粉(400mg/L)進(jìn)行蘸根,再定植在基質(zhì)里。

    1.2.5 脫毒種薯繁育

    基質(zhì)選用蛭石、泥炭土、珍珠巖,隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì),共計(jì)7種基質(zhì)配方(見表3),以100%泥炭土處理為試驗(yàn)對(duì)照,各處理基質(zhì)體積相同。移栽前施均衡性復(fù)合肥200g/m2,將基質(zhì)和肥料混合后澆透水,用塑料膜覆蓋2-3天以增溫。釆用試管苗扦插方式,株行距8*10cm,小區(qū)面積為0.5m2,每個(gè)處理3次重復(fù)。移栽15d后統(tǒng)計(jì)移栽成活率。成熟收獲時(shí),記錄小區(qū)產(chǎn)量和結(jié)薯數(shù),統(tǒng)計(jì)商品率。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同馬鈴薯莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)基篩選

    不同馬鈴薯莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)基處理下分化的愈傷組織成苗率在60.00%-86.67%,27個(gè)試驗(yàn)處理的分生組織成苗率均高于對(duì)照CK的成苗率,成苗率較高的試驗(yàn)處理如表4所示,處理14號(hào)的成苗率最高為86.67%,處理16和17的次之,為80%,比對(duì)照CK 的成苗率高出20%以上。主要是誘導(dǎo)培養(yǎng)基中6-BA、GA3、NAA等植物激素及生長調(diào)節(jié)物質(zhì)促進(jìn)莖尖分化產(chǎn)生更多愈傷組織及促進(jìn)分生組織的生長成苗,而且6-BA、GA3、NAA配比越合理的培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化能力越強(qiáng)。由此表明,處理14號(hào)的表現(xiàn)最好,即馬鈴薯外植體在MS+蔗糖(30g/L)+瓊脂(7g/L)+6-BA

    2mg/L+GA3 0.2mg/L+NAA 0.2mg/L培養(yǎng)基上進(jìn)行莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)的效果最好。

    2.2 不同馬鈴薯快繁培養(yǎng)基篩選

    16個(gè)不同快繁培養(yǎng)基上的組培苗生根較多、葉片濃綠、植株生長較好的8個(gè)處理如表5所示,這8個(gè)處理的試管苗的生根率、株高、莖粗、葉片數(shù)、莖葉鮮重、莖葉干重均大于對(duì)照CK的,均值分別為92.33%、10.99cm、0.94mm、12.28個(gè)、125.45mg、8.77mg,其中,處理5號(hào)的生根率、株高、莖粗、葉片數(shù)、莖葉鮮干重最大,好于其他處理。原因是MS比1/2MS能提供足夠的營養(yǎng)元素、鐵鹽、有機(jī)物??ɡz比起瓊脂更容易凝固,而且成本較低。生長調(diào)節(jié)劑NAA可以促使不容易生根的植物生長,而馬鈴薯植株生根能力比較強(qiáng),NAA的存在反而抑制了其生長。因此,處理5號(hào)的組培苗生長最好,即表明馬鈴薯脫毒苗在MS+卡拉膠2.5g/L+蔗糖30g/L的培養(yǎng)基上快繁效果最好。

    2.3 不同馬鈴薯脫毒種薯栽培基質(zhì)篩選

    由表6可以看出,不同栽培基質(zhì)處理的組培苗的成活率和脫毒種薯的單粒重、單株粒數(shù)、單株產(chǎn)量、商品率的大小均表現(xiàn)為D1>D3>D5>D2>D6>D4>CK,其中,D1處理的均最大,對(duì)照CK的最小。馬鈴薯脫毒微型薯的單株產(chǎn)量7個(gè)處理中D1的最大為85.45g,分別比D3、D5、D2、D6、D4和CK處理增加了15.54g、20.50g、27.24g、31.95g、38.12g、44.81g,增產(chǎn)效果明顯。因馬鈴薯微型薯的繁育對(duì)栽培基質(zhì)的主要要求是疏松性和透氣性,疏松透氣性較好的基質(zhì)有利于脫毒馬鈴薯試管苗定植成活及脫毒種薯的結(jié)薯。處理D1的綜合表現(xiàn)最好,可能是由于蛭石基質(zhì)松軟透氣,有利于根系生長,成活率較高,促進(jìn)營養(yǎng)吸收,植株生長健壯且利于匍匐莖生長和塊莖膨大,增產(chǎn)效果好,商品率高。因此,處理D1的種薯性狀最好,即表明脫毒組培苗移栽于蛭石基質(zhì)里繁育種薯最佳。

    3 結(jié)論與討論

    馬鈴薯外植體接種在MS(不含瓊脂和蔗糖)+蔗糖(30g/L)+瓊脂(7g/L)+6-BA 2mg/L+GA3 0.2mg/L+NAA 0.2mg/L的培養(yǎng)基上進(jìn)行莖尖分化培養(yǎng)效果最好,在擴(kuò)繁生根培養(yǎng)基MS(不含瓊脂和蔗糖)+卡拉膠2.5g/L+蔗糖30g/L上進(jìn)行快速繁殖最佳,脫毒組培苗移栽在蛭石基質(zhì)里生長發(fā)育表現(xiàn)最好。

    27個(gè)不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基處理的分生組織成苗率均高于對(duì)照CK,其中處理14的成苗率最高,比對(duì)照CK 高出20%以上。原因是植物激素及生長調(diào)節(jié)物質(zhì)6-BA、GA3、NAA等促進(jìn)莖尖分化產(chǎn)生更多愈傷組織及促使分生組織的生長成苗,同時(shí)6-BA、GA3、NAA配比越合理的培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化能力越強(qiáng)。這與范繼紅等[10]的研究有相似之處。16個(gè)不同快繁培養(yǎng)基處理的試管苗的生根率、株高、莖粗、葉片數(shù)、莖葉鮮干重均大于對(duì)照,其中處理5的生根率、株高、莖粗、葉片數(shù)、莖葉鮮干重最大,好于其他處理。主要是MS比1/2MS能提供足夠的營養(yǎng)元素、鐵鹽、有機(jī)物;卡拉膠比瓊脂更容易凝固,而且成本較低;生長調(diào)節(jié)劑NAA可以促使不容易生根的植物生長,而馬鈴薯植株生根能力比較強(qiáng),NAA的存在反而抑制了其生長。這跟賈小霞等[11]的研究相類似。6個(gè)不同栽培基質(zhì)處理的組培苗成活率和脫毒種薯的單粒重、單株粒數(shù)、單株產(chǎn)量、商品率都大于CK,其中處理D1最大,CK的成活率、單粒重、單株粒數(shù)、單株產(chǎn)量、商品率最小。王雪潔等[12]的研究表明疏松性透氣性較好的基質(zhì)有利于馬鈴薯微型薯的繁育,這與本研究的觀點(diǎn)基本一致。處理D1的綜合表現(xiàn)最好,可能是由于蛭石更松軟透氣,有利于根系生長及營養(yǎng)吸收,植株生長健壯且利于結(jié)薯,增產(chǎn)效果好,商品率高。

    馬鈴薯脫毒種薯快繁技術(shù)要點(diǎn)為:(1)消毒處理:使用0.1%升汞對(duì)馬鈴薯莖芽浸泡8min進(jìn)行消毒,再用75%乙醇消毒30s后,無菌水沖洗6次。然后在解剖鏡下剝離帶1-2個(gè)葉原基約0.3mm長的莖尖用作外植體。(2)莖尖誘導(dǎo):將消毒后的外植體接種在 MS(MS+蔗糖(30g/L)+瓊脂(7g/L))+6-BA 2mg/L+GA3 0.2mg/L+NAA 0.2mg/L的培養(yǎng)基上進(jìn)行莖尖分化培養(yǎng)。培養(yǎng)基pH值5.5-5.8,培養(yǎng)溫度為(22±1)℃,光照度2500 Lx,光照時(shí)間每天16小時(shí)。(3)莖段快繁:將誘導(dǎo)獲得的脫毒小苗剪成帶單個(gè)腋芽的莖段,接種在擴(kuò)繁生根培養(yǎng)基上,培養(yǎng)基配方MS+卡拉膠2.5g/L+蔗糖30g/L。培養(yǎng)基pH值5.5-5.8,培養(yǎng)溫度為(22±1)℃,光照度2500Lx,光照時(shí)間每天16小時(shí)。生長周期20-25天,植株生長健壯。(4)脫毒種薯繁育:煉苗后以株行距8*10cm將組培苗移栽在10-20cm厚的蛭石基質(zhì)中,種植深度以保持地上部分留2-3片葉為宜,加強(qiáng)通風(fēng)、保濕管理,一周后幼苗長出新根,去掉遮陽網(wǎng),進(jìn)行科學(xué)化管理,繁育脫毒種薯。

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