飼料安全與飼料微生物的檢測

韓文軍，譚青松

1.新疆維吾爾自治區(qū)獸藥飼料監(jiān)察所，新疆烏魯木齊 830063；2.新疆維吾爾自治區(qū)畜牧總站，新疆烏魯木齊 830004

飼料是畜禽的主要食物以及主要營養(yǎng)源，飼料的質(zhì)量直接關(guān)系著畜禽產(chǎn)品品質(zhì)的優(yōu)劣，因此保證飼料安全是養(yǎng)殖生產(chǎn)的基礎(chǔ)。飼料中含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，在加工以及運(yùn)輸過程中，這些營養(yǎng)物質(zhì)會(huì)為微生物提供生存條件，以導(dǎo)致飼料被感染。微生物在飼料中繁殖的過程會(huì)吸收養(yǎng)分，破壞飼料原本的營養(yǎng)結(jié)構(gòu)，并且在代謝過程會(huì)產(chǎn)生有毒性物質(zhì)以及致癌性毒素，畜禽食用被污染的飼料后會(huì)發(fā)生中毒現(xiàn)象，影響健康，進(jìn)而導(dǎo)致養(yǎng)殖生產(chǎn)的效益降低。

1 飼料安全的意義

我國是畜牧業(yè)大國，隨著科技的發(fā)展，畜牧業(yè)已經(jīng)逐漸實(shí)現(xiàn)集約化以及規(guī)模化生產(chǎn)，飼料是畜牧業(yè)發(fā)展的基礎(chǔ)。飼料直接影響著畜禽的健康，以及畜禽產(chǎn)品的品質(zhì)，因此飼料安全不僅關(guān)系著畜禽的健康生長以及養(yǎng)殖效益，同時(shí)也對(duì)人類的食品安全和生命健康有一定程度的影響。

2 飼料中微生物的危害

2.1 影響飼料營養(yǎng)價(jià)值

飼料中的微生物在生長、繁殖以及代謝的過程中，會(huì)分泌淀粉酶、脂肪酶以及蛋白酶等，這些酶大量的存在飼料中，會(huì)使飼料中本來的淀粉、蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)發(fā)生分解反應(yīng)，使飼料中脂肪酸的含量上升，淀粉含量降低，水分增多，蛋白質(zhì)含量減少，這一系列的變化會(huì)使飼料原本的營養(yǎng)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，營養(yǎng)價(jià)值有所下降。此外，部分微生物還會(huì)改變飼料的顏色，增加飼料酸性，導(dǎo)致飼料的適口性變差，影響畜禽的采食量。總之，飼料中微生物的滋生會(huì)嚴(yán)重降低飼料的品質(zhì)，甚至是完全失去其原本功能及飼喂價(jià)值。

2.2 引發(fā)畜禽中毒

微生物在飼料中代謝的過程會(huì)產(chǎn)生毒素，畜禽采食后容易發(fā)生中毒反應(yīng)。霉菌對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性強(qiáng)，在其他微生物無法生存的環(huán)境中，霉菌仍然可以生長繁殖。因此，霉菌是一種普遍存在的致病性微生物，對(duì)飼料的影響較大，霉菌在繁殖的過程中能夠產(chǎn)生真菌毒素，這些真菌毒素會(huì)使畜禽發(fā)生嚴(yán)重的中毒反應(yīng)，主要危害動(dòng)物的肝臟、腎臟、肺以及大腦等多個(gè)器官以及消化系統(tǒng)，此外還會(huì)對(duì)畜禽的生殖系統(tǒng)造成損傷。例如，黃曲霉毒素以及曲毒素。作為毒性非常強(qiáng)的真菌毒素，黃曲霉毒素會(huì)使畜禽發(fā)生免疫抑制、肝中毒甚至是癌變反應(yīng)。赭曲霉毒素會(huì)危害畜禽的腎臟，導(dǎo)致畜禽發(fā)生腎癌，肝臟損傷以及免疫抑制等病癥。此外，玉米赤霉酮對(duì)畜禽的生殖性能會(huì)產(chǎn)生較大的影響，容易導(dǎo)致母畜發(fā)生不孕或流產(chǎn)的情況。伏馬毒素會(huì)使馬發(fā)生腦白質(zhì)軟化癥，也會(huì)導(dǎo)致豬發(fā)生肺水腫病癥。

3 飼料微生物的檢測

3.1 飼料微生物種類

飼料微生物是指在飼料中寄生的一系列微生物，主要包括沙門氏菌、大腸桿菌、肉毒梭菌、霉菌等。不同微生物對(duì)飼料的污染程度受飼料品質(zhì)以及種類的影響。并且，微生物對(duì)水分的要求不同，因此不同含水量的飼料中，微生物的種類也有所差別。

3.2 檢測內(nèi)容

目前我國對(duì)飼料中微生物的檢測主要包括以下幾個(gè)內(nèi)容：細(xì)菌總數(shù)、大腸菌群、沙門氏菌以及霉菌，現(xiàn)對(duì)以上幾個(gè)檢測項(xiàng)目進(jìn)行詳細(xì)論述。

3.2.1 細(xì)菌總數(shù)

細(xì)菌總數(shù)檢測的是單位飼料中細(xì)菌的總數(shù)，不區(qū)分微生物種類。在檢測細(xì)菌總數(shù)的過程中，可以使用兩種計(jì)數(shù)方法來表示。其一，是對(duì)樣品進(jìn)行處理，培養(yǎng)基、pH值、溫度時(shí)間以及計(jì)數(shù)方法都嚴(yán)格規(guī)定的情況下，將處理后的樣品直接使用平皿培養(yǎng)或者使用微孔濾器過濾后培養(yǎng)在適宜條件下，保證每個(gè)活菌細(xì)胞有且只生成一個(gè)可見菌落時(shí)，所觀察到的飼料中的菌落數(shù)量；其二，是對(duì)樣品進(jìn)行一定的處理，將其制作成涂片，并經(jīng)過染色后，使用電鏡觀察細(xì)菌細(xì)胞的數(shù)量，計(jì)數(shù)范圍包括活菌以及還未消失的死菌。目前我國飼料微生物檢測中主要使用第一種方法。

3.2.2 沙門氏菌

沙門氏菌可以分為5個(gè)亞屬，血清型有2 000多個(gè)，目前在我國發(fā)現(xiàn)的沙門氏菌血清型大約有200個(gè)，部分血清型的沙門氏菌在飼料中會(huì)產(chǎn)生毒素，尤其是腸內(nèi)沙門氏菌以及豬霍亂沙門氏菌。沙門氏菌所產(chǎn)生的毒素對(duì)高溫有較強(qiáng)抵抗力，75 ℃下作用1 h仍具有毒性。沙門氏菌根據(jù)感染范圍可將其分為宿主適應(yīng)血清型以及非宿主適應(yīng)血清型，對(duì)于宿主適應(yīng)血清型的沙門氏菌而言，只會(huì)使其宿主患病，非宿主適應(yīng)血清型的沙門氏菌會(huì)危害多種畜禽。畜禽感染沙門氏菌會(huì)出現(xiàn)傷寒、副傷寒或急性胃炎的病癥。

3.2.3 大腸菌群

大腸菌群主要來自于畜禽的腸道，因此對(duì)飼料中的大腸菌群進(jìn)行檢測可以判斷飼料是否被畜禽的糞便所污染，大腸菌群數(shù)量的高低表示飼料被畜禽糞便所污染的嚴(yán)重程度。畜禽的糞便中除了含有正常細(xì)菌外，還包含部分腸道致病菌，因此如果飼料中存在大腸菌群，說明飼料在保存過程中接觸到了腸道致病菌的污染，進(jìn)而使畜禽食用飼料后發(fā)生中毒，或者是導(dǎo)致疾病在養(yǎng)殖場內(nèi)的傳播，因此對(duì)飼料大腸菌群的檢測十分必要。

3.2.4 霉菌

霉菌是對(duì)飼料安全危害最嚴(yán)重的一種致病性微生物，對(duì)于霉菌的檢測是對(duì)飼料安全評(píng)價(jià)的主要指標(biāo)。霉菌數(shù)量的高低直接影響飼料是否會(huì)對(duì)動(dòng)物的健康造成威脅。霉菌能夠在環(huán)境中存活較長時(shí)間，并且可經(jīng)過空氣進(jìn)行傳播，在飼料加工、儲(chǔ)存以及運(yùn)輸?shù)倪^程中，都有可能接觸到霉菌，而導(dǎo)致飼料被污染。

4 飼料微生物檢測方法

為了保證飼料安全，要做好飼料微生物檢測工作，在檢測過程中需要掌握以下技術(shù)要點(diǎn)，以保證檢測的準(zhǔn)確性，并且要及時(shí)發(fā)現(xiàn)飼料中存在的安全隱患，以確保畜禽養(yǎng)殖業(yè)的健康、可持續(xù)性發(fā)展。

4.1 近紅外光譜分析技術(shù)

近紅外光譜分析技術(shù)既可測定飼料中所含的常規(guī)營養(yǎng)成分，也可檢測飼料中的微量成分，其中包括了有毒物質(zhì)的檢測，此技術(shù)在對(duì)飼料的品質(zhì)鑒定以及真?zhèn)伪鎰e上具有一定的價(jià)值。該技術(shù)的檢測原理是，技術(shù)人員對(duì)被測物質(zhì)的紅外圖譜所展示出的特征進(jìn)行分析，以判斷飼料中所含有的物質(zhì)結(jié)構(gòu)和組成成分，確定飼料是否安全、健康以及菌落水平。

4.2 電阻電導(dǎo)測定技術(shù)

細(xì)菌在生長繁殖的過程中能夠分解培養(yǎng)液中的大分子物質(zhì)，例如蛋白質(zhì)以及糖類等，產(chǎn)生氨基酸以及有機(jī)酸等小分子物質(zhì)，進(jìn)而使培養(yǎng)液中的導(dǎo)電度發(fā)生變化，電阻電導(dǎo)測定法是通過對(duì)培養(yǎng)液的電阻和導(dǎo)電度進(jìn)行測量，判斷其變化，以分析出樣品中菌落的數(shù)量。

4.3 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS）檢測技術(shù)

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測技術(shù)是目前在飼料檢測中，用于鑒定以及篩選藥物代謝產(chǎn)物的一個(gè)有效且高效的檢測工具，在對(duì)飼料安全進(jìn)行鑒定的過程中，受到了越來越高的重視，可以檢測的范圍，包括飼料、污染物、毒素、獸藥殘留物以及違禁藥物的使用痕跡等。該項(xiàng)技術(shù)的檢測原理，是通過對(duì)飼料樣品進(jìn)行高效液相色譜檢測分析并記錄其數(shù)據(jù)，使用檢測儀器分析并記錄檢測數(shù)據(jù)，同時(shí)進(jìn)行定量以及定性分析，判斷飼料中檢測項(xiàng)目的含量。

4.4 ATP檢測技術(shù)

ATP檢測技術(shù)能夠有效的檢測飼料中微生物的含量，檢測原理是將ATP檢測儀與計(jì)算機(jī)相連接，使用檢測儀對(duì)飼料中微生物含量進(jìn)行檢測，并將檢測結(jié)果傳輸至計(jì)算機(jī)中，使用計(jì)算機(jī)分析檢測結(jié)果，以確定飼料中微生物的含量。

4.5 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在當(dāng)前飼料微生物的檢測中應(yīng)用較為廣泛，該項(xiàng)技術(shù)能夠有效檢測并篩查飼料中的有害微生物、違禁藥品以及添加劑，該項(xiàng)技術(shù)操作簡單，方便有效，具有顯著的操作優(yōu)勢，并且在對(duì)飼料微生物檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性方面也有保證。

4.6 基因探針檢測技術(shù)

基因探針檢測技術(shù)能夠通過對(duì)飼料內(nèi)DNA分子或特異堿基序列RNA的檢測，判定飼料中微生物的含量。

4.7 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測技術(shù)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測技術(shù)能夠?qū)︼暳蠘悠分械奈⑸颮NA或DNA片段進(jìn)行擴(kuò)增，同時(shí)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測，能夠確定飼料中所含有的致病微生物種類以及含量。

4.8 瓊脂平板培養(yǎng)檢測技術(shù)

瓊脂平板培養(yǎng)檢測技術(shù)是目前我國飼料微生物檢測中所使用的主要方法，該項(xiàng)技術(shù)是將微生物接種在瓊脂平板上，然后分析菌落的情況，來確定微生物的種類以及含量。此種方法操作起來比較困難，并且時(shí)間長，需要經(jīng)過2～3 d才能完成一次檢測，檢測人力和時(shí)間成本較高。

5 小結(jié)

隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們對(duì)食品安全的要求越來越高。因此保證畜產(chǎn)品安全是畜牧業(yè)發(fā)展的根本與核心。飼料中的微生物不僅會(huì)影響畜禽的健康，還會(huì)導(dǎo)致畜產(chǎn)品品質(zhì)下降，甚至是危害到食品安全，影響人類健康，因此做好飼料微生物檢測至關(guān)重要，目前有多種方法可以對(duì)飼料中的微生物進(jìn)行檢測，通過微生物檢測，能夠及時(shí)發(fā)現(xiàn)被污染飼料對(duì)畜禽的威脅，進(jìn)而降低養(yǎng)殖場的發(fā)病率，提高養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益，保證食品安全。