• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    抗栓膠囊中黃曲霉毒素的含量測定及安全性評價

    2022-11-16 08:49:38薛平顧崢嶸劉旻虹李莉常州市食品藥品纖維質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心江蘇常州213000
    中南藥學(xué) 2022年10期
    關(guān)鍵詞:抗栓黃曲霉藥典

    薛平,顧崢嶸,劉旻虹,李莉(常州市食品藥品纖維質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心,江蘇 常州 213000)

    抗栓膠囊由當(dāng)歸尾、水蛭、土鱉蟲、丹參、烏梢蛇、麝香、馬錢子、骨碎補(bǔ)、僵蠶、蜈蚣、延胡索、蟾酥等19 味藥材制成,具有活血化瘀、抗栓通脈之功效;一般用于血栓閉塞性脈管炎瘀血阻絡(luò)證,常用于輔助治療腦血栓、心肌梗死、血栓性靜脈炎等疾病[1-3]。

    目前抗栓膠囊的質(zhì)量研究主要是針對當(dāng)歸尾、丹參和甘草等藥材的薄層色譜鑒別及丹參酮ⅡA、士的寧等標(biāo)志成分的含量測定,而安全性探索相對較少[1-3]??顾z囊中含有土鱉蟲生藥粉末,關(guān)于土鱉蟲黃曲霉毒素超標(biāo)的現(xiàn)象時有報道[4-5]。中藥外源性有害物質(zhì)黃曲霉毒素的檢測和控制是藥品質(zhì)量控制的重中之重[6],目前該藥仍未進(jìn)行過黃曲霉毒素的安全性評估。

    黃曲霉毒素(AFT)是公認(rèn)的超級毒性致癌物,其種類較多,黃曲霉毒素的種類主要有黃曲霉毒素B1(AFB1)、B2(AFB2)、G1(AFG1)、G2(AFG2)、M1(AFM1)和M2(AFM2)等,其中AFB1毒性最強(qiáng),中藥制劑主要涉及AFB1、AFB2、AFG1和AFG2[5-7]。本文采用免疫親和柱凈化高效液相色譜柱后衍生熒光法(HPLC-FLD)和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS)測定抗栓膠囊中AFB1、AFB2、AFG1和AFG2的殘留量。兩種檢測方法互相驗(yàn)證,排除干擾,在符合《中國藥典》2020年版要求的前提下,完善檢測方法[7]。通過測定抗栓膠囊樣品中黃曲霉毒素的殘留量,為該藥的質(zhì)量控制和監(jiān)管提供參考。

    1 儀器與試藥

    LC-20A 高效液相色譜儀、RF-20AXS 熒光檢測器(日本島津有限公司);光化學(xué)衍生器(美國AURA);LCMS-8060 高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(日本島津);XP504 電子天平(萬分之一,瑞士梅特勒-托利多公司);KQ5200DE 超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);IKA T25 分散機(jī)[艾卡(廣州)儀器設(shè)備有限公司];Thermo Scientific Multifuge X4R Pro 臺式冷凍離心機(jī)[賽默飛世爾科技(中國)有限公司]。黃曲霉毒素混合對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號:610001-202107:AFB1以 1.08 μg·mL-1計(jì)算;AFB2以 0.33μg·mL-1計(jì)算;AFG1以 1.01 μg·mL-1計(jì)算;AFG2以0.30 μg·mL-1計(jì)算]。4 種不同品牌3 mL規(guī)格的免疫親和柱[廠家分別為VICAM(維康)、ROMER、華安麥科和青島普瑞邦(Pribolab)],甲醇、乙腈和乙酸銨均為色譜純,水為去離子水,氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鉀和吐溫20 均為分析純??顾z囊樣品來自全國20 個省級行政區(qū),涉及9 家生產(chǎn)企業(yè)(編號A~I(xiàn)),共29批次樣品。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 色譜條件[7-10]

    2.1.1 HPLC-FLD 色譜柱:Agilent ZORBAX SB C18(4.6 mm×150 mm,5 μm);流動相:甲醇-乙腈-水(16∶16∶68);流速:1.0 mL·min-1;柱溫:40℃;柱后光化學(xué)衍生法:光化學(xué)衍生器(254 nm);檢測器:熒光檢測器,激發(fā)波長λex:360 nm,發(fā)射波長λem:450 nm。

    2.1.2 LC-MS 色譜柱:Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18(2.1 mm×100 mm,1.9 μm);流動相:10 mmol·L-1醋酸銨溶液為流動相A,以甲醇為流動相B;流速:0.3 mL·min-1,梯度洗脫(0~4.5 min,65%→15%A;4.5~6 min,15%→0%A;6~6.5 min,0%→65%A;6.6~10 min,65%A);柱溫:25℃;進(jìn)樣量:5 μL。

    離子源:電噴霧離子源(ESI);離子源接口溫度:300℃;脫溶劑溫度:526℃;DL 管溫度:250 ℃;載氣流速:2 L·min-1;加熱器流量:10 L·min-1;加熱塊溫度:400℃;干燥氣流速:10 L·min-1;采集模式為正離子模式;各化合物監(jiān)測離子對和碰撞電壓(CE)見表1。

    表1 監(jiān)測離子對、碰撞電壓Tab 1 Monitor ion pair and collision voltage

    2.2 溶液的制備

    2.2.1 對照品溶液 精密量取黃曲霉毒素混合對照品溶液1 mL,置20 mL 量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,作為對照品儲備液。

    HPLC-FLD 對照品溶液:精密量取上述對照儲備液1 mL,置25 mL 量瓶中,用70%甲醇稀釋至刻度,即得。

    LC-MS 系列對照品溶液:精密量取對照儲備液適量,用70%甲醇稀釋成含AFB2、AFG2質(zhì)量濃度為0.03~0.6 ng·mL-1,含AFB1、AFG1質(zhì)量濃度為0.12~2 ng·mL-1的系列對照品溶液,見表2。

    表2 系列混合對照品溶液質(zhì)量濃度(ng·mL-1)Tab 2 Concentration of series mixed reference solution (ng·mL-1)

    2.2.2 供試品溶液[7-8]取抗栓膠囊樣品內(nèi)容物粉末約5 g,精密稱定,置于均質(zhì)瓶中,精密加入70%乙腈溶液75 mL,高速攪拌2 min(11 000 r·min-1),4000 r·min-1離心5 min,精密量取上清液7 mL,置50 mL 量瓶中,用緩沖液(稱取8.0 g 氯化鈉、1.2 g 磷酸氫二鈉、0.2 g 磷酸二氫鉀、0.2 g 氯化鉀,加水990 mL 使溶解,用鹽酸調(diào)節(jié)pH 值至7.0,加水稀釋至1000 mL,即可)稀釋至刻度,搖勻,離心10 min,過濾(用玻璃纖維濾紙過濾),精密量取上清液20 mL,通過免疫親和柱,流速3 mL·min-1,用10 mL 含1%吐溫20 的水洗脫,再用20 mL 水洗脫,棄去洗脫液,再用1.5 mL 甲醇洗脫,收集洗脫液,置2 mL 量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.22 μm)濾過,取續(xù)濾液,即得。

    2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

    2.3.1 HPLC-FLD 取“2.2.1”項(xiàng)下HPLC-FLD 對照品溶液按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣5 μL;陰性樣品(未檢出AFB1、AFB2、AFG1和AFG2)和供試品溶液各進(jìn)樣20 μL 測定,黃曲霉毒素兩個相鄰色譜峰的分離度均大于1.5,典型色譜圖見圖1。

    圖1 陰性樣品(A)、對照品(B)、供試品(C)的液相熒光色譜圖Fig 1 Liquid phase fluorescence chromatogram of negative sample(A),reference(B),and sample(C)

    2.3.2 LC-MS 取表2中的3 號對照品溶液、陰性樣品(未檢出AFB1、AFB2、AFG1和AFG2)和供試品溶液按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣5 μL 測定,結(jié)果各峰形良好,響應(yīng)高,試驗(yàn)條件滿足測定要求,典型色譜圖見圖2。

    圖2 陰性樣品(A)、對照品(B)、供試品(C)質(zhì)譜MRM 的TIC色譜圖Fig 2 TIC chromatogram of mass spectrometry MRM of negative sample(A),reference(B),and sample(C)

    2.4 線性關(guān)系考察

    2.4.1 HPLC-FLD 分別精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下HPLC-FLD 對照品溶液1、2、5、10、15、20、25 μL,注入液相色譜儀,測定峰面積,以峰面積(Y)為縱坐標(biāo),進(jìn)樣量(X,μL)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果見表3。

    2.4.2 LC-MS 分別精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下LC-MS系列對照品溶液進(jìn)樣5 μL,測定峰面積,以峰面積(Y)為縱坐標(biāo),進(jìn)樣質(zhì)量濃度(X,ng·mL-1)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果見表3。

    2.5 精密度試驗(yàn)

    2.5.1 HPLC-FLD 取“2.2.1”項(xiàng)下的HPLC-FLD對照品溶液,按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6 針,結(jié)果峰面積RSD,AFG2、AFG1、AFB2和AFB1峰面積RSD分別為1.2%、0.92%、0.75%和0.59%,表明儀器精密度良好。

    2.5.2 LC-MS 取表2中的3 號對照品溶液,按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6 針,計(jì)算峰面積RSD,結(jié)果AFG2、AFG1、AFB2和AFB1峰面積RSD分別為6.9%、4.1%、5.1%和2.9%,表明儀器精密度良好。

    2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

    取抗栓膠囊樣品(生產(chǎn)企業(yè)F,批號:200510),按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析,HPLC-FLD 進(jìn)樣20 μL,LC-MS 進(jìn)樣5 μL,平行操作6 份。HPLC-FLD 法測得AFG2、AFG1、AFB2和AFB1含量的RSD分別為5.2%、5.3%、4.3%和4.1%;LC-MS 測得AFG2、AFG1、AFB2和AFB1含量的RSD分別為7.9%、5.9%、6.6%和5.9%,RSD均小于10%,表明本方法重復(fù)性良好,兩種檢測方法均可行。

    2.7 檢測限與定量限

    2.7.1 HPLC-FLD 取“2.2.1”項(xiàng)下HPLC-FLD對照品溶液稀釋至一定的濃度,在 “2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析。以信噪比為10∶1 時相應(yīng)濃度計(jì)算定量限,以信噪比為3∶1 時相應(yīng)濃度計(jì)算檢測限,定量限與檢測限均折算到試樣中被測物能被檢測出的量,結(jié)果見表3。

    2.7.2 LC-MS 取“2.2.1”項(xiàng)下LC-MS 系列對照品溶液中濃度最低的對照品溶液稀釋至一定的濃度,在 “2.1.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析。以信噪比為10∶1 時相應(yīng)濃度計(jì)算定量限,以信噪比為3∶1 時相應(yīng)濃度計(jì)算檢測限,結(jié)果見表3。

    表3 線性關(guān)系、檢測限和定量限Tab 3 Linear,LOD and LOQ

    2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

    取抗栓膠囊樣品(生產(chǎn)企業(yè)F,批號:200510),按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。在0、2、4、6、10、12、16、24 h 時分別按“2.1”項(xiàng)下兩種色譜條件進(jìn)行分析,HPLC-FLD 進(jìn)樣20 μL,LC-MS進(jìn)樣5 μL,計(jì)算峰面積RSD。HPLC-FLD 法測得AFG2、AFG1、AFB2和AFB1峰面積的RSD分別為1.5%、0.83%、0.57%和0.56%;LC-MS 測得AFG2、AFG1、AFB2和AFB1峰面積的RSD分別為4.7%、3.3%、6.0%和2.0%,表明供試品溶液穩(wěn)定性良好,檢測方法可行。

    2.9 加樣回收試驗(yàn)

    取抗栓膠囊空白樣品(不含黃曲霉毒素)5 g,平行6 份,精密稱定,精密加入對照儲備液0.5 mL,按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液后,分別按“2.1”項(xiàng)下兩種色譜條件進(jìn)行分析,HPLC-FLD進(jìn)樣20 μL,LC-MS 進(jìn)樣5 μL,結(jié)果HPLC-FLD法平均加樣回收率(RSD)分別為AFG291.79%(1.3%)、AFG188.29%(2.1%)、AFB298.48%(1.3%)、AFB198.82%(1.1%);LC-MS 法平均加樣回收率(RSD)分別為AFG291.31%(5.8%)、AFG192.54%(4.1%)、AFB299.62%(4.4%)、AFB194.03%(2.8%),表明本試驗(yàn)準(zhǔn)確度良好。

    2.10 樣品測定

    取不同生產(chǎn)企業(yè)的抗栓膠囊樣品,按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,分別采用“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析,HPLC-FLD 進(jìn)樣20 μL,LC-MS 進(jìn)樣5 μL,計(jì)算樣品中4 種黃曲霉毒素的含量及其總量,結(jié)果見表4。部分超出線性范圍的供試品溶液稀釋后進(jìn)樣測定。

    表4 樣品測定結(jié)果(μg·kg-1)Tab 4 Sample determination results (μg·kg-1)

    HPLC-FLD 和LC-MS 兩種方法測定結(jié)果相對一致,其中液相色譜光化學(xué)衍生法HPLC-FLD 成本低,可成為生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量控制方法的首選?!吨袊幍洹?020年版中將LC-MS 作為黃曲霉毒素測定的驗(yàn)證結(jié)果,故以LC-MS 測定結(jié)果統(tǒng)計(jì)。AFG2的含量為0~28.946 μg·kg-1,AFG1的含量為0~496.11 μg·kg-1,AFB2的含量為0.029~37.751 μg·kg-1,AFB1的含量為1.115~481.879 μg·kg-1;4種黃曲霉毒素的總量為1.442~1044.686 μg·kg-1。29 批次樣品中黃曲霉毒素檢出率極高,其中AFB1檢出率100%。《中國藥典》2020年版中有關(guān)黃曲霉毒素的規(guī)定均為每1000 g 含AFB1不得過5 μg,AFG2、AFG1、AFB2和AFB1的總量不得過10 μg。參考此限度,按藥典的數(shù)據(jù)修約規(guī)則,29 批次樣品其中10 個批次樣品AFB1超過5 μg,且AFG2、AFG1、AFB2和AFB1的總量超過10 μg;1 批次樣品AFG2、AFG1、AFB2和AFB1的總量超過10 μg。29 批次樣品中黃曲霉毒素的不合格率為38%,其中一批次黃曲霉毒素殘留量遠(yuǎn)超參考限度,安全風(fēng)險相對較高。

    3 討論

    3.1 測定方法的優(yōu)化

    本試驗(yàn)測定方法主要參考《中國藥典》2020年版2351 真菌毒素測定法項(xiàng)下的黃曲霉毒素測定法,同時進(jìn)行了部分優(yōu)化。優(yōu)化原因主要是抗栓膠囊基質(zhì)復(fù)雜,預(yù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)雜質(zhì)對待測成分測定干擾較大。免疫親和柱一般要求過柱的作業(yè)溶液pH 值為中性,抗栓膠囊初始提取液pH 值大約為5.3,整體偏酸性;過柱的作業(yè)溶液要求含甲醇量不超過20%,含乙腈不得過10%。作業(yè)溶液pH 值過低或者過高,含有機(jī)相過高均不利于免疫親和柱吸附黃曲霉毒素。

    前期試驗(yàn)考察了提取溶劑70%甲醇、80%甲醇、70%乙腈、80%乙腈和1%甲酸的70%甲醇的提取效果,發(fā)現(xiàn)70%乙腈提取效率最高。

    考察測定量和取樣量的影響:取混合好的抗栓膠囊內(nèi)容物各5、10、15 g,比較樣品中待測成分的含量,試驗(yàn)總體結(jié)果表明測定稱樣量為5 g 時,已經(jīng)可以達(dá)到測定要求,但每盒樣品中的內(nèi)容物可能會出現(xiàn)不均勻現(xiàn)象。對比了取樣10、50、100、200 g 的試驗(yàn)結(jié)果,建議每個批次樣品內(nèi)容物取樣量不少于100 g。

    選擇市場上常見的4 種不同品牌的免疫親和柱進(jìn)行比較,結(jié)果表明不同品牌的親和柱對測定影響較小,本試驗(yàn)方法兼容性良好。

    3.2 建議與存在的不足

    黃曲霉毒素毒性極強(qiáng),目前大多不建議設(shè)定黃曲霉毒素的安全耐受量和無毒作用劑量,限量越低越好[10]??顾z囊組方復(fù)雜,組方中有大量的原料藥按《中國藥典》2020年版需要進(jìn)行黃曲霉毒素限量檢查,限量檢查的品種包括土鱉蟲、蜈蚣、水蛭、蜂房、地龍、醋延胡索、制馬錢子(藥材及生馬錢子飲片要求檢驗(yàn))和麩炒僵蠶(藥材及僵蠶飲片要求檢驗(yàn))。

    部分樣品AFG2、AFG1、AFB2和AFB1含量殘留量極高原因跟生產(chǎn)企業(yè)的風(fēng)險意識不強(qiáng)有關(guān),客觀原因是此次抽檢的樣品生產(chǎn)日期處于2020年版《中國藥典》換版期間,生產(chǎn)企業(yè)原料藥均按《中國藥典》2015年版檢驗(yàn),這些高危品種大部分在2015年版藥典均未要求進(jìn)行黃曲霉毒素限量檢查,存在一定的安全監(jiān)控的漏洞。

    為分析抗栓膠囊黃曲霉毒素含量過高的原因,對收到的生產(chǎn)企業(yè)B 和企業(yè)E 寄送的部分原料和小樣進(jìn)行了檢測,發(fā)現(xiàn)生產(chǎn)企業(yè)B 提供的原料蜂房AFG2、AFG1、AFB2和AFB1殘留量較高,嚴(yán)重超過了《中國藥典》2020年版蜂房下的標(biāo)準(zhǔn)限度。遺憾的是未能獲得黃曲霉毒素殘留量較高樣品相對應(yīng)的原料藥,生產(chǎn)企業(yè)寄送的部分原料不具有顯著代表性,抗栓膠囊黃曲霉毒素污染的具體原因仍需進(jìn)一步探究。課題組根據(jù)與相關(guān)生產(chǎn)企業(yè)溝通、日常相關(guān)飲片檢驗(yàn)的數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)[9-12]推測抗栓膠囊黃曲霉毒素污染是上述多種高危原料飲片共同導(dǎo)致的結(jié)果,其中土鱉蟲、醋延胡索和蜂房可能是最主要的源頭,蜈蚣、水蛭、地龍、制馬錢子和麩炒僵蠶可能是次要源頭。

    抗栓膠囊主要服用人群為老年人,黃曲霉毒素是中藥外源性有害物質(zhì)量控制的重中之重。基于上述試驗(yàn)結(jié)果,抗栓膠囊存在黃曲霉毒素污染的安全風(fēng)險,課題組已向國家藥品監(jiān)督管理局建議增加抗栓膠囊的黃曲霉毒素限量檢查,加大該藥的安全監(jiān)控;但此藥的安全質(zhì)量更需要相關(guān)企業(yè)加強(qiáng)黃曲霉毒素方面的質(zhì)量控制的意識,嚴(yán)格把控原料的質(zhì)量,保證用藥安全。

    猜你喜歡
    抗栓黃曲霉藥典
    IAC-HPLC-ESI-MS/MS法測定不同產(chǎn)地柏子仁中4種黃曲霉毒素
    中成藥(2021年5期)2021-07-21 08:38:40
    雞黃曲霉毒素中毒的臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室診斷與防治
    還有多少“穿山甲”需從藥典除名
    2015年版《中國獸藥典》編制完成
    冠心病患者四聯(lián)抗栓治療出血風(fēng)險的觀察及護(hù)理
    房顫合并急性冠脈綜合征患者的藥物抗栓治療進(jìn)展
    中國藥房(2016年29期)2016-02-01 03:39:14
    腦梗死應(yīng)用辛伐他汀聯(lián)合抗栓治療的臨床觀察
    家兔黃曲霉毒素中毒的治療與預(yù)防
    國家藥典委員會對《中國藥典》2015年版三部增修訂內(nèi)容征求意見
    水產(chǎn)品中的黃曲霉毒素:一個潛在的食品安全問題
    噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产精品一区二区在线观看99| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 少妇被粗大猛烈的视频| 搡老乐熟女国产| 男人爽女人下面视频在线观看| 日日啪夜夜爽| 色94色欧美一区二区| av免费观看日本| 青春草亚洲视频在线观看| 午夜福利影视在线免费观看| 久久久国产欧美日韩av| 久久人妻熟女aⅴ| 99热国产这里只有精品6| 一级毛片久久久久久久久女| 青春草国产在线视频| 一级毛片aaaaaa免费看小| 国产熟女欧美一区二区| 久久久久久久久大av| 亚洲色图综合在线观看| 内地一区二区视频在线| 黑丝袜美女国产一区| 少妇被粗大猛烈的视频| av国产久精品久网站免费入址| 18禁动态无遮挡网站| 国产伦理片在线播放av一区| a级毛片在线看网站| xxx大片免费视频| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 高清毛片免费看| 成年人免费黄色播放视频 | 精品久久久久久电影网| av卡一久久| 国产精品蜜桃在线观看| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲怡红院男人天堂| 国产高清有码在线观看视频| 乱人伦中国视频| www.av在线官网国产| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产精品女同一区二区软件| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲经典国产精华液单| 亚州av有码| 亚洲高清免费不卡视频| 国产免费又黄又爽又色| 亚洲精品亚洲一区二区| av天堂久久9| 少妇人妻精品综合一区二区| 午夜福利,免费看| 免费人妻精品一区二区三区视频| 久久影院123| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产午夜精品一二区理论片| 国产精品成人在线| 日本av手机在线免费观看| a级毛色黄片| 久久久欧美国产精品| 男女啪啪激烈高潮av片| 青春草亚洲视频在线观看| 国产精品国产三级国产专区5o| 少妇的逼水好多| a级毛片在线看网站| 丰满乱子伦码专区| 99热这里只有是精品在线观看| 91精品一卡2卡3卡4卡| 亚洲精品亚洲一区二区| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 另类精品久久| 精品少妇黑人巨大在线播放| 精品国产一区二区久久| 亚洲va在线va天堂va国产| 乱码一卡2卡4卡精品| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 极品人妻少妇av视频| 精品国产国语对白av| 亚洲精品一区蜜桃| 中文字幕人妻丝袜制服| 免费av中文字幕在线| 国产成人aa在线观看| av视频免费观看在线观看| 大话2 男鬼变身卡| 欧美国产精品一级二级三级 | 国产精品无大码| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 美女视频免费永久观看网站| 黄色日韩在线| 久久久久久久久大av| 亚洲综合精品二区| 亚洲第一av免费看| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产高清国产精品国产三级| 六月丁香七月| 精品少妇内射三级| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 欧美成人午夜免费资源| 九九爱精品视频在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 成人国产麻豆网| 久久久久久伊人网av| 欧美少妇被猛烈插入视频| 久久青草综合色| av在线播放精品| 亚洲av免费高清在线观看| 久久精品国产亚洲网站| 成年av动漫网址| 久久毛片免费看一区二区三区| 亚洲国产日韩一区二区| 精品国产露脸久久av麻豆| 两个人的视频大全免费| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 99热网站在线观看| 欧美性感艳星| 免费观看的影片在线观看| 婷婷色av中文字幕| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 久久久久久久精品精品| 97在线人人人人妻| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产有黄有色有爽视频| 国产精品三级大全| 欧美成人精品欧美一级黄| 岛国毛片在线播放| 久久久国产一区二区| 国产黄色视频一区二区在线观看| 黄色一级大片看看| 国产亚洲91精品色在线| 免费在线观看成人毛片| 亚洲成色77777| 日韩中文字幕视频在线看片| 在线观看www视频免费| 五月开心婷婷网| 日日撸夜夜添| 韩国av在线不卡| 国产一区二区三区综合在线观看 | 久久99蜜桃精品久久| 好男人视频免费观看在线| av一本久久久久| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲成人一二三区av| 精品久久久噜噜| 五月开心婷婷网| 只有这里有精品99| 777米奇影视久久| 午夜福利影视在线免费观看| 久久久欧美国产精品| 观看av在线不卡| 99九九在线精品视频 | 少妇人妻一区二区三区视频| 老司机影院成人| 国产精品不卡视频一区二区| 精品国产乱码久久久久久小说| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 人妻 亚洲 视频| 久久国产乱子免费精品| 女性被躁到高潮视频| 亚洲精品一二三| 日韩伦理黄色片| 国产精品久久久久成人av| 午夜免费男女啪啪视频观看| www.色视频.com| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 亚洲欧美日韩东京热| 久久久久久久久大av| 日韩亚洲欧美综合| 成年人免费黄色播放视频 | 久热久热在线精品观看| 永久免费av网站大全| 偷拍熟女少妇极品色| av线在线观看网站| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 国产精品一区二区在线不卡| 久久久国产欧美日韩av| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 国产精品一区二区性色av| 国产精品蜜桃在线观看| 久久狼人影院| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 成人特级av手机在线观看| 性色avwww在线观看| 精品一区在线观看国产| 热re99久久国产66热| 最近2019中文字幕mv第一页| 免费看av在线观看网站| 香蕉精品网在线| 国产日韩欧美亚洲二区| 久久精品国产亚洲av天美| 高清视频免费观看一区二区| 午夜福利网站1000一区二区三区| 我的女老师完整版在线观看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 男女无遮挡免费网站观看| 亚洲国产日韩一区二区| 少妇人妻一区二区三区视频| 亚洲av免费高清在线观看| 亚洲性久久影院| 中国三级夫妇交换| 99热这里只有是精品在线观看| 欧美最新免费一区二区三区| 午夜免费鲁丝| av专区在线播放| 亚洲无线观看免费| 久久久久久伊人网av| 99热全是精品| 国产成人精品无人区| 日本爱情动作片www.在线观看| 午夜影院在线不卡| 视频区图区小说| 水蜜桃什么品种好| 精品熟女少妇av免费看| 久久99热这里只频精品6学生| 日本91视频免费播放| 日日啪夜夜撸| 久久久久网色| 老司机影院毛片| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 男女边摸边吃奶| 好男人视频免费观看在线| 18+在线观看网站| av免费在线看不卡| 国产精品蜜桃在线观看| 蜜臀久久99精品久久宅男| 插阴视频在线观看视频| 国产在线免费精品| 亚洲情色 制服丝袜| 日本91视频免费播放| 91aial.com中文字幕在线观看| 我要看黄色一级片免费的| 午夜福利,免费看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 中文字幕免费在线视频6| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 卡戴珊不雅视频在线播放| 亚洲丝袜综合中文字幕| 黑人高潮一二区| 亚洲国产欧美日韩在线播放 | 亚洲精品国产av成人精品| 高清视频免费观看一区二区| 久久久精品94久久精品| 国产免费又黄又爽又色| 精品久久久久久电影网| 韩国高清视频一区二区三区| av网站免费在线观看视频| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| www.av在线官网国产| 成人特级av手机在线观看| videos熟女内射| 欧美日韩在线观看h| 麻豆成人午夜福利视频| 中文字幕人妻丝袜制服| av卡一久久| 中国美白少妇内射xxxbb| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 热re99久久精品国产66热6| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 免费看日本二区| 男的添女的下面高潮视频| 高清不卡的av网站| kizo精华| 激情五月婷婷亚洲| 精品视频人人做人人爽| 一区二区av电影网| 欧美成人精品欧美一级黄| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲精品国产av成人精品| 人人妻人人看人人澡| 高清黄色对白视频在线免费看 | 国产男女超爽视频在线观看| 国产成人精品无人区| 国产精品三级大全| 亚洲四区av| 亚洲精品一二三| 搡女人真爽免费视频火全软件| 久久99热这里只频精品6学生| 97精品久久久久久久久久精品| 国产欧美日韩精品一区二区| 日韩一本色道免费dvd| 黑人猛操日本美女一级片| 一级黄片播放器| 国产毛片在线视频| 黄片无遮挡物在线观看| 久久青草综合色| 18禁动态无遮挡网站| 大香蕉久久网| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲国产最新在线播放| 观看免费一级毛片| 男女免费视频国产| 一级片'在线观看视频| 国产精品99久久99久久久不卡 | 精品久久久久久电影网| 内地一区二区视频在线| 国产欧美日韩综合在线一区二区 | 午夜福利网站1000一区二区三区| 春色校园在线视频观看| 久久久久久久久久人人人人人人| 在线观看国产h片| 免费看日本二区| 在线观看av片永久免费下载| av女优亚洲男人天堂| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 黄色毛片三级朝国网站 | 大片免费播放器 马上看| 十八禁网站网址无遮挡 | 久久久国产精品麻豆| 一级毛片久久久久久久久女| 亚洲,欧美,日韩| 男女国产视频网站| 国产午夜精品一二区理论片| 国产亚洲最大av| 精品一品国产午夜福利视频| 九色成人免费人妻av| 在线观看人妻少妇| 一本色道久久久久久精品综合| av线在线观看网站| www.色视频.com| 99热这里只有精品一区| 哪个播放器可以免费观看大片| a级毛色黄片| 日韩av在线免费看完整版不卡| 亚洲av免费高清在线观看| 欧美区成人在线视频| 美女内射精品一级片tv| 色网站视频免费| 美女福利国产在线| 亚洲经典国产精华液单| 国产免费一区二区三区四区乱码| av天堂中文字幕网| 成人无遮挡网站| 五月开心婷婷网| 亚洲色图综合在线观看| 亚洲中文av在线| 国产高清有码在线观看视频| 国产成人精品福利久久| 嫩草影院入口| 亚洲成人av在线免费| 嫩草影院入口| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 毛片一级片免费看久久久久| 老司机影院毛片| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 九九在线视频观看精品| 亚洲综合精品二区| 国产成人精品久久久久久| 免费观看的影片在线观看| 99视频精品全部免费 在线| 精品少妇内射三级| 国产av精品麻豆| 精品国产国语对白av| 免费av不卡在线播放| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 欧美日本中文国产一区发布| 国产av国产精品国产| 久久鲁丝午夜福利片| 久久精品久久精品一区二区三区| 国产精品.久久久| 久久97久久精品| 国产成人精品福利久久| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 国产av码专区亚洲av| 人妻人人澡人人爽人人| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产在视频线精品| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 日韩免费高清中文字幕av| 国产av精品麻豆| 精品久久久精品久久久| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 一区二区三区乱码不卡18| 欧美日韩综合久久久久久| 国产精品女同一区二区软件| 欧美97在线视频| 街头女战士在线观看网站| 中文字幕av电影在线播放| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 搡老乐熟女国产| 熟妇人妻不卡中文字幕| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 夫妻午夜视频| 欧美 日韩 精品 国产| 边亲边吃奶的免费视频| 亚洲色图综合在线观看| 男女无遮挡免费网站观看| 亚洲熟女精品中文字幕| 热99国产精品久久久久久7| 欧美高清成人免费视频www| 日日撸夜夜添| 久久精品国产亚洲网站| 黑丝袜美女国产一区| 成人特级av手机在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国产精品无大码| 亚洲国产欧美日韩在线播放 | 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 大码成人一级视频| 两个人免费观看高清视频 | 国产成人freesex在线| 久久97久久精品| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 99久久综合免费| 熟女电影av网| 国产精品一区www在线观看| 午夜日本视频在线| 亚洲国产欧美日韩在线播放 | 国产色婷婷99| 欧美少妇被猛烈插入视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产黄片视频在线免费观看| 国产精品一区二区在线观看99| 一区二区三区乱码不卡18| 寂寞人妻少妇视频99o| 久久久久精品性色| 久久久午夜欧美精品| 欧美丝袜亚洲另类| 少妇丰满av| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 一二三四中文在线观看免费高清| 大陆偷拍与自拍| 中文字幕精品免费在线观看视频 | h日本视频在线播放| 午夜91福利影院| 男女免费视频国产| 国产日韩欧美视频二区| 日本午夜av视频| 久久精品国产a三级三级三级| 久久久久久久久大av| 夜夜爽夜夜爽视频| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 国产69精品久久久久777片| 精品久久久久久久久亚洲| 久久精品国产a三级三级三级| 亚洲精品乱久久久久久| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 免费观看a级毛片全部| 99热这里只有精品一区| 精品久久久久久电影网| 国产精品蜜桃在线观看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲性久久影院| 777米奇影视久久| 国产精品蜜桃在线观看| 午夜福利网站1000一区二区三区| 久久韩国三级中文字幕| 国产在线男女| 爱豆传媒免费全集在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 在线观看人妻少妇| 女人精品久久久久毛片| av线在线观看网站| 国产伦精品一区二区三区视频9| 晚上一个人看的免费电影| 久久99精品国语久久久| 亚洲av成人精品一二三区| 三级国产精品片| 亚洲精品视频女| 亚洲四区av| av天堂中文字幕网| 男男h啪啪无遮挡| 国产精品不卡视频一区二区| 午夜久久久在线观看| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 欧美精品一区二区大全| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲,欧美,日韩| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产av码专区亚洲av| 乱系列少妇在线播放| 国产 一区精品| videos熟女内射| 免费av中文字幕在线| 在线精品无人区一区二区三| 日韩欧美精品免费久久| 亚洲av欧美aⅴ国产| 婷婷色av中文字幕| 丰满人妻一区二区三区视频av| 日韩一区二区视频免费看| 日本av手机在线免费观看| 99精国产麻豆久久婷婷| 午夜激情福利司机影院| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 国产淫语在线视频| 久久99热这里只频精品6学生| 插逼视频在线观看| 日韩一区二区三区影片| 日本vs欧美在线观看视频 | 亚洲欧美日韩卡通动漫| 天堂中文最新版在线下载| 亚洲精品第二区| 视频区图区小说| 美女中出高潮动态图| 午夜免费鲁丝| 永久网站在线| 亚洲精品456在线播放app| 最近最新中文字幕免费大全7| 人人妻人人看人人澡| 国产成人免费无遮挡视频| 高清黄色对白视频在线免费看 | 日韩大片免费观看网站| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 午夜老司机福利剧场| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 欧美日韩亚洲高清精品| 大片电影免费在线观看免费| 不卡视频在线观看欧美| 热99国产精品久久久久久7| 街头女战士在线观看网站| 中文在线观看免费www的网站| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 男人添女人高潮全过程视频| 久久99热这里只频精品6学生| 免费观看在线日韩| 日本黄色片子视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 亚洲精华国产精华液的使用体验| av国产久精品久网站免费入址| 国产免费一级a男人的天堂| 99热这里只有是精品在线观看| 久久久久久伊人网av| 蜜桃在线观看..| av国产久精品久网站免费入址| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 精品久久久久久久久av| 国产欧美亚洲国产| 欧美日韩av久久| 婷婷色综合大香蕉| 日韩视频在线欧美| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 日韩av在线免费看完整版不卡| 亚洲美女搞黄在线观看| 男女国产视频网站| 在线播放无遮挡| 综合色丁香网| 亚洲国产精品成人久久小说| 久久av网站| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 欧美变态另类bdsm刘玥| 一级a做视频免费观看| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产av国产精品国产| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 欧美日韩av久久| 亚洲精品自拍成人| 国产黄色视频一区二区在线观看| 成人毛片60女人毛片免费| 亚洲精品日本国产第一区| 国产成人精品久久久久久| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲av日韩在线播放| 熟女人妻精品中文字幕| 久久久午夜欧美精品| 亚洲成人一二三区av| 最新中文字幕久久久久| 精品亚洲成a人片在线观看| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 午夜视频国产福利| 国产精品女同一区二区软件| 九草在线视频观看| 性色avwww在线观看| 在线看a的网站| 精品人妻熟女av久视频| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 最近中文字幕高清免费大全6| 精品酒店卫生间| 免费观看性生交大片5| 18+在线观看网站| 精品一区在线观看国产| 在线精品无人区一区二区三| av国产精品久久久久影院| 亚洲av二区三区四区| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产成人免费观看mmmm| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲精品一二三| 亚洲四区av| 视频区图区小说| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 一本一本综合久久| 少妇被粗大猛烈的视频| 久久毛片免费看一区二区三区| 最近手机中文字幕大全| 日本午夜av视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 我要看黄色一级片免费的| 欧美bdsm另类| 国产精品人妻久久久久久| av不卡在线播放| 久久精品国产自在天天线| 免费看不卡的av| 日本欧美国产在线视频| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 尾随美女入室| av女优亚洲男人天堂| 国产伦精品一区二区三区视频9| 亚洲国产精品999| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产成人91sexporn| 十八禁网站网址无遮挡 | 我的老师免费观看完整版| 亚洲图色成人| 18禁在线播放成人免费| 亚洲精品aⅴ在线观看| 久久久久久久国产电影|