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    葉蛋白提取與應(yīng)用的研究進(jìn)展

    2022-11-17 06:54:06李研東王成祥霍惠玲馬曉迪李丹丹
    中國飼料 2022年21期
    關(guān)鍵詞:加熱法蛋白質(zhì)蛋白

    史 可, 李研東, 王成祥, 霍惠玲, 高 山, 馬曉迪, 李丹丹, 韓 雪*

    (1.河北科技大學(xué)食品與生物學(xué)院,河北 石家莊 050018;2.河北省獸藥飼料工作總站,河北 石家莊 050035;3.河北省健康主食產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院,河北 石家莊 051430;4.河北同福健康產(chǎn)業(yè)有限公司,河北 石家莊 051430)

    葉蛋白是以綠色植物的莖葉為提取原料,經(jīng)壓榨、浸提、蛋白質(zhì)分離和濃縮干燥等步驟制備的蛋白質(zhì)濃縮物(LPC)(高琦等,2020)。主要由葉綠體內(nèi)基質(zhì)蛋白和細(xì)胞質(zhì)蛋白等組成,屬于“功能性蛋白質(zhì)”(劉曉庚等,1999)。當(dāng)前,大約有60多種植物莖葉可用于葉蛋白的提取,紫花苜蓿、桑葉、黑麥草、紫云英是研究與應(yīng)用的常見種類(表1)。葉蛋白作為一類優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)資源,其廣泛應(yīng)用于食品、飼料、醫(yī)療等行業(yè),可有效地緩解我國人均蛋白質(zhì)攝入量不足的問題。近年來,葉蛋白研究多集中在提取方法優(yōu)化和復(fù)合功能性物質(zhì)分析等方面,并且研究內(nèi)容逐漸深入。本文主要從葉蛋白的營養(yǎng)價(jià)值、提取方法、應(yīng)用前景等方面概述其研究進(jìn)展。

    表1 常見葉蛋白的蛋白質(zhì)含量及其應(yīng)用

    1 葉蛋白的營養(yǎng)價(jià)值

    葉蛋白是綠葉植物中所特有的蛋白質(zhì),是在葉中形成的初始蛋白,與經(jīng)過莖葉輸送、累積到籽實(shí)中的蛋白質(zhì)相比,蛋白質(zhì)的分子鏈更短,易于人體的消化吸收。其粗蛋白質(zhì)含量一般可達(dá)30%~60%,所含氨基酸種類齊全,比例均衡,包含人體所需的8種必需氨基酸,且含量均較高。從營養(yǎng)學(xué)角度來看,幾乎完全符合聯(lián)合國糧農(nóng)組織/世界衛(wèi)生組織(FAO/WHO)推薦的人體需要的氨基酸模式。

    除蛋白質(zhì)外,葉蛋白還含有許多營養(yǎng)物質(zhì),如胡蘿卜素、葉黃素、維生素及多種礦物質(zhì)元素等,具有抗氧化、促進(jìn)消化吸收、降低膽固醇等功效。如西蘭花莖葉蛋白肽具有較好的降血脂活性(李露等,2019)。魯梅克斯葉蛋白酶解物具有一定的抗氧化效果,食用后可有效清除體內(nèi)的自由基,減少自由基帶來的氧化損傷(李延琪等,2017)。且綠葉中含豐富的不飽和脂肪酸,非常符合人們當(dāng)下的飲食理念?,F(xiàn)我國已有研究采用一系列方法來制備其水解物,優(yōu)化制備條件并進(jìn)行成分分析,為葉蛋白資源的開發(fā)利用和精深加工提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和技術(shù)參考。

    2 葉蛋白的提取方法

    植物體內(nèi)的天然蛋白質(zhì)一般穩(wěn)定性都比較強(qiáng),即使植物受到了一定的破壞,也不會(huì)對蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)造成影響。在進(jìn)行葉蛋白的提取之前,需要通過壓榨、酶法等手段破壞其穩(wěn)定狀態(tài),利用離心等多種方式實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的沉淀,從而為后期的研究和應(yīng)用提供條件(于群,2019)。目前用到的葉蛋白提取方法有很多,針對不同的葉蛋白需要采取不同的提取方式,在提取過程中一定要綜合考慮多種影響因素,選用合理的提取方法。

    2.1 直接加熱法 直接加熱法是指蛋白質(zhì)在高溫環(huán)境下受熱沉淀而提取蛋白質(zhì)的方法。工藝流程圖如下:

    該方法操作簡單易行,成本低,但是溫度過高會(huì)破壞蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)使其變性,可能會(huì)降低蛋白質(zhì)的活性以及提取率。呂富(2013)利用50~90℃逐漸升溫的加熱法提取水葫蘆葉蛋白,發(fā)現(xiàn)隨著溫度的升高,其葉蛋白得率不斷提高,50~70℃時(shí)升高幅度較大,70℃后葉蛋白得率不再升高,考慮到經(jīng)濟(jì)效率與葉蛋白得率,提取溫度70~80℃最為適宜,葉蛋白得率可達(dá)1.52%,提供了一種水葫蘆葉蛋白提取的可行性方法。

    2.2 酸(堿)化加熱法 酸(堿)化加熱法是將酸堿法和加熱法相結(jié)合的一種復(fù)合蛋白質(zhì)分離方法,在等電點(diǎn)和熱變性雙重因素的作用下,葉片蛋白質(zhì)的聚集效應(yīng)和敏感性提高,導(dǎo)致葉片蛋白質(zhì)快速聚集。工藝流程圖如下:

    該方法蛋白質(zhì)沉淀快、過濾收集較方便,但化學(xué)試劑會(huì)在一定程度上損害葉蛋白的營養(yǎng)成分,并對環(huán)境造成一定的影響。研究發(fā)現(xiàn)以酸化加熱法來提取紅萍葉、木薯葉、黑麥草、構(gòu)樹葉、籽粒莧、黃麻等的葉蛋白效果較好(岑湘濤等,2020;楊有泉等,2013),提取率一般可達(dá)30%以上,提取效率高,但操作較繁雜,適用于實(shí)驗(yàn)室提取。而堿化加熱法適用于提取含有大量等電點(diǎn)偏堿性的葉蛋白(王震等,2016),可以有效減少葉蛋白中的不利因子,并對葉黃素的穩(wěn)定性有一定的保護(hù)作用;但一定程度上破壞了葉蛋白的結(jié)構(gòu),品質(zhì)較差。這表明在制備葉蛋白時(shí),需要根據(jù)想要得到的功能性質(zhì)和實(shí)際應(yīng)用選擇合適的提取工藝。

    2.3 鹽析法 鹽析法是利用各物質(zhì)在不同鹽溶液中的溶解度不同而沉淀析出。常用的中性鹽有硫酸銨、氯化鈉等,工藝流程圖如下:

    該方法可在室溫下進(jìn)行,操作簡單、成本較低,且可以較好的保持蛋白質(zhì)的活性。但是整個(gè)提取過程耗時(shí)較長、效率低。陳秀清(2017)通過正交試驗(yàn)優(yōu)化不同方法提取南美蟛蜞菊葉蛋白的條件,結(jié)果表明鹽析法提取南美蟛蜞菊葉蛋白的得率最高,很好的保持了葉蛋白的活性,且適用于工業(yè)化和實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。楊豪(2021)通過硫酸銨沉淀法提取辣木葉蛋白,優(yōu)化其提取條件,提取率可達(dá)13.49 mg/g。

    2.4 發(fā)酵法 發(fā)酵法是利用菌種發(fā)酵液中的酸效應(yīng)作為蛋白質(zhì)沉淀劑使蛋白質(zhì)提取液中的蛋白沉淀,通過離心分離得到粗蛋白質(zhì)。工藝流程圖如下:

    該方法不會(huì)產(chǎn)生有害物質(zhì),可以有效的減少環(huán)境污染,且發(fā)酵液中含有大量的微生物和生物活性大分子,如酶、菌肽、細(xì)菌素等,促進(jìn)了其聚集作用,同時(shí)在一定程度上可降低粗蛋白質(zhì)中有害物質(zhì)的含量。但發(fā)酵時(shí)間較長,如果要大規(guī)模生產(chǎn),就要求企業(yè)配備發(fā)酵設(shè)備,生產(chǎn)成本較高。屈紅森(2012)利用響應(yīng)面優(yōu)化枯草芽孢桿菌發(fā)酵法提取桑葉蛋白的條件,桑葉蛋白得率和蛋白質(zhì)含量分別提高了10.57%和21.53%,且發(fā)酵后桑葉蛋白的體外消化能力也得到了顯著提高,桑葉蛋白的品質(zhì)得到改善。

    2.5 超聲波輔助法 超聲波輔助法是利用超聲波產(chǎn)生的空化、振動(dòng)、粉碎、攪拌等輔以其他方法提取葉蛋白,加快蛋白的溶出,有效減少提取時(shí)間,提高提取效率,常與其他方法聯(lián)用。工藝流程圖如下:

    有研究表明,超聲波輔助提取葉蛋白在蛋白質(zhì)產(chǎn)量上優(yōu)于非超聲法,且增強(qiáng)了蛋白質(zhì)的乳化性、發(fā)泡性、吸油性、熱穩(wěn)定性等功能特性(Saha等,2017)。許英一(2013)在堿法提取苜蓿葉蛋白基礎(chǔ)上加以超聲波輔助,并對工藝條件進(jìn)行優(yōu)化,粗蛋白質(zhì)提取率可達(dá)51.09%,提高了提取率,并大大縮短了提取時(shí)間。職士淇(2020)應(yīng)用超聲波輔助堿溶液、鹽溶液和水溶液提取苧麻葉蛋白的起泡性優(yōu)于大豆分離蛋白,且超聲波輔助鹽提法提取率可達(dá)61.95%,為青葉苧麻葉的開發(fā)利用提供更多的理論依據(jù)。

    2.6 其他 目前,提取葉蛋白的方法除了以上所提到的還有泡沫分離法、微波輔助法、酶輔助法、超高壓等,但由于這些方法有能耗大、不易操作、效率低等局限性,在實(shí)驗(yàn)室和工業(yè)化生產(chǎn)中應(yīng)用較少。劉龍(2017)以回收率和富集比為指標(biāo),利用泡沫分離技術(shù)提取菠菜葉中的蛋白質(zhì),并優(yōu)化其提取條件,回收率和富集比可達(dá)81.56%、14.94。證明了泡沫分離技術(shù)是一種實(shí)現(xiàn)菠菜葉蛋白粗分離的有效的、低成本的方法,但是大多適用于低濃度,具有表面活性物質(zhì)的分離提取。有關(guān)菠菜葉蛋白功能性質(zhì)的改善及高濃度下的泡沫分離技術(shù)還需要進(jìn)一步研究。Moreno-Nájera(2020)利用超聲波輔助、微波輔助、超高壓等技術(shù)提取菠蘿蜜葉蛋白,發(fā)現(xiàn)以0.5 mol/L NaCl為環(huán)境友好溶劑的超高壓法可獲得較高的蛋白質(zhì)得率,提供了一系列綠色技術(shù)提取蛋白的可能性。

    3 應(yīng)用前景

    3.1 飼用價(jià)值 植物葉蛋白廣泛應(yīng)用于飼料生產(chǎn),有效緩解了我國飼料行業(yè)資源短缺的現(xiàn)狀,改善了飼料的營養(yǎng)價(jià)值。我國的研究工作主要集中在苜蓿、黑麥草、桑葉等,均可簡單加工為優(yōu)質(zhì)蛋白飼料飼喂動(dòng)物,也可作為添加劑加入到飼料中提高其營養(yǎng)價(jià)值。比如苜蓿、木薯葉蛋白富含各類氨基酸,可滿足動(dòng)物的營養(yǎng)需求。不僅成本低,且提高了作物的附加值。食葉草也是近年來出現(xiàn)的一種蛋白質(zhì)新資源,蛋白質(zhì)含量高,氨基酸種類較為豐富,能夠滿足動(dòng)物的生長需求,有巨大的發(fā)展前景。例如,飼料中添加濃縮苜蓿葉蛋白不僅可以提高飼料中蛋白質(zhì)含量,也提高了牛奶中高純度多不飽和脂肪酸的氧化穩(wěn)定性,利用此方法提高牛奶抗氧化水平來減少氧化(Fauteux等,2016)。范利花(2012)提取檸條葉蛋白后產(chǎn)生的殘?jiān)捎没炀l(fā)酵,得到的發(fā)酵飼料是一種品質(zhì)良好的動(dòng)物飼料。整個(gè)過程操作簡單、成本低廉,改變了檸條的傳統(tǒng)利用方式。

    3.2 食用價(jià)值 當(dāng)今時(shí)代,人們逐漸意識(shí)到膳食結(jié)構(gòu)對于身體健康的重要性,這導(dǎo)致葉蛋白作為原料在肉類替代品、乳制品類似物、休閑食品等產(chǎn)品中被廣泛應(yīng)用。目前,已經(jīng)出現(xiàn)了很多葉蛋白延伸產(chǎn)品,以及將提取所得葉蛋白以添加劑的方式應(yīng)用于食品中,用以提高食品的營養(yǎng)價(jià)值,改善人們的膳食結(jié)構(gòu)。如以小麥、綠豆和大米為原料,添加用雜交莧、辣木和白銀合歡3種不同葉片為材料制備混合葉蛋白濃縮物L(fēng)PC制成斷奶食品。使食物更有營養(yǎng),從而解決營養(yǎng)不良問題(Meda等,2017)。

    3.3 醫(yī)用價(jià)值 除卻用作動(dòng)物飼料與食品,很多葉蛋白表現(xiàn)出抑菌、防癌、降血脂等功效,對醫(yī)療行業(yè)的發(fā)展有一定的推動(dòng)作用。近年來,研究將視線聚焦于葉蛋白內(nèi)功能性物質(zhì)的提取并對蛋白進(jìn)行改性,研究其作用機(jī)制及其應(yīng)用。如桑葉蛋白水解物通過整合腸道菌群和免疫功能來緩解結(jié)腸炎,維持腸道健康,降低結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)(Sun等,2021);苜蓿葉蛋白及其水解肽具有一定的抗氧化活性,同時(shí)具有降血脂、抗衰老、增強(qiáng)免疫力等功能,已有研究者采用一些小分子糖類物質(zhì)對苜蓿葉蛋白進(jìn)行糖基化改性,有效改善了苜蓿葉蛋白的功能特性,拓寬了其應(yīng)用范圍;辣木葉蛋白對四氧嘧啶誘導(dǎo)的糖尿病小鼠具有降血糖和抗氧化作用,對小鼠無急性毒性,是一種很有前途的糖尿病替代或補(bǔ)充藥物(Paula等,2017)。

    4 結(jié)束語

    葉蛋白來源廣泛,營養(yǎng)豐富。近年來對于葉蛋白的研究,提高了作物的附加值,最大程度上利用了作物資源,緩解了我國蛋白資源短缺的現(xiàn)狀,進(jìn)一步完善優(yōu)化了國民膳食結(jié)構(gòu)。目前已有很多提取葉蛋白的方法,提取率在逐漸提升,但大多僅限于實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用,產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用方法比較局限,仍然需要進(jìn)一步研究產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)中如何降低原料成本和能耗,提高提取效率。且大部分葉蛋白制品普遍為深綠色或棕色,有一定青草味,顏色和口感均限制了其應(yīng)用范圍及商業(yè)價(jià)值?,F(xiàn)在常用到吸附法、有機(jī)溶劑和超臨界CO2流體萃取技術(shù)等進(jìn)行脫色,獲取高品質(zhì)葉蛋白。采用有機(jī)溶劑法脫色分離對溶劑消耗量大,成本較高;而超臨界CO2流體萃取以CO2為萃取劑,設(shè)備投資較高?,F(xiàn)用的提取和脫色方法均存在一定的缺陷,且在加工過程中如何最大限度保護(hù)維生素、活性物質(zhì)等有效成分,去除葉蛋白制品中的抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)和毒素,保證葉蛋白的營養(yǎng)性和安全性是有待解決的問題。因此探索低成本、安全、高效的提取和脫色方法是獲取高品質(zhì)葉蛋白的必要途徑。

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